《細(xì)胞生物學(xué)》系列課程：實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的使用方法

《細(xì)胞生物學(xué)》系列課程實(shí)驗(yàn)一顯微鏡的使用方法2緒言實(shí)驗(yàn)室規(guī)則實(shí)驗(yàn)教學(xué)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)課考核方式與評(píng)分辦法

3實(shí)驗(yàn)室規(guī)則不遲到、不早退或無故缺席；穿白大衣，對(duì)號(hào)入座，保持安靜、關(guān)閉手機(jī)；實(shí)驗(yàn)期間不得進(jìn)行任何與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的活動(dòng)；愛護(hù)儀器、標(biāo)本和器械，損壞賠償；不能隨意拆卸顯微鏡的零部件，

有異常立即報(bào)告4

注意節(jié)約實(shí)驗(yàn)材料、藥品、水電等；要保持實(shí)驗(yàn)室內(nèi)衛(wèi)生，實(shí)驗(yàn)廢物及紙屑應(yīng)

放到指定地點(diǎn)，不得隨意亂丟；實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要認(rèn)真清理各自的實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，將器械清洗后按原樣擺放整齊，并清點(diǎn)數(shù)目，無誤后方可離開；值日生負(fù)責(zé)清掃實(shí)驗(yàn)室，并關(guān)閉水、電開關(guān)，關(guān)閉門窗，清理實(shí)驗(yàn)垃圾。5實(shí)驗(yàn)課教學(xué)內(nèi)容一、顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用細(xì)胞器的觀察口腔上皮細(xì)胞臨時(shí)制片二、細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)電鏡照片識(shí)別、

細(xì)胞分裂、核型分析三、血型分析與遺傳病錄像、考試6考核方式與評(píng)分辦法1、出勤與紀(jì)律：15分2、學(xué)習(xí)態(tài)度與科學(xué)性：15分3、實(shí)際操作能力：20分5、實(shí)驗(yàn)報(bào)告：50分7實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用光鏡下細(xì)胞器的觀察口腔上皮細(xì)胞臨時(shí)制片與生物繪圖8實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私怙@微鏡的基本結(jié)構(gòu)并初步掌握顯微鏡

的正確使用方法了解動(dòng)物細(xì)胞的基本形態(tài)掌握生物學(xué)臨時(shí)制片的方法掌握生物繪圖基本要求熟悉線粒體、高爾基體的光學(xué)結(jié)構(gòu)隱藏9實(shí)驗(yàn)用品光學(xué)顯微鏡、擦鏡紙、油瓶載玻片、蓋玻片、牙簽、吸水紙、

甲基綠染液標(biāo)本：①蛙血涂片(No.1)②羊毛裝片(No.3)③線粒體標(biāo)本④高爾基體標(biāo)本(No.5)10光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造機(jī)械系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)照明系統(tǒng)一、光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造與使用方法11機(jī)械系統(tǒng)鏡座鏡柱鏡臂鏡筒物鏡轉(zhuǎn)換器調(diào)焦螺旋（粗、細(xì)）載物臺(tái)顯微鏡的移動(dòng)方法：一手握鏡臂，另一手托鏡座，放置時(shí)將鏡座前端先接觸臺(tái)面，然后放平。鏡柱鏡座鏡臂鏡筒物鏡轉(zhuǎn)換器調(diào)焦螺旋載物臺(tái)推進(jìn)尺螺旋更換鏡頭方法：手持螺紋部位輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)注意：不能用手勾鏡頭，以防鏡頭松動(dòng)而脫落粗調(diào)螺旋注意：只能在低倍鏡時(shí)使用細(xì)調(diào)螺旋通光孔標(biāo)尺標(biāo)本夾標(biāo)

本

推

進(jìn)

尺標(biāo)

本

放

置

方

法標(biāo)本要正面朝上移

動(dòng)

標(biāo)

本推

進(jìn)

尺

螺

旋18光學(xué)系統(tǒng)目鏡：多為“10×”

物鏡：10×低倍鏡

40×高倍鏡

100×油鏡目鏡物鏡19目鏡：瞳距調(diào)節(jié)20物鏡

如何區(qū)分物鏡頭？鏡頭長短顏色標(biāo)記鏡頭上標(biāo)示的性能參數(shù)物鏡的性能參數(shù)放大倍數(shù)鏡口率鏡筒長度蓋玻片厚度22工作距離顯微鏡處于工作狀態(tài)，物像調(diào)節(jié)到最清晰時(shí)，物鏡下表面與蓋玻片上表面之間的距離。物鏡放大倍數(shù)越大，工作距離越小。三種鏡頭的工作距離低倍鏡：7.14mm高倍鏡：0.5mm油鏡：0.18mm23問題如果標(biāo)本放反了，能用高倍鏡或油鏡找到標(biāo)本嗎？用高倍鏡和油鏡時(shí)，能否用粗調(diào)螺旋調(diào)焦？24所有物鏡視野構(gòu)成一組同心圓

由低→高→油鏡,

將物像移到視野

的正中央

物鏡放大倍數(shù)越

大，視野越小照明系統(tǒng)光源光圈（光闌）聚光器光源照明燈開關(guān)聚光器旋鈕聚光器光闌濾光片框聚

光

器

與

光

闌2829問題觀察標(biāo)本時(shí)，發(fā)現(xiàn)視野光線太亮，應(yīng)如何調(diào)節(jié)才能使視野柔和適中？30光學(xué)顯微鏡的使用顯微鏡使用前的準(zhǔn)備工作檢查各部件是否齊全、有無污損顯微鏡的擦拭：機(jī)械部分—用紗布擦照明部分、光學(xué)部分—用擦鏡紙擦將顯微鏡放至合適的位置

放于胸前，距實(shí)驗(yàn)臺(tái)邊緣約一橫拳左右準(zhǔn)備→低倍鏡→高倍鏡→油鏡→繪圖→清理、收鏡將低倍鏡頭轉(zhuǎn)至工作狀態(tài)調(diào)光：使用粗調(diào)螺旋，使低倍鏡鏡頭距通光孔約1cm調(diào)節(jié)視野光線，使其柔和適中放片：將標(biāo)本正面朝上并移至通光孔處調(diào)焦：低倍鏡的使用方法正確識(shí)別標(biāo)本的正面：有蓋玻片、標(biāo)簽面、對(duì)光反射差的一面調(diào)焦方法：①從側(cè)面注視載物臺(tái)，轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)螺旋，使載物臺(tái)

緩慢上升至距鏡頭0.5cm處。②雙眼在目鏡中注視視野，同時(shí)緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)螺旋，使載物臺(tái)緩緩下降，直到視野中出現(xiàn)物像，再用細(xì)調(diào)螺旋將物像調(diào)節(jié)至最清晰。★若鏡頭與標(biāo)本的距離已超過1cm，尚未看到物像，怎么辦？

必須重復(fù)①、②，直至看到物像。

（多數(shù)原因是載物臺(tái)下降過快）視野中物像是否為標(biāo)本上的物像：移動(dòng)標(biāo)本推進(jìn)尺，如視野中物像不隨之移動(dòng)，則其是目鏡或物鏡上的異物。移動(dòng)標(biāo)本推進(jìn)尺，如視野中物像隨之移動(dòng)，則為標(biāo)本上物像。正確區(qū)分異物、雜質(zhì)與標(biāo)本：正常標(biāo)本：著色均勻，濃淡合適，可區(qū)分基本的結(jié)構(gòu)；異物或雜質(zhì)：著色不均勻，多為濃染，看不到細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核等基本結(jié)構(gòu)。如何判斷是否找到欲觀察之標(biāo)本物像？隱藏高倍鏡的使用方法⒈使用前必須:①經(jīng)低倍鏡將物像調(diào)至最清晰

②將所需放大部分移到視野正中央⒉從側(cè)面注視，轉(zhuǎn)換高倍鏡頭，再用細(xì)調(diào)螺旋前后

慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)（一般0~3圈即可看到物像），使物像

達(dá)到最清晰的狀態(tài)。如果看不到物像，可能為以下原因：物像未移到視野中央玻片標(biāo)本放反鏡頭松動(dòng)或鏡頭臟找到原因、解決問題后，重復(fù)1、2切記：使用高倍鏡、油鏡時(shí)不可用粗調(diào)螺旋調(diào)焦，也不可將細(xì)調(diào)螺旋連續(xù)向上或向下單向轉(zhuǎn)動(dòng)。35思考低倍鏡下觀察到物像，換成高倍鏡卻看不到或看不清，為什么？怎么辦？高倍鏡碰擦鏡片，無法轉(zhuǎn)換到位，為什么？怎么辦？隱藏36油鏡的使用方法使用前必須：①經(jīng)低、高倍鏡將物像調(diào)至最清晰

②將所需放大部分移到視野正中央叉開高倍鏡頭，滴一滴油于標(biāo)本上通光孔正中央,

從側(cè)面注視，將油鏡頭慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)過來，注意鏡頭

應(yīng)與油滴接觸。雙眼從目鏡中觀察，慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)螺旋，直到出現(xiàn)最清晰的物像。(不能大幅度地移動(dòng)玻片)油鏡使用完以后，或由于某種原因未看到物像，都要先下降載物臺(tái)，使油滴與鏡頭分開，取下標(biāo)本，將油擦凈；再用已醮有二甲苯的擦鏡紙將鏡頭擦凈。每次重復(fù)操作都要將鏡頭及標(biāo)本上的油擦凈！油鏡使用時(shí)的注意事項(xiàng)油滴不能太大或太小，以免影響觀察效果不能大幅度地移動(dòng)玻片如發(fā)現(xiàn)油滴已與鏡頭分開，必須將鏡頭、標(biāo)本擦凈油后從低倍鏡開始重新操作用后應(yīng)及時(shí)將油擦凈隱藏39顯微鏡使用注意事項(xiàng)不能隨意拆卸顯微鏡零部件，有異常立即報(bào)告切勿放反標(biāo)本；按低→高→油鏡的順序觀察，油鏡每次使用后都要立即擦凈鏡頭及標(biāo)本上的油；粗調(diào)、細(xì)調(diào)螺旋都不能連續(xù)向上或向下轉(zhuǎn)動(dòng)，高倍鏡和油鏡只能用細(xì)調(diào)螺旋進(jìn)行調(diào)焦；根據(jù)標(biāo)本的厚薄及染色情況調(diào)節(jié)光線強(qiáng)弱；雙眼同時(shí)觀察；用后正確放置顯微鏡。隱藏40顯微鏡使用后的放置方法下降載物臺(tái)，取下標(biāo)本；叉開鏡頭，上升載物臺(tái)，使物鏡與載物臺(tái)相接近；下降聚光器，關(guān)閉光闌，關(guān)閉電源；罩上防塵罩，放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)中央。隱藏41顯微鏡使用練習(xí)

低倍→高倍→油鏡蛙血涂片42

只在低倍鏡下觀察羊毛裝片對(duì)準(zhǔn)通光孔43二、光鏡下細(xì)胞器的觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜す忡R下線粒體和高爾基復(fù)合體的形態(tài)特征及在細(xì)胞內(nèi)的分布。實(shí)驗(yàn)用品動(dòng)物肝臟切片（示線粒體）動(dòng)物脊神經(jīng)節(jié)切片（示高爾基復(fù)合體）光學(xué)顯微鏡44線粒體蟾蜍腎切片細(xì)胞質(zhì)中被染成藍(lán)黑色的顆粒狀結(jié)構(gòu)。高爾基復(fù)合體神經(jīng)節(jié)切片細(xì)胞質(zhì)中圍繞核，被

染成棕褐色的彎曲線

頭狀或顆粒狀結(jié)構(gòu)。45Golgicomplex三、人類口腔上皮細(xì)胞的臨時(shí)制片準(zhǔn)備：放置載玻片→刮取口腔上皮細(xì)胞涂于其上染色：加入一滴甲基綠染液→蓋好蓋玻片

→吸去多余染液(蓋片表面不能有染液)觀察：勿用油鏡繪圖:用鉛筆繪制高倍鏡下1～2個(gè)口腔上皮細(xì)胞，

并標(biāo)明各部位名稱。觀察結(jié)束后，丟棄使用過的牙簽、載玻片與蓋玻片。高倍鏡低倍鏡放大47臨時(shí)制片注意事項(xiàng)蓋玻片與載玻片成45°緩慢下放，盡量避免

產(chǎn)生氣泡。細(xì)胞折光性強(qiáng)，染色較淺，視野應(yīng)適當(dāng)調(diào)暗。不用油鏡觀察。尋找典型物像繪圖鉛筆繪圖、鉛筆標(biāo)注布局合理，大小適當(dāng)實(shí)事求是，不模式化用疏密小點(diǎn)表示明暗標(biāo)明各部位名稱，引線盡量水平引出且彼此平行注明標(biāo)本名稱、放大倍數(shù)、繪制時(shí)間及繪制人生物學(xué)繪圖要求：標(biāo)本名稱：放大倍數(shù)：物鏡×目鏡的放大倍數(shù)繪制時(shí)間：繪制人：細(xì)胞膜細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)50作業(yè)：實(shí)驗(yàn)一普通光學(xué)顯微鏡的結(jié)構(gòu)和使用1.填圖：標(biāo)注顯微鏡各部件名稱51試述顯微鏡使用過程中的注意事項(xiàng).切勿放反標(biāo)本；按低→高→油鏡的順序觀察，油鏡每次使用后都要立即擦凈鏡頭及標(biāo)本上的油；粗、細(xì)調(diào)焦螺旋都不能連續(xù)向上或向下轉(zhuǎn)動(dòng)，高倍鏡和油鏡只能用細(xì)調(diào)螺旋進(jìn)行調(diào)焦；注意根據(jù)標(biāo)本的厚薄及染色情況調(diào)節(jié)光線強(qiáng)弱；要雙眼同時(shí)觀察；用后正確放置顯微鏡，并認(rèn)真填寫顯微鏡使用記錄。3.視野中光線太亮,如何調(diào)節(jié)顯微鏡使光線柔和適中？52

實(shí)驗(yàn)二生物學(xué)臨時(shí)制片與生物繪圖-繪制人類口腔上皮細(xì)胞

細(xì)胞膜細(xì)胞核細(xì)胞質(zhì)標(biāo)本名稱：放大倍數(shù)：物鏡×目鏡的放大倍數(shù)繪制時(shí)間：繪制人：53下次實(shí)驗(yàn)內(nèi)容