生化試驗主題知識講座

細菌生理生化反應(yīng)及定性/7/181姓名：斯芳珍學(xué)號：17號班級：食安15A課程：食品安全快速檢測原理和技術(shù)生化試驗主題知識講座第1頁目錄CONTENTS/7/182脲酶試驗6硫化氫試驗5

吲哚(靛基質(zhì))試驗4

乙酰甲基甲醇試驗3

甲基紅試驗(MR)2糖類發(fā)酵試驗1生化試驗主題知識講座第2頁/7/183(一)糖類發(fā)酵試驗1.1定義細菌分解糖能力是細菌主要表現(xiàn)特征。可依據(jù)細菌分解利用糖能力差異表現(xiàn)中是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣作為判定菌種依據(jù)。1.2原理細菌分解糖可產(chǎn)生有機酸或二氧化碳和水。為判斷是否產(chǎn)有機酸，可在糖發(fā)酵培養(yǎng)基中，加入指示劑溴甲酚紫(即B.C.P指示劑，當(dāng)pH在5.2以下呈黃色，pH在6.8以上呈紫色)，經(jīng)培養(yǎng)后，依據(jù)指示劑顏色改變來判斷；為判斷是否產(chǎn)氣，可在糖發(fā)酵培養(yǎng)基中放人倒置杜氏小管觀察。生化試驗主題知識講座第3頁/7/1841.3結(jié)果判定若接種培養(yǎng)液保持原有顏色，則其反應(yīng)結(jié)果為陰性，表明該菌不能利用該種糖，統(tǒng)計符號用“一”表示；若培養(yǎng)液呈黃色，則反應(yīng)結(jié)果為陽性，表明該菌能分解該種糖并產(chǎn)生有機酸，統(tǒng)計符號用“+”表示。若發(fā)酵同時，培養(yǎng)液呈黃色，且培養(yǎng)液中杜氏小管內(nèi)有氣泡，則表明該菌分解糖能產(chǎn)酸并產(chǎn)氣，統(tǒng)計符號用“⊕”表示。(一)糖類發(fā)酵試驗生化試驗主題知識講座第4頁/7/185(二)甲基紅試驗(MR試驗)2.1定義MR試驗是測定細菌分解葡萄糖產(chǎn)酸程度一個方法。2.2原理

腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，并在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸，再深入分解，因為糖代謝路徑不一樣，可產(chǎn)生乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，所以可使培養(yǎng)基pH下降至4．5以下，并使甲基紅指示劑變紅[甲基紅變色范圍為pH4．4(紅色)～pH6．2(黃色)]。2.3結(jié)果判定若培養(yǎng)液上層變成紅色，即為陽性反應(yīng)，用“+”表示；若仍呈黃色，則為陰性反應(yīng)，用“一”表示；若呈橙色，則為可疑，用“±”表示。生化試驗主題知識講座第5頁/7/186(三)乙酰甲基甲醇試驗(VP試驗)3.1定義

3.2原理

一些細菌在葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)液中，能分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸。丙酮酸經(jīng)縮合、脫羧，成為乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在強堿環(huán)境下，被空氣中氧氣氧化為二乙酰。二乙酰與蛋白胨中胍基生成紅色化合物。3.3結(jié)果判定若培養(yǎng)液呈紅色，則為陽性，用“+”表示；若不變色，則為陰性，用“一”表示。生化試驗主題知識講座第6頁/7/187(四)吲哚(靛基質(zhì))試驗4.1定義吲哚試驗是指有些細菌如大腸埃希菌、變形桿菌、霍亂弧菌等能分解培養(yǎng)基中色氨酸生成吲哚(靛基質(zhì))，經(jīng)與試劑中對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲哚而呈紅色，則為吲哚試驗陽性。

4.2原理

有些細菌含有色氨酸酶能分解蛋白胨中色氨酸，生成吲哚(靛基質(zhì))。吲哚本身沒有顏色，不能直接被看見，但當(dāng)加入對二甲氨基苯甲醛試劑(Kovac氏試劑)時，該試劑與吲哚作用，生成玫瑰吲哚而成紅色。4.3結(jié)果判定若培養(yǎng)液為紅色，則為陽性反應(yīng)，用“+”表示；若為黃色，則為陰性反應(yīng)，用“一”表示。生化試驗主題知識講座第7頁/7/188(五)硫化氫試驗5.1定義測定微生物自含硫氨基酸或無機硫化物等受質(zhì)中產(chǎn)生硫化氫能力。5.2原理細菌分解含硫氨基酸時，會產(chǎn)生硫化氫，再與培養(yǎng)基中鉛鹽或鐵鹽反應(yīng)，形成黑色硫化鉛或硫化亞鐵。5.3結(jié)果判定試紙或培養(yǎng)基變成黑色為陽性結(jié)果，陰性則培養(yǎng)基和試紙均不變色。陽性生化試驗主題知識講座第8頁/7/189(六)脲酶試驗6.1定義因為幽門螺旋桿菌是人胃內(nèi)唯一能夠產(chǎn)生大量尿毒酶細菌，可經(jīng)過檢測尿毒酶來診療幽門螺旋桿菌感染。尿毒酶分解胃內(nèi)尿毒生成氨和二氧化碳，使尿素濃度降低、氨濃度升高。6.2原理

細菌分解尿素產(chǎn)生兩分子氨會使培養(yǎng)基pH升高。若指示劑酚紅顯色為紅色，即證實細菌有脲酶。6.3結(jié)果判定若在培養(yǎng)過程中瓊脂斜面由粉紅色變?yōu)樽霞t色，則為陽性反應(yīng)。生化試驗主題知識講座第9頁/7/1810參考文件1.董艷珍.野生動物保護與管理綜合實訓(xùn)教程[M].北京理工大學(xué)出版社,