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微生物的生長(zhǎng)規(guī)律微生物的生長(zhǎng)規(guī)律微生物的生長(zhǎng)規(guī)律V:1.0精細(xì)整理,僅供參考微生物的生長(zhǎng)規(guī)律日期:20xx年X月微生物的生長(zhǎng)規(guī)律微生物特別是單細(xì)胞微生物,體積很小,個(gè)體的生長(zhǎng)很難測(cè)定,而且也沒有什么實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。因此,測(cè)定它們的生長(zhǎng)不是依據(jù)細(xì)胞個(gè)體的大小,而是測(cè)定群體的增加量,即群體的生長(zhǎng)。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo),以細(xì)菌數(shù)目的對(duì)數(shù)或生長(zhǎng)速度為縱坐標(biāo)作圖,所得到的曲線,稱為微生物的生長(zhǎng)曲線。根據(jù)細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖速率的不同,可將生長(zhǎng)曲線大致分為延遲期、對(duì)數(shù)期、調(diào)整期或滯留適應(yīng)期。
一、延遲期處于延遲期細(xì)菌細(xì)胞的特點(diǎn)可概括為8個(gè)字:分裂遲緩、代謝活躍。細(xì)胞體積增長(zhǎng)較快,尤其是長(zhǎng)軸,在延遲期末,細(xì)胞平均長(zhǎng)度比剛接種時(shí)大6倍以上;細(xì)胞中RNA含量增高,原生質(zhì)嗜堿性加強(qiáng);對(duì)不良環(huán)境條件較敏感,對(duì)氧的吸收、二氧化碳的釋放以及脫氨作用也很強(qiáng),同時(shí)容易產(chǎn)生各種誘導(dǎo)酶等。這些都說明細(xì)胞處于活躍生長(zhǎng)中,只是細(xì)胞分裂延遲。在此階段后期,少數(shù)細(xì)胞開始分裂,曲線略有上升。
延遲期的長(zhǎng)短與菌種的遺傳性、菌齡以及移種前后所處的環(huán)境條件等因素有關(guān),短的只需幾分鐘,長(zhǎng)的可達(dá)幾小時(shí)。因此,深入了解延遲期產(chǎn)生的原因,采取縮短延遲期的措施,在發(fā)酵工業(yè)上具有十分重要的意義。在生產(chǎn)實(shí)踐中,通常采取的措施有增加接種量,在種子培養(yǎng)中加入發(fā)酵培養(yǎng)基的某些營(yíng)養(yǎng)成分,采用最適種齡(即處于對(duì)數(shù)期的菌種)的健壯菌種接種以及選用繁殖快的菌種等措施,以縮短延遲期,加速發(fā)酵周期,提高設(shè)備利用率。二、對(duì)數(shù)期對(duì)數(shù)期又稱指數(shù)期。在此期中,細(xì)胞代謝活性最強(qiáng),組成新細(xì)胞物質(zhì)最快,所有分裂形成的新細(xì)胞都生活旺盛。這一階段的突出特點(diǎn)是細(xì)菌數(shù)以幾何級(jí)數(shù)增加,代時(shí)穩(wěn)定,細(xì)菌數(shù)目的增加與原生質(zhì)總量的增加,與菌液混濁度的增加均呈正相關(guān)性。這時(shí),細(xì)菌純培養(yǎng)的生長(zhǎng)速率也就是群體生長(zhǎng)的速率,可用代時(shí)(generationtime)表示。所謂代時(shí),即單個(gè)細(xì)胞完成一次分裂所需的時(shí)間,亦即增加一代所需的時(shí)間(也叫增代時(shí)間或世代時(shí)間)。在此階段,由于代時(shí)穩(wěn)定,因此,只要知道了對(duì)數(shù)期中任何兩個(gè)時(shí)間的菌數(shù),就可求出細(xì)菌的代時(shí)。
單細(xì)胞微生物,在對(duì)數(shù)期細(xì)胞數(shù)據(jù)按幾何級(jí)數(shù)增加,1→2→4→8→……,若以乘方的形式表示,即20→21→22→23→2n。很清楚,這里的指數(shù)"n"就是細(xì)菌分裂的次數(shù)或增殖的代數(shù)。也就是1個(gè)細(xì)菌繁殖"n"代產(chǎn)生了2n個(gè)細(xì)菌。如果在時(shí)間t
0時(shí)菌數(shù)為x,經(jīng)過一段時(shí)間,到t1時(shí),繁殖"n"代后,菌數(shù)為y則代時(shí)(G)可以下式表示:
例如,設(shè)大腸桿菌在接種時(shí)的細(xì)胞濃度為100/個(gè)ml,經(jīng)400分鐘的培養(yǎng),細(xì)胞濃度增至10ml,求該菌的世代時(shí)間和繁殖代數(shù)。
根據(jù)公式
G=t1-t0/3.3(lgy-lgx)
t0為接種的時(shí)間
x=100
t1為培養(yǎng)時(shí)間(400分鐘)
y=1,000,000,000
n=3.3(lg109-lg102)=3.3×7=23.1
代入上式
G=400/23.1=17.3
即在上述培養(yǎng)物中,大腸桿菌的代時(shí)為17.3分鐘,400分鐘內(nèi)共繁殖了23.1代。
不同的細(xì)菌,其對(duì)數(shù)期的代時(shí)不同,同一種細(xì)菌,由于培養(yǎng)基組成和物理?xiàng)l件的影響,如培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基pH、營(yíng)養(yǎng)物的性質(zhì)等,代時(shí)也不相同。但是,在一定條件下,各種菌的代時(shí)又是相對(duì)穩(wěn)定的,多數(shù)種為20-30分鐘,有的長(zhǎng)達(dá)33小時(shí),而有的繁殖極快,增代時(shí)間只9.8分左右。表6-4示不同細(xì)菌的代時(shí)。三、穩(wěn)定期又稱恒定期或最高生長(zhǎng)期。處于穩(wěn)定期的微生物,新增殖的細(xì)胞數(shù)與老細(xì)胞的死亡數(shù)幾乎相等,整個(gè)培養(yǎng)物中二者處于動(dòng)態(tài)平衡,此時(shí)生長(zhǎng)速度,又逐漸趨向零。
此階段初期,細(xì)菌分裂的間隔時(shí)間開始延長(zhǎng),曲線上升逐漸緩慢。隨后,部分細(xì)胞停止分裂,少數(shù)細(xì)胞開始死亡,致使細(xì)胞的新生與死亡速率處于動(dòng)態(tài)平衡。這時(shí)培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)達(dá)到最高水平,接著死亡細(xì)胞數(shù)大大超過新增殖細(xì)胞數(shù),曲線出現(xiàn)下降趨勢(shì)。
穩(wěn)定期的細(xì)胞內(nèi)開始積累貯藏物,如肝糖、異染顆粒、脂肪粒等,大多數(shù)芽孢細(xì)菌也在此階段形成芽孢。如果為了獲得大量菌體,就應(yīng)在此階段收獲,因這時(shí)細(xì)胞總數(shù)量最高;這一時(shí)期也是發(fā)酵過程積累代謝產(chǎn)物的重要階段,某些放線菌抗生素的大量形成也在此時(shí)期。
可以看出,穩(wěn)定期的微生物,在數(shù)量上的達(dá)到了最高水平,產(chǎn)物的積累也達(dá)到了高峰,此時(shí),菌體的總產(chǎn)量與所消耗的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間存在著一定關(guān)系,這種關(guān)系,生產(chǎn)上稱為產(chǎn)量常數(shù),可用下式表示:
γ=菌體總生長(zhǎng)量/消耗營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)總量
式中γ值的大小可說明該種細(xì)菌同化效率的高低。根據(jù)這一原理,可用適當(dāng)?shù)奈⑸镒鳛橹甘荆瑢?duì)維生素、氨基酸或核苷酸等進(jìn)行定量的生物測(cè)定。穩(wěn)定期的長(zhǎng)短與菌種和外界環(huán)境條件有關(guān)。生產(chǎn)上常常通過補(bǔ)料、調(diào)節(jié)pH、調(diào)整溫度等措施,延長(zhǎng)穩(wěn)定期,以積累更多的代謝產(chǎn)物。四、衰亡期穩(wěn)定期后如再繼續(xù)培養(yǎng),細(xì)菌死亡率逐漸增加,以致死亡數(shù)大大超過新生數(shù),群體中活菌數(shù)目急劇下降,出現(xiàn)了"負(fù)生
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