薜荔中的總黃酮含量測定研究

薜荔籽果膠的提取和含量測定研究1薜荔的概述薛荔(FicuspumilaL．)屬桑科榕屬，亦稱木蓮、涼粉樹等，是常綠攀緣性灌木藤本植物。枝條有兩種，結(jié)果枝葉型大，葉小枝用于趴在樹干或墻壁上的枝條囝。土產(chǎn)于中國和日本，在我國，主要分布在江西、湖南、四川、海南等省區(qū)。從本草記載看，薜荔在我國的藥用歷史久遠。植物名貴圖考(公元1670)稱“俗以其實中子浸汁為涼粉，以解暑”，可見薜荔在中國甚早即己知可利用其種子洗出膠體食用。薜荔的藥用價值和其營養(yǎng)價值很早就為人所知，然而因其以野生為主，國內(nèi)外對其研究報道較少，對此資源的研究與利用處于比較的低水平。1.1薜荔的營養(yǎng)成分和藥用價值近年來，關(guān)于薜荔營養(yǎng)成分的研究，國內(nèi)報道較多，而國外報道相對較少。薜荔的花粉、瘦果、果皮和種子、莖葉以及藤都含有豐富的營養(yǎng)成分。吳文珊等對薛荔進行成分預試驗中發(fā)現(xiàn)，以薜荔葉為原料提取黃酮類物質(zhì)，總黃酮最大提取率為4．5％。Katajarna，J．(1998)等研究了薜荔的莖和葉中的化學成分，分離得到兩種香豆素、10種類黃酮化合物、兩種糖甙類化合物。范明松等人對薜荔地上除果部分外干樣的化學成分進行了研究，分離得到16種化合物。此外，薛荔藤內(nèi)含內(nèi)肌醇、蕓香甙、O．谷甾醇等化合物。吳文珊等測定了薛荔花粉干樣的營養(yǎng)成分，結(jié)果表明蛋白質(zhì)高達39．88％、總糖18．83％、此外還含有一定量的脂肪酸、黃銅類物質(zhì)和維生素(Vbl，Vb2、Vc、ve和胡蘿卜素)。同年，研究者研究了薜荔瘦果的營養(yǎng)成分，結(jié)果表明薛荔花被中含果膠32．70％，蛋白質(zhì)3．80％總糖量20．33％，總黃酮15．14％；種子中亦含有豐富的營養(yǎng)成分，其中果膠含量為5．73％～10．8％，遠高于其他含果膠量高的植物果實，是一種是良好的果膠資源。薜荔不僅具有豐富的營養(yǎng)價值，而且還具有很高的藥用價值。薜荔的根、莖、藤、葉、果均可入藥。藥理研究顯示，薜荔有抗菌、增強免疫、抗腫瘤、抗誘導、抗炎鎮(zhèn)痛、驅(qū)蛔蟲等活性。空軍漢口醫(yī)院腫瘤防治小組通過動物試驗，研究了薜荔果多糖抗腫瘤作用，結(jié)果表明薜荔籽的水洗粘液對多種小自鼠移植性腫瘤的生長，有較明顯的抑制作用。鄂少廷等研究表明薜荔果多糖對化療藥所致的免疫抑制現(xiàn)象似有糾正作用，且對放療、化療后的骨髓有一定的保護作用。吳文珊等以薜荔的水提液和乙醇提取液進行抑菌藥敏試驗，結(jié)果顯示薜荔的水提液對大腸桿菌抑菌效果明顯；乙醇提取液對枯草芽孢桿菌的抑菌效果較為顯著，對啤酒酵母、桔青霉、黑曲霉等真菌均無抑菌作用。此外，薜荔亦可用于治療其它惡性腫瘤。2.1實驗材料薜荔果采集于湖南省永州市祁陽縣肖家村鎮(zhèn)八廟村2.2實驗試劑95％乙醇(分析純，天津大茂化學試劑廠)；咔唑(分析純，北京化學試劑公司)；濃硫酸(分析純，廣東汕頭西攏試劑廠)。2.3實驗儀器TDL．5．A臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)；SHA-D(Ш)循環(huán)式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）；RE-52C型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鞏義市予華儀器有限責任公司）；HH-600數(shù)顯三用恒溫水浴箱（無錫沃信儀器有限公司）；SHA-D(Ш)循環(huán)式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）；ARll40電子分析天平(奧豪斯國際貿(mào)易(上海)有限公司)；DZG．6020型真空干燥箱(上海森信試驗儀器有限公司)；752型紫外可見分光光度計（上海光譜儀器有限公司）；FW177型中草藥粉碎機（上海隆拓儀器設備有限公司）；DHG·9145A電熱恒溫鼓風干燥箱(上海恒科技儀器有限公司)。3實驗步驟采用低溫水萃取法提取薜荔耔果膠的基本工藝流程如下：薜荔瘦果(除雜過篩)→薜荔籽(加水)→加熱浸提(濾布)→過濾→乙醇沉淀→離心→乙醇洗滌(沉淀)→干燥→稱重(果膠含量測定)→提取率計算稱取薜荔籽粉20g，按液固比為28:1ml/g，加入560ml蒸餾水，于65℃水浴鍋中加熱，提取60min，將提取完的果膠水溶液過120目濾布，再用玻璃棒擠壓濾布至干為止。濃縮：將過濾后的果膠溶液置于60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀內(nèi)濃縮。沉淀：按體積比為1:2加入95%乙醇沉淀，冷卻置于4℃冰箱中靜置過夜。離心：六支離心管內(nèi)沉淀均為25g，轉(zhuǎn)速為4000r/min，離心20min，將上清液倒棄，加入濃度為78%乙醇并進行第二次離心。干燥：將果膠放入已恒重的培養(yǎng)皿中，置于電熱恒溫鼓風干燥箱中，55℃下干燥5h。3.1計算公式式中：Ml一干燥后果膠的重量(g)Mo一容器重量(g)M2一薜荔籽重量(g)3.2果膠的純度測定采用咔唑硫酸法，依據(jù)果膠水解之后的生成物(半乳糖醛酸)在強酸溶液中與咔唑試劑作用發(fā)生縮合反應，呈現(xiàn)紫紅色。540nm處呈色強度與試樣中半乳糖醛酸的含量成正比，測定薜荔籽果膠中果膠質(zhì)含量。3.3吸收光譜曲線和最大吸收波長的確定將顯色樣品溶液用紫外可見分光光度計從400--850nm掃描樣品的吸光度，繪制吸收曲線。結(jié)果見圖（圖3.4）。從圖中可以得到樣品溶液在526nm處有最大吸收峰。吸收光譜曲線4果膠的咔哇硫酸分光光度測定法標準曲線的制作：準確稱取分析純G.A0.0500g,用蒸餾水溶解后定容于50mL容量瓶中(濃度1mg/ml),于6個5mL容量瓶中分別吸取此液O、1、2、3、4、5mL,配成0、20、40、60、80、100mg/ml。取6支比色管分別加入上述溶液1ml，然后各加入6ml濃硫酸,用自來水邊加邊冷卻至室溫后,各加入0.30mL0.15%咔唑無水乙醇溶液,搖勻。在室溫下暗處放置1.5h,在540nm處測吸光度(A)，以試劑空白作參比,繪制標準曲線。標準曲線的吸光值含量（mg）020.0040.0050.0060.0080.00100.00吸光度（A）0.0000.0460.0720.2020.2250.3270.263咔唑硫酸分光光度法標準曲線4.1樣品測定：準確稱取0.035一0.040g果膠粉于50mL燒杯中,加入10mL0.5mol濃硫酸，15mL水,攪勻,在75℃水中水解15min，冷卻至室溫后定容于50mL容量瓶中。然后,準確移取5.00mL該液于另一50mL容量瓶,稀釋至刻度。標準稀釋液的測定。4.2計算公式：式中：c為從標準曲線查得的所測果膠液中G.A的濃度(mg/l)，W為果膠粉質(zhì)量(