安捷倫液相色譜使用問題與解決方案

安捷倫液相色譜使用問題與解決方案AgilentLC問題與答案一．什么原因?qū)е乱合嗌V儀壓力過高？可能的原因：1.排氣閥里面的PTFE濾蕊堵塞。2.壓力上限設(shè)置太低。3.壓力傳感器堵塞。4.建議的措施：1.打開排氣閥。如果壓力依然很高，則更換排氣閥內(nèi)的PTFE濾芯。2.查看軟件的壓力上限設(shè)置并確保設(shè)置值適于分析。3.檢查系統(tǒng)內(nèi)的堵塞部位。（如下所述）要檢查是否堵塞，請(qǐng)采用隔離系統(tǒng)的方法來排除故障：將安裝的色譜柱、預(yù)色譜柱和預(yù)色譜柱過濾器摘開。①.如果壓力恢復(fù)到正常值，則在色譜柱的位置安裝ZDV接頭。A如果壓力正常，則色譜柱、預(yù)色譜柱或過濾器是產(chǎn)生問題的原因。請(qǐng)進(jìn)行更換。B如果壓力仍然很高，則在色譜柱的另一端查找堵塞位置（例如：通入檢測器或從其通出的管路）。②.如果取出色譜柱后壓力依然很高，則檢查從排氣閥到自動(dòng)進(jìn)樣器的管路。如果壓力正常，則使用進(jìn)樣步驟命令將自動(dòng)進(jìn)樣器的進(jìn)樣閥切換到旁路狀態(tài)。A如果壓力正常，則說明自動(dòng)進(jìn)樣器堵塞。請(qǐng)檢查針、針座、針座毛細(xì)管和轉(zhuǎn)子密封墊。B如果壓力依然很高，則檢查從進(jìn)樣六通閥到色譜柱入口之間的管線.。二．改變填料孔徑大小對(duì)液相色譜分離有什么影響？填料孔徑越小，允許的流動(dòng)相線速度越高。最佳流動(dòng)相線速度取決于固定相的顆粒大小。在最佳線速度時(shí)，色譜柱生成的理論塔板數(shù)最多。對(duì)于內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱，10um的顆粒流動(dòng)相線速度為0.75ml/min或5um的顆粒流動(dòng)相線速度為1.5ml/min時(shí)，塔板數(shù)最多三．如何避免峰拖尾和峰分叉？與色譜柱相關(guān)的原因及處理方法1色譜柱污染;處理方法:清洗或更換色譜柱2色譜柱填料有問題;處理方法:反沖色譜柱或更換柱頭過濾片3色譜柱中間出現(xiàn)間斷;處理方法:更換色譜柱或填充空隙4保護(hù)柱失效;處理方法:更換保護(hù)柱5樣品分布差;處理方法:改進(jìn)色譜柱進(jìn)口的設(shè)計(jì)6與色譜柱無關(guān)的原因：柱外體積大、樣品過量、流動(dòng)相組分（添加劑、pH值、緩沖液濃度）改變。四．改變填料顆粒大小和色譜柱的長度對(duì)液相色譜分離有什么影響？如果填料顆粒大小減半，則理論塔板數(shù)加倍（假設(shè)柱長不變）。如果填料顆粒大小減半，則柱壓增加為原來的四倍。如果柱長加倍，則理論塔板數(shù)加倍。如果柱長加倍，則分析時(shí)間加倍。隨著柱長增加，柱壓也線性地增加。以下是一個(gè)根據(jù)上述信息選擇色譜柱的示例：一個(gè)裝填10um填料的長度為200mm的色譜柱可生成6000塊理論塔板，這是在很多情況下能提供比較適當(dāng)?shù)姆蛛x的色譜柱效率。將顆粒大小由10um減小到5um，柱長仍為200mm，則可生成12000塊理論塔板。然而，這個(gè)色譜柱可生成相當(dāng)于原來四倍的柱壓。通常情況下不需要生成12000塊塔板，因此柱長可減半至100mm，結(jié)果生成6000塊塔板，同時(shí)分析時(shí)間也縮短一半；柱壓僅比最初裝填10um填料的長度為200mm的色譜柱高兩倍五．如何選擇液相色譜保護(hù)柱？保護(hù)柱的作用是用來防止分析柱被一些微粒物質(zhì)堵塞,及在色譜柱上強(qiáng)吸附組分在色譜柱上吸附。為防止樣品的雜質(zhì)不進(jìn)入色譜分析柱,不出現(xiàn)不必要的峰展寬，保護(hù)柱與分析柱的體積比應(yīng)在1:15至1:25之間。在理想的情況下，保護(hù)柱的填料應(yīng)與分析柱相同，以確保得到分析柱較好的色譜圖。盡量使保護(hù)柱與分析柱近似。在我們的目錄里，將分析柱和與其配套的保護(hù)柱列在一起。六．色譜圖上出現(xiàn)鬼峰。如何消除？可能的原因有：1.上次進(jìn)樣遺留組分產(chǎn)生2.有污染3.有氣泡4.色譜柱問題5.保護(hù)柱失效建議用戶:1.做樣品后應(yīng)保證有足夠時(shí)間沖洗色譜柱,。有必要的話在運(yùn)行結(jié)束后使用更強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱。2.洗脫原色譜柱中的原有污染。3.為確保系統(tǒng)中沒有氣泡，只使用徹底脫氣后的溶劑。4.更換色譜柱。5.更換保護(hù)柱。6.檢查流動(dòng)相純度。7.檢查樣品中的其他成分.七．如何避免液相基線飄移？基線向上飄移表明系統(tǒng)中有污染。請(qǐng)沖洗色譜柱，凈化樣品，然后使用新溶劑。向下飄移通常是由于檢測室或柱箱中的溫度波動(dòng)的原因。減小室溫變化，將儀器從通風(fēng)櫥中取出，并將色譜柱和毛細(xì)管保溫隔熱。向下飄移也可能由于溶劑的純度不是HPLC級(jí)別的溶劑而且此純度低的溶劑在紫外有吸收。八．如何排除流動(dòng)相/流動(dòng)池中的氣泡？避免流動(dòng)相中產(chǎn)生氣泡的最佳方式是將流動(dòng)相經(jīng)脫氣裝置進(jìn)行脫氣。如果沒有脫氣裝置，則可以在流動(dòng)相溶劑瓶中通入氦氣進(jìn)行脫氣。也可以在檢測器的出口端加一根細(xì)管線以調(diào)節(jié)流動(dòng)池中的背壓，但必須注意不要超過流動(dòng)池