藥品生產(chǎn)驗證指南 第三篇 檢驗方法和清潔驗證、無菌保證

TOC\o"1-5"\h\z\o"CurrentDocument"第三篇檢驗方法和清潔驗證、無菌保證1\o"CurrentDocument"第一章檢驗方法驗證1\o"CurrentDocument"第一節(jié)概述1\o"CurrentDocument"第二節(jié)驗證的定義及分類2\o"CurrentDocument"第三節(jié)檢驗方法驗證的基本內(nèi)容3\o"CurrentDocument"第四節(jié)藥品微生物檢查方法的驗證7\o"CurrentDocument"第五節(jié)確認及驗證示例10\o"CurrentDocument"第二章清潔驗證26\o"CurrentDocument"第一節(jié)概要26\o"CurrentDocument"第二節(jié)清潔方法的制訂26\o"CurrentDocument"第三節(jié)清潔驗證方案的準備28\o"CurrentDocument"第四節(jié)驗證的實施35\o"CurrentDocument"第五節(jié)清潔方法的監(jiān)控與再驗證36\o"CurrentDocument"第六節(jié)清潔方法的優(yōu)化36\o"CurrentDocument"第七節(jié)驗證方案實例——大容量注射劑在線清洗驗證方案37\o"CurrentDocument"第三章熱力滅菌動力學基礎與無菌保證38\o"CurrentDocument"第一節(jié)熱力滅菌的動力學基礎39\o"CurrentDocument"第二節(jié)滅菌產(chǎn)品的無菌保證47第三篇檢驗方法和清潔驗證、無菌保證第一章檢驗方法驗證第一節(jié)概述一、引言藥品的生產(chǎn)過程中，原料、中間體、成品均需進行檢驗，檢驗結果既是過程受控的依據(jù)，也是評價產(chǎn)品質(zhì)量的重要依據(jù)，檢驗結果應具有準確可靠。而檢驗方法的驗證為檢驗結果的準確及可靠提供了有力保障。國內(nèi)外在檢驗方法的驗證方面已有了許多法規(guī)、規(guī)定。如美國食品藥品管理局(FoodandDrugAdministration，簡稱FDA)1994年11月公布了《色譜方法的驗證》(ValidationofChromatographicMethods)；1987年2月公布新品注冊相關的《送樣及上報檢驗方法驗證資料指南》)(GuidanceforSubmittingSamplesandAnalyticalDataforMethodsValidation)；人用藥品注冊技術要求國際互認協(xié)會(theInternationalConferenceonHarmonizationofTechnicalRequirementsforRegistrationofPharmaceuticalsforHumanUse簡稱ICH)1995年3月頒布了《分析方法的驗證》》(TextonValidationofAnalyticalProcedures)規(guī)定了需進行驗證的方法的種類和應考察的項目，還對分析方法、專屬性、準確度、精密度、重現(xiàn)性作出明確定義，從而統(tǒng)一了各國藥典和法規(guī)對這些術語的解釋；作為對《分析方法的驗證》的補充、擴展，ICH于1996年11月頒了《分析方法的驗證：方法學》(ValidationofAnalyticalProcedures.Methodology)；美國藥典第24版<1225>規(guī)定了《藥典方法的驗證))(ValidationofCompendialMethods)；中國藥典2000版附錄XIXA規(guī)定了《藥品質(zhì)量標準分析方法驗證》。這些法規(guī)、規(guī)定從不同方面對檢驗方法的驗證作了規(guī)定，它們是實施檢驗方法驗證的重要依據(jù)。本章將著重討論檢驗方法驗證的基本內(nèi)容，并以示例形式介紹驗證的基本實踐，以使本章的內(nèi)容具有可操作性。方法驗證有以下幾個先決條件，在進行方法驗證以前，必須逐條進行檢查［1］。儀器已經(jīng)過校正且在有效期內(nèi)。人員人員應經(jīng)過充分的培訓，熟悉方法及所使用的儀器。參照品參照品的來源一般有3個：購自法定機構(如中國生物制品檢定所)的法定參照品；購自可靠的供應商，如Sigma,Merck等；自備參照品，其純度和性能可自行檢測或由法定檢驗機構檢測。材料所用材料，包括試劑、實驗用容器等，均應符合試驗要求，不給實驗帶來污染、誤差。如進行高效液相色譜分析時，所用試劑應為色譜級；檢查鐵鹽時使用的鹽酸不得含有鐵鹽等。穩(wěn)定性應在開始進行方法驗證前考察試驗溶液和試劑的穩(wěn)定性，確保在檢驗周期內(nèi)試驗溶液和試劑是穩(wěn)定的。使用自動進樣器，一般是預先配制好一系列樣品溶液置進樣器中，依次進樣。這時要確保進樣周期內(nèi)樣品溶液是穩(wěn)定的。隨著科學技術的發(fā)展，儀器分析在檢驗方法中所占的比例越來越大。為保證分析數(shù)據(jù)的可靠性，儀器的確認也就顯得越來越重要。儀器的確認一般分為安裝確認、運行確認、性能確認、預防性維修和再確認5個方面。本章將用一定篇幅對這5方面進行介紹。常規(guī)化驗中常用的容量儀器、分析天平的校正以附錄形式附后，便于驗證中使用。二、檢驗方法驗證的意義檢驗方法的驗證是質(zhì)量保證體系的重要組成部分，它的必要性至少可從以下4個方面來認識。藥品標準的建立和執(zhí)行需要經(jīng)驗證的檢驗方法《中華人民共和國藥品管理法》［2］第五章“藥品管理”第三十二條明文規(guī)定“藥品必須符合國家藥品標準”。第二章“藥品生產(chǎn)企業(yè)管理”第十二條明文規(guī)定“藥品生產(chǎn)企業(yè)必須對其生產(chǎn)的藥品進行質(zhì)量檢驗；不符合國家藥品標準或者不按照省、自治區(qū)、直轄市人民政府藥品監(jiān)督管理部門制定的中藥飲版炮制規(guī)范炮制的，不得出廠”。眾所周知，藥品標準由兩部分基本內(nèi)容組成：一是項目的規(guī)格標準或限度；二是相應的檢驗方法和操作步驟。新品開發(fā)建立的藥品質(zhì)量標準必須同時包括這兩個方面的內(nèi)容。只有項目的規(guī)格標準或限度，沒有具備一定準確度、精密度和重現(xiàn)性的檢驗方法、操作步驟，就不成其為藥品質(zhì)量標準。對于現(xiàn)行版藥典收載品種的質(zhì)量標準，我國2000年版藥典二部“凡例”第十四條有明確規(guī)定“本版藥典收載的原料藥及制劑，均應按規(guī)定的方法進行檢驗如采用其他方法，應將該方法與規(guī)定的方法做比較試驗，根據(jù)試驗結果掌握使用，但在仲裁時仍以本版藥典規(guī)定的方法為準。”這里所說的與規(guī)定方法的比較試驗，其實際含義即是用其他方法進行分析時，必須對該方法進行驗證并確認該方法可靠準確時方能使用。工藝過程的監(jiān)控需要經(jīng)驗證檢驗方法從質(zhì)量保證的觀點出發(fā)，廠房、設備、工藝經(jīng)過驗證投入正常運行后，應當對已驗證過的狀態(tài)進行監(jiān)控。這種監(jiān)控包括以下方面。工藝環(huán)境例如，凍干制及粉針無菌分裝區(qū)潔凈級別的監(jiān)控。生產(chǎn)作業(yè)如無菌過濾器使用前后的完好性檢查；又如對輸液產(chǎn)品而言，能綜合反映工藝環(huán)境、生產(chǎn)作業(yè)、人員個人衛(wèi)生等狀況的滅菌前藥液含菌量的監(jiān)控。介質(zhì)如氮氣的純度控制、生產(chǎn)用水的質(zhì)量控制。原料和輔料的質(zhì)量監(jiān)控如藥用級大豆油中脂肪酸組分的測定；氣霧劑生產(chǎn)用的氟里昂中水分的檢查；某些原料晶形的檢查以及往往被忽視的原輔料細度的檢查等。另外，成品檢驗結果的統(tǒng)計分析可用于證明已驗證工藝的受控狀態(tài)，如一些固休制劑含量均勻度檢查、含量測定、溶出度測定、崩解時限、注射劑的澄明度等都能從某個方面反映工藝過程的受控狀態(tài)。所有這些都離不開檢查方法，沒有經(jīng)過驗證的、可靠的檢驗方法，藥品質(zhì)量保證將是一句空話。藥品的商業(yè)交換需要經(jīng)驗證的檢驗方法藥品的商業(yè)交換需要驗證的檢驗方法是不言而喻的，生產(chǎn)單位的檢驗結果與使用單位或監(jiān)控管理部門的檢驗結果應在允許范圍之內(nèi)。如抗生素、肝素鈉的商業(yè)交換以效價為單位結算費用，如果檢驗結果不準確，不僅可能帶來經(jīng)濟上的損失，更重要的是影響到企業(yè)的信譽。由于方法沒有驗證，廠方自己的內(nèi)控方法沒有和法定的方法進行驗證和對照，供需雙方檢驗結果不一致，引起糾葛，甚至導致客戶大批退貨事件的發(fā)生也是不足為怪的。總之，法定的、經(jīng)過驗證的方法是藥品進行商業(yè)交換的必要條件。藥品生產(chǎn)驗證需要經(jīng)驗證的檢驗方法藥品生產(chǎn)驗證中不論何種劑型都涉及到檢驗方法的檢驗。分析檢驗工作通常被人們比作一個人的眼睛，通過分析檢驗才能對藥品質(zhì)量作出判斷。如果檢驗方法沒有經(jīng)過檢驗，在準確性和重現(xiàn)性上存在問題，無論如何進行檢驗都是徒勞的，對藥品質(zhì)量的評價是盲目的。藥品生產(chǎn)驗證中使用的檢驗方法應經(jīng)過驗證后方能使用。GMP的基本實踐告訴我們，為確保工藝的可靠性和重現(xiàn)性，工藝必須驗證；同樣，為確保檢驗方法的準確性和重現(xiàn)性，檢驗方法同樣必須進行驗證。第二節(jié)驗證的定義及分類一、驗證的定義WHO1992年版的GMP對驗證的定義為：“能證實任何程序、生產(chǎn)過程、設備、物料、活動或系統(tǒng)確實能導致預期結果的有文件證明的行動?！卑创硕x來理解，工藝驗證和檢驗方法驗證兩者之間有相同或相似的特點。（一）目標相似對工藝驗證的要求是實現(xiàn)工藝的可靠性和重現(xiàn)性，始終如一地生產(chǎn)出符合預定規(guī)格及質(zhì)量的產(chǎn)品為最終目標。對檢驗方法驗證的要求則是檢驗方法的準確度和重現(xiàn)性，始終如一地獲得符合客觀實際的數(shù)據(jù)或結果為最終目標。（二）手段相似工藝驗證以關鍵工藝變量的控制為手段，檢驗方法的驗證則以控制檢驗的試驗條件為手段。（三）主體相同都必須包括GMP中最為活躍的因素一一人員。驗證的過程也同時是一個人員在職培訓的過程。（四）前提相同工藝驗證的前提是在產(chǎn)品開發(fā)階段已完成配方及工藝條件的優(yōu)化工作。檢驗方法驗證的前提是在檢驗方法開發(fā)階段已完成方法的測試條件的優(yōu)選工作，排除了干擾因素。（五）類型相同兩者都有3種基本的驗證類型：前驗證、回顧性驗證和再驗證。二、驗證的分類檢驗方法的驗證工作可分為3種類型：前驗證、回顧性驗證和再驗證。（一）前驗證檢驗方法的前驗證系指在方法正式投入使用前按照設定的方案進行試驗，收集證據(jù)以證實檢驗方法達到預期要求的一系列活動。前驗證的基本步驟和內(nèi)容可參見第一篇第三章第四節(jié)。（二）回顧性驗證檢驗方法的回顧性驗證系指利用對現(xiàn)有的歷史數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，收集證據(jù)，以證明檢驗方法達到預期要求的行為。對以下兩種情況可實施回顧性驗證。一檢驗方法已長期使用，結果穩(wěn)定，由于方法投入使用時，法規(guī)尚無方法驗證方面的要求，因而缺乏必要的原始驗證資料。對某一方法的驗證數(shù)據(jù)表示懷疑時。這類驗證的先決條件是生產(chǎn)的工藝條件沒有變更，有完整的批生產(chǎn)記錄和批檢驗記錄可進行追溯。每批的投料量和檢驗的結果，生產(chǎn)作業(yè)中出現(xiàn)的偏差和糾正措施以及檢驗過程中出現(xiàn)的異常情況等均有據(jù)可查。如果一個方法在使用過程中曾做過若干次修改，相應的數(shù)據(jù)應分段進行統(tǒng)計分析。在回顧性驗證中，可以把產(chǎn)品各批的樣品作為一個系列具有目標值的“標準”來看待，把相應的檢驗結果與之比較，如果檢驗結果的平均值是目標值且處在一個統(tǒng)計的控制狀態(tài)，便證明了檢驗方法的可靠性和重現(xiàn)性。對上述歷史數(shù)據(jù)進行匯總，統(tǒng)計分析及綜合評價并經(jīng)過批準的報告即是回顧性驗證的文件。第二個進行回顧性驗證的方法是利用對照品和相應的輔助材料在實驗室配制“檢驗標準”，得到一系列已知濃度的樣品，進行常規(guī)檢驗，把分析結果記錄于控制圖上。如果分析結果的平均值接近“標準”，并處在統(tǒng)計的控制狀態(tài)，那么這些結果可用于驗證的目的。另外，由于實驗室不具備生產(chǎn)車間的工藝條件，如車間制粒、滅菌等，這些因素對結果可能產(chǎn)生的影響也應加以考慮。實際上，在實驗室配制“檢驗標準”將結果和標準比較的方法是一種后補措施，用現(xiàn)實來推斷歷史。在可能條件下應盡可能采取前驗證的方法進行驗證，以減少質(zhì)量及經(jīng)濟方面可能的風險，提高質(zhì)量保證的可信度。（三）再驗證出現(xiàn)下述情況時需對檢驗方法進行再驗證。儀器更新或大修。檢驗方法獲得的結果作趨勢分析，發(fā)現(xiàn)系統(tǒng)性偏差。對檢驗方法進行了修訂或檢測條件發(fā)生了變更。經(jīng)過一段使用時間，對檢驗方法的再驗證。再驗證的目的是證實驗證的狀態(tài)沒有發(fā)生飄移。第三節(jié)檢驗方法驗證的基本內(nèi)容一、檢驗儀器的確認[3]檢驗儀器是一統(tǒng)稱，它實際分為兩類。一類是測量儀器，只進行測量，不涉及分析過程。如計時器、溫度計、天平、pH計、分光光度計、HPLC中的檢測器等。計量儀器如容量瓶、移液管、滴定管等通常也歸人此類。另一類是分析儀器，它不僅進行測量，還有一分析過程。女OHPLC系統(tǒng)，它先將樣品組分進行分離，然后再用檢測器進行檢測，即測量。測量儀器只需進行安裝確認和校正，無需進行其他確認步驟。分析儀器的確認一般分為安裝確認、運行確認、性能確認、預防性維修和再確認5個方面。測量儀器的確認因比較簡單，故本章只在示例中討論中加以說明。以下著重討論分析儀器的確認。安裝確認指資料檢查歸檔、備件驗收入庫、檢查安裝是否符合設計和安裝要求有記錄和文件證明的一系列活動。同工藝驗證中生產(chǎn)設備一樣，儀器安裝確認的主要內(nèi)容包括如下幾點。按訂貨合同核對所到貨物正確無誤，并登記儀器代號、名稱、型號、生產(chǎn)廠商名稱、生產(chǎn)廠商的編號、生產(chǎn)日期、公司內(nèi)部固定資產(chǎn)設備登記號及安裝地點。檢查并確保有該儀器的使用說明書、維修保養(yǎng)手冊和備件清單，并收集、匯編和翻澤(必要時)儀器使用說明書和維修保養(yǎng)手冊。檢查安裝是否恰當，氣、電及管路連接是否符合供貨商的要求。制定使用規(guī)程和維修保養(yǎng)規(guī)程，建立使用日記和維修記錄。制定清洗規(guī)程。明確儀器設備技術資料(圖、手冊、備件清單、各種指南及與該機器設備有關的其他文件)的專管人員及存放地點。除上面提到的內(nèi)容外，在安裝確認方案中對儀器的性能用途應有一概述并記錄維修服務單位的名稱，聯(lián)系人電話號碼、傳真號、銀行賬號等。以利于日后的維修保養(yǎng)活動，這對大型精密儀器尤為重要。進行運行確認前，應有一份安裝確認報告，以文件形式來說明安裝確認的有關工作已經(jīng)完成并符合要求。運行確認即為空載試驗，它在不使用樣品的前提下，確認儀器達到設計的要求。如氣相色譜儀的程序升溫設定后能否按設定程序執(zhí)行，溶出儀轉速能否達到規(guī)定的性能要求，紫外分光光度計的吸收度與透光率的轉換是否符合要求等。對于高效液相色譜(HPLC)系統(tǒng)的運行確認，其內(nèi)容可參見表3—1。運行確認前應確定校驗方法及限度。校驗方法及限度可參照生產(chǎn)廠家推薦的方法及限度，也可參照使用者的要求?，F(xiàn)在許多大型儀器的運行確認都由儀器生產(chǎn)廠家專派技術人員前來進行，此時只需將他們的測試數(shù)據(jù)記錄下來即可，沒有必要再單獨重復進行一次運行確認。性能確認主要考察儀器運行的可靠性、主要運行參數(shù)的穩(wěn)定性和結果的重現(xiàn)性。通常取某一樣品按給定方法進行試驗，考察結果是否符合方法設定的要求。性能確認一般與具體分析方法相聯(lián)系，如系統(tǒng)適用性試驗即屬于性能確認的范疇。預防性維修(Preventive—maintenance)是許多HPLC生產(chǎn)廠商建議進行的步驟。預防性維修是為了確保儀器處于良好的使用狀態(tài)，根據(jù)儀器的類別、確認的經(jīng)驗制定的維修計劃。它可以減少由于儀器故障而引起實驗失敗的次數(shù)。預防性維修的頻率取決于儀器的使用情況，一般剛開始時定為12個月，而后根據(jù)實際情況延長或縮短。預防性維修的內(nèi)容一般是對儀器主要的性能參數(shù)進行檢查，確認其在設定的范圍內(nèi)，實際上是進行一次運行確認。對于不符合規(guī)定的元件，則進行適當?shù)男蘩砘蚋鼡Q，使其達到要求。再確認一般在分析儀器經(jīng)過較大的變更后進行，如經(jīng)過修理或其中的元件被更換等，其目的是在證實已確認的狀態(tài)沒有發(fā)生飄移。再確認一般只需運行確認和性能確認即可。每件儀器在確認前都應有確認計劃，按確認計劃進行確認。確認結束后應有儀器確認報告，記錄確認過程及原始數(shù)據(jù)。儀器確認報告應歸檔保存，以便查閱。表3—1HPLC系統(tǒng)運行確認試驗及限度各儀器名稱儀器中各組件功能試驗項目限度泵流量控制閥向系統(tǒng)輸出流動相流速準確度5%流動相比例控制閥控制各流動相的比例流動相混合比例的準確度土[F(1—F)10%,F為所測流動相組分所占的體積比自動進樣器進樣體積控制閥將定量體積的樣品注入色譜柱精密度RSD應W1.0%柱溫箱溫度控制器保持色譜柱的溫度準確度精密度W土3.0°C，波動應在1.0°C內(nèi)UV檢測器單色器從連續(xù)光譜中分離出單色光準確度土3nm光電管測定樣品的吸收度線性相關系數(shù)不得小于0.999二、檢驗方法驗證的類型及基本要求(一)概述方法驗證的目的是證明所采用的方法達到相應的檢測要求。由于分析性質(zhì)的差異，本節(jié)中所討論的驗證內(nèi)容不適用微生物分析方法，微生物分析方法的驗證將在本章第四節(jié)中介紹。驗證的內(nèi)容主要包括準確度、精密度、專屬性、檢測限、定量限、線性、范圍、粗放性和耐用性9個方面。藥典收載的方法一般比較成熟，需驗證的內(nèi)容與新開發(fā)的檢驗方法有很大差異，美國藥典中明確規(guī)定其所收載的方法需做系統(tǒng)適用性試驗，這即是美國藥典對方法驗證的要求。某一方法需到底須進行哪些項目的驗證，應根據(jù)實際情況而定，并不是所有的方法都必需進行以上9個方面的驗證試驗。方法驗證的范圍，一般來說，可分以下3種情況區(qū)別對待。對于直接弓1用有法定依據(jù)的方法，如藥典標準和部頒標準，僅做系統(tǒng)適用性試驗即可。但若將法定方法用于測定新藥，或將某一品種的法定測定方法用于另一品種，就需進行系統(tǒng)的方法驗證。對于已在一實驗室驗證過但需在另一個實驗室使用的分析方法，可采用對照試驗法。即取同一批樣品，按此方法在兩實驗室分別進行檢驗，將結果進行比較（如用t檢驗法計算），判斷是否有顯著性差異。這特別適用于大公司（包括跨國公司）的情況。母公司完成了系統(tǒng)的方法驗證工作，子公司實驗室均可用結果對照的方法進行判斷，節(jié)省了大量人力、物力。國外稱這種做法為“技術轉移”（Technicaltransfer）。其他分析方法可分為4種類型，驗證要求可參見表3—2[4]。（二）驗證的內(nèi)容及基本要求1．準確度準確度是指用該方法測定的結果與真實值接近的程度，一般用回收率表示。準確度的測定至少要取方法范圍內(nèi)的3個濃度級別，每個濃度級別至少要測定3次。如某方法的范圍是80%?120%,則應取80%、100%、120%3個濃度，每個濃度測定3次，計算9個測定結果的回收率及相對標準偏差，回收率及相對標準偏差均應在規(guī)定限度之內(nèi)。（1）原料藥含量分析可通過分析已知純度的對照品或樣品進行測定；或用本法所得結果與另一已驗證的方法所得結果進行比較。（2）制劑中各組分的含量分析按制劑處方取適量各組分進行有機混合得一混合物進行測定，從而確定方法的準確度。若不可能得到處方中所有組分，可往制劑中加入已知量的被分析物進行測定；另一方法是把此方法的分析結果與另一已建立準確度的方法的分析結果進行比較。表3－2不同分析方法的驗證要求驗證項目類型類型I類型II類型III類型W定量測定限度試驗準確度要求要求**一精密度要求要求一要求一專屬性要求要求要求*要求檢測限一一要求*一定量限一要求一*一線性要求要求一*一范圍要求要求**一注：“－”表示不作要求；“*”表示需根據(jù)實驗特性決定是否作要求。類型I指用于測定原料藥中主要成分或制劑中活性組分（包括防腐劑）的定量分析方法。類型II指用于測定原料藥中雜質(zhì)或制劑中降解產(chǎn)物的分析方法，包括定量分析和限度試驗。類型III指用于測定性能特性（如溶解度、溶出度）的分析方法。類型W指鑒別試驗。（3）雜質(zhì)的定量分析往樣品中加入已知量的雜質(zhì)進行測定；若不可能得到某種雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可把此方法的分析結果與另一已驗證的方法的結果進行比較來確定。雜質(zhì)的量可用雜質(zhì)與主藥響應值的比值來表示。2．精密度精密度指在規(guī)定的測試條件下，同一個均勻樣品，經(jīng)多次取樣測定所得結果之間的接近程度。精密度一般用偏差、標準偏差或相對標準偏差（變異系數(shù)）表示。精密度又分為重復性、中間精密度、重現(xiàn)性3類。在相同條件下，由同一分析人員測定所得結果的精密度稱為重復性；在同一實驗室，不同時間由不同分析員用不同設備測定結果的精密度，稱為中間精密度；在不同實驗室由不同分析人員測定結果的精密度，稱為重現(xiàn)性。（1）重復性方法重復性的確定至少要取方法范圍內(nèi)的3個濃度級別，每個濃度級別至少要測定3次；或取100%的樣品濃度至少測定6次。應自樣品制備開始制備6份樣品溶液，所得結果的相對標準偏差即為方法重復性。自動進樣器重復性的測試，一般取同一樣品溶液至少重復進樣10次，其相對標準偏差不應大于1%。中間精密度中間精密度主要是為考察隨機變動因素(如時間、人員、設備等)對精密度的影響，但不必對每個可能的影響因素進行單個的考察，可設計方案對其進行統(tǒng)一考察。色譜分析方法由于受外界因素的影響較大，故一般需考察中間精密度，至少應在兩種不同條件下進行考察(如不同時間，更換實驗人員等)。重現(xiàn)性一般實驗室不進行此項考察，只有當分析方法將被法定標準采用時，才進行重現(xiàn)性試驗。建立藥典分析方法時常需通過協(xié)同檢查得出重現(xiàn)性的結果。如紫外分光光度法中吸收系數(shù)》l%lcm的確定，需通過5個以上實驗室分析，測定結果符合數(shù)理統(tǒng)計要求，才能采納使用，收入標準。準確度和精密度之間沒有必然的聯(lián)系。測量的精密度不能說明測量值與真值的關系，精密的測量值不一定是準確的，因為引起測量值遠離真值的誤差可能會對一系列的測量發(fā)生同樣的影響，而不影響精密度，這即是系統(tǒng)誤差的概念。3．專屬專屬性系指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，采用的方法能準確測定出被測物的特性。對于鑒別試驗，應證明當樣品中含有被分析物時呈正反應，當不含被分析物時呈(陰性)負反應。必要時，需證明與被分析物結構相似或相近的物質(zhì)均不呈正反應。對于雜質(zhì)的測定，一般取含一定雜質(zhì)量的樣品進行分析，證明此雜質(zhì)測定其具有適宜的準確度和精密度即可。對于含量分析，可通過加入一定量的雜質(zhì)或賦形劑至樣品中，通過分析證明結果不受影響。若雜質(zhì)或降解產(chǎn)物為未知物，可將樣品用強光照射、高溫、高濕、酸堿水解或氧化的法進行加速破壞，而后將此樣品進行分析，將分析結果與另一個經(jīng)驗證的方法或法定方法得結果進行比較。含量測定應比較兩方法的分析結果，雜質(zhì)測定若有色譜圖，則應對比雜質(zhì)峰的形狀。檢測限指樣品中被測物能被檢測出的最低量。非儀器分析目視法通過用已知濃度的樣品分析來確定可檢出的最低水平作為檢測限。儀器分析方法可以非儀器分析所用的目視法來確定檢測限，也可用已知濃度的樣品與空白試驗對照，以信噪比為2：l或3：l來確定檢測限的最低水平。不論用哪種方法，均需制備相應檢測限濃度的樣品，反復測試來確定。5．定量限定量限系指樣品中被測物能被定量測定的最低量，其測定結果應具一定準確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物用定量測定方法研究時，應確定定量限。非儀器分析方法與檢測限的非儀器分析方法所用方法相同，只是所得結果需符合一定的準確度和精密度要求。儀器分析方法一般以信噪比為10：1時相應的濃度作為定量限的估計值，然后配制相應定量限濃度的樣品，反復測試來進行確定。6．線性線性指在設計的范圍內(nèi)，測試結果與試樣中被測物濃度直接呈正比關系的程序。應在規(guī)定的范圍內(nèi)測定線性關系。可用一貯備液精密稀釋或分別精密稱樣，制備一系列的供試品(至少5份不同濃度的供試品)進行測定。以測得的響應信號作為被測物濃度的函數(shù)線性回歸，求出回歸方程及相關系數(shù)。7．范圍范圍指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。分析方法的范圍應根據(jù)具體分析方法以及對線性、準確度、精密度的結果和要求確定。無特殊要求時，通常采用以下標準。對于原料藥和制劑的含量測定，范圍應為測試濃度的80%?20%。雜質(zhì)測定，范圍應為測試濃度的50%?20%。含量均勻度，范圍應為測試濃度的70%?130%，根據(jù)某些劑型的特點(如氣霧劑)，此范圍可適當放寬。溶出度范圍應為標準規(guī)定范圍的土20%。、如某一劑型的溶出度規(guī)定，1h后溶出度不得小于20%，24h后溶出度不得小于90%，則考察此劑型的溶出度范圍應為0?110%若含量測定與雜質(zhì)檢查同時測定，用百分歸一化法，則線性范圍應為雜質(zhì)規(guī)定限度的一20%至含量限度的20%。8．粗放性分析方法的粗放性(Ruggedness)指在不同實驗條件下(如不同實驗室、不同實驗員、不同儀器、不同批的試劑、不同的分析溫度、不同時間等)對同一樣品進行分析所得結果重現(xiàn)性。此實驗條件應仍在方法規(guī)定的限度內(nèi)。將在不同實驗條件下所得結果的重現(xiàn)性與方法的重復性進行比較，來衡量分析方法的粗放性。9．耐用性耐用用性(Robustness)指測定條件有小的變動時，測定結果不受影響的承受程度。典型的變動因素有：被測溶液的穩(wěn)定性，樣品提取次數(shù)、時間等。液相色譜法中典型的變動因素有：流動相的組成和pH、不同廠牌或不同批號的同類型色譜柱、柱溫、流速等。氣相色譜法變動因素有：不同廠牌或批號的色譜柱、固定相、柱溫、進樣器和檢測器溫度等。如果測試條件要求比較苛刻，則應在方法中寫明。三、檢驗方法驗證過程（一）驗證方案的制訂檢驗方法的驗證方案通常由研究開發(fā)實驗室提出，由質(zhì)檢實驗室會簽。沒有開發(fā)實驗室的藥廠應由質(zhì)檢實驗室負責方法開發(fā)的人員或其他有經(jīng)驗的技術人員起草。根據(jù)產(chǎn)品的工藝條件、原輔料化學結構、中間體、分解產(chǎn)物查閱有關資料，提出需驗證的項目、各項目的指標要求及具體的操作步驟。最后經(jīng)有關人員審批后方可實施。（二）驗證的實施應由有一定理論知識和操作經(jīng)驗的實驗室操作人員進行驗證。實驗室操作人員在接收到已經(jīng)批準的驗證方案后，首先應進行做好以下準備工作。檢查所涉及的儀器是否經(jīng)確認并在有效期內(nèi)。檢查所涉及的參照品是否齊全并在有效期內(nèi)。檢查所用容器、試劑等都符合實驗要求。檢查樣品溶液是否穩(wěn)定，若不穩(wěn)定則需首先確認樣品溶液的有效期，或采用新鮮配制的方法。準備工作結束后，即可根據(jù)驗證方案中規(guī)定的項目及方法進行驗證，得出實驗結果。所記錄的實驗結果應能真實反映實驗情況。每個結果后均應有操作人員簽名確定，必要時須由第二個人復核。（三）驗證報告方法驗證結束后，應由方法開發(fā)人員寫出驗證報告，將試驗數(shù)據(jù)資料進行匯總分析，對檢驗方法作出正確的評價。驗證報告需包括實驗目的、驗證要求、所用儀器名稱、品牌及設定條件、所用試劑、具體操作方法、結果及結論。試驗中的主要偏差應有適當?shù)慕忉?。原始記錄及圖譜應附在報告后。報告需由實驗室操作人員、方法開發(fā)人員簽字確認，最后經(jīng)部門負責人批準方可生效。（四）經(jīng)驗證的檢驗方法檢驗方法驗證的最終產(chǎn)物是一個經(jīng)過驗證的方法。方法驗證結束后，此方法可正式批準，投入日常使用。第四節(jié)藥品微生物檢查方法的驗證在化學測試中，藥品含量測定方法需要驗證，與此相應，微生物檢驗方法也需要驗證。盡管藥品的微生物學檢驗方法在各國藥典中均有規(guī)定，但是，不同的檢品、不同的儀器或材料及實驗環(huán)境條件等均可能對檢驗結果產(chǎn)生影響。例如，當檢品有抑菌性時，它們會掩蓋無苗藥品已受污染的事實或造成低于實際污染水平的菌檢結果；選用不適當?shù)呐囵B(yǎng)基，其促菌生長能力不符合要求，也會造成類似的后果。另外，為了保證藥品使用的安全性，有些藥品中加了一定的防腐劑，當對防腐劑的防腐性能進行挑戰(zhàn)性試驗時，微生物的種類、生長的狀態(tài)、介質(zhì)的）H等因素又對試驗的結果產(chǎn)生影響。為了使微生物學檢驗方法的結果準確可靠，需要對每個品種的具體檢驗方法進行驗證。本節(jié)重點討論的藥品微生物方法驗證包括：微生物限度檢查、無菌檢查和防腐劑抑菌效力測定方法。同化學檢驗方法驗證的原理相似將藥典的微生物學方法具體應用于特殊品種時，需進行方法研究，摸清微生物學檢驗方法適用的條件，即通過試驗，尋找并確定合適的材料、條件和方法。在這一工作的基礎上，通過驗證試驗，最終確認檢驗條件，批準成為正式方法。一、微生物學檢驗的影響因素在藥品微生物學檢驗中，不管是微生物限度檢查、無菌檢查還是藥品防腐劑的抑菌效力測定，檢驗結果受多種因素影響，其中抑菌因素由于其特殊的重要性而備受關注。在藥檢實踐中，以下幾種因素均可對微生物學檢驗產(chǎn)生影響。藥品本身的抑菌性。藥品中防腐劑的抑菌性。培養(yǎng)基的促菌生長能力。培養(yǎng)條件（溫度、濕度及需氧或厭氧）。過濾系統(tǒng)的材質(zhì)。此外，檢查時所用微生物的種類及生長狀態(tài)等，也會影響微生物的檢驗結果。眾所周知，一些無菌藥品中，如多劑量形式的注射劑，往往添加抑菌劑；滴眼劑中，常添加抑菌劑，以保證它們在一段時間可安全使用。抑菌劑的有效性須用微生物挑戰(zhàn)試驗來證實。挑戰(zhàn)試驗用微生物菌種的制備方法影響抑菌性產(chǎn)品的檢驗。因為挑戰(zhàn)試驗用微生物的生長和制備方式?jīng)Q定著細胞的生理狀態(tài)，而這種狀態(tài)又直接影響到抑菌劑抑菌效力測定的結果。美國藥典對抑菌劑抑菌效果的檢驗作了明確規(guī)定。測定時所用的微生物，包括革蘭陽性菌、革蘭陰性菌、酵母菌和霉菌等。本節(jié)文末列出了美國藥典和歐洲藥典在藥品微生物學檢查及其驗證中常用的菌種名稱及其代號。微生物培養(yǎng)條件是影響供試品中菌檢計數(shù)準確與否的重要因素。應注意影響結果的兩個方面：一是培養(yǎng)基本身的性質(zhì)；二是培養(yǎng)條件。通俗說來，培養(yǎng)基應具備應廣譜性，即有助于供試品中所有存活微生物的生長。另外，應注意采用最佳培養(yǎng)條件，以確保微生物充分生長并使計數(shù)結果呈現(xiàn)良好的重現(xiàn)性。二、消除抑菌性的方法消除藥品抑菌性常見的方法有：化學中和法、稀釋法和薄膜過濾淋洗法。在微生物檢查中，根據(jù)檢品的具體情況，也可將此3種方法適當組合使用。（一）化學中和法化學中和法是抑菌效力測定（Antimicrobialefficacy）中首選的方法。藥品或其組分具有抑菌作用時，選用一定的化學中和劑，加入其中，以方便而快捷地中和抑菌劑，消除抑菌作用。有些化學中和劑在有效消除抑菌作用的同時，對微生物有輕微的傷害作用，這點應在驗證過程中注意。表3—3列舉了適用于消除各類種化學抑菌劑的相應中和劑名稱以及曾報道過它們（中和劑）對特定微生物所具有的毒害作用。無論是采用薄膜過濾，還是直接接種法，某具體品種進行無菌檢查或微生物限度檢查所用的微生物方法檢驗方法必須經(jīng)過驗證。搞清檢品是否具有抑菌作用，或檢品中是否添加化學抑菌劑是檢驗方法驗證的先決條件。根據(jù)檢品抑菌作用的大小和藥典的通則要求，需設計方案，通過試驗確認化學中和劑的濃度、加量及其他有關的檢驗條件。抗生素對化學抑制劑并不敏感，在無菌檢查或微生物限度檢查中，應根據(jù)具體品種采用不同的酶（如青霉素酶）將抗生素活性破壞后，方能進行檢驗。這類方法均須驗證。（二）稀釋法消除藥品抑菌性的第二種方法是稀釋。實驗表明，化學抑菌劑的濃度與其抑菌效果相關。不同抑菌劑在不同濃度下的抑菌作用各不相同。但對某一特定的抑菌劑來說，抑菌劑濃度與抑菌效率呈指數(shù)關系，可用下式表示：Cnt=k式中，C表示抑菌劑的濃度；t表示殺滅標準菌株所需要的時間；k是一個常數(shù)；濃度指數(shù)n,是lgt與lgc作圖所得直線的斜率。抑菌劑的n值越高，越易通過稀釋的方法消除檢品的抑菌性；抑菌劑的值n越低，則越難通過稀釋法消除其抑菌性。3－3抑菌劑常用的化學中和劑中和劑抑菌劑類別中和劑的抑制對象重硫酸鹽戊一醛、汞類非芽抱類細菌稀釋液酚類、酒精、醛類、山梨酸酯甘氨酸醛類化合物生長態(tài)細胞卵磷脂季銨鹽類化合物、一重雙胍類、對羥基苯甲酸酯類細菌鈣或鎂離子EDTA葉溫季銨鹽類化合物、碘酒、對羥基苯甲酸酯類巰基乙酸~L、［z.汞類硫代硫酸鹽汞類、鹵酸類、醛類匍萄球菌類及牙抱匍萄球菌類（三）薄膜過濾法在藥品微生物學檢驗中，尤其是無菌檢查，常用薄膜過濾法來消除藥品的抑菌性。該法基本原理是當抑菌產(chǎn)品通過濾膜時，微生物被截留在濾膜上，具有抑菌作用的檢品被過濾掉，過濾過程消除了檢品的抑菌作用。經(jīng)過濾后，將濾膜置于規(guī)定量（通常為100ml）的特定培養(yǎng)基內(nèi)，在適當?shù)臈l件下培養(yǎng)，觀察其是否有微生物生長。殘留于濾膜上的抑菌劑仍有一定的抑菌作用，因此，應盡可能采用對檢品具有低吸附性的濾膜（如聚偏四氟乙烯），以便減少抑菌作用；此外，可通過稀釋防腐劑或淋洗濾膜的方式來進一步消除殘留物的抑菌作用。所用的稀釋液或淋洗液應比較溫和，如0.1％的蛋白胨水溶液。當淋洗液中需添加化學中和劑時，要保證濾膜上的殘留物對截留在濾膜上所有微生物的生長無不良影響。三、藥品微生物檢查方法的驗證——生長比較法微生物檢查法準確與否的核心是對抑菌性的有效消除。而對抑菌作用的有效消除須經(jīng)驗證。微生物檢查法的驗證通常采用生長對比法。以下對生長對比法作簡要介紹。（一）方法驗證概述1．試驗方法試驗需分3組進行。（1）檢品組——接有試驗菌株的中和檢品組按照常規(guī)檢品的微生物檢驗法進行，加入抑菌中和劑，最后接人已知量的菌株（少于100個菌），培養(yǎng)計數(shù)，看該試驗條件下能否恢4復生長，它和化學保的回收率試驗十分相似。（2）對照組――接有試驗菌株的緩沖液試驗組用蛋白胨代替檢品，即以0.1%的蛋白胨溶液作為供試品，菌株接種操作同（1）。（3）菌種活性檢查組――不含檢品或中和劑的空白對照組不加抑菌中和劑，將試驗菌株直接接種培養(yǎng)。2．合格標準在確定藥品抑菌消除方法的驗證合格標準時，需兼顧中和劑的效力和劑的毒性兩個方面。驗證試驗的數(shù)據(jù)應能證明所采用的中和法能有效消除藥品的抑菌力（中和劑的效力），與此同時，它對微生物的正常生長應無不良影響（劑的毒性）。達到了這兩方面的要求，微生物檢驗方法即通過了驗證。3．結果判斷如果檢品組與蛋白胨對照組的微生物計數(shù)相似，表明所用中和劑（中和劑的類別及用量）具有足夠的中和效力；如果蛋白胨對照組與菌種活性檢查組的生長數(shù)量相似，表明所用中和劑的毒性不影響微生物的生長。驗證試驗必須證明檢品經(jīng)適當?shù)闹泻头ㄌ幚砗?，不會抑制較少量（少于100個菌）的微生物生長即檢品組、對照組、菌種活性檢查組的微生物計數(shù)接近。在比較檢品組與菌種活性檢查組的微生物生長結果時，如果檢品組的生長結果與菌種活性檢查組——空白對照組的不同，則應考慮中和法中所設定試驗條件不適宜微生物的生長，該微生物檢查方法不能通過驗證，須繼續(xù)摸索條件，進一步進行驗證試驗。（二）不同檢查法的操作和要點1．平皿菌落計數(shù)法美國藥典在藥品防腐劑的抑菌效力測定試驗〈51〉和微生物限度試驗〈61〉中，采用平皿菌落（瓊脂培養(yǎng)基）計數(shù)法來檢查存活的試驗菌。選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)基對菌落計數(shù)至關重要。檢品中微生物能否完全恢復生長，能否在適當?shù)呐囵B(yǎng)條件下（培養(yǎng)溫度、濕度以及給氧條件等），于規(guī)定時間內(nèi)易于觀察和計數(shù)，這與培養(yǎng)基的選用、培養(yǎng)基的質(zhì)量直接相關。因此，在用對比生長法進行驗證時，應當綜合考慮各種因素，設計好驗證方案。（1）驗證試驗次數(shù)至少需重復進行3次。（2）合格標準檢品組的平均菌檢計數(shù)結果不得低于空白對照組的70％。每次試驗均應達標。2．膜濾計數(shù)法由于樣品可處理的量大、易消除檢品的抑菌性以及操作簡便等優(yōu)點，薄膜過濾法被廣泛應用于藥品的無菌檢查和微生物限度檢查（無法過濾的樣品除外）。過濾膜的材質(zhì)、孔徑以及其與檢品的相容性是影響實驗結果的關鍵因素。過濾膜的材質(zhì)會影響檢品的過濾速度以對檢晶的吸附性。各國藥典均規(guī)定，用于微生物檢查的濾膜孔徑不得大于045“m,并能有效截留微生物。歐洲藥典在“無菌檢查”一節(jié)中明確規(guī)定，應根據(jù)供試晶的性質(zhì)選用不同材質(zhì)的濾膜，如硝酸纖維素過濾膜適用于水溶性、油性和低酒精含量的溶液；醋酸纖維素過濾膜適用于高酒精度溶液。對于特殊檢品（如抗菌素），則需用特定的濾膜。由此可見，過濾是檢驗方法驗證中的關鍵要素。下面分別簡要介紹無菌檢查和微生物限度檢查中薄膜過濾法的驗證。按無菌檢查的操作程序，在同一型號的每個過濾器或過濾筒內(nèi)過濾規(guī)定量（指容器及每容器的過濾體積）的檢品，必要時，可再淋洗濾膜3次，每次淋洗液用量為100ml,在最后一次淋洗液中接人驗證用菌種，接種量小于100CFU；另取一過濾器或濾筒，不過濾檢晶，重復以上淋洗操作，作為陽性對照。視具體方法，將整張濾膜或半張濾膜轉移至100ml的指定培養(yǎng)基內(nèi)，或將培養(yǎng)基加入到裝有濾膜的濾筒內(nèi)。對表3－4中所列菌種及相應的培養(yǎng)基逐一進行驗證，并將容器置于適當?shù)臏囟认屡囵B(yǎng)，培養(yǎng)時間不超過7d。如果檢品培養(yǎng)基容器內(nèi)的培養(yǎng)結果顯見微生物生長，且與陽性對照容器，內(nèi)的結果相似，則驗證通過。在日常無菌檢查中所用檢品的量、淋洗液量、淋洗次數(shù)、培養(yǎng)基種類及數(shù)量，均應與驗證時用的一致；如果與陽性對照相比，檢品容器內(nèi)微生物生長現(xiàn)象不明顯，則說明該檢驗量在此檢驗條件下有抑菌作用，需增加淋洗次數(shù)，或通過更換過濾膜、使用中和劑等方法，重復以上試驗，直至符合要求為止。與微生物限度檢查相同，供試品經(jīng)過濾后，用稀釋中和液淋洗濾膜兩次，每次100ml。第二次淋洗后，在另100ml淋洗液中接人對照菌株（不超過100個菌），對濾膜進行第三次淋洗。將濾膜轉移至適當?shù)沫傊囵B(yǎng)基上培養(yǎng)，作為檢品組；另一組以0.1％的蛋白胨溶液作為供試品液，重復上述操作，用作陽性對照組；再將與上述接種量相等的菌液直接接種于固體培養(yǎng)基上，作為菌種活性檢查組。通過陽性對照組的微生物生長結果與菌種活性檢查組結果比較，就能得出過濾法本身所導致的微生物減少程度；通過檢品組與陽性對照組的結果比較，就會獲得檢品抑菌性的消除或中和效果資料。驗證試驗次數(shù)至少需重復進行3次。合格標準檢品組的微生物生長結果與陽性對照組的生長結果相似。3．液體培養(yǎng)基法如無菌檢查中的“直接接種法”所用培養(yǎng)基能使所有的微生物生長，那么，它證明微生物檢查用肉湯培養(yǎng)基能同時起到消除抑菌性和促菌生長的作用。在此條件下，可根據(jù)檢品特性及培養(yǎng)基種類，確定合理的中和方法，用平皿菌落計數(shù)法(瓊脂培養(yǎng)基)中所述各試驗組完成方法驗證。各試驗組的培養(yǎng)基中，如果在7天內(nèi)所有微生物生長情況均相同，則方法通過驗證。四、更換培養(yǎng)基的驗證在上述各驗證試驗中，所用挑戰(zhàn)微生物均未與抑菌劑接觸，沒有受到傷害，但在防腐效力測定時或對抑菌性藥品進行無菌檢查時，微生物均與抑菌劑接觸并受到傷害。由于在這兩種情況下，微生物狀態(tài)不同，因此，有時需要考慮更換培養(yǎng)基，以取得更能反映實際的菌檢計數(shù)結果。為驗證培養(yǎng)基的變更對受傷微生物恢復生長的影響，可先將微生物接種于產(chǎn)品內(nèi)一段時間，并將其接種于欲代替的培養(yǎng)基上生長，再將未與產(chǎn)品接觸過的微生物接種于原方法中規(guī)定的培養(yǎng)基上生長，比較兩者的生長情況。在微生物死亡速率太快時，試驗沒有意義。如微生物與產(chǎn)品的接觸后，只是受傷，在一定的培養(yǎng)條件下，仍能恢復生長，此時，可將濃度小于100CFU/ml的微生物與產(chǎn)品按兩個不同的時間接觸，分別培養(yǎng)，觀察結果，以驗證培養(yǎng)基變更的影響。(1)驗證試驗次數(shù)至少進行3次。(2)驗證合格標準如果所選用的培養(yǎng)基上的微生物數(shù)量與原方法規(guī)定的培養(yǎng)基上生長數(shù)量之差每次平均小于0.5個對數(shù)單位，則所選用的培養(yǎng)基符合要求。美國藥典24版和歐洲藥典2000年增補版中有關藥品微生物學檢驗用微生物名稱及其代號見表3－4，表3－5。表3—4藥品菌檢計數(shù)用培養(yǎng)基的靈敏度檢查試驗及檢驗方法驗證試驗用微生物菌種①(USP24)菌種名稱ATCC編號培養(yǎng)溫度/°c條件大腸桿菌(Escherichiacoli)ATCC873932土2.5有氧金黃色匍萄球菌(SCdphylococcusaureus)②ATCC653832土2.5有氧銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)③ATCC902732土2.5有氧生抱梭菌(Clostridiumjsporogenes)④ATCC1143732土2.5有氧枯草芽抱桿菌(Bacillussubtilis)ATCC663322土2.5有氧白色念珠菌(Candidaalbicans)ATCC1023122土2.5有氧黑曲霉菌(Aspergillusniger)ATCC1640422土2.5有氧菌株來源：美國菌種保藏中心(AmericanTypeCultureC011ection，10801UniversitB1vd．，Manassas，VA20110—2209)?？捎每莶菅勘U菌(Bacillussubtilis,ATCC6633)代替金黃色葡萄球菌(SCdphylococcusaureus)?？捎锰冱S微球菌(Micrococcusluteus，ATCC9341)代替銅綠假單胞菌。如需非芽抱菌株，可用普通類桿菌(Bacteroidesvulgatus,ATCC8482)代替生抱梭菌。注：從ATCC原始菌種取出后，菌種的傳代次數(shù)不得超過5代。第五節(jié)確認及驗證示例一、儀器確認示例本節(jié)共舉了兩個示例，說明分析儀器確認的內(nèi)容。對于計量儀器，只需進行分析儀器確認中的安裝確認和校正這里不再重復。表3—5培養(yǎng)基靈敏度檢查及菌檢計數(shù)法驗證用微生物品種(Eu.Ph.2000增補)微生物培養(yǎng)條件菌種名稱最佳菌株溫度/c最長培養(yǎng)時間/d類型：需氧菌所有需氧菌金黃色匍萄球菌ATCC653830—353

CIP4.83NCTC10788NCIMB9518枯草芽抱桿菌ATCC6633CIP52.62NCIMB8054銅綠假單胞菌ATCC9027NCIMB8626CIP82.118類型：厭氧菌所有厭氧菌梭狀芽抱桿菌ATCC19404CIP79.330?353類型：真菌所有真菌白色念珠菌ATCC1023lCIP4872ATCC209lIP1180.7920?255黑曲霉菌ATCC16404示例1】熔點測定儀的確認(表3－6)表3－6熔點測定儀確認儀器名稱：熔點測定儀代號：L2l生產(chǎn)廠家及型號：BUCHI510N設備登記號：536764頁次：起草/日期：曹XX批準/日期：程鬃儀器負責人：肖XX1．概述本儀器為BUCH1510N型熔點測定儀，專供測定樣品的熔點之用。由加熱器、攪拌器、傳溫液等部件組成，升溫速度可選擇不同檔次控制。2．安裝確認參加人員肖XX、王XX。檢查清單(表3－7)維修服務服務單位名稱：技術服務部地址：聯(lián)系人：電話號碼：傳真號碼：銀行賬號：結論所有物品與檢查清單相符。實驗室水、電、氣設計安裝合理，實驗室通風系統(tǒng)運行良好，符合儀器安裝要求。簽名/日期：肖XX表3－7檢查清單名稱編號數(shù)量存放處負責人簽收采購定單建廠時統(tǒng)一進口一進口設備科李XX操作手冊L2l—ll本QC-208室肖XX維修手冊L2l—2l本QC-208室肖XX設備卡L2l—3一化學實驗室肖XX使用手冊L2l—4l本QC-208室肖XX備件清單L2l—5一QC-208室王XX

熔點溫度計一共3支QC備品備件庫王XX測定熔點用毛細管一2管（進口）QC備品備件庫王XX照明小燈泡一4只（進口）QC備品備件庫王XX傳溫液硅油一500ml（進口）QC備品備件庫王XX3．運行確認（表3－8）目的為在不使用任何試樣的前提下，確認該儀器達到設計要求。表3－8運行確認檢查內(nèi)容檢查項目認可質(zhì)量標準檢查結果熔點觀察燈正常明亮符合要求升溫速度控制實測值不得超過設定值的土20%符合要求設定升溫速度/C?min—l0.20.51.02.03.0實測升溫速度/°C?min—10.20.41.01.92.9偏差/%020%05%3.4%熔點溫度計一般由指定機構定點生產(chǎn)、校正，故運行確認中不包括此項。4．性能確認（1）目的使用供試品以確證儀器性能符合規(guī)定要求。（2）確認步驟分別取甲硝唑和甲氰脒胍適量，按中國藥典2000年版二部WC熔點測定法第一法進行測定，平行測定3次。（3）合格標準3次結果偏差不得過±0.5°C。（4）測定結果（表3－9）表3－9測定結果樣品名稱規(guī)定熔點/°C實測熔點/°c甲硝唑159?163160.0?162.3160.1?162.6160.3?162.6甲氰脒胍140?145142.5?144.6142.3?144.5142.6?144.6結果偏差均小于0.5C，符合要求。5．防性維修每隔一段時間需對此熔點測定儀進行例行維修，以確保其符合要求（1）內(nèi)容（表3－10）（2）周期初定為每三個月一次。以后視實際使用情況進行修訂。示例2】高效液相色譜儀的確認（表3－11）1．概述表3－10防性維修檢查內(nèi)容檢查項目認可質(zhì)量標準熔點觀察燈正常明亮升溫速度控制用一秒表檢查升溫速度，實測值不得超過設定值的土20%表3－11高效液相色譜儀確認儀器名稱：高效液相色譜儀代號：L15生產(chǎn)廠家及型號：HP1100設備登記號：501732頁次：起草/日期：劉XX批準/日期：陳XX儀器負責人：劉XX本儀器為HPllOO型高效液相色譜儀，配有四元梯度泵、自動進樣器、柱溫箱及紫外檢測器。2．安裝確認參加人員朱XX、劉XX。檢查清單(表3－12)維修服務服務單位名稱：Agilent科技有限公司地址：聯(lián)系人：電話號碼：傳真號碼：銀行賬號：表3—12彳檢杳清單名稱編號數(shù)量存放處負責人簽收采購定單建廠時統(tǒng)一進口一進口設備科李XX操作手冊L15—110本QC—208室劉XX設備卡L15—3一化學實驗室劉XX備件清單L15—5一QC—208室朱XX1100四元梯度系統(tǒng)一1QC—208室劉XX自動進樣器一1QC—208室劉XX柱溫箱一lQC—208室劉XX紫外檢測器一1QC—208室劉XXHP計算機一1QC—208室劉XX打印機一lQC—208室劉XX進樣針900Ml一2QC—208室劉XX針密封圈一1袋QC—208室劉XX氘燈一2QC—208室劉XX手擰接頭一4QC—208室劉XX結論所有物品與檢查清單相符。實驗室水、電、氣設計安裝合理，實驗室通風系統(tǒng)運行良好，符合儀器安裝要求。簽名/日期：劉XX3．運行確認目的為在不使用試樣的條件下，確認該儀器達到設計要求。試驗項目及限度(表3－13)試驗方法及結果流量控制閥方法。流量分別設定為0.5ml/min、1.0ml/min、1.5ml/min,用一lOml容量瓶接收流動相，同時計時，各重復3次。以流出lOml流動相所需時間計算流量。表3－13運行確認的試驗項目及其限度各設備名稱儀器中各組件試驗項目限度泵流量控制閥流速準確度±5%流動相比例控制閥流動相混合比例的準確度±[F(1—F]10%,F為所測流動相組分所占的體積比自動進樣器進樣體積控制閥精密度RSD應W1.0%柱溫箱溫度控制器準確度精密度W±3.0°C，波動應在1.0°C內(nèi)UV檢測器單色器準確度±3nm光電管線性相關系數(shù)不得小于0.999b結果(表3—14)表3－14流量控制閥檢查結果流量/m1?min—1第1次時間/min第2次時間/min第3次時間/min平均流速/ml*min—1偏差/%0.519.9720.0220.050.49970.061.010.0210.0010.070.99700.31.56.706.686.681.49550.3c.結論。偏差均小于5％，符合要求。流動相比例控制閥a.方法。因日常檢驗僅用二泵，另兩泵用于清洗，因此僅檢驗二泵的流量比。將泵編號，分別為A、B、C、D,A、B泵用于實驗，C、D泵用于清洗?，F(xiàn)對A、B泵的流動相比例進行檢測。設定流動相A和流動相B的比例為1：1，流速為1.0m1/min。取兩個10m1量筒，分別裝入流動相A和流動相B,開始運行同時計時。5min時記錄消耗的流動相A和流動相B的體積。重復3次。b結果俵3—15)3—15流動相比例控制閥檢查結果流動相第1次體積/m1第2次體積/m1第3次體積/m1平均體積/m1允許偏差/%實測偏差/%流動相A4.994.984.984.98+2.5—2.0流動相B5.015.025.0l5.0l+2.5+1.0c.結論。偏差均小于允許值，符合要求。進樣體積控制閥a.方法。制備一樣品溶液(儀器公司推薦用咖啡因標準溶液，無條件者也可選用日常HPLC檢驗方法中所用的對照品溶液。若用咖啡因標準溶液，則選用儀器公司推薦的儀器條件；若選用本公司的對照品溶液，則按相應的方法條件進行試驗)，設定進樣體積為10“1,連續(xù)進樣6次，計算相對標準偏差(RSD)。b結果俵3—16)表3—16進樣體積控制閥檢查結果l23456RSD/%208624.14206992.56205321.83205943.20208296.79204267.930.83c結論。進樣體積精密度小于1.0%，符合要求。柱溫箱a.方法。溫度設為36°C，將一經(jīng)過校正的溫度計放入柱溫箱，每隔30min讀取溫度計顯示溫度及柱溫箱顯示溫度一次。共讀取5次。b結果俵3—17)c.結論。與溫度計讀數(shù)偏差最大為0.C5，小于3.OC，準確度符合要求；柱溫箱顯示讀數(shù)波動最大為一0.3C,小于1.0C，精密度符合要求。表3—17柱溫箱檢查結果項目30min60min90min120min150min180min溫度計讀數(shù)36.536.236.136.236.236.3/C柱溫箱顯示讀數(shù)/C36.036.136.036.035.935.7紫外檢測器a.單色器?方法。主要檢測波長的準確度。通過測定一已知光譜特征的物質(zhì)，來確定波長的準確度。方法有多種，可根據(jù)實際情況任選一種。?以儀器本身光源檢查。如為氘燈，檢查656.1nm；如為氫燈則檢查379079nm、486.13nm和656.28nm。?用苯的乙醇溶液(160pg/ml)在233.9nm、238.9nm、243.3nm、248.5nm、254.5nm和260.6nm處檢查。?利用汞燈的較強譜線237.83nm、253.65nm、275.28nm、296.73nm、313.16nm、334.15nm、365.02nm、404.66nm、435.83nm、546.07nm、576.96nm進行檢查。?利用欽玻璃在279.4nm、287.5nm、333.7nm、360.9nm、418.5nm、460.0nm、484.5nm、536.0nm、63