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第第頁檢驗病理科晉升副高(正高)職稱病例分析專題報告單位:***姓名:***現(xiàn)任專業(yè)技術(shù)職務:***申報專業(yè)技術(shù)職務:***20**年**月**日病理科醫(yī)師職稱晉升專題報告微波技術(shù)在病理技術(shù)中的應用微波(Microwave,MW)是一種具有能量的電磁波,波長很短,僅有1mm-m間,但頻率卻很高,在330-300000MHZ(兆赫),由于它的頻率高,可使物體內(nèi)部的極性分子以每秒24.億次的速度運動,在運動中產(chǎn)生瞬間熱,自70年代Mayer氏首次把MW技術(shù)用于組織的固定以來,已有二十年的時間,在這時間里,人們已將MW技術(shù)廣泛應用于病理技術(shù)的各個方面,如組織固定,組織脫水,組織切片的特殊染色,組織脫鈣,快速組織制作,免疫組化染色等。(一)組織固定組織固定的目的是使組織細胞中的蛋白質(zhì)發(fā)生凝固,以保存組織中原有的微細結(jié)構(gòu)。以往為了達到上述的目的,常應用許多常規(guī)試劑來固定組織,如甲醛和酒精等。但是,由于這些固定液的穿透性不強,因而固定需時較長,致使某些抗原成分的喪失,雖然人們應用新鮮的組織來制作切片,以利于研究,但這樣手續(xù)極為麻煩,且病例有限,做不了回顧性研究。基于上述原因,人們?yōu)榱烁玫乇4婵乖芯苛瞬煌母鞣N固定組織的方法,在這些方法中,MW技術(shù)固定的組織、抗原保存較好。1.MW技術(shù)固定各種組織所需的溫度MW是具有能量的電磁波,由于它能使物體內(nèi)部的極性分子快速運動而產(chǎn)熱,那么應用于組織固定的溫度應是多少為好呢?各種組織由于各自的結(jié)構(gòu)不同,分子不一,電子密度也就不一樣,因而用于組織固定的溫度也不一樣。Bernard經(jīng)過一系列的實驗,認為肝、腎、肺的最佳固定溫度是70℃,77℃和77℃,我們的實驗認為各組織的固定溫度應在60℃左右,時間2-3min為好。2.MW技術(shù)固定是組織所需固定液的選擇本室張素娟應用臨床冰凍切片所剩的新鮮組織如甲狀腺、乳腺、淋巴結(jié)等組織,實驗性小鼠的肝、腎、心、肺和大腸等組織,分別用甲醛、生理鹽水進行固定,然后通過HE、網(wǎng)染、AB-PAS等特殊染色以及用免疫組化對幾種抗體如CEA、EMA和L26等的標記,對其結(jié)果進行比較,結(jié)果發(fā)現(xiàn)生理鹽水固定的組織效果最好。我們的實驗也證明生理鹽水固定的組織效果為最好,但應注意的是固定組織塊不能太厚,時間在3min左右。3.MW技術(shù)固定組織固定液的選擇固定液的量按傳統(tǒng)的固定方法,應是1:20,但在固定液也不能很少,至少不少于250ml。原因之一,液體量少,容易導致沸騰,如此易使液體揮發(fā)直至干涸,使組織塊破壞嚴重。其二是液體量多,可保持一定的溫度,接受全程的MW輻射,使輻射和固定足時,使固定完全徹底。(二)MW快速石蠟制作法新鮮組織或臨床門診病例的組織(存于福爾馬林固定液中)采用本法的以下列為好:1.福爾馬林(或生理鹽水)MW輻射1.30-2.30min;

2.80%酒精MW1.30-2.30min;

3.90%酒精MW1.30-2.30min;

4.95%酒精MW1.30-2.30min;

5.95%酒精MW1.30-2.30min;

6.100%酒精MW1.30-2.30min;

7.100%酒精MW1.30-2.30min;

8.二甲苯MW1.30-2.30min;

9.浸蠟15-20min左右。應用MW技術(shù)快速石蠟切片,必須注意的問題:1.如果組織送至病理科時已用福爾馬林固定液浸泡,則固定液仍采用福爾馬林固定液,如為新鮮組織,可用生理鹽水固定。

2.脫水劑采用由低至高濃度的酒精,以減少組織的過度收縮。

3.如果采用丙酮作脫水劑,應注意組織的收縮,因丙酮的沸點低,在MWO內(nèi)容易沸騰。

4.脫水劑的量應在200-250ml間,過少容易使液體沸騰直至干涸,過多則達不到所需的溫度,影響脫水效果。

5.如需在MWO內(nèi)浸蠟,應注意脫水盒上的金屬片,因為MWO內(nèi)不能用金屬等物品。(三)MW技術(shù)的特殊染色法特殊染色法中,有許多方法中的浸染時間,少則幾秒種,多則幾十個小時,下面是幾種特殊染色的時間比較。項目/時間室溫浸染時間(min)MW輻射時間(min)Grocott六胺銀701.5膠性銀AgNOR401.5膠性角-AB40,401.5,1.0PAS-膠性銀30,401.0,1.5(四)MW技術(shù)脫鈣法將骨組織鋸成小塊,取一燒杯,盛100ml左右的10%硝酸,在其液面上加入20ml左右的液體石蠟,然后于MWO輻射10min左右,直至用大頭針能順利扎入為止。應用MW技術(shù)進行骨組織脫鈣,既要使組織快速脫鈣,又要不使硝酸腐蝕機器,就必須注意如下問題:1.液體不能過少,否則易沸騰導致硝酸濺灑出來。2.液面上加上液體石蠟,以使硝酸分子濺灑出來,同時在MWO內(nèi)加2杯冷水或冰塊,以吸收一些熱量,使溫度不會過高。(五)MW技術(shù)的免疫組化染色法各種免疫組織化學的方法如ABC、LSAB(SP)、EV二步法等,都能用MW技術(shù)來進行,在應用MW技術(shù)時,必須注意如下問題:1.MW輻射的時間:作為MW技術(shù)進行免疫組化染色,其輻射時間各有不同,這應看所使用的MWO型號及其功率,大功率的時間應相對較少。2.MW輻射的溫度:應用的MWO如為家用MWO,其溫度將不好控制,MW技術(shù)免疫組化染色,溫度過高,將會導致染色的失敗。免疫組化加入的抗體,最多為100μl(這如果用手工操作,至少可作3例)當溫度過高時,抗體很容易被蒸發(fā)至干涸,此時應在MWO內(nèi)放置一些冰塊或用三角燒杯或瓶裝的冷水,以吸收MW輻射產(chǎn)生的熱量,使染色能順利進行,一旦加入抗體被熱量所蒸發(fā)干涸,染色將告失敗,應重新切片,決不能使用干涸的切片,因這種切片的抗原已失活。3.MWO內(nèi)禁用一切從屬和從屬性的東西,否則容易操壞儀器。檢驗病理科禽食鹽中毒的病理分析報告1發(fā)病情況2021年8月,**鎮(zhèn)某鴨場,混群飼養(yǎng)1000羽鴨、300羽雞,精神萎靡,不愿下水,采食量下降,出現(xiàn)下痢、腫眼、流淚和神經(jīng)等癥狀,鄉(xiāng)鎮(zhèn)獸醫(yī)先給予50%高滲葡萄糖灌服,維生素治療,效果不顯著,發(fā)病禽只逐漸增多,截止剖檢當日已死亡900只鴨,180只雞。鴨死亡率90%,雞死亡率60%。2臨床癥狀初期病禽精神萎靡,羽毛蓬松,兩翼下垂,打堆,腹脹,觸診波動感,眼腫,流淚,采食量下降,下痢,糞便呈黃褐色或黃白色不等,嗉囊柔軟擴張,低頭時口鼻流出粘性分泌物,呼吸困難,兩肢無力,共濟失調(diào),行走困難,驅(qū)趕時靠兩翼撲地移行;后期,病禽消瘦衰弱,肌肉痙攣,昏迷,虛脫,瀕死期角弓反張扭頸。3病理剖檢剖檢十只病死禽,頭部腫大至正常大小的兩倍,眼睛腫脹,切開有大量固性分泌物,胸肌、腿肌皮下水腫,膠凍樣浸潤,嗉囊中有大量粘液性液體,氣管出血,氣管內(nèi)有栓性分泌物,心包積液,腺胃黏膜充血,小腸充血,出血,腸內(nèi)空虛水狀內(nèi)容物,腎腫大嚴重,腹腔內(nèi)大量積液。4病例分析該鴨場所養(yǎng)鴨為東北品種,第一年飼養(yǎng),鴨舍、雞舍為一條小河溝旁邊的兩棟小平房,鴨子主要活動的河溝水質(zhì)較差,鴨和雞混群散養(yǎng),分多批次引進,大小不一致,同群飼養(yǎng),飼養(yǎng)密度很大,氨氣味道很重,飼養(yǎng)條件惡劣,衛(wèi)生情況很差,故發(fā)病率和死亡率都高。主要的飲水即為河水以及一個年久未用的水井水,無清潔自來水。年久未用的水井水里面的鹽分過高,大量高濃度的食鹽進入消化道后,刺激胃腸黏膜而發(fā)生炎癥過程,同時因滲透壓的梯度關(guān)系吸收腸壁血液循環(huán)中的水分,引起嚴重的腹瀉、脫水、積液、水腫,進一步導致全身血液濃縮,機體血液循環(huán)障礙,組織相應缺氧,機體的正常代謝功能紊亂,呼吸困難,神經(jīng)癥狀。5治療停止飲用水井水和河水,增設飲水器,給予清潔飲水,可適量加入維生素及電解多維采用多次、少量、間斷的方式飲水,以免一次性飲水過量而導致嚴重腦水腫而使病情加劇,對不能自行飲水的病禽可灌服。灌服5%葡萄糖水以利尿解毒,病情嚴重者另加0.3%~0.5%醋酸鉀溶液。改喂無鹽易消化飼料,直至康復為止。加強飼養(yǎng)管理,搞好禽舍衛(wèi)生消毒,避免繼發(fā)其他疾病給禽場帶來更大的損失。經(jīng)過治療,病禽癥狀逐漸減輕,死亡逐漸減少。但因為該場養(yǎng)殖條件太差,加上治療時禽群已經(jīng)死亡嚴重,故最終存活率不高。建議該場主下次飼養(yǎng)前將禽舍徹底消毒,空舍一段時間,同進同出,雞、鴨分開飼養(yǎng),注意禽舍衛(wèi)生消毒工作,減少飼養(yǎng)密度,保證潔凈水的供應,飼料中的鹽分控制在0.3%。白細胞分類檢測的影響因素探討影響血液細胞分析儀測定白細胞分類的因素,排除假性增高和假性降低情況,必要時必須血片復核,準確地為臨床提供可靠的診治依據(jù)。方法:使用SysmexKX-21血液細胞分析儀及目視顯微鏡,同時對150例標木進行檢查,對比分析。結(jié)果:操作不順利、標木采取后放置時間、溫度及上機前標木混勻、振蕩時間、力度等均可影響血液細胞分析儀正確對白細胞的分類。結(jié)論:血液細胞分析儀并不能完全代替日視顯微鏡進行白細胞分類,對出現(xiàn)疑有異常白細胞警告報警,應分析原因,日視顯微鏡下白細胞分炎或重新采血。外周血白細胞分類,是白細胞分析中-.項十分重要的內(nèi)容,是臨床診斷和鑒別診斷的重要指標之一-。近幾年來,隨若科學技術(shù)的不斷發(fā)展,各種型號血液細胞分析儀,在各級醫(yī)院檢驗科已廣泛應用,特別是自細胞自動分類和異常白細胞警告提示,改變了目視顯微鏡分類方法,大大減輕了檢驗人員的勞動強度,使工作效率明顯提高。但是,日前很多檢驗人員囚對三分類血細胞分析儀性能缺乏足夠的認識,誤認為血細胞分析儀分類結(jié)果,完全可以代替H視顯微鏡分類結(jié)果,而忽視某些結(jié)果需耍復片的重要性。為此,本文將對口本**公司生產(chǎn)的KX-21血細胞分析儀白細胞分類,與目視顯微鏡復片分類,對異常白細胞檢出率進行對比分析。找出使用血細胞分析儀檢測白細胞分類的影響因索,現(xiàn)探討如下:一、方法隨機抽查門診患者150例,靜脈采血,EDIA-K2抗凝。室溫放置15min后,充分混勻,上機測試。同時推血片一張,空溫自然|燥,堖氏染色,日視顯微鏡下進行白細胞分類。將兩種方法對異常白細胞檢出率進行對比分析。二、結(jié)果150例標本經(jīng)山血液細胞分析儀檢測,白細胞分類結(jié)果,出現(xiàn)疑有異常白細胞警告報警有20例,報警率(陽性率)13.3%。日視顯微鏡復片,發(fā)現(xiàn)有不同程度異常白細胞12例,陽性率8.0%。20例陽性標本,目視顯微鏡復片,其中有8例可見有不同程度異常白細胞(有幼稚細胞1例,桿狀核粒細胞增多1例,嗜酸粒細胞增多2例,嗜堿粒細胞增多1例,異常淋巴細胞增多3側(cè)),占陽性標本的40%。130例陰性標本(無警告),H視顯微鏡復片,有2例發(fā)現(xiàn)有不同程度的異常白細胞,占陰性標本的1.5%。其中1例為已確診急性淋巴白血病在化療中,血液中白細胞總數(shù)偏低,血細胞分析儀分類淋巴細胞百分比增高,儀器無異常白細胞警告,顯微鏡復片,幼稚細胞8%。另1例為發(fā)熱待查兒童,血液中白細胞總數(shù)正常,血細胞分析儀三分類百分比基本正常,沒有出現(xiàn)異常白細胞警告,H視顯微鏡復片,異常淋巴細胞達10%。三、討論通過以上結(jié)果分析,可以看出門診患者,全血做血液細胞分析,白細胞分類結(jié)果,異常白細胞警告較高,假陰性率雖然較低,但也應該引起檢驗人員的重視。根據(jù)幾年來的工作體會認為,出現(xiàn)上述問題的主要原因,一是血液細胞分析儀對白細胞分類不同于常規(guī)的涂片染色分類|11,常規(guī)分類除細胞大小外,還要根據(jù)細胞染色反應,核的形態(tài)及染色質(zhì)的著色情況,胞質(zhì)的著色及顆粒才能確定為某種細胞。三分類血細胞分析儀法,是根據(jù)白細胞直方圖分類法,只能反映經(jīng)溶血劑處理后某種體積的顆粒,即某種大小細胞的多少,血不能反映某種特殊細胞的變化,對少見的正常白細胞和異常細胞不能準確識別,不難看出電阻法自細胞分類只不過是較粗的篩選方法[1]。另外,手指采血,出于采血過程中囚操作緩慢、穿刺不順、組織液混入、混勻不及時等,均會引起自細胞形態(tài)變化。對血細胞分析儀分類會產(chǎn)生明顯影響,出現(xiàn)異常白細胞假報警,為此,根據(jù)文獻介紹和大量實驗證明[2],使用末梢血在血細胞分析儀上進行檢測,影響因索較多,有些參數(shù)不能得出準確結(jié)果,共重復性及穩(wěn)定性都不及靜脈血標本,應提倡靜脈血。血細胞的檢測結(jié)果,尤其是血小板(PLT)的結(jié)果,直接反映試劑的質(zhì)量。原則.上強調(diào)使用與儀器檢測原理相匹配的試劑[3]。血液細胞分析儀試劑中的主要試劑,能將紅細胞溶解,并能使白細胞的體積發(fā)生規(guī)律性變化。實際工作中發(fā)現(xiàn),若溶血不完全,出于紅細胞碎片沖洗不徹底將引起白細胞計數(shù)(WBC)假性增.高。此外,稀釋液的滲透壓、離子強度等亦可影響檢測結(jié)果。特別注意的是,試劑應避免污染,否則,雜質(zhì)微粒會使本底增高,導致最后計數(shù)結(jié)果偏高,影響自細胞分類結(jié)果的準確性。抗凝劑的種類對檢測結(jié)果影響較大,國際化學標準化委員會(ICSI)推薦用LDTA二.鉀抗凝。另外,血液和抗凝劑比例也會影響檢測質(zhì)量。血液比例過高時,由于抗凝劑相對不足,血漿中出現(xiàn)微血塊的可能性增加。微凝塊可能堵塞儀器影響檢測結(jié)果,從而無法得出正確的結(jié)果[4]。在正常情況下,血液細胞分析儀對血細胞體積的識別有明顯的體積界限:WBC35-450f1。根據(jù)Coulter原理,儀器只識別顆粒大小而不能識別顆粒的性質(zhì)。當其體積異常高于或低于儀器設定的閱值時,往往會造成識判。除以上原因外,標本采取后放置時間、溫度及上機前標本混勻

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