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實(shí)驗(yàn)九細(xì)胞中DNA、RNA的顯示I.DNA的細(xì)胞化學(xué)——Feulgen反應(yīng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解Feulgen反應(yīng)的原理,掌握有關(guān)的操作方法。二、實(shí)驗(yàn)原理

Feulgen反應(yīng)的原理是根據(jù)DNA經(jīng)1mol/L弱酸水解后,打開(kāi)嘌呤和脫氧核糖連接的鍵,在脫氧核糖的一端形成游離的醛基。這些醛基就在原位與Schiff試劑結(jié)合,形成含醌基的化合物,醌基是一個(gè)發(fā)色團(tuán)所以具有顏色,因此凡有DNA的部位,就呈現(xiàn)紫紅色。用鑷子撕洋蔥鱗莖內(nèi)表皮↓1mol/LHCl1ml←蒸餾水(對(duì)照組)↓60℃,8-10分鐘蒸餾水水洗↓Schiff試劑1ml遮光染色30分鐘↓

新鮮配制的亞硫酸水1ml洗3次,每次2分鐘↓蒸餾水水洗5分鐘↓將染色后的鱗莖內(nèi)表皮制片↓鏡檢四、實(shí)驗(yàn)步驟注意問(wèn)題:水解時(shí)間:水解時(shí)間一定要合適,不宜過(guò)長(zhǎng)或不足,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。水解時(shí)間一般在8-15分鐘之間。水解時(shí)間的長(zhǎng)短要隨不同的材料而定。Schiff試劑的質(zhì)量:在做Feulgen反應(yīng)時(shí),一個(gè)重要的成功因素就是Schiff試劑的質(zhì)量問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)時(shí),要注意試劑顏色是否正常、有無(wú)SO2的氣味。洗滌劑的重要性:漂洗時(shí),所用的亞硫酸水,最好在每次實(shí)驗(yàn)前臨時(shí)配制,以便保持較濃的SO2。實(shí)驗(yàn)對(duì)照組:一定要做對(duì)照片,以便說(shuō)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性。五、作業(yè)1.簡(jiǎn)述Feulgen反應(yīng)的原理和實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟。

2.繪圖示洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞DNA的分布部位。II.RNA的細(xì)胞化學(xué)——Brachet反應(yīng)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私釨rachet反應(yīng)的原理,掌握有關(guān)的操作方法。三、實(shí)驗(yàn)儀器、材料和試劑(一)器材顯微鏡、鑷子、載玻片、蓋玻片、吸水紙(二)材料洋蔥鱗莖表皮(三)試劑Unna試劑:甲基綠—派洛寧(Methylgreen-Pyronin)染色液1M醋酸緩沖液(pH=4.8)5%三氯

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