TOC分析方法的驗證

第三章TOC分析方法的驗證一、 分析方法驗證的要求分析方法學驗證包括線性、檢測限（MD）、定量限（COG）、準確度、精確度以及擦拭回收率。Refrence:USP<1226>andICHQ2（R1）質(zhì)呈控制檢杳扌羊品系統(tǒng)適用性

試驗岳析方狂血證i■l分析儀器的確認-只有在分析方法是可靠的和可重復的時，驗證才可通過。-USP<1226>與ICHQ2（R1）闡述了分析方法的驗證程序。二、 TOC分析方法驗證的前提：TOC分析儀的性能確認A分析儀器確認是一個過程，確保對特定測試使用分析方法是能符合目標用途的。X根據(jù)cGMP規(guī)定，"企業(yè)所使用的檢測方法的準確度、靈敏度（檢測限）、專屬性和重現(xiàn)性（精確度）必須確立并有文件證明?！痹谶@種情況下用TOC法進行清潔過程驗證的測試之前，對分析儀器進行嚴格的確認就尤為重要。此方法包括由USP<1058>所建議的安裝確認、運行確認和性能確認（IQ/OQ/PQ）。《中國藥典》（2015版）四部0682制藥用水中總有機碳測定法三、 系統(tǒng)適用性試驗要求：響應效率應為85%?115%。試劑：-蔗糖標準溶液（含碳量0.500mg/L）-1，4-對苯醌標準溶液（含碳量0.500mg/L）四、分析方法驗證的要點?專屬性(％碳)?線性度：5點、范圍：最高和最低之間的濃度覆蓋域?誰確度：(總有機碳)?精確度：％RSD百分標準偏差?最低檢測限(LOD)、最低定量限(LOQ)'可靠性：在不同的使用條件五、TOC方法驗證的具體內(nèi)容?專屬性專屬性：專屬性是能能非常準確地確定所存被測物質(zhì)°ICHQ2(R1)如能對目標物質(zhì)進行準確的定量檢測，有機碳，就顯示出這分析方法對有機碳具有專屬性。這可通過檢測具有代表性的一些有機——可選一些含有除碳、氫、氧以外元素的有機物，比如含有氯、硫、氮或磷的有機物。Example：FDA缺陷例子“Yourfirmfailedtoestablishandfollowwrittenprocedurestoassurethecleaningandmaintenanceofequipmentusedinthemanufacturingofdrugproducts.Forexample,cleaningvalidationfortheCIPprocessvessel,whichisutilizedintheasepticformulationoftheCIPprocessvessel,whichisutilizedintheasepticformulationoftrivalentbulkinfluenzavaccine...Thestudydidnotincludeswabsamplingoftheproducttransferlines.”貴司未能建立和遵循已寫的操作規(guī)程，在藥品制造中確保清潔和維護設備。例如，流感疫苗的CIP過程罐清潔驗證未包括對生產(chǎn)線的棉簽取樣實驗。'線性和范圍線性：是指測定結果與試樣中被測物濃度呈正比關系的程度。范圍：是指能達到一定精密度、準確度和線性，測試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。-定量檢查應至少測試5個濃度范圍并且包含清潔的最低限和最高限度。-線性的相關系數(shù)應不低于0.98%o-濃度范圍應達到殘留物限度的50%-150%°

-淋洗法和棉簽法用于限度檢查時不需做線性/范圍驗證。Example：TOC測量值和冃標物濃度的相關性姿布專耒氐制濃度tnhramyHfipnp|jamlinnccm^ntralinn)i姿布專耒氐制濃度tnhramyHfipnp|jamlinnccm^ntralinn)img*L"B)C測定值Hu(h)CnwaunnndvalueRv)/ni耳*L"i1.60(ISOU.40(k2()1.60(ISOU.40(k2()0.8061(J,47M60.3082(I.2215(>.10D.1673口口=12苑umjq口一》00.00.10.20.30.40.50.60.70.B0.9TOC測定氓此(TOCacasuredvalue 1參考文獻：《藥物分析雜志》2013.33.(3)'精密度和準確度要顯示TOC法的精密度和準確度，以含10-6碳的標準品溶液連續(xù)檢測10次。這里選用此碳濃度來評估精密度和準確度是因為通常殘留物的TOC限度一般為此水平左右。在此TOC水平，精密度為1%,準確度為±5%。＞回收率試驗確定合適取樣方法(沖洗方法、擦拭方法、取樣人員的操作培訓及檢測方法)可使污染物/殘留被有效收回，最終為驗證方法提供證據(jù)。通過回收率試驗驗證取樣過程的回收率和重現(xiàn)性。

通常取樣回收率和檢驗方法回收率結合進行。0取樣方法方法擦拭法淋洗法定義在探針的一端裝上一種惰性材料（通常用原棉或類似的材料），用它系統(tǒng)的交叉摩擦表面。取淋洗線路的最下游的排水口。優(yōu)點＞可以評估難以清洗和相當容易接近的區(qū)域，使得可確定每個給出的表面區(qū)域的污染物或殘留物的級別。＞不能溶解的殘留物可以通過物理切除的方法來取樣。＞大面積的取樣。＞可以對人為達不到或常規(guī)不能卸解的系統(tǒng)進行取樣和評估。缺點＞不易在大型設備上實施。＞從小面積獲得的結果外推至設備的整個產(chǎn)品接觸表面。＞不易對難接近的區(qū)域進行取樣。＞殘留物或污染物可能不溶解或堵塞在設備中。＞受被取樣物溶解性的影響。＞只是簡單檢測沖洗水的質(zhì)量（它是否符合測試綱要）而不檢測潛在的污染物的做法是不被認可的。0擦拭法回收率可接受標準回收率：＞50%重現(xiàn)性：＜20%步驟舉例：1、 準備1塊500mmx500mm的平整光潔的不銹鋼板。2、 在鋼板上用鋼錐劃出400mmx400mm的區(qū)域每隔100mm劃線形成16塊100mmxlOOmm的方塊。3、 配制濃度為160mg/L的妥布霉素水溶液定量裝入噴霧器。4、 將約10mL溶液盡量均勻地噴在400mmx400mm的區(qū)域內(nèi)。5、 根據(jù)實際噴出的溶液量計算單位面積上的妥布霉素量約1yg/100mm2。

123456786、 自然干燥或用電吹風溫和地吹干不銹鋼板。7、 用注射用水潤濕棉簽按擦拭取樣操作規(guī)程擦拭鋼板每擦一個方塊，100cm2換一根棉簽。在鋼板上取均布的8個方塊。8、將棉簽分別放入試管中定量加入注射用水10mL,加塞輕搖試管并放置10min，使物質(zhì)溶出。然后將溶液稀釋10倍。9、使用TOC分析儀測定此清潔驗證水樣的TOC值。

10、計算回收率。擦拭回收率(％)=0.8914/1x100%=89.1%帶入校正公式實際計算值?fj集號TOO定值叫(NX：iwjkiijrwlva]u<H)/mg?L■'讒泡瀋液買布雷索的深度fn-lbrnniy^iniwnceritfalwiinfinniiistnfiiuviAaduliina〕/m/L'L_110.51060.S9052050590B79430.49750.K595斗(J.5144U.BW530引骷0議沖4605Z7Qa.skzvj70.54J1?0K694o.mt0.腳）平均誼0.3110a8V34auitc0.034]呷?I?HSpF務t.w L21! 7議瞬dI結論：理想的回收率，說明TOC分析方法適合目標化合物擦拭法的清潔驗證檢測。0擦拭技術向T檢拭詡而并向上銀拭再坎悄匪沿￡坐路怪蟲上向下攥拭由不向上棒拭向T檢拭詡而并向上銀拭再坎悄匪沿￡坐路怪蟲上向下攥拭由不向上棒拭注意：連貫性，固定的力度、速度和線路。0淋洗法回收率通常淋洗法限度檢查不需做回收率驗證，定量檢查應做回收率驗證?？梢岳昧芟慈軇_洗已知量(在限度附近)的分析物確定回收率，回收率通常應不低于95%。淋洗法樣品可對沖洗液直接檢測，也可對沖洗液做稀釋后檢測，無論直接檢測還是稀釋檢測都應在接到樣品后首先將樣品同空白溶劑做視覺檢查確定是否有顏色差異和異物存在，如果有述現(xiàn)象發(fā)生，可直接判定樣品不合格。0回收率接受程度測試結果評價>80%可接受良好的樣品采集方法>50%理論上可接受需要評價是否可以提高<50%不合格而且需要調(diào)査最低檢測限(LOD)、最低定量限(LOQ)LOD/LOQ推演法記錄低濃度純屬標樣的實測TOC值和標準偏差（用250、500、750ppbTOC的蔗糖）使用最小二乘線性回歸算法，確定標樣的標準差比