基因工程一輪復(fù)習(xí)課件

基因工程一輪復(fù)習(xí)課件1恢復(fù)被限制酶切開的磷酸二酯鍵結(jié)果連接________________連接黏性末端功能T4噬菌體___________來源T4DNA連接酶E·coliDNA連接酶常用類型恢復(fù)被限制酶切開的磷酸二酯鍵結(jié)果連接____________23．載體(1)作用：①作為運(yùn)載工具，將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞內(nèi)；②利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。(2)具備的條件：①能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制；②有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，以便與外源基因連接；③具有特殊的標(biāo)記基因，以便進(jìn)行篩選。(3)種類：①質(zhì)粒：一種祼露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外，能夠自我復(fù)制的很小的雙鏈環(huán)狀DNA分子；②噬菌體③動、植物病毒3．載體3一、基因工程的基本工具[判斷正誤](1)限制酶只能用于切割目的基因。()(2)限制酶切割DNA分子具有特異性。()(3)限制酶切割DNA后可產(chǎn)生黏性末端和平末端兩種類型()

(4)DNA連接酶能將兩堿基間通過形成氫鍵連接起來。()(5)E·coliDNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端。()(6)質(zhì)粒是小型環(huán)狀DNA分子，是基因工程常用的載體。()(7)載體的作用是攜帶目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中，使之穩(wěn)定存在并表達(dá)。()×√√××√√一、基因工程的基本工具[判斷正誤]×√√××√√41．與DNA重組技術(shù)相關(guān)的酶(1)幾種酶的比較：種類項(xiàng)目限制酶DNA連接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA分子片段脫氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵堿基對間的氫鍵DNA重組技術(shù)的基本工具1．與DNA重組技術(shù)相關(guān)的酶種類限制酶DNA連接酶DNA聚合5種類項(xiàng)目

限制酶DNA連接酶DNA聚合酶解旋酶作用特點(diǎn)切割目的基因及載體，能專一性識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開了的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵只能將單個(gè)脫氧核苷酸添加到脫氧核苷酸鏈上將DNA兩條鏈之間的氫鍵打開作用結(jié)果形成黏性末端或平末端形成重組DNA分子形成新的DNA分子形成單鏈DNA分子種類限制酶DNA連接酶DNA聚合酶解旋酶作用切割目的基因及載6(2)限制酶與DNA連接酶的關(guān)系：①限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在該酶的識別序列或識別序列已經(jīng)被修飾。②DNA連接酶起作用時(shí)不需要模板。(2)限制酶與DNA連接酶的關(guān)系：7基因工程一輪復(fù)習(xí)課件8【關(guān)鍵一點(diǎn)】(1)一般來說，天然載體往往不能滿足人類的所有要求，因此人們根據(jù)不同的目的和需要，對某些天然的載體進(jìn)行人工改造。(2)限制酶切割位點(diǎn)所處的位置必須是在所需的標(biāo)記基因之外，這樣才能保證標(biāo)記基因的完整性，有利于對目的基因的檢測。(3)為使目的基因與載體形成相同的DNA片段末端以便連接，通常使用同一種限制酶將二者切割，但如果不同限制酶切割DNA分子所產(chǎn)生的末端也存在互補(bǔ)關(guān)系時(shí)，則兩末端也可連接。【關(guān)鍵一點(diǎn)】9[典例1]

(2010·江蘇高考)下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請回答下列問題：限制酶BamHⅠHindⅢEcoRⅠSmaⅠ識別序列及切割位點(diǎn)↓GGATCCCCTAGG↑

↓AAGCTTTTCGAA↑↓GAATTCCTTAAG

↑↓CCCGGGGGGCCC↑[典例1](2010·江蘇高考)下表中列出10(1)一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有________個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。

(2)若對圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越________。

(3)用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是____________________________。(1)一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割11(4)與只使用EcoRⅠ相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止________________。

(5)為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入________酶。

(6)重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了_________。

(7)為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在______的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測。(4)與只使用EcoRⅠ相比較，使用BamH12[答案]

(1)0、2(2)高(3)SmaⅠ會破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因(4)質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化(5)DNA連接(6)鑒別和篩選含有目的基因的受體細(xì)胞(7)蔗糖為唯一含碳源[答案](1)0、2(2)高13二、基因工程的操作程序基因文庫PCR技術(shù)啟動子標(biāo)記基因二、基因工程的操作程序基因文庫PCR技術(shù)啟動子標(biāo)記基因141．基因工程的操作程序分析(1)目的基因的獲取途徑：①從自然界現(xiàn)有的物種的細(xì)胞中分離出來，如從基因文庫（cDNA文庫）中獲取。②人工合成目的基因：常用的方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。③利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因：通過PCR技術(shù)可對已獲取的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，以獲取大量的目的基因?；蚬こ痰幕静僮鞒绦蚣芭c蛋白質(zhì)工程的比較1．基因工程的操作程序分析基因工程的基本操作程序及與蛋白質(zhì)工15PCR技術(shù)：是利用DNA復(fù)制的原理PCR循環(huán)PCR技術(shù)：是利用DNA復(fù)制的原理PCR循環(huán)16高溫變性中溫延伸低溫復(fù)性PCR90~95℃55~60℃70~75℃高溫變性中溫延伸低溫復(fù)性PCR90~95℃55~60℃70~17(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：【關(guān)鍵一點(diǎn)】(1)插入的目的基因的表達(dá)需要調(diào)控序列，因而用作載體的質(zhì)粒的插入基因部位之前需有啟動子，之后需有終止子。(2)兩次使用的限制酶為同一種酶，這樣形成的黏性末端堿基之間互補(bǔ)，便于連接。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：【關(guān)鍵一點(diǎn)】18農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法花粉管通道法顯微注射農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法花粉管通道法顯微注射19(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(轉(zhuǎn)化)：生物種類植物細(xì)胞動物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)感受態(tài)法受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的DNA上→表達(dá)將含有目的基因的表達(dá)載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動物Ca2＋處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→重組表達(dá)載體DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子受體是植物細(xì)胞時(shí)，還可以用花粉管通道法、基因槍法(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(轉(zhuǎn)化)：生物種類植物細(xì)胞動物細(xì)20基因工程一輪復(fù)習(xí)課件21DNA分子雜交DNA-RNA分子雜交抗原—抗體雜交個(gè)體生物學(xué)水平DNA分子雜交DNA-RNA抗原—抗體雜交個(gè)體生物學(xué)水平22(4)目的基因的檢測與鑒定：類型檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子水平檢測導(dǎo)入檢測目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞DNA分子雜交(DNA和DNA之間)雜交帶轉(zhuǎn)錄檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA分子雜交(DNA和mRNA之間)雜交帶翻譯檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原－抗體雜交雜交帶個(gè)體生物學(xué)水平檢測包括做抗蟲、抗病的接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及抗性的程度；對基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能進(jìn)行活性比較，以確定功能活性是否相同等(4)目的基因的檢測與鑒定：類型檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子水平23基因工程一輪復(fù)習(xí)課件242．基因工程與蛋白質(zhì)工程的比較項(xiàng)目區(qū)別與聯(lián)系蛋白質(zhì)工程基因工程區(qū)別過程預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列獲取目的基因→構(gòu)建基因表達(dá)載體→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測與鑒定實(shí)質(zhì)定向改造或生產(chǎn)人類所需的蛋白質(zhì)定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類所需的生物類型或生物產(chǎn)品2．基因工程與蛋白質(zhì)工程的比較項(xiàng)目蛋白質(zhì)工程基因工程區(qū)別過程25①蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上，延伸出來的第二代基因工程；②基因工程中所利用的某些酶需要通過蛋白質(zhì)工程進(jìn)行修飾、改造聯(lián)系只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì)可生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質(zhì)結(jié)果區(qū)別基因工程蛋白質(zhì)工程項(xiàng)目區(qū)別與聯(lián)系①蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上，延伸出來的第二代基因工程；聯(lián)261．[2014·天津卷]嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開展了以下試驗(yàn)：Ⅰ.利用大腸桿菌表達(dá)BglB酶(1)PCR擴(kuò)增bglB基因時(shí)，選用________________________基因組DNA作模板。(2)下圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴(kuò)增的bglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入______和______不同限制酶的識別序列。(3)大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)開___________。注：圖中限制酶的識別序列及切割形成的黏性末端均不相同【高考隨堂體驗(yàn)】1．[2014·天津卷]嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷27Ⅱ.溫度對BglB酶活性的影響(4)據(jù)圖1、2可知，80℃保溫30分鐘后，BglB酶會__________；為高效利用BglB酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好控制在________(單選)。A．50℃B．60℃C．70℃D．80℃圖1溫度對BglB酶活性的影響圖2BglB酶的熱穩(wěn)定性Ⅱ.溫度對BglB酶活性的影響圖1溫度對BglB酶活性的影28注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時(shí)間后通過其活性的保持程度來反映的Ⅲ.利用分子育種技術(shù)提高BglB酶的熱穩(wěn)定性在PCR擴(kuò)增bglB基因的過程中，加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過篩選，可獲得能表達(dá)出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。(5)與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽胞桿菌相比，上述育種技術(shù)獲取熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR過程中________(多選)。A．僅針對bglB基因進(jìn)行誘變B．bglB基因產(chǎn)生了定向突變C．bglB基因可快速累積突變D．bglB基因突變不會導(dǎo)致酶的氨基酸數(shù)目改變【答案】．(1)嗜熱土壤芽胞桿菌(2)NdeⅠBamHⅠ(3)轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶(4)失活B(5)A、C注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時(shí)間后通過其活性的292．[2014·新課標(biāo)全國卷Ⅱ]植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān)。若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性?；卮鹣铝袉栴}：(1)理論上，基因組文庫含有生物的________基因；而cDNA文庫中含有生物的________基因。(2)若要從植物甲中獲得耐旱基因，可首先建立該植物的基因組文庫，再從中________出所需的耐旱基因。(3)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌，并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入植物________的體細(xì)胞中，經(jīng)過一系列的過程得到再生植株。要確認(rèn)該耐旱基因是否在再生植株中正確表達(dá)，應(yīng)檢測此再生植株中該基因的________，如果檢測結(jié)果呈陽性，再在田間試驗(yàn)中檢測植株的________是否得到提高。(4)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為3∶1時(shí)，則可推測該耐旱基因整合到了______________________(填“同源染色體的一條上”或“同源染色體的兩條上”)。全部部分篩選乙表達(dá)產(chǎn)物耐旱性同源染色體的一條上2．[2014·新課標(biāo)全國卷Ⅱ]植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其3036．[2014·山東卷]人組織纖溶酶原激活物(htPA)是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得。流程如下：(1)htPA基因與載體用________切割后，通過DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。檢測目的基因是否已插入受體細(xì)胞DNA，可采用____________技術(shù)。(2)為獲取更多的卵(母)細(xì)胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其________。采集的精子需要經(jīng)過________，才具備受精能力。36．[2014·山東卷]人組織纖溶酶原激活物(htPA)31(3)將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是________。為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行________。利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個(gè)轉(zhuǎn)基因個(gè)體，這體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的________。(4)若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到__________，說明目的基因成功表達(dá)?！敬鸢浮浚?1)同種限制性核酸內(nèi)切酶(或同種限制酶)DNA分子雜交(或核酸探針)(2)超數(shù)排卵獲能(處理)(3)顯微注射法性別鑒定全能性(4)htPA(或人組織纖溶酶原激活物)(3)將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是________。321．(2012·新課標(biāo)全國卷)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題：(1)限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有________和________。(2)質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下：

AATTC……G

G……CTTAA為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)_________________________________________________________________________________________。1．(2012·新課標(biāo)全國卷)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下33(3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即________DNA連接酶和________DNA連接酶。(4)反轉(zhuǎn)錄作用的模板是________，產(chǎn)物是________。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用________技術(shù)。(5)基因工程中除質(zhì)粒外，________________和________________也可作為運(yùn)載體。(6)若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是_______________。答案：(1)黏性末端平末端(2)切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同(3)大腸桿菌T4

(4)mRNA(或RNA)cDNA(或DNA)PCR(5)噬菌體動植物病毒(6)未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱(3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即343．(2012·江蘇高考)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對)和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題：3．(2012·江蘇高考)圖1表示含有目的基因D的DNA片段35(1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由________連接。(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是________末端，其產(chǎn)物長度為______________________。(3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有________種不同長度的DNA片段。脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖平537bp、790bp、661bp4(1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由____36(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是________。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加________的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是______________________________________________________________________。BamHⅠ抗生素B同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行連接374．(2012·天津高考)生物分子間特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。以下實(shí)例為體外處理“蛋白質(zhì)—DNA復(fù)合體”獲得DNA片段信息的過程圖。據(jù)圖回答：(1)過程①酶作用的部位是________鍵，此過程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNA。過程②酶作用的部位是________鍵。(2)①、②兩過程利用了酶的________特性。(3)若將得到的DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要將過程③的測序結(jié)果與________酶的識別序列進(jìn)行比對，以確定選用何種酶。(4)如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNA聚合酶，則其識別、結(jié)合的DNA序列區(qū)為基因的________。4．(2012·天津高考)生物分子間特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于38(5)以下研究利用了生物分子間特異性結(jié)合性質(zhì)的有_____(多選)。A．分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后提取rRNAB．用無水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素C．通過分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體基因定位D．將抑制成熟基因?qū)敕眩鋗RNA與催化成熟酶基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實(shí)成熟答案：(1)磷酸二酯肽(2)專一性(3)限制性核酸內(nèi)切(4)啟動子(或轉(zhuǎn)錄起始區(qū))(5)A、C、D(5)以下研究利用了生物分子間特異性結(jié)合性質(zhì)的有_____答395．(2012·福建高考)肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)敕伟┘?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1。5．(2012·福建高考)肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱40請回答：(1)進(jìn)行過程①時(shí)，需用________酶切開載體以插入let-7基因。載體應(yīng)有RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，以驅(qū)動let-7基因轉(zhuǎn)錄，該部位稱為____________。(2)進(jìn)行過程②時(shí)，需用____________酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于傳代培養(yǎng)。(3)研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖2。據(jù)圖分析，可從細(xì)胞中提取________進(jìn)行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉(zhuǎn)錄。肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中________(RASmRNA/RAS蛋白)含量減少引起的。答案：(1)限制性核酸內(nèi)切(或限制酶)啟動子(2)胰蛋白

(3)RNARAS蛋白請回答：答案：(1)限制性核酸內(nèi)切(或限制酶)啟動子416.（18分）（2013北京卷）斑馬魚的酶D由17號染色體上的D基因編碼。具有純合突變基因（dd）的斑馬魚胚胎會發(fā)出紅色熒光。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將綠色熒光蛋白（G）基因整合到斑馬魚17號染色體上，帶有G基因的胚胎能夠發(fā)出綠色熒光。未整合G基因的染色體的對應(yīng)位點(diǎn)表示為g。用個(gè)體M和N進(jìn)行如下雜交實(shí)驗(yàn)。（1）在上述轉(zhuǎn)基因?qū)嶒?yàn)中，將G基因與質(zhì)粒重組，需要的兩類酶是

和

。將重組質(zhì)粒顯微注射到斑馬魚

中，整合到染色體上的G基因

后，使胚胎發(fā)出綠色熒光。6.（18分）（2013北京卷）斑馬魚的酶D由17號染色體上42（2）根據(jù)上述雜交實(shí)驗(yàn)推測：①親代M的基因型是

（選填選項(xiàng)前的符號）。a.DDggb.Ddgg②子代中只發(fā)出綠色熒光的胚胎基因型包括

（選填選項(xiàng)前的符號）。a.DDGGb.DDGgc.DdGGd.DdGg（3）雜交后，出現(xiàn)紅·綠熒光（既有紅色又有綠色熒光）胚胎的原因是親代

（填“M”或“N”）的初級精（卵）母細(xì)胞在減數(shù)分裂過程中，同源染色體的

發(fā)生了交換，導(dǎo)致染色體上的基因重組。通過記錄子代中紅·綠熒光胚胎數(shù)量與胚胎總數(shù)，可計(jì)算得到該親本產(chǎn)生的重組配子占其全部配子的比例，算式為

?！敬鸢浮浚?）限制性核酸內(nèi)切酶DNA連接酶受精卵表達(dá)（2）①b②b、d（3）N非姐妹染色單體4×（紅·綠熒光胚胎數(shù)量/胚胎總數(shù)）（2）根據(jù)上述雜交實(shí)驗(yàn)推測：【答案】437．（16分）(2013廣東卷)地中海貧血癥屬于常染色體遺傳病。一對夫婦生有一位重型β地中海貧血癥患兒，分析發(fā)現(xiàn)，患兒血紅蛋白β鏈第39位氨基酸的編碼序列發(fā)生了突變（C→T）。用PCR擴(kuò)增包含該位點(diǎn)的一段DNA片段l，突變序列的擴(kuò)增片段可用一種限制酶酶切為大小不同的兩個(gè)片段m和s；但正常序列的擴(kuò)增片段不能被該酶酶切，如圖11（a）。目前患兒母親再次懷孕，并接受了產(chǎn)前基因診斷。家庭成員及胎兒的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物酶切電泳帶型示意圖見圖11（b）。（終止密碼子為UAA、UAG、UGA。）7．（16分）(2013廣東卷)地中海貧血癥屬于常染色體遺44（1）在獲得單鏈模板的方式上，PCR擴(kuò)增與體內(nèi)DNA復(fù)制不同，前者通過__________解開雙鏈，后者通過________解開雙鏈。（2）據(jù)圖分析，胎兒的基因型是_______（基因用A、a表示）。患兒患病可能的原因是_________的原始生殖細(xì)胞通過_______________過程產(chǎn)生配子時(shí)，發(fā)生了基因突變；從基因表達(dá)水平分析，其患病是由于_____________。（1）在獲得單鏈模板的方式上，PCR擴(kuò)增與體內(nèi)DNA復(fù)制不同45（3）研究者在另一種貧血癥的一位患者β鏈基因中檢測到一個(gè)新的突變位點(diǎn)，該突變導(dǎo)致β鏈第102位的天冬酰胺替換為蘇氨酸。如果____________，但____________，則為證明該突變位點(diǎn)就是這種貧血癥的致病位點(diǎn)提供了一個(gè)有力證據(jù)?！敬鸢浮浚?）高溫解旋酶（2）Aa母親減數(shù)分裂突變后終止密碼子提前出現(xiàn)，翻譯提前終止形成異常蛋白（3）該病可遺傳給后代患者的β鏈不能被限制性酶切割（3）研究者在另一種貧血癥的一位患者β鏈基因中檢測到一個(gè)新的46基因工程一輪復(fù)習(xí)課件47恢復(fù)被限制酶切開的磷酸二酯鍵結(jié)果連接________________連接黏性末端功能T4噬菌體___________來源T4DNA連接酶E·coliDNA連接酶常用類型恢復(fù)被限制酶切開的磷酸二酯鍵結(jié)果連接____________483．載體(1)作用：①作為運(yùn)載工具，將目的基因轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞內(nèi)；②利用它在宿主細(xì)胞內(nèi)對目的基因進(jìn)行大量復(fù)制。(2)具備的條件：①能在宿主細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定保存并大量復(fù)制；②有多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)，以便與外源基因連接；③具有特殊的標(biāo)記基因，以便進(jìn)行篩選。(3)種類：①質(zhì)粒：一種祼露的、結(jié)構(gòu)簡單、獨(dú)立于細(xì)菌擬核DNA之外，能夠自我復(fù)制的很小的雙鏈環(huán)狀DNA分子；②噬菌體③動、植物病毒3．載體49一、基因工程的基本工具[判斷正誤](1)限制酶只能用于切割目的基因。()(2)限制酶切割DNA分子具有特異性。()(3)限制酶切割DNA后可產(chǎn)生黏性末端和平末端兩種類型()

(4)DNA連接酶能將兩堿基間通過形成氫鍵連接起來。()(5)E·coliDNA連接酶既可連接平末端，又可連接黏性末端。()(6)質(zhì)粒是小型環(huán)狀DNA分子，是基因工程常用的載體。()(7)載體的作用是攜帶目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中，使之穩(wěn)定存在并表達(dá)。()×√√××√√一、基因工程的基本工具[判斷正誤]×√√××√√501．與DNA重組技術(shù)相關(guān)的酶(1)幾種酶的比較：種類項(xiàng)目限制酶DNA連接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA分子片段脫氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵堿基對間的氫鍵DNA重組技術(shù)的基本工具1．與DNA重組技術(shù)相關(guān)的酶種類限制酶DNA連接酶DNA聚合51種類項(xiàng)目

限制酶DNA連接酶DNA聚合酶解旋酶作用特點(diǎn)切割目的基因及載體，能專一性識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開將雙鏈DNA片段“縫合”起來，恢復(fù)被限制酶切開了的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵只能將單個(gè)脫氧核苷酸添加到脫氧核苷酸鏈上將DNA兩條鏈之間的氫鍵打開作用結(jié)果形成黏性末端或平末端形成重組DNA分子形成新的DNA分子形成單鏈DNA分子種類限制酶DNA連接酶DNA聚合酶解旋酶作用切割目的基因及載52(2)限制酶與DNA連接酶的關(guān)系：①限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物中不存在該酶的識別序列或識別序列已經(jīng)被修飾。②DNA連接酶起作用時(shí)不需要模板。(2)限制酶與DNA連接酶的關(guān)系：53基因工程一輪復(fù)習(xí)課件54【關(guān)鍵一點(diǎn)】(1)一般來說，天然載體往往不能滿足人類的所有要求，因此人們根據(jù)不同的目的和需要，對某些天然的載體進(jìn)行人工改造。(2)限制酶切割位點(diǎn)所處的位置必須是在所需的標(biāo)記基因之外，這樣才能保證標(biāo)記基因的完整性，有利于對目的基因的檢測。(3)為使目的基因與載體形成相同的DNA片段末端以便連接，通常使用同一種限制酶將二者切割，但如果不同限制酶切割DNA分子所產(chǎn)生的末端也存在互補(bǔ)關(guān)系時(shí)，則兩末端也可連接?！娟P(guān)鍵一點(diǎn)】55[典例1]

(2010·江蘇高考)下表中列出了幾種限制酶識別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請回答下列問題：限制酶BamHⅠHindⅢEcoRⅠSmaⅠ識別序列及切割位點(diǎn)↓GGATCCCCTAGG↑

↓AAGCTTTTCGAA↑↓GAATTCCTTAAG

↑↓CCCGGGGGGCCC↑[典例1](2010·江蘇高考)下表中列出56(1)一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割前后，分別含有________個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。

(2)若對圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越________。

(3)用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是____________________________。(1)一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)SmaⅠ切割57(4)與只使用EcoRⅠ相比較，使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止________________。

(5)為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入________酶。

(6)重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了_________。

(7)為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在______的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測。(4)與只使用EcoRⅠ相比較，使用BamH58[答案]

(1)0、2(2)高(3)SmaⅠ會破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因(4)質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化(5)DNA連接(6)鑒別和篩選含有目的基因的受體細(xì)胞(7)蔗糖為唯一含碳源[答案](1)0、2(2)高59二、基因工程的操作程序基因文庫PCR技術(shù)啟動子標(biāo)記基因二、基因工程的操作程序基因文庫PCR技術(shù)啟動子標(biāo)記基因601．基因工程的操作程序分析(1)目的基因的獲取途徑：①從自然界現(xiàn)有的物種的細(xì)胞中分離出來，如從基因文庫（cDNA文庫）中獲取。②人工合成目的基因：常用的方法有反轉(zhuǎn)錄法和化學(xué)合成法。③利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因：通過PCR技術(shù)可對已獲取的目的基因進(jìn)行擴(kuò)增，以獲取大量的目的基因。基因工程的基本操作程序及與蛋白質(zhì)工程的比較1．基因工程的操作程序分析基因工程的基本操作程序及與蛋白質(zhì)工61PCR技術(shù)：是利用DNA復(fù)制的原理PCR循環(huán)PCR技術(shù)：是利用DNA復(fù)制的原理PCR循環(huán)62高溫變性中溫延伸低溫復(fù)性PCR90~95℃55~60℃70~75℃高溫變性中溫延伸低溫復(fù)性PCR90~95℃55~60℃70~63(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：【關(guān)鍵一點(diǎn)】(1)插入的目的基因的表達(dá)需要調(diào)控序列，因而用作載體的質(zhì)粒的插入基因部位之前需有啟動子，之后需有終止子。(2)兩次使用的限制酶為同一種酶，這樣形成的黏性末端堿基之間互補(bǔ)，便于連接。(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建：【關(guān)鍵一點(diǎn)】64農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法花粉管通道法顯微注射農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法花粉管通道法顯微注射65(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(轉(zhuǎn)化)：生物種類植物細(xì)胞動物細(xì)胞微生物細(xì)胞常用方法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)感受態(tài)法受體細(xì)胞體細(xì)胞受精卵原核細(xì)胞轉(zhuǎn)化過程將目的基因插入Ti質(zhì)粒的T-DNA上→農(nóng)桿菌→導(dǎo)入植物細(xì)胞→整合到受體細(xì)胞的DNA上→表達(dá)將含有目的基因的表達(dá)載體提純→取卵(受精卵)→顯微注射→受精卵發(fā)育→獲得具有新性狀的動物Ca2＋處理細(xì)胞→感受態(tài)細(xì)胞→重組表達(dá)載體DNA分子與感受態(tài)細(xì)胞混合→感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA分子受體是植物細(xì)胞時(shí)，還可以用花粉管通道法、基因槍法(3)將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞(轉(zhuǎn)化)：生物種類植物細(xì)胞動物細(xì)66基因工程一輪復(fù)習(xí)課件67DNA分子雜交DNA-RNA分子雜交抗原—抗體雜交個(gè)體生物學(xué)水平DNA分子雜交DNA-RNA抗原—抗體雜交個(gè)體生物學(xué)水平68(4)目的基因的檢測與鑒定：類型檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子水平檢測導(dǎo)入檢測目的基因是否進(jìn)入受體細(xì)胞DNA分子雜交(DNA和DNA之間)雜交帶轉(zhuǎn)錄檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA分子雜交(DNA和mRNA之間)雜交帶翻譯檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原－抗體雜交雜交帶個(gè)體生物學(xué)水平檢測包括做抗蟲、抗病的接種實(shí)驗(yàn)，以確定是否有抗性以及抗性的程度；對基因工程產(chǎn)品與天然產(chǎn)品的功能進(jìn)行活性比較，以確定功能活性是否相同等(4)目的基因的檢測與鑒定：類型檢測內(nèi)容方法結(jié)果顯示分子水平69基因工程一輪復(fù)習(xí)課件702．基因工程與蛋白質(zhì)工程的比較項(xiàng)目區(qū)別與聯(lián)系蛋白質(zhì)工程基因工程區(qū)別過程預(yù)期蛋白質(zhì)功能→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列獲取目的基因→構(gòu)建基因表達(dá)載體→將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞→目的基因的檢測與鑒定實(shí)質(zhì)定向改造或生產(chǎn)人類所需的蛋白質(zhì)定向改造生物的遺傳特性，以獲得人類所需的生物類型或生物產(chǎn)品2．基因工程與蛋白質(zhì)工程的比較項(xiàng)目蛋白質(zhì)工程基因工程區(qū)別過程71①蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上，延伸出來的第二代基因工程；②基因工程中所利用的某些酶需要通過蛋白質(zhì)工程進(jìn)行修飾、改造聯(lián)系只能生產(chǎn)自然界已有的蛋白質(zhì)可生產(chǎn)自然界沒有的蛋白質(zhì)結(jié)果區(qū)別基因工程蛋白質(zhì)工程項(xiàng)目區(qū)別與聯(lián)系①蛋白質(zhì)工程是在基因工程基礎(chǔ)上，延伸出來的第二代基因工程；聯(lián)721．[2014·天津卷]嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開展了以下試驗(yàn)：Ⅰ.利用大腸桿菌表達(dá)BglB酶(1)PCR擴(kuò)增bglB基因時(shí)，選用________________________基因組DNA作模板。(2)下圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴(kuò)增的bglB基因重組進(jìn)該質(zhì)粒，擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入______和______不同限制酶的識別序列。(3)大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述構(gòu)建好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)開___________。注：圖中限制酶的識別序列及切割形成的黏性末端均不相同【高考隨堂體驗(yàn)】1．[2014·天津卷]嗜熱土壤芽胞桿菌產(chǎn)生的β-葡萄糖苷73Ⅱ.溫度對BglB酶活性的影響(4)據(jù)圖1、2可知，80℃保溫30分鐘后，BglB酶會__________；為高效利用BglB酶降解纖維素，反應(yīng)溫度最好控制在________(單選)。A．50℃B．60℃C．70℃D．80℃圖1溫度對BglB酶活性的影響圖2BglB酶的熱穩(wěn)定性Ⅱ.溫度對BglB酶活性的影響圖1溫度對BglB酶活性的影74注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時(shí)間后通過其活性的保持程度來反映的Ⅲ.利用分子育種技術(shù)提高BglB酶的熱穩(wěn)定性在PCR擴(kuò)增bglB基因的過程中，加入誘變劑可提高bglB基因的突變率。經(jīng)過篩選，可獲得能表達(dá)出熱穩(wěn)定性高的BglB酶的基因。(5)與用誘變劑直接處理嗜熱土壤芽胞桿菌相比，上述育種技術(shù)獲取熱穩(wěn)定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR過程中________(多選)。A．僅針對bglB基因進(jìn)行誘變B．bglB基因產(chǎn)生了定向突變C．bglB基因可快速累積突變D．bglB基因突變不會導(dǎo)致酶的氨基酸數(shù)目改變【答案】．(1)嗜熱土壤芽胞桿菌(2)NdeⅠBamHⅠ(3)轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌分泌出有活性的BglB酶(4)失活B(5)A、C注：酶的熱穩(wěn)定性是酶在一定溫度下，保溫一段時(shí)間后通過其活性的752．[2014·新課標(biāo)全國卷Ⅱ]植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其耐旱性與某個(gè)基因有關(guān)。若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性?；卮鹣铝袉栴}：(1)理論上，基因組文庫含有生物的________基因；而cDNA文庫中含有生物的________基因。(2)若要從植物甲中獲得耐旱基因，可首先建立該植物的基因組文庫，再從中________出所需的耐旱基因。(3)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌，并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入植物________的體細(xì)胞中，經(jīng)過一系列的過程得到再生植株。要確認(rèn)該耐旱基因是否在再生植株中正確表達(dá)，應(yīng)檢測此再生植株中該基因的________，如果檢測結(jié)果呈陽性，再在田間試驗(yàn)中檢測植株的________是否得到提高。(4)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為3∶1時(shí)，則可推測該耐旱基因整合到了______________________(填“同源染色體的一條上”或“同源染色體的兩條上”)。全部部分篩選乙表達(dá)產(chǎn)物耐旱性同源染色體的一條上2．[2014·新課標(biāo)全國卷Ⅱ]植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其7636．[2014·山東卷]人組織纖溶酶原激活物(htPA)是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得。流程如下：(1)htPA基因與載體用________切割后，通過DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。檢測目的基因是否已插入受體細(xì)胞DNA，可采用____________技術(shù)。(2)為獲取更多的卵(母)細(xì)胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其________。采集的精子需要經(jīng)過________，才具備受精能力。36．[2014·山東卷]人組織纖溶酶原激活物(htPA)77(3)將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是________。為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行________。利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個(gè)轉(zhuǎn)基因個(gè)體，這體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的________。(4)若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到__________，說明目的基因成功表達(dá)?！敬鸢浮浚?1)同種限制性核酸內(nèi)切酶(或同種限制酶)DNA分子雜交(或核酸探針)(2)超數(shù)排卵獲能(處理)(3)顯微注射法性別鑒定全能性(4)htPA(或人組織纖溶酶原激活物)(3)將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是________。781．(2012·新課標(biāo)全國卷)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下列問題：(1)限制性內(nèi)切酶切割DNA分子后產(chǎn)生的片段，其末端類型有________和________。(2)質(zhì)粒運(yùn)載體用EcoRⅠ切割后產(chǎn)生的片段如下：

AATTC……G

G……CTTAA為使運(yùn)載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性內(nèi)切酶切割，該酶必須具有的特點(diǎn)_________________________________________________________________________________________。1．(2012·新課標(biāo)全國卷)根據(jù)基因工程的有關(guān)知識，回答下79(3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即________DNA連接酶和________DNA連接酶。(4)反轉(zhuǎn)錄作用的模板是________，產(chǎn)物是________。若要在體外獲得大量反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，常采用________技術(shù)。(5)基因工程中除質(zhì)粒外，________________和________________也可作為運(yùn)載體。(6)若用重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細(xì)胞，原因是_______________。答案：(1)黏性末端平末端(2)切割產(chǎn)生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產(chǎn)生的相同(3)大腸桿菌T4

(4)mRNA(或RNA)cDNA(或DNA)PCR(5)噬菌體動植物病毒(6)未處理的大腸桿菌吸收質(zhì)粒(外源DNA)的能力極弱(3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即803．(2012·江蘇高考)圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度(bp即堿基對)和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請回答下列問題：3．(2012·江蘇高考)圖1表示含有目的基因D的DNA片段81(1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由________連接。(2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，產(chǎn)生的末端是________末端，其產(chǎn)物長度為______________________。(3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有________種不同長度的DNA片段。脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖平537bp、790bp、661bp4(1)圖1的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由____82(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是________。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加________的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是______________________________________________________________________。BamHⅠ抗生素B同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接(4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行連接834．(2012·天津高考)生物分子間特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于生命科學(xué)研究。以下實(shí)例為體外處理“蛋白質(zhì)—DNA復(fù)合體”獲得DNA片段信息的過程圖。據(jù)圖回答：(1)過程①酶作用的部位是________鍵，此過程只發(fā)生在非結(jié)合區(qū)DNA。過程②酶作用的部位是________鍵。(2)①、②兩過程利用了酶的________特性。(3)若將得到的DNA片段用于構(gòu)建重組質(zhì)粒，需要將過程③的測序結(jié)果與________酶的識別序列進(jìn)行比對，以確定選用何種酶。(4)如果復(fù)合體中的蛋白質(zhì)為RNA聚合酶，則其識別、結(jié)合的DNA序列區(qū)為基因的________。4．(2012·天津高考)生物分子間特異性結(jié)合的性質(zhì)廣泛用于84(5)以下研究利用了生物分子間特異性結(jié)合性質(zhì)的有_____(多選)。A．分離得到核糖體，用蛋白酶酶解后提取rRNAB．用無水乙醇處理菠菜葉片，提取葉綠體基粒膜上的光合色素C．通過分子雜交手段，用熒光物質(zhì)標(biāo)記的目的基因進(jìn)行染色體基因定位D．將抑制成熟基因?qū)敕眩鋗RNA與催化成熟酶基因的mRNA互補(bǔ)結(jié)合，終止后者翻譯，延遲果實(shí)成熟答案：(1)磷酸二酯肽(2)專一性(3)限制性核酸內(nèi)切(4)啟動子(或轉(zhuǎn)錄起