薄層色譜法注意事項課件

薄層色譜法檢驗注意事項1定義薄層色譜法系指以適宜的固定相涂布于玻璃板、鋁箔片或聚酯薄膜上使成一均勻的薄層，將供試品與相應(yīng)的對照物點(diǎn)于薄層板的一端，以適宜的溶劑置展開容器內(nèi)展開，使供試品所含的相應(yīng)成分分離,采用適宜的顯色劑或顯色方法顯色，將供試品色譜與對照物色譜相比較，或采用薄層掃描儀掃描，以進(jìn)行鑒別、檢查或含量測定的方法。2薄層板的制備將1份固定相和3份水(或加有黏合劑如0.2～0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液)在研缽中向同一方向研磨混合,去除表面的氣泡后,倒入準(zhǔn)備好的玻璃板上,用潔凈玻棒涂鋪成一個均勻的薄層,再稍加振動,使整板薄層均勻。0.2～0.5%羧甲基纖維素鈉溶液:稱取2—5g羧甲基纖維素鈉,加1升水煮沸溶解,過濾,靜置，用時取上清液。110℃活化30分鐘，即置有干燥劑的干燥箱中備用。3點(diǎn)樣盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點(diǎn)樣管。這樣，點(diǎn)的斑點(diǎn)較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。薄層色譜用于定量時，點(diǎn)樣是最主要的誤差來源。供試液的溶劑均有不同程度的洗脫力，所以在點(diǎn)樣的同時，樣品在原點(diǎn)就可是成環(huán)形展開，原點(diǎn)直徑的擴(kuò)散促進(jìn)了這種展開，Kaiser稱之為“上樣環(huán)形色譜效應(yīng)”。如果樣品在溶劑中的溶解度很大，原點(diǎn)將變成空心環(huán)。這種效應(yīng)對隨后的先行展開造成很不利的影響。供試液的溶劑在原點(diǎn)的殘留，也會改變展開的選擇性，特別是供試液的溶劑與展開劑的極性相差較大時更明顯。再者，親水性溶劑殘留在原點(diǎn)吸收大氣中的水分（特別在高濕度環(huán)境）對色譜的影響也不可低估。因此點(diǎn)樣時的同步干燥或繼后干燥以除去原點(diǎn)殘存的溶劑是需要的。但應(yīng)盡可能避免高溫加熱，如用吹風(fēng)筒加熱，樣品變?yōu)楣虘B(tài)后，部分或全部強(qiáng)烈的吸附在吸附劑的顆粒上，而促進(jìn)了硅膠的有催化作用的活性表面故態(tài)化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致樣品的變性（尤其熱不穩(wěn)定物質(zhì)），至少移動相在展開時對這部分樣品的溶解速度比移動速度慢得多而形成拖尾（斑點(diǎn)拖尾的原因之一）。5展開浸入展開劑的深度為距原點(diǎn)5mm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中)，上行展距一般為8～15cm，高效板上行展距為5～8cm.若展距過長，各個物質(zhì)的分離更大，能夠提高分離效果。但是斑點(diǎn)的擴(kuò)散也更大，影響了斑點(diǎn)的集中。6展開劑的配置選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑?；旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑，會造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對不同的分析任務(wù)有不同的要求，

7展開系統(tǒng)的飽和一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當(dāng)然動作應(yīng)該盡量輕、快。8薄層掃描法——定義系指用一定波長的光照射在薄層板上，對薄層色譜中可吸收紫外光或可見光的斑點(diǎn)，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射熒光的斑點(diǎn)進(jìn)行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、檢查或含量測定的方法。10