瘧原蟲(chóng)血檢課件

瘧原蟲(chóng)血檢江西省疾控中心地病所

2011.41前言一、目的

通過(guò)對(duì)“三熱病人”（瘧疾、疑似瘧疾、不明原因的發(fā)熱病人）血檢瘧原蟲(chóng)，及時(shí)發(fā)現(xiàn)瘧疾病人，及時(shí)處理疫點(diǎn)，清除瘧疾傳染源，阻斷瘧疾傳播，最終實(shí)現(xiàn)消除瘧疾目標(biāo)。二、血檢方法1、采血對(duì)象：臨床診斷為瘧疾、疑似瘧疾和不明原因的發(fā)熱病人（簡(jiǎn)稱“三熱病人”）。2、血檢：臨床醫(yī)生門診日志上登記，并開(kāi)具化驗(yàn)單，患者到化驗(yàn)室采血鏡檢。3、登記：鏡檢人員對(duì)血檢對(duì)象按照血檢登記本要求進(jìn)行登記。2

血片制作3所需用具采血針一律使用一次性采血針。75％酒精棉球用于采血前后的消毒。記號(hào)筆、鉛筆用于玻片上寫(xiě)號(hào)碼。玻片盒為防止污染和蒼蠅吸食血膜，新制作的血膜應(yīng)放在玻片盒中，厚血膜放置時(shí)要保持水平，直到充分干燥。5取血方法

采血部位以耳垂較為合適，也可在手指末端采血，嬰兒可從拇趾或足跟取血。先用75%酒精棉球消毒取血部位，待酒精干后，用左手拇指和食指輕輕捻轉(zhuǎn)耳垂邊緣或夾住被檢者手指尖稍下方，右手持消毒針，迅速刺入取血部位1-2mm，不宜過(guò)深或過(guò)淺。然后用左手大拇指、食指和右手中指協(xié)同擠出血滴。6血膜的涂制

取潔凈的玻片2張，1張作載片，1張作推片（具有光滑邊緣），右手拇指和食指夾持推片側(cè)緣中部，用推片左下角刮取血液4-5ul（約火柴頭大?。?，再用該端中部刮取血液1-1.5ul（相當(dāng)于1/4火柴頭大?。瑢⒆笙陆堑难瓮坑谳d片的中央偏右，由里向外劃圈涂成直徑0.8-1.0cm的圓形厚血膜（厚血膜的厚度以一個(gè)油鏡視野內(nèi)可見(jiàn)到5-10個(gè)白細(xì)胞為宜）。用干棉球抹凈角上的血漬，然后將推片下緣平抵載玻片的中線，當(dāng)血液在載玻片和推片之間向兩側(cè)擴(kuò)展至約2cm寬時(shí)，使兩玻片保持25~35度夾角，從右向左迅速向前推成舌狀薄血膜。推制時(shí)速度要均勻，血滴大小、推片與載片之間夾角大小及展開(kāi)血膜的速度快慢等常影響血膜的厚薄。制成的薄血膜應(yīng)在玻片上形成平鋪的血細(xì)胞，細(xì)胞之間互相接觸而不相互重疊。每張載玻片上分別做1個(gè)薄血膜和1個(gè)厚血膜。7血膜的涂制

標(biāo)準(zhǔn)血膜的位置如圖所示8涂制血膜的注意事項(xiàng)

涂制血膜時(shí)，手指只能持載片的邊緣，不能接觸玻片表面，以免油污使薄血膜產(chǎn)生空白區(qū)以及厚血膜脫落。推片的邊緣一定要平滑，才能使推出的血膜均勻一致。剛涂制的血膜要平放，干前勿傾斜，以免造成厚血膜厚薄不均，厚處不易溶血和著色而影響檢查結(jié)果。血膜讓其自然干燥，切忌用太陽(yáng)曬或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。10常用染液的配制吉氏染液的配制吉氏粉5.0g甲醇250ml甘油250ml12染色用水常用染液的稀釋和染色的沖洗用水是中性蒸餾水或經(jīng)煮沸過(guò)濾的冷開(kāi)水.在沒(méi)有蒸餾水的情況下，也可用井水、河水、泉水或雨水。因稀釋和沖洗用水的PH值在7.0-7.2時(shí)，染色效果最佳。因此，也可選用臨時(shí)配制的PBS緩沖液，以取得較好的染色效果。14染色用水PBS緩沖液配制（0.01mol/lPBSPH7.20）KH2PO40.38gNa2HPO41.02gNaCl8.00g蒸餾水加到1000ml15吉氏染液染色方法先用甲醇固定薄血膜，待干后進(jìn)行染色。單張血片染色：用中性蒸餾水或PH值7.0-7.2緩沖液1毫升，加入吉氏染液1滴，混合均勻后，滴在厚薄血膜上，染色20-30分鐘，然后用清水輕輕將片上的染液漂洗干凈，晾干鏡檢。成批血片染色：將已固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入新配的2%吉氏染液稀釋液（即2毫升吉氏染液加中性蒸餾水或PH值7.0-7.2緩沖液98毫升稀釋均勻而成），浸沒(méi)厚薄血膜，染色30分鐘后，向染色缸中注入緩沖液或自來(lái)水，直至溢出，除掉染液表面上的浮渣，將液色缸中殘余的染液傾出，然后用水輕輕漂洗一次，干凈后取出玻片，將血膜朝下，插于晾干板上，待干鏡檢。16吉氏染液染色方法染色較好的血膜，紅細(xì)胞呈淡紅色，嗜酸性粒細(xì)胞的顆粒呈鮮紅色，淋巴細(xì)胞及瘧原蟲(chóng)胞漿呈藍(lán)色或淡藍(lán)色，瘧原蟲(chóng)的核呈紅色。17影響血片染色好壞的因素染料溶劑的質(zhì)量染料、甲醇和甘油如果不純，常使配制的染液偏酸或偏堿而影響染色效果。因此必須用分析純的甲醇和中性甘油，而且在配制時(shí)所用的器具必須干凈而無(wú)水份。染液的新舊新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力較弱且常有沉渣。染液存放時(shí)間越久，染色力越強(qiáng)。通常在染液配制1-2周后才使用，盛裝染液的瓶子應(yīng)加塞蓋密。以防吸潮而影響染液質(zhì)量。染液稀釋后使用時(shí)間染液的主要成份是美藍(lán)、伊紅和由美藍(lán)氧化產(chǎn)生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，但在水溶液中伊紅遇到美藍(lán)和天青即產(chǎn)生沉淀。因此，必須在稀釋染液當(dāng)時(shí)使用，一般在半小時(shí)內(nèi)染色力最強(qiáng)。18薄血膜中常見(jiàn)的血液成分中性白細(xì)胞酸性球血小板大單核球淋巴球紅血球20紅細(xì)胞被間日瘧原蟲(chóng)寄生的紅細(xì)胞脹大、顏色變淡。瘧原蟲(chóng)發(fā)育至阿米巴樣體，紅細(xì)胞出現(xiàn)薛氏點(diǎn)(Schuffner'sdots)。被惡性瘧原蟲(chóng)寄生的紅細(xì)胞大小正?；蛏晕⒖s小，紅細(xì)胞上有時(shí)見(jiàn)到茂氏點(diǎn)(Maurer'sdots)。21核即細(xì)胞核或染色質(zhì)粒。在正常情況下核呈鮮紅色，呈圓形或不規(guī)則的顆粒狀。核的結(jié)構(gòu)致密，只有在個(gè)別發(fā)育階段較為疏松，例如間日瘧原蟲(chóng)雄配子體的核。有時(shí)因胞漿厚密或染色深藍(lán)，使核呈暗紅或紫紅色。瘧色素不著色，顏色和顆粒的形狀，因瘧原蟲(chóng)種類而異。間日瘧原蟲(chóng)的色素顆粒呈短棒狀，黃褐色；惡性瘧原蟲(chóng)的色素顆粒呈細(xì)砂狀，黑褐色；23間日瘧早期滋養(yǎng)體--環(huán)狀體約占寄生紅細(xì)胞的1/3，很少見(jiàn)到一個(gè)紅細(xì)胞寄生2個(gè)環(huán)狀體和一個(gè)環(huán)狀體有2個(gè)核。24間日瘧裂殖體2.1未成熟裂殖體（immature

schizont）經(jīng)40小時(shí)晚期滋養(yǎng)體發(fā)育成熟，蟲(chóng)體變圓，空泡消失核開(kāi)始分裂又稱裂殖體前期色素聚集成團(tuán)塊成熟裂殖體約有12－24個(gè)細(xì)胞核胞漿也隨之分裂受染RBC脹大、顏色蒼白、蟲(chóng)體幾乎充滿紅細(xì)胞26間日瘧原蟲(chóng)雌雄配子體27惡性瘧原蟲(chóng)--環(huán)狀體環(huán)纖細(xì)可見(jiàn)數(shù)粒，大小不一，紅色粗大的茂氏點(diǎn)核1個(gè)，但2個(gè)常見(jiàn)，紅細(xì)胞常含2個(gè)以上原蟲(chóng)蟲(chóng)體常位于紅細(xì)胞的邊緣，呈“鳥(niǎo)飛狀”28惡性瘧成熟裂殖體裂殖子8～36個(gè)，通常18～24個(gè)，排列不規(guī)