植物檢疫程序課件

學(xué)習(xí)目標(biāo)重點掌握檢疫的基本程序、檢測方法及檢疫處理方法。學(xué)習(xí)目標(biāo)重點掌握檢疫的基本程序、檢測方法及檢疫處理方法。1植物檢疫程序即檢驗檢疫機構(gòu)在執(zhí)行檢疫過程采取的方式和步驟，包括：檢疫許可，檢疫申報，現(xiàn)場檢驗和實驗室檢測，檢疫處理和出證放行。

植物檢疫程序即檢驗檢疫機構(gòu)在執(zhí)行檢疫過程采取的方式和步驟，包2

第一節(jié)檢疫許可檢疫許可：指在輸入某些檢疫物或引進(jìn)禁止進(jìn)境物時，輸入單位向植物檢疫機關(guān)提前提出申請，檢疫機關(guān)經(jīng)過審查做出是否批準(zhǔn)引進(jìn)的法定程序。

1．作用（1）避免盲目引進(jìn)，減少經(jīng)濟損失；（2）提出檢疫要求，預(yù)防傳入；（3）依據(jù)貿(mào)易合同，合理索賠。

第一節(jié)檢疫許可檢疫許可：指在輸入某些檢疫物或引進(jìn)禁止進(jìn)境3

2．引進(jìn)的單位或個人應(yīng)具備下述3方面的條件（1）必須事先向?qū)徟块T提出申請；（2）必須提供上級主管部門的證明，詳細(xì)說明“待批物”的品名、品種、產(chǎn)地和引進(jìn)的特殊需要和使用方式；（3）必須提供具有符合檢疫要求的監(jiān)督管理措施。

2．引進(jìn)的單位或個人應(yīng)具備下述3方面的條件（1）必須事先向4

3．許可范圍（1）輸入的植物、植物產(chǎn)品、種苗、繁殖材料；（2）攜帶、郵寄植物種子、苗木及其它繁殖材料；（3）過境物。

3．許可范圍5

4．負(fù)責(zé)機關(guān)（1）國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局及其授權(quán)的口岸檢疫機關(guān)：動植物產(chǎn)品、禁止進(jìn)境物（2）國務(wù)院農(nóng)業(yè)、林業(yè)主管部門所屬的植物檢疫機構(gòu)：種苗、繁殖材料

4．負(fù)責(zé)機關(guān)65．手續(xù)（1）領(lǐng)取單證：引進(jìn)單位提供有關(guān)證明和說明材料后，領(lǐng)取許可申請表。（2）報請批準(zhǔn)：填寫后報檢疫機關(guān)審批。（3）批準(zhǔn)輸入：表明批準(zhǔn)的數(shù)量、檢疫要求、進(jìn)境口岸、許可證有效期等。

5．手續(xù)7

6．重新辦理許可：三變一超（1）變更輸入物品種或數(shù)量（2）變更輸出國或地區(qū)（3）變更進(jìn)境口岸（4）超過有效期

6．重新辦理許可：8植物檢疫程序課件9植物檢疫程序課件10植物檢疫程序課件11第二節(jié)檢疫申報是有關(guān)檢疫物進(jìn)出境或過境時由貨主或其代理人向植物檢疫機關(guān)及時聲明并申請檢疫的法律程序。手續(xù)（1）填寫報檢單：報檢員憑《報檢員證》辦理

（2）提交單據(jù)：報檢單、檢疫證書、產(chǎn)地證明、貿(mào)易合同、信用證等。第二節(jié)檢疫申報是有關(guān)檢疫物進(jìn)出境或過境時由貨主或其代理人向12植物檢疫程序課件13植物檢疫程序課件14第三節(jié)現(xiàn)場檢驗

1、基本概念現(xiàn)場檢驗（On-the-sportInspection）（P87）

是檢疫人員對進(jìn)出境的應(yīng)檢物進(jìn)行現(xiàn)場檢查，以確認(rèn)是否符合相關(guān)檢疫要求的法定程序。

第三節(jié)現(xiàn)場檢驗1、基本概念15植物檢疫程序課件162、主要方法

（1）X光機檢查

（2）檢疫犬檢查

（3）肉眼檢查

（4）過篩檢查

2、主要方法

（1）X光機檢查

（217植物檢疫程序課件18過篩檢驗對象：倉儲害蟲、菌核、菌癭、蟲癭、病殘體、雜草種子等。篩子的選擇：依據(jù)供檢物品，選用不同孔形和孔徑的套篩。計算公式：

病原物含量（%）=病?；蚓`、菌核重量/樣品重量×100

害蟲含量（頭/千克）=害蟲頭數(shù)/樣品重量過篩檢驗19植物檢疫程序課件203、現(xiàn)場抽樣注意事項：代表性、害蟲的移動性和趨性等。樣本量：一份樣本的重量、體積和個體數(shù)量。樣本數(shù)：從同一批貨物中抽取的樣本的份數(shù)。

檢疫抽樣中樣本數(shù)的確定需要視貨物類型而定。抽樣方法：根據(jù)不同有害生物的分布規(guī)律及生物學(xué)特性、貨物數(shù)量、裝載方式、堆放形式等而定。常用方法：對角線取樣法、棋盤式取樣法和隨機或分層隨機取樣法等幾種。3、現(xiàn)場抽樣注意事項：代表性、害蟲的移動性和趨性等。21第四節(jié)實驗室檢測一、基本概念實驗室檢測（LaboratoryTesting）（P90）是借助實驗室儀器設(shè)備對樣品進(jìn)行有害生物檢查、鑒定的法定程序。經(jīng)現(xiàn)場檢驗，某些應(yīng)檢物或查驗出的病蟲害需要進(jìn)一步進(jìn)行實驗室檢測，以確定其種類。

第四節(jié)實驗室檢測一、基本概念22比較內(nèi)容現(xiàn)場檢驗實驗室檢測實施先后先后實施現(xiàn)場現(xiàn)場（機場、車站、碼頭、郵局、貨場等）實驗室（檢疫部門、檢測中心等）主要任務(wù)檢查單證、抽取樣品制定樣品、鑒定種類主要方法肉眼檢查鏡檢、生化檢查所需設(shè)備放大鏡、多孔篩、X光機、檢疫犬等解剖鏡、顯微鏡、離心機等人員要求應(yīng)具專業(yè)基礎(chǔ)知識和現(xiàn)場經(jīng)驗應(yīng)具扎實的專業(yè)技能、掌握檢測方法現(xiàn)場檢驗和實驗室檢測比較內(nèi)容現(xiàn)場檢驗實驗室檢測實施先后先后實施現(xiàn)場現(xiàn)場（機場、車23二、實驗室檢測的常用方法二、實驗室檢測的常用方法24（一）、比重檢測鉆蛀性害蟲菌癭菌核病秕籽粒雜草種子（一）、比重檢測鉆蛀性害蟲25（二）、染色檢驗染色檢驗：用化學(xué)藥品對待鑒定樣品進(jìn)行染色處理，觀察判斷。谷象、米象類為害的糧谷檢驗

高錳酸鉀染色法；品紅染色法豆象類蛀害的豆籽用碘或碘化鉀染色法（二）、染色檢驗染色檢驗：用化學(xué)藥品對待鑒定樣品進(jìn)行染色處理26原理：種子表面常附著真菌孢子，將一定量的樣品放入容器內(nèi)，加一定量的無菌水，充分振蕩，可使病菌孢子洗滌下來，而后離心后，可沉淀，鏡檢沉淀物可確定其種類和數(shù)量。檢驗對象：附著在種子表面的真菌孢子。如：小麥的矮腥黑穗病菌、甜菜銹病菌主要儀器和試劑：振蕩器、離心機、顯微鏡、

0.1％吐溫溶液等（三）、洗滌檢測原理：種子表面常附著真菌孢子，將一定量的樣品放入容器內(nèi)，加一27稱取樣品洗脫孢子（振蕩）離心富集鏡檢計數(shù)主要試驗流程如下：稱取樣品洗脫孢子（振蕩）離心富集鏡檢計數(shù)主要試驗流程如下：28計數(shù)方法1、血球計數(shù)板計數(shù)

顯微鏡下觀察每小格的孢子數(shù)目，求平均數(shù)。

孢子數(shù)（個）/g種子=每小格平均孢子數(shù)×4000000×洗滌液總體積/種子重量2、用平均每視野孢子數(shù)推算：5個玻片共觀察50個視野。計數(shù)方法29影響檢驗結(jié)果的因素：種子表面的病菌孢子不一定能完全洗滌下來；離心管內(nèi)，懸浮液表面常形成一層極難沉降的孢子薄膜，管壁上也可能黏附孢子；將懸浮液滴于玻片時，由于孢子迅速沉淀，造成一些視野間孢子分布極不均勻；操作不夠嚴(yán)格，造成人為誤差。影響檢驗結(jié)果的因素：30原理：種子攜帶的真菌，無論外表黏附的還是潛伏種子內(nèi)的，在種子萌發(fā)階段即可開始侵染，甚至有些在種子還未萌發(fā)時就可長出病菌。主要儀器及試劑：吸水紙、沙土、冰箱、培養(yǎng)箱等。主要包括：保濕培養(yǎng)檢驗、沙土萌芽和試管幼苗癥狀測定法等三種方法，其中保濕培養(yǎng)檢驗法是國內(nèi)外最常用的一種方法。（四）、保濕萌芽檢測原理：種子攜帶的真菌，無論外表黏附的還是潛伏種子內(nèi)的，在種子31吸水紙法適用對象：多種類型種傳病害檢驗，尤其是真菌性病害的檢驗。已列為國際種子協(xié)會（ISTA）規(guī)定的種子健康檢驗的常規(guī)方法之一。培養(yǎng)皿中放上浸濕的吸水紙三層種子放于吸水紙上置20-28℃溫箱近紫外光照射和黑暗交替處理，3-7天鏡檢、鑒定吸水紙法適用對象：多種類型種傳病害檢驗，尤其是真菌性病害的檢32觀察判斷：菌落形態(tài)、菌絲體顏色、疏密程度、生長特點、繁殖結(jié)構(gòu)類型（如分生孢子梗的形狀、長度及排列方式；分生孢子的形態(tài)、大小、顏色等及其在分生孢子梗上的排布）觀察判斷：菌落形態(tài)、菌絲體顏色、疏密程度、生長特點、繁殖結(jié)構(gòu)33植物檢疫程序課件34植物檢疫程序課件35吸水紙檢驗

存在問題：許多重要種傳真菌用該法不能長出；腐生菌的迅速生長干擾實驗結(jié)果。吸水紙檢驗

36適用對象潛伏于種子、苗木、繁殖材料及植物產(chǎn)品內(nèi)的病原菌，包括真菌和細(xì)菌。

常用培養(yǎng)基病原真菌—馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）；病原細(xì)菌—牛肉浸膏蛋白胨培養(yǎng)基。還有選擇性培養(yǎng)基，可抑制其它菌類的生長或病原菌的鑒定。檢驗依據(jù)病原菌形態(tài)學(xué)、生物學(xué)、生理生化特性等。此方法對專性寄生的真菌、病毒、植原體等不適合。（五）、分離培養(yǎng)檢測適用對象（五）、分離培養(yǎng)檢測371、分離的方法1、分離的方法38植物病原線蟲的分離檢驗直接檢驗適用檢驗固著在植物體內(nèi)或以休眠狀態(tài)生存于植物組織內(nèi)線蟲，如粒癭線蟲（Anguina）、根結(jié)線蟲（Meloidogune）、胞囊線蟲（Heterodera）、水稻干尖線蟲等。首先以肉眼和手持放大鏡仔細(xì)檢查種子，檢出畸形、變色、干秕種子及夾雜的雜質(zhì)等，作進(jìn)一步檢查。

植物病原線蟲的分離檢驗直接檢驗39植物檢疫程序課件40染色檢驗適用于檢驗植物組織內(nèi)的寄生線蟲，用酸性品紅乳酸酚溶液染色。

染色（酸性品紅乳酸酚溶液，加熱至沸騰，加入植物材料，染色1-3分鐘）

褪色（乳酸酚溶液褪色）觀察（線蟲紅色）冷水沖洗染色檢驗適用于檢驗植物組織內(nèi)的寄生線蟲，用酸性品紅乳酸酚溶液41分離檢驗：有漏斗分離法、過篩檢驗法、漂浮分離法等。i.漏斗分離法：分離可活動的線蟲。也稱改良貝爾曼漏斗法。ii.過篩檢驗法：分離可活動的病原線蟲。iii.漂浮分離法：分離土壤中馬鈴薯金線蟲（Globoderarostochiensis）和各種胞囊線蟲（Heterodera）的胞囊。

原理：干燥的胞囊比重較輕，可從水中漂浮出來。

方法：漂浮器分離法；三角瓶分離法。分離檢驗：有漏斗分離法、過篩檢驗法、漂浮分離法等。42漏斗分離法漏斗分離法43過篩檢驗法過篩檢驗法442、接種方法（1）、拌種法：小麥矮星黑穗病（2）、浸種法：種子浸入真菌孢子或細(xì)菌懸浮液中（3）、花器法：用于從花期侵入的病菌.

如小麥散黑穗病菌2、接種方法（1）、拌種法：小麥矮星黑穗病45（4）、噴霧接種（5）、針刺接種：水稻細(xì)菌性條斑?。?）、剪葉接種：水稻白葉枯（7）、摩擦接種：“病毒可侵入，細(xì)胞不死亡”（4）、噴霧接種46（六）、鑒別寄主檢測許多不同種類的病毒和一些細(xì)菌，接種到某些特定的敏感植物上可以產(chǎn)生特定的癥狀。鑒別寄主：對特定病原物有特殊反應(yīng)或表現(xiàn)特定癥狀的植物。（六）、鑒別寄主檢測許多不同種類的病毒和一些細(xì)菌，接種到某些47（七）、血清學(xué)檢測酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）（七）、血清學(xué)檢測酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）48植物檢疫程序課件49植物檢疫程序課件50植物檢疫程序課件51DNM-9602G酶標(biāo)分析儀DNM-9602標(biāo)配酶標(biāo)分析儀

DNM-9602A酶標(biāo)分析儀幾種酶標(biāo)分析儀DNM-9602G酶標(biāo)分析儀DNM-9602標(biāo)配酶標(biāo)分析儀52（八）、顯微鏡檢測比較項透射電鏡光學(xué)顯微鏡鏡頭電子透鏡光學(xué)鏡頭光源高速電子流可見光源承載體銅網(wǎng)載玻片放大電子放大光學(xué)放大（八）、顯微鏡檢測比較項透射電鏡光學(xué)顯微鏡鏡頭電子透鏡光學(xué)鏡53植物檢疫程序課件54球狀病毒粒子球狀病毒粒子55植物檢疫程序課件56（九）、分子鑒定和計算機輔助鑒定（九）、分子鑒定和計算機輔助鑒定57

分子生物學(xué)方法1、聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR技術(shù)）:是體外模擬DNA復(fù)制過程的核酸擴增技術(shù)。

PCR擴增步驟：

預(yù)變性：92-94℃，5min

變性：92-94℃，0.5-1min

退火：50-65℃,0.5-1min

延伸：72℃,0.5-1minPCR技術(shù)在病毒檢測中的應(yīng)用與改進(jìn)：

RT-PCR(ReverseTranscriptionPCR)

IC-RT-PCR(Immuno-captureRT-PCR)

NestPCR

MultiplePCR

分子生物學(xué)方法582．核酸雜交

探針—帶有標(biāo)記的已知DNA或RNA片段。

標(biāo)記：放射標(biāo)記（P32），非放射標(biāo)記（地高辛，生物素?zé)晒猓?/p>

步驟：核酸變性、雜交、顯影、觀察。

2．核酸雜交

探針—帶有標(biāo)記的已知DNA或RNA片59補：噬菌體檢驗噬菌體：感染細(xì)菌的病毒，能在活細(xì)菌細(xì)胞中寄生繁殖，破壞和裂解寄主細(xì)胞。在液體培養(yǎng)時，使混濁的細(xì)菌懸浮液變得澄清；固體平板培養(yǎng)時，出現(xiàn)許多邊緣整齊、透明光亮的圓形無菌空斑，稱為“噬菌斑”，肉眼即可分辨。補：噬菌體檢驗噬菌體：感染細(xì)菌的病毒，能在活細(xì)菌細(xì)胞中寄生繁60優(yōu)點：簡便、快速，能直接用種子提取液測定。缺點：非目標(biāo)菌大量存在時敏感性較差，噬菌體的寄生?；院图?xì)菌對噬菌體的抵抗性都可能影響檢驗的準(zhǔn)確性。優(yōu)點：簡便、快速，能直接用種子提取液測定。61

基本原理：一般來說，自然界中凡是有細(xì)菌存在的地方，就有可能存在寄生于該細(xì)菌的噬菌體。噬菌體的數(shù)量消長常與該寄主細(xì)菌數(shù)量校長成正相關(guān)；噬菌體的寄主范圍常有一定的?；?。該法已列入“水稻種子產(chǎn)地檢疫規(guī)程”，檢驗稻種中的白葉枯病菌。

基本原理：一般來說，自然界中凡是有細(xì)菌存在的地方，就有可能62植物檢疫程序課件63應(yīng)用現(xiàn)狀：實踐中能用噬菌體檢驗的植物病原細(xì)菌不多，因噬菌體和細(xì)菌都有生理分化現(xiàn)象。解決方法獲得能侵染大多數(shù)細(xì)菌菌系的廣譜性寄生的噬菌體株系。如：日本柑橘潰瘍病菌的Cp1和Cp2兩個噬菌體菌株，能侵染日本98%以上的柑橘潰瘍病菌菌株。應(yīng)用現(xiàn)狀：實踐中能用噬菌體檢驗的植物病原細(xì)菌不多，因噬菌體和64第五節(jié)檢疫監(jiān)管與檢疫檢測

一、檢疫監(jiān)管檢疫監(jiān)管（QuarantineSupervision）P103檢疫機關(guān)對進(jìn)出境的植物、植物產(chǎn)品的生產(chǎn)、加工、存放等過程實行監(jiān)督管理的檢疫程序。包括：產(chǎn)地檢疫，預(yù)檢，隔離檢疫，疫情監(jiān)測。

第五節(jié)檢疫監(jiān)管與檢疫檢測一、檢疫監(jiān)管65檢疫監(jiān)管的意義促進(jìn)經(jīng)濟貿(mào)易的發(fā)展現(xiàn)有植物檢疫技術(shù)能夠進(jìn)一步控制有害生物的傳播檢疫監(jiān)管是適應(yīng)特定有害生物檢疫的需要檢疫監(jiān)管的意義促進(jìn)經(jīng)濟貿(mào)易的發(fā)展66二、檢疫監(jiān)測檢疫監(jiān)測：P103一般檢測與監(jiān)測主要是通過面上的普查來監(jiān)測病蟲害發(fā)生情況，其次是采用設(shè)立預(yù)測圃，通過在預(yù)測圃種植感病品種的作物，創(chuàng)造一些有利于發(fā)病的條件，誘導(dǎo)植物發(fā)病，根據(jù)預(yù)測圃發(fā)病情況來了解周圍作物上的病情。特定調(diào)查官方進(jìn)行的有針對性的特定目標(biāo)的調(diào)查二、檢疫監(jiān)測檢疫監(jiān)測：P10367誘捕監(jiān)測誘集劑誘芯誘捕器

誘捕監(jiān)測68第六節(jié)產(chǎn)地檢疫、預(yù)檢和隔離檢疫一．產(chǎn)地檢疫和預(yù)檢

產(chǎn)地檢疫（Produced-areaQuarantine），是在植物或植物產(chǎn)品出境前，輸出方的植物檢疫人員在其生長期間于原產(chǎn)地進(jìn)行檢驗、檢測的過程。

預(yù)檢（Pre-inspection），是在植物或植物產(chǎn)品入境前，輸入方的植物檢疫人員在其生長期間于原產(chǎn)地進(jìn)行檢驗、檢測的過程。第六節(jié)產(chǎn)地檢疫、預(yù)檢和隔離檢疫一．產(chǎn)地檢疫和預(yù)檢

69產(chǎn)地檢疫和預(yù)檢的意義：（1）提高檢疫結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性；（2）簡化現(xiàn)場檢驗的手續(xù)，加快商品流通；

經(jīng)過產(chǎn)地檢疫和預(yù)檢合格的植物和植物產(chǎn)品，在進(jìn)出境時一般不需再檢疫。（3）避免貨主的經(jīng)濟損失。產(chǎn)地檢疫和預(yù)檢的意義：70二．隔離檢疫

隔離檢疫（IsolationQuarantine），是將擬進(jìn)境的植物種子、苗木和其他繁殖材料，于植物檢疫機關(guān)指定的場所內(nèi)，在隔離條件下進(jìn)行試種，在其生長期間進(jìn)行檢驗和處理的檢疫過程。要求：（1）引進(jìn)的植物繁殖材料必須實施隔離檢疫；（2）隔離檢疫期內(nèi)，除檢疫人員可進(jìn)入場內(nèi)采取樣品外，其他人員不許進(jìn)入；（3）植物繁殖材料至少試種1個生長周期。二．隔離檢疫

隔離檢疫（IsolationQuaranti71第七節(jié)檢疫處理一、檢疫處理概念：P106二、檢疫處理的基本規(guī)定1、退回或銷毀處理2、禁止出口處理3、除害處理第七節(jié)檢疫處理一、檢疫處理72在執(zhí)行植物檢疫時，遇到下列疫情時應(yīng)退回或銷毀：

（1）輸入《中華人民共和國進(jìn)境植物檢疫禁止進(jìn)境物名錄》中的植物產(chǎn)品，未事先辦理特許審批手續(xù)的；

（2）雖然已辦理了審批手續(xù)，現(xiàn)場檢出輸入植物產(chǎn)品，經(jīng)檢疫發(fā)現(xiàn)一、二類病蟲害，無有效處理方法的；

（3）危害已很嚴(yán)重，貨物已失去使用價值。在執(zhí)行植物檢疫時，遇到下列疫情時應(yīng)退回或銷毀：

（1）73結(jié)果評定與出證1

檢驗檢疫合格的檢驗檢疫結(jié)果符合要求的，出具《入境貨物檢驗檢疫證明》《衛(wèi)生證書》或《檢驗證書》。

結(jié)果評定與出證1

檢驗檢疫合格的742檢驗檢疫不合格的2.1發(fā)現(xiàn)我國進(jìn)境植物檢疫危險性有害生物（一、二類）、潛在危險生物、政府及政府主管部門間雙邊植物檢疫協(xié)定、協(xié)議和備忘錄中標(biāo)明的的有害生物、其它有檢疫意義的有害生物的，出具《檢驗檢疫處理通知書》，報檢人要求或需對外索賠的，出具《植物檢疫證書》。2.2安全衛(wèi)生檢驗不合格的，出具《衛(wèi)生證書》。2.3品質(zhì)檢驗不合格的，出具《檢驗證書》。2檢驗檢疫不合格的753有分港卸貨的，先期卸貨港檢驗檢疫機構(gòu)只對本港所卸貨物進(jìn)行檢驗檢疫，并將檢驗檢疫結(jié)果以書面形式及時通知下一卸貨港所在地檢驗檢疫機構(gòu)，需統(tǒng)一對外出證的，由卸畢港檢驗檢疫機構(gòu)匯總后出證。

4需要隔離的種子、苗木、繁殖材料，按“繁殖材料檢驗檢疫工作程序”實施隔離檢疫。3有分港卸貨的，先期卸貨港檢驗檢疫機構(gòu)只對本港所卸貨物進(jìn)行76作業(yè)：P107作業(yè)：P10777本章結(jié)束啦！本章結(jié)束啦！78學(xué)習(xí)目標(biāo)重點掌握檢疫的基本程序、檢測方法及檢疫處理方法。學(xué)習(xí)目標(biāo)重點掌握檢疫的基本程序、檢測方法及檢疫處理方法。79植物檢疫程序即檢驗檢疫機構(gòu)在執(zhí)行檢疫過程采取的方式和步驟，包括：檢疫許可，檢疫申報，現(xiàn)場檢驗和實驗室檢測，檢疫處理和出證放行。

植物檢疫程序即檢驗檢疫機構(gòu)在執(zhí)行檢疫過程采取的方式和步驟，包80

第一節(jié)檢疫許可檢疫許可：指在輸入某些檢疫物或引進(jìn)禁止進(jìn)境物時，輸入單位向植物檢疫機關(guān)提前提出申請，檢疫機關(guān)經(jīng)過審查做出是否批準(zhǔn)引進(jìn)的法定程序。

1．作用（1）避免盲目引進(jìn)，減少經(jīng)濟損失；（2）提出檢疫要求，預(yù)防傳入；（3）依據(jù)貿(mào)易合同，合理索賠。

第一節(jié)檢疫許可檢疫許可：指在輸入某些檢疫物或引進(jìn)禁止進(jìn)境81

2．引進(jìn)的單位或個人應(yīng)具備下述3方面的條件（1）必須事先向?qū)徟块T提出申請；（2）必須提供上級主管部門的證明，詳細(xì)說明“待批物”的品名、品種、產(chǎn)地和引進(jìn)的特殊需要和使用方式；（3）必須提供具有符合檢疫要求的監(jiān)督管理措施。

2．引進(jìn)的單位或個人應(yīng)具備下述3方面的條件（1）必須事先向82

3．許可范圍（1）輸入的植物、植物產(chǎn)品、種苗、繁殖材料；（2）攜帶、郵寄植物種子、苗木及其它繁殖材料；（3）過境物。

3．許可范圍83

4．負(fù)責(zé)機關(guān)（1）國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局及其授權(quán)的口岸檢疫機關(guān)：動植物產(chǎn)品、禁止進(jìn)境物（2）國務(wù)院農(nóng)業(yè)、林業(yè)主管部門所屬的植物檢疫機構(gòu)：種苗、繁殖材料

4．負(fù)責(zé)機關(guān)845．手續(xù)（1）領(lǐng)取單證：引進(jìn)單位提供有關(guān)證明和說明材料后，領(lǐng)取許可申請表。（2）報請批準(zhǔn)：填寫后報檢疫機關(guān)審批。（3）批準(zhǔn)輸入：表明批準(zhǔn)的數(shù)量、檢疫要求、進(jìn)境口岸、許可證有效期等。

5．手續(xù)85

6．重新辦理許可：三變一超（1）變更輸入物品種或數(shù)量（2）變更輸出國或地區(qū)（3）變更進(jìn)境口岸（4）超過有效期

6．重新辦理許可：86植物檢疫程序課件87植物檢疫程序課件88植物檢疫程序課件89第二節(jié)檢疫申報是有關(guān)檢疫物進(jìn)出境或過境時由貨主或其代理人向植物檢疫機關(guān)及時聲明并申請檢疫的法律程序。手續(xù)（1）填寫報檢單：報檢員憑《報檢員證》辦理

（2）提交單據(jù)：報檢單、檢疫證書、產(chǎn)地證明、貿(mào)易合同、信用證等。第二節(jié)檢疫申報是有關(guān)檢疫物進(jìn)出境或過境時由貨主或其代理人向90植物檢疫程序課件91植物檢疫程序課件92第三節(jié)現(xiàn)場檢驗

1、基本概念現(xiàn)場檢驗（On-the-sportInspection）（P87）

是檢疫人員對進(jìn)出境的應(yīng)檢物進(jìn)行現(xiàn)場檢查，以確認(rèn)是否符合相關(guān)檢疫要求的法定程序。

第三節(jié)現(xiàn)場檢驗1、基本概念93植物檢疫程序課件942、主要方法

（1）X光機檢查

（2）檢疫犬檢查

（3）肉眼檢查

（4）過篩檢查

2、主要方法

（1）X光機檢查

（295植物檢疫程序課件96過篩檢驗對象：倉儲害蟲、菌核、菌癭、蟲癭、病殘體、雜草種子等。篩子的選擇：依據(jù)供檢物品，選用不同孔形和孔徑的套篩。計算公式：

病原物含量（%）=病?；蚓`、菌核重量/樣品重量×100

害蟲含量（頭/千克）=害蟲頭數(shù)/樣品重量過篩檢驗97植物檢疫程序課件983、現(xiàn)場抽樣注意事項：代表性、害蟲的移動性和趨性等。樣本量：一份樣本的重量、體積和個體數(shù)量。樣本數(shù)：從同一批貨物中抽取的樣本的份數(shù)。

檢疫抽樣中樣本數(shù)的確定需要視貨物類型而定。抽樣方法：根據(jù)不同有害生物的分布規(guī)律及生物學(xué)特性、貨物數(shù)量、裝載方式、堆放形式等而定。常用方法：對角線取樣法、棋盤式取樣法和隨機或分層隨機取樣法等幾種。3、現(xiàn)場抽樣注意事項：代表性、害蟲的移動性和趨性等。99第四節(jié)實驗室檢測一、基本概念實驗室檢測（LaboratoryTesting）（P90）是借助實驗室儀器設(shè)備對樣品進(jìn)行有害生物檢查、鑒定的法定程序。經(jīng)現(xiàn)場檢驗，某些應(yīng)檢物或查驗出的病蟲害需要進(jìn)一步進(jìn)行實驗室檢測，以確定其種類。

第四節(jié)實驗室檢測一、基本概念100比較內(nèi)容現(xiàn)場檢驗實驗室檢測實施先后先后實施現(xiàn)場現(xiàn)場（機場、車站、碼頭、郵局、貨場等）實驗室（檢疫部門、檢測中心等）主要任務(wù)檢查單證、抽取樣品制定樣品、鑒定種類主要方法肉眼檢查鏡檢、生化檢查所需設(shè)備放大鏡、多孔篩、X光機、檢疫犬等解剖鏡、顯微鏡、離心機等人員要求應(yīng)具專業(yè)基礎(chǔ)知識和現(xiàn)場經(jīng)驗應(yīng)具扎實的專業(yè)技能、掌握檢測方法現(xiàn)場檢驗和實驗室檢測比較內(nèi)容現(xiàn)場檢驗實驗室檢測實施先后先后實施現(xiàn)場現(xiàn)場（機場、車101二、實驗室檢測的常用方法二、實驗室檢測的常用方法102（一）、比重檢測鉆蛀性害蟲菌癭菌核病秕籽粒雜草種子（一）、比重檢測鉆蛀性害蟲103（二）、染色檢驗染色檢驗：用化學(xué)藥品對待鑒定樣品進(jìn)行染色處理，觀察判斷。谷象、米象類為害的糧谷檢驗

高錳酸鉀染色法；品紅染色法豆象類蛀害的豆籽用碘或碘化鉀染色法（二）、染色檢驗染色檢驗：用化學(xué)藥品對待鑒定樣品進(jìn)行染色處理104原理：種子表面常附著真菌孢子，將一定量的樣品放入容器內(nèi)，加一定量的無菌水，充分振蕩，可使病菌孢子洗滌下來，而后離心后，可沉淀，鏡檢沉淀物可確定其種類和數(shù)量。檢驗對象：附著在種子表面的真菌孢子。如：小麥的矮腥黑穗病菌、甜菜銹病菌主要儀器和試劑：振蕩器、離心機、顯微鏡、

0.1％吐溫溶液等（三）、洗滌檢測原理：種子表面常附著真菌孢子，將一定量的樣品放入容器內(nèi)，加一105稱取樣品洗脫孢子（振蕩）離心富集鏡檢計數(shù)主要試驗流程如下：稱取樣品洗脫孢子（振蕩）離心富集鏡檢計數(shù)主要試驗流程如下：106計數(shù)方法1、血球計數(shù)板計數(shù)

顯微鏡下觀察每小格的孢子數(shù)目，求平均數(shù)。

孢子數(shù)（個）/g種子=每小格平均孢子數(shù)×4000000×洗滌液總體積/種子重量2、用平均每視野孢子數(shù)推算：5個玻片共觀察50個視野。計數(shù)方法107影響檢驗結(jié)果的因素：種子表面的病菌孢子不一定能完全洗滌下來；離心管內(nèi)，懸浮液表面常形成一層極難沉降的孢子薄膜，管壁上也可能黏附孢子；將懸浮液滴于玻片時，由于孢子迅速沉淀，造成一些視野間孢子分布極不均勻；操作不夠嚴(yán)格，造成人為誤差。影響檢驗結(jié)果的因素：108原理：種子攜帶的真菌，無論外表黏附的還是潛伏種子內(nèi)的，在種子萌發(fā)階段即可開始侵染，甚至有些在種子還未萌發(fā)時就可長出病菌。主要儀器及試劑：吸水紙、沙土、冰箱、培養(yǎng)箱等。主要包括：保濕培養(yǎng)檢驗、沙土萌芽和試管幼苗癥狀測定法等三種方法，其中保濕培養(yǎng)檢驗法是國內(nèi)外最常用的一種方法。（四）、保濕萌芽檢測原理：種子攜帶的真菌，無論外表黏附的還是潛伏種子內(nèi)的，在種子109吸水紙法適用對象：多種類型種傳病害檢驗，尤其是真菌性病害的檢驗。已列為國際種子協(xié)會（ISTA）規(guī)定的種子健康檢驗的常規(guī)方法之一。培養(yǎng)皿中放上浸濕的吸水紙三層種子放于吸水紙上置20-28℃溫箱近紫外光照射和黑暗交替處理，3-7天鏡檢、鑒定吸水紙法適用對象：多種類型種傳病害檢驗，尤其是真菌性病害的檢110觀察判斷：菌落形態(tài)、菌絲體顏色、疏密程度、生長特點、繁殖結(jié)構(gòu)類型（如分生孢子梗的形狀、長度及排列方式；分生孢子的形態(tài)、大小、顏色等及其在分生孢子梗上的排布）觀察判斷：菌落形態(tài)、菌絲體顏色、疏密程度、生長特點、繁殖結(jié)構(gòu)111植物檢疫程序課件112植物檢疫程序課件113吸水紙檢驗

存在問題：許多重要種傳真菌用該法不能長出；腐生菌的迅速生長干擾實驗結(jié)果。吸水紙檢驗

114適用對象潛伏于種子、苗木、繁殖材料及植物產(chǎn)品內(nèi)的病原菌，包括真菌和細(xì)菌。

常用培養(yǎng)基病原真菌—馬鈴薯蔗糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）；病原細(xì)菌—牛肉浸膏蛋白胨培養(yǎng)基。還有選擇性培養(yǎng)基，可抑制其它菌類的生長或病原菌的鑒定。檢驗依據(jù)病原菌形態(tài)學(xué)、生物學(xué)、生理生化特性等。此方法對專性寄生的真菌、病毒、植原體等不適合。（五）、分離培養(yǎng)檢測適用對象（五）、分離培養(yǎng)檢測1151、分離的方法1、分離的方法116植物病原線蟲的分離檢驗直接檢驗適用檢驗固著在植物體內(nèi)或以休眠狀態(tài)生存于植物組織內(nèi)線蟲，如粒癭線蟲（Anguina）、根結(jié)線蟲（Meloidogune）、胞囊線蟲（Heterodera）、水稻干尖線蟲等。首先以肉眼和手持放大鏡仔細(xì)檢查種子，檢出畸形、變色、干秕種子及夾雜的雜質(zhì)等，作進(jìn)一步檢查。

植物病原線蟲的分離檢驗直接檢驗117植物檢疫程序課件118染色檢驗適用于檢驗植物組織內(nèi)的寄生線蟲，用酸性品紅乳酸酚溶液染色。

染色（酸性品紅乳酸酚溶液，加熱至沸騰，加入植物材料，染色1-3分鐘）

褪色（乳酸酚溶液褪色）觀察（線蟲紅色）冷水沖洗染色檢驗適用于檢驗植物組織內(nèi)的寄生線蟲，用酸性品紅乳酸酚溶液119分離檢驗：有漏斗分離法、過篩檢驗法、漂浮分離法等。i.漏斗分離法：分離可活動的線蟲。也稱改良貝爾曼漏斗法。ii.過篩檢驗法：分離可活動的病原線蟲。iii.漂浮分離法：分離土壤中馬鈴薯金線蟲（Globoderarostochiensis）和各種胞囊線蟲（Heterodera）的胞囊。

原理：干燥的胞囊比重較輕，可從水中漂浮出來。

方法：漂浮器分離法；三角瓶分離法。分離檢驗：有漏斗分離法、過篩檢驗法、漂浮分離法等。120漏斗分離法漏斗分離法121過篩檢驗法過篩檢驗法1222、接種方法（1）、拌種法：小麥矮星黑穗?。?）、浸種法：種子浸入真菌孢子或細(xì)菌懸浮液中（3）、花器法：用于從花期侵入的病菌.

如小麥散黑穗病菌2、接種方法（1）、拌種法：小麥矮星黑穗病123（4）、噴霧接種（5）、針刺接種：水稻細(xì)菌性條斑病（6）、剪葉接種：水稻白葉枯（7）、摩擦接種：“病毒可侵入，細(xì)胞不死亡”（4）、噴霧接種124（六）、鑒別寄主檢測許多不同種類的病毒和一些細(xì)菌，接種到某些特定的敏感植物上可以產(chǎn)生特定的癥狀。鑒別寄主：對特定病原物有特殊反應(yīng)或表現(xiàn)特定癥狀的植物。（六）、鑒別寄主檢測許多不同種類的病毒和一些細(xì)菌，接種到某些125（七）、血清學(xué)檢測酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）（七）、血清學(xué)檢測酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）126植物檢疫程序課件127植物檢疫程序課件128植物檢疫程序課件129DNM-9602G酶標(biāo)分析儀DNM-9602標(biāo)配酶標(biāo)分析儀

DNM-9602A酶標(biāo)分析儀幾種酶標(biāo)分析儀DNM-9602G酶標(biāo)分析儀DNM-9602標(biāo)配酶標(biāo)分析儀130（八）、顯微鏡檢測比較項透射電鏡光學(xué)顯微鏡鏡頭電子透鏡光學(xué)鏡頭光源高速電子流可見光源承載體銅網(wǎng)載玻片放大電子放大光學(xué)放大（八）、顯微鏡檢測比較項透射電鏡光學(xué)顯微鏡鏡頭電子透鏡光學(xué)鏡131植物檢疫程序課件132球狀病毒粒子球狀病毒粒子133植物檢疫程序課件134（九）、分子鑒定和計算機輔助鑒定（九）、分子鑒定和計算機輔助鑒定135

分子生物學(xué)方法1、聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR技術(shù)）:是體外模擬DNA復(fù)制過程的核酸擴增技術(shù)。

PCR擴增步驟：

預(yù)變性：92-94℃，5min

變性：92-94℃，0.5-1min

退火：50-65℃,0.5-1min

延伸：72℃,0.5-1minPCR技術(shù)在病毒檢測中的應(yīng)用與改進(jìn)：

RT-PCR(ReverseTranscriptionPCR)

IC-RT-PCR(Immuno-captureRT-PCR)

NestPCR

MultiplePCR

分子生物學(xué)方法1362．核酸雜交

探針—帶有標(biāo)記的已知DNA或RNA片段。

標(biāo)記：放射標(biāo)記（P32），非放射標(biāo)記（地高辛，生物素?zé)晒猓?/p>

步驟：核酸變性、雜交、顯影、觀察。

2．核酸雜交

探針—帶有標(biāo)記的已知DNA或RNA片137補：噬菌體檢驗噬菌體：感染細(xì)菌的病毒，能在活細(xì)菌細(xì)胞中寄生繁殖，破壞和裂解寄主細(xì)胞。在液體培養(yǎng)時，使混濁的細(xì)菌懸浮液變得澄清；固體平板培養(yǎng)時，出現(xiàn)許多邊緣整齊、透明光亮的圓形無菌空斑，稱為“噬菌斑”，肉眼即可分辨。補：噬菌體檢驗噬菌體：感染細(xì)菌的病毒，能在活細(xì)菌細(xì)胞中寄生繁138優(yōu)點：簡便、快速，能直接用種子提取液測定。缺點：非目標(biāo)菌大量存在時敏感性較差，噬菌體的寄生?；院图?xì)菌對噬菌體的抵抗性都可能影響檢驗的準(zhǔn)確性。優(yōu)點：簡便、快速，能直接用種子提取液測定。139

基本原理：一般來說，自然界中凡是有細(xì)菌存在的地方，就有可能存在寄生于該細(xì)菌的噬菌體。噬菌體的數(shù)量消長常與該寄主細(xì)菌數(shù)量校長成正相關(guān)；噬菌體的寄主范圍常有一定的?；?。該法已列入“水稻種子產(chǎn)地檢疫規(guī)程”，檢驗稻種中的白葉枯病菌。

基本原理：一般來說，自然界中凡是有細(xì)菌存在的地方，就有可能140植物檢疫程序課件141應(yīng)用現(xiàn)狀：實踐中能用噬菌體檢驗的植物病原細(xì)菌不多，因噬菌體和細(xì)菌都有生理分化現(xiàn)象。解決方法獲得能侵染大多數(shù)細(xì)菌菌系的廣譜性寄生的噬菌體株系。如：日本柑橘潰瘍病菌的Cp1和Cp2兩個噬菌體菌株，能侵染日本98%以上的柑橘潰瘍病菌菌株。應(yīng)用現(xiàn)狀：實踐中能用噬菌體檢驗的植物病原細(xì)菌不多，因噬菌體和142第五節(jié)檢疫監(jiān)管與檢疫檢測

一、檢疫監(jiān)管檢疫監(jiān)管（QuarantineSupervision）P103檢疫機關(guān)對進(jìn)出境的植物、植物產(chǎn)品的生產(chǎn)、加工、存放等過程實行監(jiān)督管理的檢疫程序。包括：產(chǎn)地檢疫，預(yù)檢，隔離檢疫，疫情監(jiān)測。

第五節(jié)檢疫監(jiān)管與檢疫檢測一、檢疫監(jiān)管143檢疫監(jiān)管的意義促進(jìn)經(jīng)濟貿(mào)易的發(fā)展現(xiàn)有植物檢疫技術(shù)能夠進(jìn)一步控制有害生物的傳播檢疫監(jiān)管是適應(yīng)特定有害生物檢疫的需要檢疫監(jiān)管的意義促進(jìn)經(jīng)濟貿(mào)易的發(fā)展144二、檢疫監(jiān)測檢疫監(jiān)測：P103