曲霉檢測(cè)方法

9/9曲霉檢測(cè)方法曲霉是一種條件致病菌，人體對(duì)曲霉有極強(qiáng)免疫力，只有在人體免疫功能降低時(shí)才能致病，曲霉可侵犯機(jī)體許多部位，尤其是呼吸系統(tǒng)為主，除此之外還可感染眼部、外耳道、皮膚等部位。除直接感染和變態(tài)反應(yīng)引起曲霉病外，曲霉可產(chǎn)生毒素引起食物中毒，有些曲霉毒素還具有致癌作用，如黃曲霉素、雜色曲霉素。

一、曲霉致病性

曲霉感染是一種免疫相關(guān)性疾病，吸入曲霉孢子導(dǎo)致疾病是常見(jiàn)的感染途徑，曲霉感染主要包括3種形式：侵襲性曲霉病、慢性曲霉病、過(guò)敏性曲霉病。

侵襲性曲霉病多發(fā)生在免疫缺陷患者中，是一種較為嚴(yán)重的深部真菌感染性疾病。引起侵襲性曲霉病的致病菌主要包括煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉和土曲霉。近年來(lái)，隨著免疫抑制劑、廣譜抗菌藥的廣泛使用，器官移植等侵入性診療技術(shù)的普遍開(kāi)展，以及惡性腫瘤、獲得性免疫缺陷綜合征患者人數(shù)的不斷增加，侵襲性曲霉病的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。侵襲性曲霉病在常見(jiàn)的醫(yī)院獲得性真菌感染中排名第2位，僅次于侵襲性念珠病，其預(yù)后往往較差，死亡率高達(dá)50%以上，曲霉感染后是否發(fā)病及病情輕重與宿主的基礎(chǔ)疾病和免疫功能密切相關(guān)。

慢性曲霉病一般指慢性肺曲霉病，是一種復(fù)雜且無(wú)臨床特異性病癥的肺部疾病，常伴有肺結(jié)核感染、非結(jié)核分枝桿菌感染、結(jié)節(jié)或肺癌手術(shù)等，因此易造成誤診、漏診，導(dǎo)致發(fā)病率較高。慢性肺曲霉病主要由煙曲霉引起，是以肺實(shí)質(zhì)緩慢進(jìn)行性破壞為特征的疾病，其形式表現(xiàn)為單發(fā)或多發(fā)空洞、結(jié)節(jié)、浸潤(rùn)或纖維化，伴或不伴曲霉菌球。

過(guò)敏性曲霉病以過(guò)敏性支氣管肺曲霉病為代表，其致病曲霉以煙曲霉最常見(jiàn)，黃曲霉、稻曲霉、土曲霉偶可見(jiàn)到。過(guò)敏性支氣管肺曲霉病較常發(fā)生于哮喘患者，與其他過(guò)敏性疾病常見(jiàn)于兒童不同，其發(fā)病率在成年人最高。由于臨床對(duì)該病認(rèn)識(shí)不足，常會(huì)被漏診，往往發(fā)展至疾病晚期出現(xiàn)不可逆結(jié)構(gòu)改變才被確診。

二、曲霉檢測(cè)方法

近年來(lái)，隨著曲霉病診療技術(shù)的發(fā)展，抗真菌藥物和輔助藥物為臨床治療曲霉病提供了有力的武器。然而，由于曲霉病患者往往同時(shí)患有其他疾病或者不具有特異性病癥，因此難以早期得到診斷而延誤病情。由此可見(jiàn)，曲霉感染的快速、精確檢測(cè)十分必要。

曲霉的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法主要有：顯微鏡檢查、分離培養(yǎng)與鑒定、血清學(xué)抗原抗體檢測(cè)、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）等，各檢測(cè)方法特異性、靈敏度及檢測(cè)條件不同，具有不同優(yōu)缺點(diǎn)，對(duì)臨床診斷曲霉感染具有不同意義。

組織病理學(xué)和無(wú)菌部位的真菌培養(yǎng)被認(rèn)為是診斷曲霉病的金標(biāo)準(zhǔn)。但是這類傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室診斷方法操作繁瑣，耗時(shí)長(zhǎng)，對(duì)試驗(yàn)操作技術(shù)和樣本取材有著較高要求，陽(yáng)性率低，而且缺乏敏感性和特異性的問(wèn)題。

半乳甘露聚糖是曲霉細(xì)胞壁的組成成分，當(dāng)曲霉感染時(shí)，血液和體液中的半乳甘露聚糖會(huì)顯著增高，故檢測(cè)半乳甘露聚糖可用于曲霉感染的早期診斷。2016年美國(guó)感染病學(xué)會(huì)《曲霉菌病診治指南》推薦，對(duì)于血液系統(tǒng)惡性腫瘤及造血干細(xì)胞移植患者，建議將血清和肺泡灌洗液中的半乳甘露聚糖作為侵襲性曲霉病的精確診斷標(biāo)志物。

針對(duì)曲霉菌特異性IgE或總IgE的檢測(cè)可作為過(guò)敏性曲霉菌病的診斷指標(biāo)，治療過(guò)程中還可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)總IgE水平用以指導(dǎo)藥物調(diào)整。煙曲霉血清沉淀素或特異性IgG對(duì)過(guò)敏性支氣管肺曲霉病的診斷特異性不高，但如果患者出現(xiàn)高滴度的曲霉特異性IgG抗體，同時(shí)伴有胸膜纖維化或持續(xù)性肺部空洞形成，則提示為慢性肺曲霉病。

近年來(lái)分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，PCR擴(kuò)增技術(shù)在臨床上已應(yīng)用于各種病原的檢測(cè)，該技術(shù)靈敏度高，特異性好，具有良好的臨床應(yīng)用前景，尤其在曲霉早期感染的診斷方面具有優(yōu)勢(shì)。在曲霉檢測(cè)方面，2016年美國(guó)感染病學(xué)會(huì)《曲霉菌病診治指南》推薦有條件的實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展分子生物學(xué)檢測(cè)用于曲霉病診斷，但由于該方法尚缺乏結(jié)論性驗(yàn)證證據(jù)，因此應(yīng)結(jié)合其他診斷結(jié)果和臨床表現(xiàn)進(jìn)行綜合性判斷。

三、已批準(zhǔn)曲霉檢測(cè)試劑概況

我國(guó)境內(nèi)已批準(zhǔn)曲霉檢測(cè)試劑主要為過(guò)敏原特異性IgE抗體檢測(cè)試劑和曲霉抗原/抗體檢測(cè)試劑，前者管理類別為II類，后者管理類別為三類，均使用血清樣本進(jìn)行檢測(cè)。已批準(zhǔn)曲霉檢測(cè)試劑以酶聯(lián)免疫法居多，其具有敏感性高、特異性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)便，肉眼可觀察，既可以檢測(cè)抗體、又可以檢測(cè)抗原，易于自動(dòng)化，便于大規(guī)模檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。但酶聯(lián)免疫法受其技術(shù)原理的影響，干擾因素較多，容易出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性。目前，已有基于熒光PCR法的國(guó)產(chǎn)曲霉核酸檢測(cè)試劑獲批上市，該方法使用痰液樣本，具有靈敏度高和特異性高的特點(diǎn)，在曲霉感染早期臨床檢測(cè)方面具有優(yōu)勢(shì)。

檢測(cè)類別產(chǎn)品名稱管理類別批準(zhǔn)年份樣本來(lái)源適應(yīng)癥國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口抗原曲霉菌抗原檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）III2017血清體外定性檢測(cè)人血清樣本中的曲霉菌半乳甘露聚糖抗原進(jìn)口曲霉半乳甘露聚糖檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）III2020血清體外定性檢測(cè)成人血清樣本中的曲霉半乳甘露聚糖國(guó)產(chǎn)曲霉半乳甘露聚糖檢測(cè)試劑盒（熒光免疫層析法）III2022血清體外定性檢測(cè)人血清樣本中的曲霉半乳甘露聚糖國(guó)產(chǎn)抗體煙曲霉菌硫氧還蛋白還原酶IgG抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）III2015血清體外定性檢測(cè)人血清中的煙曲霉菌硫氧還蛋白還原酶IgG抗體國(guó)產(chǎn)曲霉IgG抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）III2018血清定性檢測(cè)人血清樣本中的曲霉IgG抗體國(guó)產(chǎn)IgE煙曲霉m3過(guò)敏原特異性IgE抗體檢測(cè)試劑盒（熒光免疫法）II2015血清定量檢測(cè)人血清中的煙曲霉m3特異性IgE抗體進(jìn)口霉菌混合mx1過(guò)敏原特異性IgE檢測(cè)試劑（熒光免疫法）II2018血清體外定性檢測(cè)人血清中的產(chǎn)黃青霉、多主枝孢、煙曲霉和鏈格孢過(guò)敏原特異性IgE進(jìn)口霉菌混合mx2過(guò)敏原特異性IgE檢測(cè)試劑（熒光免疫法）II2018血清體外定性檢測(cè)人血清中的產(chǎn)黃青霉、多主枝孢、煙曲霉、白色念珠菌、鏈格孢和長(zhǎng)蠕孢霉過(guò)敏原特異性IgE進(jìn)口煙曲霉過(guò)敏原特異性IgE抗體檢測(cè)試劑盒(酶免疫分析法II2019血清體外定量檢測(cè)人血清樣本中煙曲霉過(guò)敏原特異性IgE抗體國(guó)產(chǎn)煙曲霉M003過(guò)敏原特異性IgE抗體檢測(cè)試劑盒(熒光磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫法)II2020血清體外定量檢測(cè)人體血清樣本中煙曲霉過(guò)敏原特異性IgE抗體的濃度國(guó)產(chǎn)煙曲霉（M3）過(guò)敏原特異性IgE抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫捕獲法）II2021血清定量檢測(cè)人血清中煙曲霉（M3）過(guò)敏原特異性IgE抗體的含量國(guó)產(chǎn)煙曲霉（M3）過(guò)敏原特異性IgE抗體檢測(cè)試劑盒（磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法）II2021血清體外定量檢測(cè)人血清中過(guò)敏原煙曲霉（M3）特異性IgE抗體含量國(guó)產(chǎn)霉菌混合過(guò)敏原特異性IgE抗體檢測(cè)試劑盒(酶免疫分析法)II2021血清用于體外定性檢測(cè)人血清樣本中青霉菌、枝孢屬、曲霉屬、白色念珠菌、鏈格孢、長(zhǎng)蠕孢屬過(guò)敏原特異性IgE抗體國(guó)產(chǎn)過(guò)敏原特異性IgE抗體檢測(cè)試劑盒（霉菌混合MX14/酶聯(lián)免疫捕獲法）II2021血清用于體外定性檢測(cè)人血清中點(diǎn)青霉（M1）、多主枝孢（M2）、煙曲霉（M3）、白色念珠菌（M5）、交鏈孢霉（M6）和黑根霉（M11）過(guò)敏原特異性IgE抗體國(guó)產(chǎn)核酸煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）III2020痰液體外定性檢測(cè)痰液樣本中的煙曲霉、黃曲霉、黑曲霉的DNA國(guó)產(chǎn)煙曲霉核酸檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）III2020痰液體外定性檢測(cè)痰液樣本中的煙曲霉DNA國(guó)產(chǎn)

四、總結(jié)

曲霉在免疫缺陷患者中往往引起較為嚴(yán)重的感染，其預(yù)后較差，死亡率較高，因此對(duì)曲霉的檢測(cè)，尤其是感染早期的檢測(cè)，在治療曲霉感染方面具有重要意義。隨著分子診斷技術(shù)的發(fā)展以及PCR實(shí)驗(yàn)室的建立，曲霉核酸檢測(cè)在臨床應(yīng)用方面的優(yōu)勢(shì)得以凸顯。但是目前曲霉核酸檢測(cè)類產(chǎn)品普遍存在以下問(wèn)題：曲霉核酸檢測(cè)的診斷標(biāo)準(zhǔn)尚不明確，注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的方法、內(nèi)容多種多樣，有的存在方法不合理，驗(yàn)證內(nèi)容不全面等問(wèn)題，對(duì)交叉反應(yīng)和包容性的驗(yàn)證需要進(jìn)一步規(guī)范，各個(gè)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)陽(yáng)性判斷值的建立方法理解差異較大，對(duì)于臨床判斷曲霉病的金標(biāo)準(zhǔn)認(rèn)識(shí)不統(tǒng)一，對(duì)于最低檢出能力的評(píng)價(jià)也存在不同的認(rèn)識(shí)，不同注冊(cè)申請(qǐng)人的企業(yè)參考品設(shè)置也是千差萬(wàn)別，為了進(jìn)一步規(guī)范此類產(chǎn)品的申報(bào)材料，統(tǒng)一注冊(cè)申請(qǐng)人的認(rèn)識(shí)，為審評(píng)人員提供依據(jù)，接下來(lái)需制定相關(guān)原則對(duì)曲霉核酸檢測(cè)試劑開(kāi)發(fā)進(jìn)行指導(dǎo)。

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