實(shí)驗(yàn)五 糞標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn)課件

實(shí)驗(yàn)六糞便標(biāo)本的微生物學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆占S便標(biāo)本的采集與處理、常見(jiàn)病原菌及一般微生物學(xué)檢驗(yàn)程序。掌握沙門氏菌和志賀氏菌的鑒定方法；熟悉它們的生物學(xué)性狀。糞便標(biāo)本的采集與處理：自然排便采集法：自然排便后，挑取糞便2～3克于無(wú)菌的容器內(nèi)送檢。應(yīng)盡可能取有膿血、粘液的標(biāo)本。肛拭子法：不易獲得糞便的患者或作厭氧菌培養(yǎng)時(shí)，常采用此法。將無(wú)菌棉拭子用無(wú)菌生理鹽水濕潤(rùn)后，插入肛門約4～5厘米（幼兒約2～3厘米）處，輕輕旋轉(zhuǎn)，擦取直腸表面粘液后取出，置無(wú)菌試管內(nèi)送檢。除嬰幼兒外，不推薦用棉拭子做常規(guī)病原菌培養(yǎng)。疑似痢疾患者應(yīng)在發(fā)病初期、用藥前采取標(biāo)本；疑似傷寒患者應(yīng)在發(fā)病2～3周內(nèi)采集糞便標(biāo)本。若疑為霍亂患者，標(biāo)本應(yīng)置堿性蛋白胨水中。若疑有耶爾森菌或彎曲菌等，標(biāo)本應(yīng)置卡～布運(yùn)送培養(yǎng)基送檢。糞便標(biāo)本如不能立即送檢，可將標(biāo)本放入甘油鹽水保存液中或保存于冰箱內(nèi)（勿超過(guò)2h）糞便標(biāo)本的檢驗(yàn)程序糞便標(biāo)本或肛拭子標(biāo)本直接涂片革蘭染色抗酸染色分離培養(yǎng)（SS、MaC、TCBS、堿性蛋白胨平板）增菌培養(yǎng)（

GN增菌、

亞硒酸鹽增菌液、堿性蛋白胨水）35℃18～24h菌落形態(tài)、革蘭染色氧化酶試驗(yàn)KIA、MIU及其他生化反應(yīng)、血清學(xué)凝集、藥敏試驗(yàn)報(bào)告結(jié)果

注：①GN增菌液、亞硒酸鹽增菌液用于志賀菌、沙門菌的增菌。

②直接涂片只適應(yīng)于疑為霍亂、腸結(jié)核及偽膜炎腸炎患者。

GN增菌液：本培養(yǎng)基含有膽鹽、枸櫞酸鹽對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌有抑制作用，而對(duì)革蘭氏陰性菌有增菌作用，接種標(biāo)本6小時(shí)內(nèi)，大腸桿菌、變形桿菌及假單胞菌在此培養(yǎng)基中生長(zhǎng)遲緩，而志賀菌、沙門氏菌生長(zhǎng)較迅速。故常于接種糞便6～8小時(shí)，再自此增菌液內(nèi)接種至SS平板、MaC平板中。亞硒酸鹽增菌液：本培養(yǎng)基中的0．4%亞硒酸鈉可抑制革蘭氏陽(yáng)性菌的生長(zhǎng)，對(duì)革蘭氏陰性菌也有毒性，但磷酸鈉有中和此毒性的作用，能使腸道致病菌迅速繁殖。磷酸氫二鈉與磷酸二氫鈉有緩沖作用，有利于腸道致病菌生長(zhǎng)。SS平板：是專用志賀菌、沙門菌分離培養(yǎng)用的一種強(qiáng)選擇性培養(yǎng)基。膽鹽能抑制革蘭氏陽(yáng)性菌生長(zhǎng)，煌綠抑制大腸桿菌的生長(zhǎng)。促進(jìn)志賀菌、沙門菌生長(zhǎng)（對(duì)膽鹽和煌綠等染料有抵抗力）。膽鹽、枸櫞酸鈉及硫代硫酸鈉在一定比例時(shí)發(fā)揮聯(lián)合抑菌作用。硫代硫酸鈉有緩和膽鹽對(duì)志賀菌、沙門菌的有害作用并中和煌綠、中性紅的毒性作用。本培養(yǎng)基除抑制腸球菌、革蘭氏陽(yáng)性菌外，還可抑制大部分大腸艾希氏菌、產(chǎn)氣腸桿菌等革蘭氏陰性菌，對(duì)志賀菌、沙門菌也有輕度的抑制作用。由于該培養(yǎng)基抑制雜菌的能力強(qiáng)，故可以增加糞便接種量而獲得較高的陽(yáng)性分離率。實(shí)驗(yàn)方法：一、分離培養(yǎng)

用無(wú)菌方法將1#、2#、3#、4#、5#模擬糞便標(biāo)本分別劃線接種于SS、Mac上，置35℃培養(yǎng)18～24小時(shí)。KIA菌名乳糖/葡萄糖H2S動(dòng)力氣體福氏志賀菌A/K———宋內(nèi)氏志賀菌A/K———甲型副傷寒桿菌A/K—/+++乙型副傷寒桿菌A/K+++傷寒桿菌A/K+/—+—三、KIA結(jié)果觀察分別描述1#、2#、3#、4#、5#標(biāo)本的KIA結(jié)果。四、生化反應(yīng)：

根據(jù)KIA的結(jié)果進(jìn)一步做生化反應(yīng)。從KIA斜面上挑取1#、2#、3#、4#、5#標(biāo)本細(xì)菌分別接種于蔗糖半固體發(fā)酵管、蛋白胨水、尿素、苯丙氨酸斜面、硝酸鹽蛋白胨水，37℃培養(yǎng)18—24小時(shí)后，觀察結(jié)果。志賀菌屬：若生化反應(yīng)結(jié)果相符，則作玻片凝集反應(yīng)：1、做生理鹽水對(duì)照,看有無(wú)自凝。2、用志賀氏菌屬4種多價(jià)血清反應(yīng)，若有凝集，再用單價(jià)群診斷血清（福氏志賀菌多價(jià)診斷血清、宋內(nèi)氏志賀菌單價(jià)診斷血清）行凝集反應(yīng)定群。血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果判斷：

血清凝集試驗(yàn)陽(yáng)性：出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)凝集顆粒

血清凝集試驗(yàn)陰性：液體呈乳狀懸液KIA標(biāo)本號(hào)乳糖/葡萄糖H2S動(dòng)力氣體菌名A/K———福氏志賀菌A/K———宋內(nèi)氏志賀菌A/K—/+++甲型副傷寒桿菌A/K+++乙型副傷寒桿菌A/K+/—+—傷寒桿菌

生化反應(yīng)標(biāo)本號(hào)蔗糖靛基質(zhì)甘露醇脲酶苯丙氨酸脫氨酶動(dòng)力氣體——+——————+——————+—

—++——+——++——+——+—六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：1、KIA結(jié)果：2、生化反應(yīng)結(jié)果：標(biāo)本號(hào)A—F群O多價(jià)血清O2O4O9Ha

HbHd生理鹽水對(duì)照菌名++——+———甲型副傷寒桿菌+—+——+——乙型副傷寒桿菌+——+——+—傷寒桿菌標(biāo)本號(hào)志4種多價(jià)血清福氏多價(jià)診斷血清宋內(nèi)氏單價(jià)診斷血清生理鹽水對(duì)照菌名++——福氏志賀菌+—+—宋內(nèi)氏志賀菌血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果：沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果記錄志賀氏菌血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果記錄結(jié)果報(bào)告：1#標(biāo)本檢出2#標(biāo)本檢出3