α淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測導(dǎo)學(xué)案

實(shí)驗(yàn)5α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測【學(xué)習(xí)目標(biāo)】1.認(rèn)識(shí)固定化酶的概念，了解固定化酶的方法，學(xué)習(xí)制備固定化α-淀粉酶。2.了解淀粉酶水解淀粉的過程，能夠進(jìn)行淀粉水解的測定?！窘虒W(xué)重點(diǎn)】制備固定化α-淀粉酶；進(jìn)行淀粉水解的測定?！窘虒W(xué)難點(diǎn)】制備固定化α-淀粉酶【導(dǎo)學(xué)誘思】（一）酶與固定化酶1.酶：活細(xì)胞產(chǎn)生的具有催化作用的一類有機(jī)物，它是生物體內(nèi)各種化學(xué)反應(yīng)的催化劑。2.固定化酶：將________的酶用________或________方法________，使之成為________而又有________。3.將酶改造成固定化酶的原因是：由于酶________，且不利于________，所以要將酶改造成固定化酶。4.酶固定化的方法有：________法、________法、________法和________法等。本實(shí)驗(yàn)用的是________法。5.固定化酶作用的機(jī)理：將固定化酶________，當(dāng)________時(shí)，在________的作用下________。答案：2.水溶性物理化學(xué)固定在某種介質(zhì)上不溶于水酶活性的制劑3.在水溶液中很不穩(wěn)定工業(yè)化使用4.吸附共價(jià)偶聯(lián)交聯(lián)包埋吸附5.裝柱底物經(jīng)過該柱酶轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物（二）淀粉水解的過程及其在淀粉指示劑下的顏色反應(yīng)：答案：糊精藍(lán)紅不顯（三）α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用檢測的實(shí)驗(yàn)1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?1)制備________。(2)進(jìn)行________的測試。2.實(shí)驗(yàn)原理：將________酶固定在________上，一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過________后，可使淀粉水解成________。用________測試，若流出物呈________色，表明有________生成。3.本實(shí)驗(yàn)使用的酶及特性：本實(shí)驗(yàn)使用的酶是________酶，其作用的最適宜pH為________，最適宜溫度為________。4.實(shí)驗(yàn)設(shè)備及用品：5mL塑料注射器、50mL燒杯、滴管、自行車用氣門芯及夾子、注射器架、試管或微量離心管3支。5.實(shí)驗(yàn)材料及其制備：(1)材料：固定化的α-淀粉酶、可溶性淀粉酶、5mol/LKI—I2溶液。(2)部分材料的制備：▲α-淀粉酶的固定化：在燒杯中將5mg________溶于4mL蒸餾水中(由于________，可能有些不溶物)↓再加入5g________，不時(shí)攪拌30min↓30min后將上述溶液裝入1支注射器中(該注射器的下端接有________并用________封住)石英砂體積約4mL↓用________倍體積的蒸餾水________此注射器以除去__________________，流速為1mL/min▲可溶性淀粉溶液：取________mg可溶性淀粉溶于100mL________中，攪拌均勻?！扇苄缘矸廴芤海悍Q取g________和g________。加蒸餾水100mL，完全溶解后裝入滴瓶中。6.實(shí)驗(yàn)步驟：(1)淀粉溶液流經(jīng)固定化酶柱將灌注了________的注射器放在注射器架上，用滴管加________溶液，使該溶液以________mL/min的流速過柱。(2)接取流出物待從固定化酶柱中流出________mL的溶液后，接收________mL流出液。(3)流出物鑒定在流出物中加入________溶液，觀察顏色。用水稀釋________倍后再觀察顏色。(4)洗滌、保存固定化酶柱。實(shí)驗(yàn)后，用________倍柱體積的蒸餾水洗滌此柱。放置在________℃冰箱中保存。(5)幾天后取出冰箱中該固定化酶柱，重復(fù)實(shí)驗(yàn)，觀察結(jié)果。7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果的比較：答案：1.(1)固定化α淀粉酶(2)淀粉水解2.α淀粉石英砂固定化酶柱糊精淀粉指示劑紅糊精3.枯草桿菌的α淀粉～50～75℃5.實(shí)驗(yàn)材料及其制備：(2)α淀粉酶酶不純石英砂氣門芯夾子10洗滌未吸附的游離淀粉酶50熱水碘碘化鉀6.(1)固定化酶淀粉(2)5(3)KII21(4)1047.藍(lán)紅紅【典型例題】典型例題一下面關(guān)于固定化酶的說法，正確的是()A.固定化酶是一種能溶解在水中，但依然保持酶活性的制劑B.固定化酶能溶解于水，且結(jié)構(gòu)很穩(wěn)定，有利于工業(yè)化生產(chǎn)C.固定化酶是經(jīng)過物理或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上，使之能溶解于水中，又有酶活性的制劑D.固定化酶是經(jīng)過物理或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上，使之不能溶解于水中，又有酶活性的制劑【解析】本題考查固定化酶的概念。A、B、C選項(xiàng)都錯(cuò)在固定化酶是不溶于水中的。此外，固定化酶是經(jīng)過物理或化學(xué)的方法固定在某種介質(zhì)上，使之不能溶解于水中，又有酶活性的制劑。所以，只有選項(xiàng)D是正確的。【答案】D典型例題二下列方法中不屬于固定化酶的是()A.吸附法B.共價(jià)法C.交聯(lián)法D.包埋法【解析】本題考查固定化酶的方法。固定化酶的方法比較多，其中包括吸附法、共價(jià)偶聯(lián)法、交聯(lián)法、包埋法等。本題4個(gè)選項(xiàng)中B的方法是不對的，所以要求知識(shí)掌握，尤其是專用名詞一定要精確?！敬鸢浮緽典型例題三淀粉在各種酶的作用下會(huì)依次水解，不同階段的水解產(chǎn)物遇到指示劑會(huì)出現(xiàn)不同的顯色反應(yīng)，下列選項(xiàng)中屬于本實(shí)驗(yàn)中的反應(yīng)物質(zhì)和顯色現(xiàn)象的是()A.淀粉遇碘顯藍(lán)色B.糊精遇KI—I2溶液顯紅色C.麥芽糖遇碘不顯色D.葡萄糖遇斐林試劑顯磚紅色【解析】本題考查