2022-2023學年浙科版（2019）選擇必修三 1.1微生物的培養(yǎng)需要適宜條件 課件（19張）

?微生物概述微生物的概念：_________________________的統(tǒng)稱。包括_______________________________等。本章中提及的微生物主要指用于發(fā)酵的細菌和真菌。難以用肉眼觀察的微小生物細菌、真菌、病毒及一些原生生物禽流感病毒SARS病毒第一節(jié)微生物的培養(yǎng)需要適宜條件大型真菌19世紀中期，法國釀酒業(yè)曾一度遭到毀滅性打擊，葡萄酒出現(xiàn)了變酸變味的怪事...[法國]巴斯德發(fā)現(xiàn)，導致生產(chǎn)失敗的根源在于發(fā)酵物中混入了微生物。細菌、真菌、病毒、原生動物等由于制作工藝并不復雜，一些人會在家里自制酸奶，但成功率低，食用后導致腸胃不適的事件屢見不鮮。原因分析：制作過程中有雜菌混入怎樣才能保證無處不在的雜菌不混入發(fā)酵物？制作工具和原料滅菌接種純的菌種控制發(fā)酵條件避免雜菌進入微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)?實驗室培養(yǎng)微生物條件1）提供微生物生長繁殖所需營養(yǎng)和環(huán)境條件——培養(yǎng)基的配制2）確保其它微生物無法混入——無菌技術(shù)高壓蒸汽滅菌固體培養(yǎng)基3）將需要的微生物分離出來——微生物的純培養(yǎng)微生物在其表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。3.培養(yǎng)基分類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基（分離、計數(shù)、鑒定、保藏菌種等）（擴大培養(yǎng)、工業(yè)生產(chǎn)）2.培養(yǎng)基作用：用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累代謝物。長有酵母菌菌落的固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基1.培養(yǎng)基概念：是否含凝固劑

（如瓊脂）無有注：瓊脂僅作為凝固劑不為微生物生長提供能量和碳源。98℃以上熔化，44℃以下凝固。（①提供微生物所需各種營養(yǎng)②異養(yǎng)微生物的能源）一、培養(yǎng)基為目標微生物提供適宜的生長環(huán)境

根據(jù)物理特性分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基：常用于大規(guī)?？焖俜敝衬撤N微生物。固體培養(yǎng)基：包括“平板”和“斜面”?！捌桨濉笨捎糜诜蛛x、鑒定、活菌計數(shù)“斜面”常用于菌種保存什么作用？選擇培養(yǎng)基：將某種類微生物從混雜的微生物群體中分離出來。怎樣選擇出抗氨芐青霉素能力的細菌?通用型培養(yǎng)基所有的細菌都能生長培養(yǎng)基中加氨芐青霉素沒有抗氨芐青霉素能力的菌落被淘汰培養(yǎng)基+氨芐青霉素具有抗氨芐青霉素能力的菌落【易錯】病毒為非細胞結(jié)構(gòu)生物，只能在活細胞中營寄生生活，不能直接利用培養(yǎng)基來培養(yǎng)病毒。根據(jù)功能特性分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：加入能與目的菌的代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑。根據(jù)化學成分分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基：化學成分完全清楚的培養(yǎng)基，一般用于實驗室進行的、要求可重復性強的各種研究工作。天然培養(yǎng)基：成分還不十分清楚或成分不恒定的天然有機物制成的培養(yǎng)基。成本較低，除用于實驗室外，更多被用于大規(guī)模的生物發(fā)酵工業(yè)。如：馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基、麥芽汁蔗糖培養(yǎng)基等主要成分

不同的微生物往往需要用不同的培養(yǎng)基配方，不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機鹽、生長因子（自身缺陷，有特殊需求）等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH、氧氣、滲透壓的要求．成分作用主要來源碳源主要作能源物質(zhì)無機碳(CO2)或有機碳(糖類)氮源合成含N類化合物N2，NH3，銨，硝酸鹽尿素，牛肉膏，蛋白胨無機鹽調(diào)節(jié)滲透壓、必要的元素等NaCI、CaCl2等水溶解營養(yǎng)物質(zhì)生長因子調(diào)節(jié)促生長特定維生素，氨基酸，嘌呤和嘧啶（堿基）等不同微生物生長所需的培養(yǎng)基成分有差別。細菌喜葷，霉菌喜素細菌培養(yǎng)基：含有較高的有機氮，常用蛋白胨和酵母提取物等配制；中性偏堿霉菌培養(yǎng)基：常用可溶性淀粉加無機物配制，或用添加蔗糖的豆芽汁等配制；中性偏酸細菌喜堿，霉菌喜酸

防止雜菌污染，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是研究和應(yīng)用微生物的前提，也是發(fā)酵工程的重要基礎(chǔ)。實驗室培養(yǎng)微生物的要求？提供微生物生長繁殖所需的營養(yǎng)和環(huán)境條件培養(yǎng)基的配制固體培養(yǎng)基確保其他微生物無法混入將需要的微生物分離出來無菌技術(shù)微生物的純培養(yǎng)、分離技術(shù)單個微生物在固體培養(yǎng)基表面形成的具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細胞群體。一個種群菌落較為溫和理化生方法，殺死部分微生物（不包括芽孢、孢子）1.消毒類型操作方法適用范圍消毒煮沸消毒法巴氏消毒法化學藥物消毒法紫外線照射消毒法100℃煮沸5～6min日常生活62～65℃消毒30min或80～90℃消毒30s～1min不耐高溫的液體用酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源生物活體、水源等紫外線照射30min接種室、接種箱，超凈工作臺。二、滅菌和無菌操作技術(shù)可以排除非目標微生物的干擾2.滅菌：用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外“所有”微生物（包括芽孢和孢子）⑴濕熱滅菌

⑵干熱滅菌

⑶灼燒滅菌原理：高溫蒸汽破壞蛋白質(zhì)、核酸等結(jié)構(gòu)使其變性。優(yōu)點：操作簡便，效果可靠，可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體。對象：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿等基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞特別注意：使用后的培養(yǎng)基必須滅菌后才能丟棄，以免污染環(huán)境(1)濕熱滅菌法：高壓蒸汽滅菌鍋100kPa、121℃下維持15～30min對象：耐高溫，需保持干燥的物品（玻璃器皿、金屬器具）原理：使微生物細胞膜破壞、蛋白質(zhì)變性和原生質(zhì)干燥等。干熱滅菌箱(2)干熱滅菌法：160～170℃下加熱2～3h對象：接種的金屬工具如接種環(huán)、接種針，以及接種過程中的試管口或瓶口等易被污染部位。原理：使微生物燃燒效果：最徹底灼燒滅菌(3)灼燒滅菌法：直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒無菌技術(shù)要點2.實驗器具用什么方法滅菌？1.培養(yǎng)基的配置過程調(diào)pH值

混合加熱融化（瓊脂）確定配方及用量滅菌請回答下列問題：培養(yǎng)基用什么方法滅菌？高壓蒸汽滅菌法或G6玻璃砂漏斗過濾法含葡萄糖的培養(yǎng)基也可采用適當降低溫度、壓力（500g/cm2、112℃）以及延長時間（30min）的高壓滅菌。（防止其碳化）加熱會分解的物質(zhì)如尿素--G6玻璃砂漏斗過濾法高壓蒸汽滅菌法培養(yǎng)皿、三角瓶、試管、移液管等常用高壓蒸汽法滅菌，且滅菌后的儀器要放在烘箱烘干，使用時取出放在超凈工作臺中，然后打開紫外燈和過濾風，滅菌30min.接種環(huán)常用灼燒滅菌，（接種環(huán)的環(huán)部、金屬絲、金屬絲與柄的連接部、連接部的上端）冷卻后使用。玻璃刮刀（涂布器）使用前保存在75%的酒精中，使用時放在酒精燈火焰上（除去殘留酒精），直到熄滅，冷卻后使用。分裝G6玻璃砂漏斗孔徑最小，細菌不能濾過，使用前也要在121℃下用紙包好滅菌，使用后需用1mol/L的HCI浸泡，并抽濾去酸，再用蒸餾水洗至中性，干燥后保存。3.雙手用什么方法消毒？4.為保證無雜菌，實驗操作（接種和培養(yǎng)基的轉(zhuǎn)移）都在哪里進行？5.如何制備無菌水？超凈工作臺的酒精燈火焰外焰旁用三角瓶裝水，高壓蒸汽滅菌法滅菌75%酒精擦拭6.培養(yǎng)基分裝時，不能將培養(yǎng)基黏附在三角瓶口、試管口、培養(yǎng)皿內(nèi)壁上，容器口或壁，否則會發(fā)生污染。因此轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基到三角瓶口、試管口時應(yīng)用三角漏斗操作。7.操作完成后，儀器要高壓滅菌后再保存，使用過的培養(yǎng)基要高壓滅菌后再倒掉。（1Kg/cm2、121℃）8.試管或三角瓶口：棉塞不能用脫脂棉，以免吸水引起污染。棉塞應(yīng)該使用普通棉花。三、活動:配制可用于培養(yǎng)酵母菌的馬鈴薯蔗糖培養(yǎng)基1.目的要求:配制液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。2.材料用具:馬鈴薯、蔗糖、瓊脂、天平、試管、燒杯、三角瓶、培養(yǎng)皿、封口膜(或紗布)、牛皮紙或報紙、橡皮筋、小刀、高壓滅菌鍋、玻璃漏斗、移液器等。3.方法步驟計算：根據(jù)配方計算出所需的馬鈴薯、蔗糖和瓊脂的用量配制20%馬鈴薯浸汁：去皮→稱重→切塊→加水→煮沸→過濾加入蔗糖→定容制備斜面、固體、液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：將馬鈴薯浸汁分裝→滅菌斜面培養(yǎng)基：在馬鈴薯浸汁中加入瓊脂→加熱溶化→分裝到試管→滅菌后擺成斜面固體培養(yǎng)基：將剩余的培養(yǎng)基分裝到三角瓶中，封口→滅菌制作棉塞：確定棉塞的長度和粗細制作過程：將棉花鋪成圓片→對折→折卷→檢查長度和粗細4.注意事項（1）制作斜面培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基時要注意控制好溫度，防止培養(yǎng)基提前凝固。（2）斜面培養(yǎng)基試管中的液體量約為試管長度的1/4（3）培養(yǎng)基需要經(jīng)高壓蒸汽滅菌(1kg/cm2、121℃下滅菌20min)。（4）棉塞的長度要保證既能塞住瓶口，在瓶口外又要留有一定的長度，方便接種時用無名指、小拇指取下來；粗細也要適當，以不易脫落為度。（5）制作棉塞應(yīng)該使用普通棉花，不能使用醫(yī)用的脫脂棉，防止脫脂棉吸水后引起污染.1.判斷正誤（1）配制培養(yǎng)基時要考慮不同微生物的代謝特性（）（2）大腸桿菌在液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基中的繁殖速度相同（）（3）天然培養(yǎng)基成本較低，可用于大規(guī)模的生物發(fā)酵工程（）對錯對2.蛋白胨能為微生物生長提供______________________營養(yǎng)物質(zhì)。碳源、氮源、生長因子2.下列是與微生物培養(yǎng)有關(guān)的問題，請回答：（1）某細菌固體培養(yǎng)基的組成成分是KH2PO4、Na2HPO4、MgSO4、葡萄糖、尿素、瓊脂和蒸餾水，其中凝固劑是＿＿＿，碳