宮頸液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)與鏡下診斷新

主要內(nèi)容液基細(xì)胞學(xué)常見(jiàn)制片技術(shù)液基細(xì)胞學(xué)染色方法常見(jiàn)質(zhì)量問(wèn)題與鏡下形態(tài)宮頸液基細(xì)胞學(xué)質(zhì)量控制4123（一）液基細(xì)胞學(xué)常見(jiàn)制片技術(shù)1.膜式技術(shù)2.沉降式技術(shù)3.離心甩片技術(shù)4.手工制片技術(shù)5.其他膜式技術(shù)最早出現(xiàn)的液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)原理—膜式負(fù)壓過(guò)濾代表產(chǎn)品：TCT膜式技術(shù)制片原理宮頸脫落細(xì)胞中常見(jiàn)的成分：黏液，血液，炎性細(xì)胞，上皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞過(guò)濾膜孔徑8um,黏液，紅細(xì)胞及部分直徑較小的炎性細(xì)胞能穿透，而上皮細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞則被“卡”在過(guò)濾膜上，從而達(dá)到去除雜質(zhì)，收集有效診斷細(xì)胞成分的目的。膜孔阻塞會(huì)造成細(xì)胞成團(tuán)細(xì)胞通透力度大小不一，中間視野細(xì)胞偏少，周邊視野細(xì)胞量聚集細(xì)胞團(tuán)被外力壓扁，腺細(xì)胞團(tuán)特有的三維立體結(jié)構(gòu)消失膜式技術(shù)對(duì)制片的影響自動(dòng)化程度最高的制片技術(shù)原理—分離提??；自然沉降代表產(chǎn)品：LCT,LBP沉降式制片技術(shù)原理一：密度分層去除雜質(zhì)宮頸脫落細(xì)胞中常見(jiàn)的成分：黏液，血液，炎性細(xì)胞，上皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞分離提取液（密度液）比重較保存液大，細(xì)胞沉降到達(dá)兩者交界處，只有自身比重大，能克服下層分離液阻力的細(xì)胞才能繼續(xù)下降，從而被收集。樣本中的粘液，紅細(xì)胞比重輕，無(wú)法透過(guò)分離提取液，被分層在上部，繼而被去除；上皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞及部分炎性細(xì)胞則被收集用來(lái)制片。沉降式技術(shù)制片原理LCTLBP原理二：重力自然沉降，優(yōu)先富集有效診斷細(xì)胞細(xì)胞自然沉降，與玻片相吸附，沒(méi)有外力施壓，某些成團(tuán)的細(xì)胞保持三維立體結(jié)構(gòu)，一方面對(duì)判讀來(lái)源有幫助，另一方面，鏡下細(xì)胞不在同一層面上，需要調(diào)節(jié)微調(diào)才能觀察清楚沉降式技術(shù)對(duì)制片的影響（二）液基細(xì)胞學(xué)染色方法《細(xì)胞病理學(xué)技術(shù)制作規(guī)范及質(zhì)量控制》：宮頸細(xì)胞學(xué)制片需采用巴氏染色非宮頸細(xì)胞學(xué)制片可以采用巴氏，HE染色宮頸細(xì)胞學(xué)質(zhì)控要求采用巴氏染色的原因。1：巴氏染色是國(guó)際通行的染色方法。2.HE染色不能顯示鱗狀細(xì)胞的分化層次，不利于直觀的感受激素水平，不利于判斷細(xì)胞的組織學(xué)層次來(lái)源。3.HE染色不能顯示胞漿不同的色彩，對(duì)于感染性病變，放療引起的改變等失去了提示意義。4.HE染色核染色質(zhì)容易凝集造成深染，失去核的細(xì)微結(jié)構(gòu)，容易造成過(guò)診斷。通過(guò)巴氏染色，表層角化細(xì)胞胞漿呈現(xiàn)紅色，中層呈藍(lán)色，底層呈藍(lán)綠色；這一特點(diǎn)可以用來(lái)判斷雌激素水平的高低，同時(shí)也能對(duì)我們的診斷帶來(lái)幫助。小的細(xì)胞本應(yīng)該呈現(xiàn)藍(lán)綠色，但是當(dāng)胞漿呈紅色，核有異型時(shí)，提示鱗狀上皮病變可能性大。

年齡：40歲判讀結(jié)果：HSIL巴氏染色能更加清楚的表達(dá)核的信息。細(xì)胞學(xué)的診斷關(guān)鍵還是在于核的異型性改變，核膜，核染色質(zhì)，核仁等信息的表達(dá)清楚與否事關(guān)重要。年齡：34歲判讀意見(jiàn)：HSIL巴氏染色能好的顯示胞漿的色彩變化，常見(jiàn)的有：角化不全嗜橘黃改變，病原微生物感染嗜雙色改變，放療反應(yīng)呈多彩性改變判讀意見(jiàn)：滴蟲(chóng)（巴氏染色）

判讀意見(jiàn)：滴蟲(chóng)（HE染色）判讀意見(jiàn)：放療反應(yīng)性改變巴氏染色能使細(xì)胞，特別是腫瘤細(xì)胞有更鮮明的核漿對(duì)比效果。HE染色的腫瘤細(xì)胞往往染色較深，很難觀察清楚。年齡：35歲活檢結(jié)果：宮頸管腺癌個(gè)人體會(huì)：巴氏染色對(duì)于腫瘤細(xì)胞的著色，相比于HE染色，顯得“溫和很多”，一般不會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞核完全染成看不清楚結(jié)構(gòu)的現(xiàn)象。腺細(xì)胞，或成團(tuán)細(xì)胞，著色能力更加強(qiáng)，巴氏染色對(duì)這些細(xì)胞的觀察更加清楚。（三）液基細(xì)胞學(xué)制片常見(jiàn)問(wèn)題與鏡下形態(tài)常見(jiàn)問(wèn)題1.細(xì)胞量2.細(xì)胞分布3.細(xì)胞染色4.細(xì)胞清晰度5.污染1.標(biāo)本滿意度評(píng)估，是否屬于不滿意標(biāo)準(zhǔn)？2.出現(xiàn)的問(wèn)題是屬于個(gè)別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？3.整體現(xiàn)象從哪幾方面檢查？細(xì)胞量過(guò)少解決思路：液基制片：至少應(yīng)有5000個(gè)形態(tài)清晰完整的鱗狀上皮細(xì)胞。大致判斷標(biāo)準(zhǔn)：400倍鏡下，每個(gè)視野大于4個(gè)（膜式），大于8個(gè)（沉降式）。強(qiáng)調(diào)說(shuō)明：1.計(jì)數(shù)的為鱗狀細(xì)胞，鱗化細(xì)胞也可以算。2.計(jì)數(shù)的為一張制片，而不是幾張制片的總和。3.最低計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)適用于宮頸細(xì)胞學(xué)樣本，對(duì)于子宮全切術(shù)后，陰道取樣標(biāo)本不適合。4.任何存在異常細(xì)胞的樣本均屬于合格樣本。標(biāo)本滿意度的評(píng)估

細(xì)胞量少，整體出現(xiàn)時(shí)考慮以下因素1.取樣環(huán)節(jié)：取樣刷過(guò)軟，取樣醫(yī)生用力過(guò)小2.制片操作環(huán)節(jié)：抽吸力度過(guò)大，轉(zhuǎn)移樣本量過(guò)少，玻片吸附力差1.細(xì)胞量過(guò)多的表現(xiàn)有哪些？2.出現(xiàn)的是個(gè)別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？3.出現(xiàn)的為整體現(xiàn)象時(shí)要考慮哪些因素？細(xì)胞量過(guò)多解決思路：

細(xì)胞量整體過(guò)多時(shí)要考慮以下因素：1.吸附力影響2.轉(zhuǎn)移標(biāo)本量過(guò)多3.振蕩不充分1.個(gè)別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？2.個(gè)別現(xiàn)象考慮什么原因？整體現(xiàn)象考慮什么原因？細(xì)胞分布不均勻解決思路

個(gè)別制片細(xì)胞分布不均1.標(biāo)本自身原因：粘液，血液過(guò)多2.玻片吸附力不穩(wěn)定整體制片細(xì)胞分布不均勻1.玻片吸附力低2.技術(shù)自身缺陷1.個(gè)別現(xiàn)象還是整體現(xiàn)象？2.染色深了還是染色淺了？3.細(xì)胞核還是細(xì)胞漿的染色問(wèn)題?4.影響染色的因素有哪些？染色問(wèn)題解決思路

巴氏染色的幾點(diǎn)基本常識(shí)：1.染色原理：物理作用，化學(xué)作用。2.染料分類：堿性染料，酸性染料。巴氏染色相關(guān)的影響因素1.時(shí)間2.溫度3.PH值4.固定是否及時(shí)5.脫水是否干凈PH值當(dāng)染色效果通過(guò)調(diào)節(jié)時(shí)間長(zhǎng)短，考慮了溫度變化后，仍然不能獲得滿意效果。需要考慮染液自身或者次緩沖液的PH值。在堿性環(huán)境下蘇木素容易著色，伊紅，亮綠，橘黃不容易著色；反之亦然。固定不及時(shí)核染色質(zhì)信息表達(dá)不清晰，胞漿透明效果差。脫水不干凈酒精不純或濕度大：影響胞漿上色，片子整體呈現(xiàn)綠色或者灰色。二甲苯進(jìn)水：整片細(xì)胞顏色單一，不鮮艷，?？梢?jiàn)背景中有小水珠。干燥現(xiàn)象表現(xiàn)：鱗狀上皮細(xì)胞胞漿里出現(xiàn)深褐色斑點(diǎn)原因：片子染色完成后，封片以前在空氣中暴露時(shí)間過(guò)久所致干封（不過(guò)二甲苯）：對(duì)于成熟的鱗狀上皮影響較小，但是對(duì)于底層的鱗狀上皮及腺細(xì)胞，間皮細(xì)胞影響很大；對(duì)于單個(gè)散在的細(xì)胞影響較小，對(duì)于成團(tuán)的細(xì)胞影響很大。胸水胸水封片膠：多種環(huán)保膠都會(huì)影響液基制片的最終效果，比如褪色，模糊，輕微干燥現(xiàn)象等。1.制片過(guò)程中的交叉污染2.外源性污染污染

如何鑒別制片污染如果不注意制片環(huán)境及操作流程，制片中經(jīng)常會(huì)見(jiàn)到污染成分。特別是一些形態(tài)與念珠菌類似的污染菌，往往會(huì)影響到我們的判讀結(jié)果，可以從以下幾個(gè)方面加以鑒別：1.，看整體：污染菌常漂浮在片子中，或者是單獨(dú)出現(xiàn)背景中，多的時(shí)候彼此纏繞如雜草一般。念珠菌感染則常常串起在鱗狀上皮團(tuán)之間。2，看反應(yīng)性改變：污染菌不引起細(xì)胞的增生，也不引起細(xì)胞的蟲(chóng)蛀樣改變及嗜雙色改變。念珠菌感染可以引起鱗狀上皮的普遍性增生，有較明顯的反應(yīng)性改變。3，看具體形態(tài)：污染菌染色常較淺，多為灰紅色或藍(lán)綠色，念珠菌為紅色；污染菌無(wú)竹節(jié)狀典型特征，多為面條狀或串珠狀；污染菌的芽孢不如念珠菌典型，或沒(méi)有。4，看出現(xiàn)概率（很簡(jiǎn)單也很重要）：一批制片中如果出現(xiàn)菌絲的比例過(guò)高（個(gè)人覺(jué)得超過(guò)30%），首先要考慮污染。如何解決制片污染1，徹底清洗機(jī)器管道2，檢查載玻片，蓋玻片是否清潔3，更換自配的試劑，特別要注意清洗試劑瓶，污染菌往往長(zhǎng)在瓶壁與瓶底4，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境差的話，建議安裝紫外線燈交流，討論在宮頸液基細(xì)胞學(xué)制片中，有些少見(jiàn)的東西，見(jiàn)過(guò)一次就不會(huì)再忘記，問(wèn)題是當(dāng)它初次出現(xiàn)的時(shí)候，我們認(rèn)識(shí)它嗎？判讀意見(jiàn)：吳策線蟲(chóng)屬班氏絲蟲(chóng)型微絲蚴判讀意見(jiàn)：蟯蟲(chóng)卵判讀意見(jiàn)：鐮刀菌判讀意見(jiàn)：鏈格孢菌屬單細(xì)胞藻類（四）液基細(xì)胞學(xué)制片質(zhì)量控制

好的液基細(xì)胞學(xué)制片取決于質(zhì)量?jī)?yōu)異的液基細(xì)胞學(xué)制片產(chǎn)品，取決于責(zé)任心強(qiáng)的液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)員，取決于懂得制片技術(shù)的細(xì)胞病理診斷醫(yī)生對(duì)質(zhì)量的控制。網(wǎng)絡(luò)上很多爭(zhēng)論激烈的帖子，其實(shí)是由于制片效果不好，細(xì)胞形態(tài)觀察不清楚所造成的。實(shí)際工作中很多誤診，漏診的病例，也是由于制片效果不好，細(xì)胞形態(tài)觀察不清楚所造成。只有成團(tuán)細(xì)胞觀察清楚的片子才是合格的液基制片。只有細(xì)胞核信息表達(dá)清晰的細(xì)胞才是有診斷價(jià)值的細(xì)胞。個(gè)人體會(huì)細(xì)胞病理診斷醫(yī)生，掌握以下兩個(gè)問(wèn)題，能解決絕大部分制片質(zhì)量問(wèn)題。1.成團(tuán)的東西是什么？2.成團(tuán)的東西怎么才能看清楚?這樣的片子您有把握診斷嗎？病例討論制片存在哪些質(zhì)量問(wèn)題？1.細(xì)胞量過(guò)多2.染色過(guò)深3.雜質(zhì)（粘液）去除不干凈4.成團(tuán)細(xì)胞觀察不清楚解決制片問(wèn)題以后病例討論結(jié)果第一次制片判讀意見(jiàn)：HSIL第二次制片判讀意見(jiàn)：HSV病理診斷中最大的陷阱是人為造成的