2022-2023 學(xué)年 蘇教版 選擇性必修三 微生物分離、純化和培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù) 教案

第2課時(shí)微生物分離、純化和培養(yǎng)的無(wú)菌技術(shù)課程內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)核心素養(yǎng)對(duì)接(1)概述平板劃線法分離和純化微生物的過(guò)程。(2)概述稀釋涂布平板法分離和純化微生物的過(guò)程。(3)進(jìn)行土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)。(1)科學(xué)思維——能通過(guò)平板劃線法和稀釋涂布平板法的操作，掌握微生物分離和純化的基本方法。(2)科學(xué)探究——學(xué)會(huì)配制選擇培養(yǎng)基，以分離出能分解尿素的細(xì)菌，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析和評(píng)價(jià)。知識(shí)點(diǎn)1平板劃線法分離和純化微生物1.平板劃線法2.通過(guò)平板劃線法獲得純化的酵母菌菌落知識(shí)點(diǎn)2稀釋涂布平板法分離和純化微生物(1)稀釋涂布平板法(3)分離土壤中分解尿素的細(xì)菌并進(jìn)行計(jì)數(shù)(1)倒平板后，待平板冷凝之后需將其倒置。(√)(2)平板劃線法接種時(shí)，每一次劃線前都要挑取菌體。(×)(3)稀釋涂布平板法能分離細(xì)菌，也能計(jì)數(shù)。(√)(4)測(cè)定不同微生物數(shù)量時(shí)，接種的土壤懸液的稀釋度相同。(×)(5)采用混合平板法分離和純化微生物時(shí)，僅在培養(yǎng)基的表面長(zhǎng)出菌落。(×)(6)通過(guò)培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基，可以判斷是否存在著雜菌污染。(√)eq\x(教材P22“走進(jìn)實(shí)驗(yàn)室”拓展)1.在利用平板劃線法純化酵母菌的實(shí)驗(yàn)中，若純化培養(yǎng)失敗，可能的原因有哪些？提示接種環(huán)灼燒后未冷卻即挑取菌體進(jìn)行劃線，菌體因接觸高溫接種環(huán)而死亡；第1次劃線前挑取的菌體過(guò)多，劃線時(shí)不能得到充分稀釋而無(wú)法獲得酵母菌單菌落；第1次劃線前未灼燒接種環(huán)，因接種環(huán)有雜菌而無(wú)法獲得酵母菌單菌落；第2次、第3次劃線前未灼燒接種環(huán)，未將殘留在接種環(huán)上的酵母菌殺死，酵母菌得不到充分稀釋而無(wú)法獲得酵母菌單菌落；第2次劃線或第3次劃線時(shí)未能從上次劃線的末端開(kāi)始，酵母菌得不到充分稀釋而無(wú)法獲得酵母菌單菌落；培養(yǎng)基滅菌不徹底或培養(yǎng)過(guò)程受到雜菌污染，無(wú)法獲得酵母菌單菌落。eq\x(教材P23“旁欄思考題”)2.有人說(shuō)，采用稀釋涂布平板法培養(yǎng)和計(jì)算得到的微生物的數(shù)量比稀釋液中實(shí)際微生物的數(shù)量要少。你同意這樣的觀點(diǎn)嗎？為什么？提示同意這個(gè)觀點(diǎn)。稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)是根據(jù)微生物在平板表面上所形成的單個(gè)菌落來(lái)計(jì)數(shù)的，一個(gè)菌落代表一個(gè)單細(xì)胞。實(shí)際計(jì)數(shù)時(shí)，往往會(huì)出現(xiàn)菌落聚合在一起的情況，因?yàn)閮蓚€(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此，稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。eq\x(教材P26“思辨題3”)3.在無(wú)菌操作的條件下，為什么能通過(guò)稀釋涂布平板法對(duì)所培養(yǎng)的微生物進(jìn)行計(jì)數(shù)？提示稀釋涂布平板法將待分離的材料做一系列的梯度稀釋，再取一定量的某一稀釋度的菌液涂布平板，然后用無(wú)菌的涂布器將菌液均勻地涂布在整個(gè)平板表面，使其中的微生物充分分散，培養(yǎng)后在平板培養(yǎng)基表面形成多個(gè)單菌落。如果經(jīng)稀釋涂布平板法培養(yǎng)出的都是單個(gè)細(xì)胞增殖形成的菌落，那么統(tǒng)計(jì)這些菌落數(shù)目，即可計(jì)算出單位體積樣品中的微生物數(shù)量。探究點(diǎn)一平板劃線法分離和純化微生物1.閱讀教材P22有關(guān)倒平板的內(nèi)容，回答下列問(wèn)題：(1)倒平板時(shí)，為什么在酒精燈火焰旁操作？提示酒精燈火焰旁是無(wú)菌區(qū)域，可以避免周圍環(huán)境中的微生物的污染。(2)倒平板時(shí)為什么要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？提示通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。(3)平板冷凝后為何要倒置？提示防止皿蓋上的冷凝水珠落入培養(yǎng)基，避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快蒸發(fā)。2.閱讀教材P21有關(guān)平板劃線法的內(nèi)容，回答下列問(wèn)題：(1)平板劃線法接種菌種時(shí)，哪些操作可防止雜菌污染？提示①接種前將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒。②劃線操作在酒精燈火焰旁進(jìn)行。③接種環(huán)挑取菌體前后，要將試管口通過(guò)火焰。④劃線時(shí)將培養(yǎng)皿的皿蓋打開(kāi)一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃線，劃線后及時(shí)蓋上皿蓋。(2)在瓊脂平板表面多次做“由點(diǎn)到線”的稀釋劃線的目的是什么？提示這樣做可以得到較多獨(dú)立分布的單個(gè)微生物增殖而成的菌落。(3)在做第二次劃線以及其后的操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？提示劃線末端含有的菌體數(shù)目較少，每次從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線能夠使菌體的數(shù)目隨劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終分散成單個(gè)的菌體。(4)接種操作時(shí)每次劃線接種前與接種后都要灼燒接種環(huán)，其目的分別是什么？提示每次劃線前灼燒是為了殺死上次劃線結(jié)束后殘留的菌種。接種結(jié)束后灼燒，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免污染環(huán)境和感染操作者。(5)接種結(jié)束后，為什么要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)？未接種的培養(yǎng)基表面是否有菌落生長(zhǎng)很關(guān)鍵。如果有菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明了什么？提示培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對(duì)照，未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的。若有菌落形成，說(shuō)明培養(yǎng)基滅菌不徹底，或培養(yǎng)基被污染了，需要重新制備。1.倒平板成功關(guān)鍵點(diǎn)(1)待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)進(jìn)行倒平板操作。(2)要使錐形瓶的瓶口通過(guò)酒精燈火焰，通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。(3)倒平板時(shí)，要用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開(kāi)，以免雜菌污染培養(yǎng)基。(4)整個(gè)操作過(guò)程要在酒精燈火焰旁進(jìn)行，避免雜菌污染。(5)在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，那么這個(gè)平板不能用來(lái)培養(yǎng)微生物，因?yàn)榭諝庵械奈⑸锟赡茉诿笊w與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。2.平板劃線法成功關(guān)鍵點(diǎn)(1)劃線用力要大小適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。(2)第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環(huán)滅菌，劃線操作結(jié)束后仍需灼燒接種環(huán)。(3)灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后才能挑取菌體，以免溫度太高殺死菌種。(4)在做第二次以及其后的劃線操作時(shí)，總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線，使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的菌落。(5)多次劃線時(shí)最后一區(qū)域不要與第一區(qū)域相連。(6)接種和劃線操作需要在酒精燈火焰附近進(jìn)行。[例1]下列關(guān)于制備固體培養(yǎng)基時(shí)倒平板的敘述，正確的是()A.倒好的培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿要進(jìn)行干熱滅菌B.應(yīng)將打開(kāi)的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.為防止微生物侵入培養(yǎng)基，要在酒精燈火焰旁進(jìn)行操作D.倒好培養(yǎng)基后，應(yīng)立即將平板倒過(guò)來(lái)放置答案C解析應(yīng)該在倒平板之前將培養(yǎng)基進(jìn)行濕熱滅菌，將培養(yǎng)皿進(jìn)行干熱滅菌，A錯(cuò)誤；倒平板時(shí)，用左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，B錯(cuò)誤；為防止微生物侵入培養(yǎng)基，要在酒精燈火焰旁進(jìn)行操作，C正確；倒好培養(yǎng)基后，等培養(yǎng)基冷凝后再將平板倒過(guò)來(lái)放置，D錯(cuò)誤。[例2](多選)為了獲得純化的酵母菌菌落，在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上進(jìn)行劃線接種，培養(yǎng)結(jié)果如圖所示。下列敘述正確的是()A.為保證無(wú)菌操作，接種環(huán)使用前必須滅菌B.倒平板后需間歇晃動(dòng)，以保證表面平整C.圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落D.接種和劃線操作需要在酒精燈火焰附近進(jìn)行答案ACD解析為保證無(wú)菌操作，接種環(huán)使用前必須滅菌，A正確；倒平板后無(wú)需間歇晃動(dòng)，B錯(cuò)誤；圖中Ⅰ、Ⅱ區(qū)的細(xì)菌數(shù)量均太多，應(yīng)從Ⅲ區(qū)挑取單菌落，C正確；酒精燈火焰附近是無(wú)菌區(qū)，接種和劃線操作需要在酒精燈火焰附近進(jìn)行，D正確。探究點(diǎn)二稀釋涂布平板法分離和純化微生物1.篩選分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基的配方如表所示：組分含量KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0gH2O定容至1000mL(1)在培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長(zhǎng)提供碳源和氮源的分別是什么物質(zhì)？提示碳源是葡萄糖，氮源是尿素。(2)分離分解尿素的細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基是如何進(jìn)行選擇的？提示該選擇培養(yǎng)基的配方中，尿素是培養(yǎng)基中的唯一氮源，因此，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)。(3)為什么只有能分解尿素的微生物才能在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)？提示分解尿素的微生物能合成脲酶，而脲酶可催化尿素分解產(chǎn)生NH3，NH3可作為微生物生長(zhǎng)的氮源。2.甲、乙兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)。在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果。(1)甲同學(xué)在該濃度下涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230，該同學(xué)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果是否可靠？為什么？提示不可靠。為增加實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性，應(yīng)設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)，在同一稀釋度下至少涂布3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)結(jié)果后計(jì)算平均值。(2)乙同學(xué)在該濃度下涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212、256，該同學(xué)將21舍去，然后取平均值。該同學(xué)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理是否合理？為什么？提示不合理。微生物計(jì)數(shù)時(shí)，如果實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果差別很大的情況，應(yīng)分析實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能的影響因素，找出差異的原因，而不能簡(jiǎn)單地將結(jié)果舍棄后進(jìn)行計(jì)數(shù)。(3)某同學(xué)在三種稀釋度下吸取0.1mL的菌液涂布平板，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，得到以下的數(shù)據(jù)，試計(jì)算1g樣品的活菌數(shù)。平板菌落數(shù)稀釋度平板1平板2平板3104320360356105212234287106212318提示105的稀釋度下取0.1mL的菌液涂布的三個(gè)平板上的菌落數(shù)在30～300之間，計(jì)算其平均值為(212＋234＋287)/3≈244。進(jìn)一步可以換算出1g樣品中活菌數(shù)為(244÷0.1)×105＝2.44×108(個(gè))。(4)為什么統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低？提示當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。1.稀釋涂布平板法(1)主要操作環(huán)節(jié)：系列稀釋和涂布平板。(2)系列稀釋和涂布平板后培養(yǎng)結(jié)果如圖所示2.平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較3.兩種微生物計(jì)數(shù)方法的比較[例3](多選)某興趣小組從校園土壤中取樣，進(jìn)行土壤中“分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)”實(shí)驗(yàn)。小明將1g土壤制成10－6稀釋液，取0.1mL稀釋液篩選出約120個(gè)菌落，而其他同學(xué)只篩選出約40個(gè)菌落。下列敘述正確的是()A.出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是小明和其他同學(xué)取樣的土壤不同B.要檢查培養(yǎng)基是否受到污染，可將小明配制的培養(yǎng)基不接種進(jìn)行培養(yǎng)C.稀釋倍數(shù)太小可能導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小D.其他同學(xué)1g土樣中分解尿素的細(xì)菌約為4×108個(gè)答案ABCD解析小明篩選出的菌落數(shù)明顯比其他同學(xué)多，出現(xiàn)這種結(jié)果的原因可能是小明和其他同學(xué)取樣的土壤不同，也有可能是培養(yǎng)基中混入其他氮源或培養(yǎng)基被污染，A正確；要檢查培養(yǎng)基是否受到污染，可將小明配制的培養(yǎng)基不加土樣進(jìn)行培養(yǎng)，即進(jìn)行空白對(duì)照，B正確；當(dāng)稀釋倍數(shù)太小時(shí)，兩個(gè)或兩個(gè)以上細(xì)菌連在一起時(shí)，培養(yǎng)基上看到的是一個(gè)菌落，即可能導(dǎo)致計(jì)數(shù)結(jié)果偏小，C正確；其他同學(xué)篩選出約40個(gè)菌落，1g土樣中分解尿素的細(xì)菌約為40×106÷0.1＝4×108個(gè)，D正確。[例4]環(huán)境中的苯酚有害，研究者準(zhǔn)備依據(jù)下圖步驟操作，從處理廢水的活性污泥中分離篩選能高效降解苯酚的菌株。相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.苯酚降解菌富集培養(yǎng)基以苯酚為碳源促進(jìn)目的菌大量增殖B.將采集樣品接種培養(yǎng)時(shí)苯酚濃度應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加C.可采用稀釋涂布平板法獲得降解苯酚的單菌落D.平板上長(zhǎng)出的菌落就是研究者所需要的目的菌株答案D解析欲分離篩選能高效降解苯酚的菌株，在培養(yǎng)基中以苯酚為唯一碳源富集培養(yǎng)，可促進(jìn)目的菌的大量增殖，A正確；圖示方法為稀釋涂布平板法，將采集樣品接種培養(yǎng)時(shí)苯酚濃度應(yīng)隨轉(zhuǎn)接次數(shù)增加而逐漸增加，B正確；當(dāng)稀釋倍數(shù)足夠大時(shí)，平板上可獲得降解苯酚的單菌落，C正確；由于活性污泥中含有多種微生物，則在平板上長(zhǎng)出的菌落不全是研究者所需要的目的菌株，D錯(cuò)誤。思維導(dǎo)圖晨讀必背1.由單個(gè)微生物增殖形成的菌落，就是這種微生物的純種菌落。2.平板劃線法和稀釋涂布平板法都可用于菌種的分離和純化，只有稀釋涂布平板法才可用于微生物的計(jì)數(shù)。隨堂檢測(cè)1.如圖為純培養(yǎng)酵母菌的一個(gè)操作環(huán)節(jié)，下列相關(guān)敘述中，錯(cuò)誤的是()A.該操作步驟是接種，方法是平板劃線法B.除第一次劃線外，以后的每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端C.圖中酵母菌密度最小的是5處D.該接種方法適用于酵母菌的計(jì)數(shù)答案D解析該操作步驟是接種，方法是平板劃線法，A正確；除第一次劃線外，以后的每一次劃線的起點(diǎn)是上一次劃線的末端，目的是將聚集的菌種逐漸稀釋，從而得到單菌落，B正確；圖中5為最后一次劃線，菌種密度最低，C正確；平板劃線法只能用于微生物的分離、培養(yǎng)，不能用于計(jì)數(shù)，D錯(cuò)誤。2.某些土壤細(xì)菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用。下列關(guān)于土壤中分解尿素細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)的敘述，正確的是()A.分解尿素的細(xì)菌是以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源的B.倒平板時(shí)應(yīng)將打開(kāi)的培養(yǎng)皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上C.培養(yǎng)基中KH2PO4等的作用之一是作為緩沖劑保持pH穩(wěn)定D.若實(shí)驗(yàn)組菌落平均數(shù)為57個(gè)/平板，空白對(duì)照平板上有3個(gè)菌落，則本組菌落數(shù)的平均值為54個(gè)/平板答案C解析分解尿素的細(xì)菌是異養(yǎng)型，不能以CO2作為碳源，A錯(cuò)誤；倒平板時(shí)，不能將打開(kāi)的培養(yǎng)皿蓋放到一邊，以免微生物污染，正確的做法是：用左手將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約10～20mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋，B錯(cuò)誤；無(wú)機(jī)鹽可以作為緩沖劑保持細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中pH穩(wěn)定，所以培養(yǎng)基中KH2PO4等的作用之一是作為緩沖劑保持pH穩(wěn)定，C正確；在完全正確的操作情況下，空白對(duì)照組中不應(yīng)出現(xiàn)菌落。若空白對(duì)照組出現(xiàn)菌落，說(shuō)明操作過(guò)程中存在微生物污染，屬于實(shí)驗(yàn)失誤，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均不應(yīng)采用，D錯(cuò)誤。3.為了觀察手掌上附著的微生物，某小組成員將自己的手掌在配制的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上輕輕按壓后，蓋上培養(yǎng)皿蓋，將平板倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h，結(jié)果如圖所示。下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是()A.配制的培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后，還要調(diào)節(jié)pH才能用于接種B.待高溫滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至50℃左右后，再進(jìn)行倒平板C.在超凈工作臺(tái)上和酒精燈火焰旁進(jìn)行操作，是為了防止雜菌污染D.手掌上的某些微生物在該培養(yǎng)基上并沒(méi)有生長(zhǎng)繁殖形成菌落答案A解析配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基時(shí)，先調(diào)節(jié)pH，再進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，A錯(cuò)誤；待高溫滅菌后的培養(yǎng)基冷卻至50℃左右后，再進(jìn)行倒平板，此溫度下培養(yǎng)基不燙手，便于后續(xù)操作，且培養(yǎng)基尚未凝固，容易倒出，B正確；超凈工作臺(tái)在使用前經(jīng)紫外線消毒，而酒精燈火焰附近存在一個(gè)無(wú)菌區(qū)，為了防止雜菌污染，要在超凈工作臺(tái)上和酒精燈火焰附近進(jìn)行操作，C正確；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基雖然營(yíng)養(yǎng)齊全，但并非所有微生物均可在其上生存，如病毒則無(wú)法在該培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖，D正確。4.(多選)下列關(guān)于稀釋涂布平板法和平板劃線法的操作，正確的是()A.兩次劃線之間灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種B.不同濃度的菌液經(jīng)涂布后均可在固體培養(yǎng)基表面形成單菌落C.在獲取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過(guò)火焰D.同一濃度的稀釋液應(yīng)至少涂布三個(gè)平板用來(lái)計(jì)數(shù)答案ACD解析兩次劃線之間灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使得下次劃線的菌種來(lái)自上次劃線的末端，A正確；若菌液濃度過(guò)大，形成的菌落就連在一起，則得不到單個(gè)的菌落，當(dāng)菌液稀釋度足夠高的情況下，菌液經(jīng)涂布后可在固體培養(yǎng)基表面形成單菌落，B錯(cuò)誤；在獲取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過(guò)火焰，進(jìn)行灼燒滅菌，目的是防止雜菌污染，C正確；同一濃度的稀釋液應(yīng)至少涂布三個(gè)平板，取平均值，以減小誤差，D正確。5.尿素是一種重要的氮肥，但是不能被農(nóng)作物直接吸收，只有被土壤中的細(xì)菌分解成氨后才能被植物利用。某實(shí)驗(yàn)小組要完成課題“從土壤中分離出能分解尿素的細(xì)菌”，回答下列問(wèn)題：(1)在該實(shí)驗(yàn)中，配制培養(yǎng)基需要以________為唯一氮源。該培養(yǎng)基中________(填“需要”或“不需要”)添加葡萄糖，原因是_________________________。若要驗(yàn)證該培養(yǎng)基具有選擇作用，需要設(shè)置________