乙型肝炎病毒微生物學(xué)及檢驗(yàn)課件

第二節(jié)乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒(HBV)

以肝臟炎性病變?yōu)橹鞯膫魅拘约膊?/p>

是乙型肝炎的病原體乙型肝炎全球分布全球HBV感染流行情況20億人曾感染HBV,占全球人口1/3慢性HBV感染者約3.5~4億，其中亞洲占2/3,中國(guó)占1/3全球60億人口15%~25%最終將死于與HBV有關(guān)肝病每年全球死亡75~100萬(wàn)例，占死因第7位LavanchyD.JViralHepatitis.2004;11:97-107

一生物學(xué)特性形態(tài)與基因結(jié)構(gòu)

嗜肝DNA病毒科正肝DNA病毒屬電鏡：3種形態(tài)

大球形顆粒小球形顆粒管型顆粒完整的HBV顆粒為大球形顆粒，又稱Dane顆粒，直徑42nm，分為包膜與核心兩部分，包膜HBsAg，核心部分含有環(huán)狀雙股DNA、DNA聚合酶、HBcAg和HBeAg等，是病毒復(fù)制的主體病毒衣殼成分：蛋白質(zhì)由殼粒組成。殼粒是衣殼的形態(tài)學(xué)亞單位，多肽分子是衣殼的化學(xué)亞單位功能保護(hù)病毒核酸參與感染過(guò)程具有抗原性3管形顆粒

成分與小球形顆粒相同，是由多個(gè)小球形顆粒串聯(lián)而成直徑22nm長(zhǎng)100—500nm無(wú)法復(fù)制基因組基因組長(zhǎng)約3.2kb，為部分雙鏈環(huán)狀DNApre-S1pre-S1蛋白pre-S2pre-S2蛋白SHBsAgpre-CHBeAgCHBcAgPDNAPXHBxAg

DNARNADNA轉(zhuǎn)錄逆轉(zhuǎn)錄

HBV的復(fù)制方式很特殊,在復(fù)制過(guò)程中有逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程,與逆轉(zhuǎn)錄病毒相似,逆轉(zhuǎn)錄后的DNA可整合至靶細(xì)胞的染色體

HBV的復(fù)制3、HBV的抗原組成表面抗原HBsAg外衣殼抗原前S1抗原前S2抗原內(nèi)衣殼抗原核心抗原HBcAge抗原HBeAg大球形顆粒形態(tài)（完整的病毒，具有傳染性）HBsAgHBcAgHBVDNADNAP<聚合酶》（外膜蛋白）（核衣殼蛋白）

（1）表面抗原曾用名“澳抗”出現(xiàn)時(shí)間：HBV感染后2—6個(gè)月由S基因碼產(chǎn)生的蛋白4個(gè)亞型adradwaywayr抗-HBs●出現(xiàn)時(shí)間：急性感染后期或HBsAg消失后（空白期或窗口期）●抗-HBs為保護(hù)性抗體（中和抗體）其出現(xiàn)標(biāo)志著HBV感染進(jìn)入恢復(fù)期●抗-HBs對(duì)相同HBsAg亞型的HBV再感染有免疫力，但對(duì)不同亞型的HBV保護(hù)力不完全?？笻Bc-IgG：凡“有過(guò)”HBV感染者均可陽(yáng)性HBcAg的免疫原性最強(qiáng)抗HBc-IgG可終身陽(yáng)性（3）e抗原為可溶性蛋白血清HBeAg陽(yáng)性者中，HBVDNA陽(yáng)性率為92%左右，是HBV復(fù)制和傳染的感染性標(biāo)志其抗體有利于抑制病毒復(fù)制，抗-HBe的出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低

4培養(yǎng)特性黑猩猩最敏感疫苗效價(jià)安全評(píng)價(jià)不能在細(xì)胞培養(yǎng)中分離培養(yǎng)

5抵抗力抵抗力強(qiáng)70%乙醇無(wú)法滅活HBV傳染性與抗原性不一致

二微生物學(xué)檢驗(yàn)標(biāo)本處理：

1.常規(guī)檢測(cè)：24小時(shí)分離5天內(nèi)2—8℃5天后—20℃/—70℃2.核酸檢測(cè)：血清（常用）血漿肝素抗凝X

6小時(shí)處理24小時(shí)按成保存—70℃HBVDNA：是HBV感染最直接，最靈敏和最特異的檢測(cè)指標(biāo)，且血清中HBVDNA的水平可作為治療方案與療效觀察的指標(biāo)。HBVDNA定量檢測(cè)

酶聯(lián)免疫法ELLSA

E固相抗體標(biāo)本（含抗原）酶標(biāo)抗體EE底物雙抗體夾心法檢測(cè)抗原（+）1、已知抗體包3、加酶標(biāo)抗體4、加酶作用的2、加待檢抗原4、加酶作用的洗滌洗滌洗滌洗滌1、已知抗體包2、加待檢物3、加酶標(biāo)抗體（-）YYYYYYEYEYEYYYYYYYYYYEYEYEYYYYYYYEYEYEYYYY洗滌洗滌雙抗體夾心法測(cè)抗原

EEE底物固相抗體標(biāo)本（含抗原）酶標(biāo)抗體雙位點(diǎn)一步法檢測(cè)抗原固相抗體標(biāo)本（含抗體）抗原酶標(biāo)抗體底物EEE競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)HBeAb乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的綜合評(píng)價(jià)

(1)(2)(3)(4)(5)常見(jiàn)模式及其意義

＋－＋－＋急性或慢性乙型肝炎，高傳染性＋－－－＋急性、慢性乙型肝炎或慢性HBsAg攜帶者＋－－＋＋急性乙肝趨向恢復(fù)或慢性乙肝，弱傳染性－＋－－＋急性HBV感染康復(fù)期或有既往感染史，有免疫力－－－＋＋乙肝恢復(fù)期，弱傳染性－－－－＋急性HBV感染“窗口期”，或既往曾感染過(guò)乙肝－＋－－－接種HBV疫苗或HBV感染后康復(fù)－＋－＋＋急性乙肝康復(fù)期，開(kāi)始產(chǎn)生免疫力－－－－－無(wú)HBV感染＋－－－－無(wú)癥狀攜帶者乙型肝炎病毒血清標(biāo)志物的綜合評(píng)價(jià)

(1)(2)(3)(4)(5)少見(jiàn)模式及其意義＋＋＋－＋不HBsAg亞型病毒的雙重感染

＋＋－－＋HBsAg亞型病毒的雙重感染

＋－＋＋＋乙肝趨向恢復(fù)1表面抗原HBsAg2表面抗體抗-HBs3e抗原HBeAg4e抗體抗-HBe5核心抗體抗-HBc

三臨床意義HBsAg無(wú)癥狀攜帶者主要傳染源潛伏期30—160天傳播方式1、輸血傳播2、性接觸傳播(同性戀)3、垂直傳播4、口-口傳播（唾液檢測(cè)HBV-DNA）5、靜脈藥癮，血液透析醫(yī)源性傳播輸血或注射器、血透機(jī)、內(nèi)窺鏡等消毒不嚴(yán)格乙肝垂直傳播主要途徑：圍產(chǎn)期（新生兒皮膚、粘膜有破損而接觸母血）和產(chǎn)后密切接觸經(jīng)胎盤(pán)及生殖細(xì)胞傳播：有可能垂直傳播是我國(guó)HBV感染的主要模式HBV感染的自然史急性HBV感染慢性HBV感染

成年期感染3~5%

嬰兒期感染>95%

肝硬化肝功能衰竭肝細(xì)胞癌

慢性乙型肝炎5年發(fā)生率12~25%5年發(fā)生率6~15%5年發(fā)生率20~23%肝移植AdaptedfromEASLConsensusStatement.JHepatol2003;3