葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定標準操作程序

葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定標準操作程序葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定標準操作程序葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定標準操作程序V:1.0精細整理，僅供參考葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定標準操作程序日期：20xx年X月葡萄球菌屬的常規(guī)鑒定標準操作程序1概述葡萄球菌屬是一類觸媒試驗陽性的革蘭陽性球菌，包括金黃色葡萄球菌，表面葡萄球菌、腐生葡萄球菌等32個種。是臨床最常見的化膿性球菌，廣泛分布于自然界中，在人體表面鼻、咽、腸道也經(jīng)常存在。2形態(tài)與染色革蘭陽性球菌，直徑~μ m成單、雙、短鏈或不規(guī)則狀排列。在液體培養(yǎng)基濃汁標本中，往往排列成雙或短鏈狀多數(shù)有鞭毛。3培養(yǎng)特性金黃色葡萄球菌在血瓊脂平板上典型菌落為金黃色，周圍有明顯的透明（β）溶血環(huán)，部分菌落呈橙色，在高鹽甘露醇平板上呈橙色菌落。表皮葡萄球菌等其他葡萄球菌在血瓊脂平板上菌落為白色或檸檬色，不溶血。4生化反應觸酶試驗陽性，多數(shù)能分解葡萄糖、麥蚜糖、蔗糖和甘露醇。不分解棉籽糖和水楊苷，液化明膠，血漿凝固酶和DNA酶實驗分陽性。5鑒別要點本菌屬特征：觸酶實驗陽性，革蘭陽性球菌，葡萄狀排列，菌落中等大小，中等干燥。與微球菌屬的鑒別：觸酶實驗都為陽性，但O∕F試驗葡萄球菌屬為發(fā)酵型，而微球菌為氧化型或無反應，而且菌體較葡萄菌屬更大，排列呈四聯(lián)狀為主。與鏈球菌屬的鑒別：葡萄球菌屬觸酶試驗都為陽性，而鏈球菌為陰性，O∕F試驗葡萄球菌屬為發(fā)酵型而鏈球菌為氧化型。凝固酶陽性葡萄球菌的鑒別見下表。 結合型凝游離型凝 鳥氨酸脫菌名 PYP試驗DNA試驗VP試驗 固酶試驗固酶試驗羧酶實驗金黃色葡萄球菌++-++-中間型葡萄球菌-+++--施氏葡萄球菌+-+++-路鄧葡萄球菌+-+-++注：“+”為90%以上菌株為陽性，“--”為90%以上菌株為陽性。凝固酶陽性葡萄球菌的鑒別見下表吡咯烷酮芳基新生霉素耐藥多黏菌素B耐菌名凝固因子脲酶甘露醇蔗糖酰胺酶（PYR）（5βg）藥300U紙片表面葡萄球菌——+—+-+腐生葡萄球菌——+V++—溶血葡萄球菌+——V+——人型葡萄球菌——+—+——華納葡萄球菌——+V + ——模仿葡萄球菌+—++ + ——頭狀葡萄球菌——V + + ——耳葡萄球菌V—— — V ——施氏葡萄球菌++— — — ——路鄧葡萄球菌+VV — +—V注：“+"為90%以上菌株為陽性，“—”為90%以上菌株為陰性。6細菌鑒定與藥物敏感試驗取平板上菌落直接涂片、革蘭染色并鏡檢，葡萄球菌為革蘭陽性球菌。呈單個、成雙或葡萄狀排列，菌體呈圓形。在血瓊脂平板上，成圓形、凸起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤德不透明菌落，可產生脂溶性色素，在血瓊脂平板上部分葡萄球菌表現(xiàn)為β溶血。觸酶試驗（3%過氧化氫試驗）陽性。發(fā)酵葡萄糖產酸。血漿凝固酶試驗（用混合德人血漿）。6.4.1試管法：檢測分泌型凝固酶：取1：4枸櫞酸鈉抗凝血漿，加入3~5個菌落，35℃培養(yǎng)箱4~6小時，觀察血漿有無凝固發(fā)生，凝固者為陽性，若陰性，繼續(xù)觀察6.4.2玻片法：檢測結合凝固酶，但要注意假陽性和假陰性的出現(xiàn)。取純化后的單個菌落，用Vitek2系統(tǒng)GPS藥敏卡進行細菌鑒定和藥敏試驗，如有必要加入做補充試驗。耐苯唑西林的金黃色葡萄球菌為MRSA，耐苯唑西林的凝固酶陰性葡萄球菌為MRSCN。也可選頭報西丁來檢測MRSA和MRSCN。7檢驗結果分析與報告金黃色葡萄球菌在任何標本中分離出都要及時鑒定報告，輸液管、人工植入組織分離的表皮葡萄球菌和尿液中的腐生葡萄球菌視為病原菌；凝固酶陰性感染鑒定到種；注意MRS的報告。根據(jù)NCCLS標準，如果該菌β-內酰胺酶陽性，則應報告該菌對所有的青霉素類、大多數(shù)一代頭孢菌素耐藥，治療時建議臨床醫(yī)師選擇含酶抑制的復合抗生素或對該酶穩(wěn)定的藥物；如該菌MRS陽性，則應報告該菌對所有β-內酰胺酶類抗生素（包括含抑酶劑復合劑）耐藥，要注意其他藥物的多重耐藥性。8臨床意義葡萄球菌屬在自然界分布很廣，大部分無致病性。金黃色葡萄球菌是最重要的治病性葡萄球菌，以金黃色葡萄球菌代表的致病性葡萄球