醫(yī)藥工業(yè)環(huán)境監(jiān)控

醫(yī)藥工業(yè)環(huán)境監(jiān)控吳國平1環(huán)境監(jiān)控

內容環(huán)境污染的控制環(huán)境監(jiān)控和評估警戒限度、糾偏限度的設置環(huán)境監(jiān)控的偏差處理趨勢分析微生物鑒定21.環(huán)境污染的控制環(huán)境污染

污染包括宏觀的污染（玻璃，金屬，塑料碎片）微觀的污染（微生物、塵埃微粒和過敏物質）4環(huán)境污染

污染導致產品不合格，可能會引起無法預料的后果從顧客角度考慮，污染就意味著降低產品的功效加重病人的病情或致病人死亡從公司角度考慮，污染就意味著一種低質量的產品顧客忠誠度下降召回5過程廠房公用設施設備人員文件規(guī)程物料產品環(huán)境控制要素

6污染源和污染因素

廠房：灰塵、細菌、非活性微粒公用設施：細菌、非活性微粒、碳氫化合物、氣溶膠設備：細菌、非活性微粒、難以清潔的位置過程：非無菌的接觸面、利于微生物生長的條件、氣溶膠、金屬碎片、纖維、玻璃和橡膠顆粒人：活性的和非活性的微粒(皮膚細胞、細菌)78污染類型舉例來源（舉例）處理方法（舉例）非活性（粒子）金屬斑點衣物纖維儀器人員衣物外部空氣供水懸浮粒子由高效過濾器過濾接觸部分清潔和滅菌純化水系統(tǒng)活性（微生物）細菌酵母，霉菌人員水外部空氣儀器工具輔料活性物質有限的無菌核心區(qū)干擾懸浮粒子由高效過濾器過濾溶液無菌過濾（0.2um）蒸汽滅菌或零件的輻射滅菌內毒素（通常與空氣中的細菌無關）來源于某種有機體細胞壁（經常水生的）潮濕的設備或更換零件，或暴露一段時間后的容器/密封容器加熱的苛性鈉溶液高溫（大于200C）時間視情況而定無菌生產過程的污染來源環(huán)境污染的控制

潔凈狀態(tài)的維持通常依靠以下幾類屏障高標準衛(wèi)生(消毒清潔、個人衛(wèi)生、潔凈區(qū)行為規(guī)范)潔凈室消毒清洗程序氣閘和更衣程序防護性著裝(頭罩、護目鏡、操作服、腳套、手套)HVAC系統(tǒng)9環(huán)境污染的控制

要達到潔凈區(qū)域有效環(huán)境控制，要求：合理的潔凈區(qū)域設計和設備選擇合理的操作流程和清潔/消毒/維護/監(jiān)控流程人員對SOP的嚴格執(zhí)行102.環(huán)境境監(jiān)監(jiān)控控和和評評估估環(huán)境境監(jiān)監(jiān)控控的的來來由由醫(yī)藥行業(yè)業(yè)的質量量要求醫(yī)藥行業(yè)業(yè)的高要要求：質量Quality安全Safety療效Efficacy建立合適適的環(huán)境境監(jiān)控體體系是達達到醫(yī)藥藥行業(yè)質質量高要要求的有有效保障障12環(huán)境監(jiān)控控一個良好好的環(huán)境境監(jiān)控體體系可執(zhí)行生產/IPC/QC/QA具有說服服力內部人員員/外部審計計結果有價價值13環(huán)境監(jiān)控控目的1說明過程程控制、、清潔消消毒程序序是否有有效，人人員操作作是否適適當通過趨勢勢分析，，在發(fā)生生偏差前前，及早早做出調調整確認潔凈凈區(qū)域的的環(huán)境，，是否達達到了藥藥品生產產的要求求。以確確保最終終產品的的的生物物、理化化特性都都不會受受到生產產環(huán)境的的影響14環(huán)境監(jiān)控控目的2合適的環(huán)環(huán)境監(jiān)控控程序應應能做到到，區(qū)分分正常原因因造成的環(huán)環(huán)境變化化，與非正常原原因造成環(huán)境境變化。。e.g.人員進出出潔凈區(qū)區(qū)域，因因開門關關門造成成壓差變變化因為非正正常原因因造成的的環(huán)境變變化，往往往源自自于機械械故障和和人員活活動造成成的污染染環(huán)境監(jiān)控控結果的的分析和和偏差調調查至關關重要15環(huán)境監(jiān)控控，包括括以下部部分:潔凈級別別劃分和和評估受控？何何級別？？何種活活動？環(huán)環(huán)境參數(shù)數(shù)？監(jiān)測測項目？？采樣計劃劃的設定定采樣數(shù)據(jù)的評評估發(fā)生偏差差后的修修正16環(huán)境監(jiān)控控區(qū)域的的概念17環(huán)境監(jiān)控區(qū)域無菌藥品非無菌藥品生物制品血液制品原料藥中藥制劑品控檢驗中國GMP附件1（2010年）的級別劃劃分潔凈級別靜態(tài)動態(tài)最大允許空氣懸浮粒子數(shù)（微粒數(shù)/m3）≥0.5μm≥5μm≥0.5μm≥5μmA352020352020B3520293520002900C3520002900352000029000D3,520,00029000不作規(guī)定不作規(guī)定18實行全面監(jiān)控控空氣潔凈度、、表面微生物物、人員衛(wèi)生生狀況分析和評價環(huán)環(huán)境凈化設施施總體運行狀狀況實行動態(tài)監(jiān)控控環(huán)境控制和評評估19定期進行再驗驗證定期進行趨勢勢分析制定警戒限度度和糾偏限度度及時處理異常?；虺薅冉Y果制定和實施系系統(tǒng)的環(huán)境監(jiān)監(jiān)測方案環(huán)境控制和評評估20-21-風險分析原則則基于對患者安安全性的考慮慮工藝對產品的的影響設施的特點環(huán)境控制和評評估21環(huán)境監(jiān)控計劃劃的建立建立環(huán)境監(jiān)控控計劃，包括括:采樣點位置和和數(shù)量的設定定(根據(jù)位置和用用途)監(jiān)測頻率(每日、每周、、月度、季度度)采樣類型、方方式(浮游菌、表面面樣/RODAC、棉簽法)警戒限限度和和糾偏偏限度度超警戒戒限度度和超超糾偏偏限度度的應應對流流程趨勢分分析微生物物鑒定定人員培培訓22環(huán)境監(jiān)監(jiān)測項項目潔凈區(qū)區(qū)域所所需要要進行行的環(huán)環(huán)境監(jiān)監(jiān)測項項目主主要包包括:懸浮粒粒子測測試沉降菌菌(定性監(jiān)監(jiān)測)浮游菌菌(定量監(jiān)監(jiān)測)表面微生生物溫度和濕濕度(房間)房間或者者區(qū)域間間的壓差差風速(層流臺、、生物安安全柜)23-24-監(jiān)測標準準GB/T16292/ISO14644-1監(jiān)測狀態(tài)靜態(tài)/動態(tài)/空態(tài)監(jiān)測時間間通常在在操作開開始前、、進行中中及結束束后三個個階段懸浮粒子子監(jiān)測24靜態(tài)和動動態(tài)取樣樣靜態(tài)情情況下下的采采樣:非活性性微粒?！獌H在廠廠房確確認時時活性微微?！獌H關鍵鍵表面面和人人員樣樣空氣流流——僅在廠廠房或或者設設備確確認時時動態(tài)情情況下下的采采樣:所有日日常監(jiān)監(jiān)控——非活性性和活活性微微粒25懸浮粒粒子取取樣位位置的的選擇擇潔凈區(qū)區(qū)（室室）空空氣懸懸浮粒粒子、、浮游游菌及及沉降降菌的的最少少取樣樣點數(shù)數(shù)GB/T16292-16294ISO14644-1空態(tài)或或靜態(tài)態(tài)測試試：懸懸浮粒粒子采采樣點點數(shù)目目及其其布置置應力力求均均勻，，并不不得少少于最最少采采樣點點數(shù)目目動態(tài)測測試：：懸浮浮粒子子采樣樣點數(shù)數(shù)目及及其布布置應應根據(jù)據(jù)產品品的生生產及及工藝藝關鍵鍵操作作區(qū)設設置26懸浮粒粒子監(jiān)監(jiān)測的的頻率率A級區(qū)的的監(jiān)測測頻率率和采采樣量量應能能檢出對對環(huán)境境的所所有干干擾檢出瞬瞬時的的事件件和任任何系系統(tǒng)的的損壞壞并在超超過警警戒限限度時時啟動動報警警。在灌裝裝時，，由于產產品本本身也也能產產生粒粒子和和霧滴滴，證證明≥≥5.0um的塵粒粒始終終達標標可能能并不不現(xiàn)實實，這這是可可以接接受建議在在B級區(qū)域域采用用相似似的監(jiān)監(jiān)測系系統(tǒng)，，采樣樣頻率率可以以降低低。應按照照質量量風險險管理理原則則，對對C級和D級區(qū)進進行動動態(tài)監(jiān)監(jiān)控。。應根根據(jù)所所從事事操作作的性性質來來確定定監(jiān)控控要求求以及及警戒戒/糾偏措措施限限度，，但應應能達達到建建議的的“自自凈時時間””。27沉降菌菌測試試屬于被被動式式取樣樣法，，對空空氣環(huán)環(huán)境破破壞小小空氣浮浮游菌菌測試試屬于主動式取取樣法法表面微微生物物監(jiān)測測接觸碟碟取樣樣拭子取取樣微生物物監(jiān)測測28微生物物取樣樣點數(shù)數(shù)和位位置的的確定定微生物物監(jiān)測測的采采樣點點設置置一般般會考考慮但但不局局限于于以下下影響響因素素：驗證的的數(shù)據(jù)據(jù)生產工工藝的的風險險程度度(開放式式/封閉式式生產產過程程)氣流形形式區(qū)域中中的活活動級級別/潔凈級級別采樣對對生產產過程程的影影響人員干干預的的程度度人員和和物料料的流流通形形式取樣具具有代代表性性，同同時避避免污污染29培養(yǎng)基基和培培養(yǎng)條條件必必須具具有廣廣譜性性廣譜培養(yǎng)基基TSA或NA專用于于酵母母菌和和霉菌菌分離離生長長的特特定培培養(yǎng)基基表面面監(jiān)監(jiān)測測用用培培養(yǎng)養(yǎng)基基中中的的添添加加劑劑30～35℃℃，48～72小時時+20～25℃℃，5～7天在20～25℃℃和30～35℃℃下下均均需需培培養(yǎng)養(yǎng)不不少少于于72小小時時。。不不能能確確定定微微生生物物種種類類時時，，可可將將同同一一塊塊平平板板放放置置在在兩兩個個溫溫度度下下培培養(yǎng)養(yǎng)，，并并且且采采用用先先高高溫溫后后低低溫溫的的做做法法培養(yǎng)養(yǎng)條條件件30微生生物物環(huán)環(huán)境境監(jiān)監(jiān)測測頻頻率率(無菌菌制制劑劑)31監(jiān)測區(qū)域取樣頻率潔凈室/RABS關鍵區(qū)域(ISO5或更高級別)浮游菌每生產班次均監(jiān)測表面樣生產結束時與關鍵區(qū)域鄰近的無菌區(qū)域所有監(jiān)測項目每生產班次均監(jiān)測其他非相鄰的無菌區(qū)域所有監(jiān)測項目每天1次隔離器關鍵區(qū)域(ISO5或更高級別)浮游菌每天1次表面樣每個campaign生產結束時隔離器外非無菌區(qū)域所有監(jiān)測項目每月1次微生生物物環(huán)環(huán)境境監(jiān)監(jiān)測測頻頻率率非無無菌菌制制劑劑32劑型取樣頻率口服固體制劑，如壓制片、充粉或充液膠囊劑每3個月一次口服液體制劑每月1次局部用藥，如洗劑、軟膏劑、乳膏劑、直腸栓劑每月1次陰道栓劑每周1次鼻用噴霧劑每周1次吸入性氣霧劑或溶液每天1次-33-根據(jù)據(jù)其其產產品品或或工工藝藝的的特特性性來來自自行行設設置置溫溫濕濕度度的的限限度度，，并并制制定定監(jiān)監(jiān)測測的的頻頻率率溫濕濕度度33-34-潔凈凈區(qū)區(qū)與與非非潔潔凈凈區(qū)區(qū)之之間間、、不不同同級級別別潔潔凈凈區(qū)區(qū)之之間間的的壓壓差差應應不不低低于于10Pa應在在壓壓差差十十分分重重要要的的相相鄰鄰級級別別區(qū)區(qū)之之間間安安裝裝壓壓差差表表壓差差數(shù)數(shù)據(jù)據(jù)應應定定期期記記錄錄或或者者歸歸入入有有關關文文檔檔中中壓差差34警戒戒限限度度和和糾糾偏偏限限度度(微生生物物監(jiān)監(jiān)測測)用以以幫幫助助監(jiān)監(jiān)控控和和趨趨勢勢分分析析，，起起到到警警告告和和控控制制的的作作用用需要根據(jù)區(qū)域域、級別的不不同，而設置置不同的警戒戒限度和糾偏偏限度限度的設置應應基于歷史數(shù)數(shù)據(jù)的回顧，，并定期回顧顧35初始設置當沒有歷史數(shù)數(shù)據(jù)，或者歷歷史數(shù)據(jù)不足足以分析得到到警戒限度和和糾偏限度的的時候，可設設置：糾偏限度使用用法規(guī)規(guī)定值值，警戒限度度設定為糾偏偏限度的一定定百分比，e.g.1/2糾偏限度和警警戒限度設定定為法規(guī)規(guī)定定值的一定百百分比(e.g.50%和30%)36基于已有數(shù)據(jù)據(jù)的設置確定用于計算算限度的數(shù)據(jù)據(jù)(如有)，可以使用下下列方法：對于新的或者者有重大修改改的系統(tǒng)，在在計算限度前前，應收集至至少6個月的數(shù)據(jù)對于已有的設設施，應使用用12個月甚至更長長時間的歷史史數(shù)據(jù)剔除所有超過過糾偏限度的的數(shù)據(jù)將數(shù)據(jù)根據(jù)區(qū)區(qū)域、級別進進行分組(環(huán)境、水系統(tǒng)統(tǒng))剔除設施非正正常狀態(tài)下采采集的數(shù)據(jù)取樣錯誤/不合適的技術術/斷電/HVAC失敗37設置的常用方方法警戒限度和糾糾偏限度的設設置常用的方方法有：平均值與標準準偏差百分比質量控制圖38平均值與標準準偏差警戒限度：平平均值+2*標準偏差糾偏限度：平平均值+3*標準偏差39正態(tài)分布負指數(shù)分布泊松分布百分比將樣本數(shù)據(jù)，，從大到小，，降序排列k=n––(p*n)k：樣本序列號號；p：百分比；n：樣品數(shù)量找到k樣本序列號對對應的結果，，作為限度值值警戒限度=n–(0.95*n)糾偏限度=n-(0.99*n)40環(huán)境監(jiān)控常用用的控制圖單值控制圖(Individualscharts)不合格品數(shù)控控制圖(c-charts)修正的控制圖圖(Modified)41環(huán)境監(jiān)控偏差差處理的基本本原則超警戒限度和和超糾偏限度度后所采取的的偏差處理流流程，應在受受控的文件中中做出規(guī)定任何超糾偏限限度的偏差，，應進行徹底底和詳細的調調查環(huán)境監(jiān)控警戒戒限度和糾偏偏限度，并不不是產品的規(guī)規(guī)格值環(huán)境監(jiān)控數(shù)據(jù)據(jù)，應作為無無菌產品批次次放行的評估估依據(jù)，但不不應該作為判判斷產品無菌菌性的直接檢檢測標準42環(huán)境監(jiān)控偏差差的處理靜態(tài)條件(rest/staticcondition)下進行額外取取樣，可能會會有助于鑒別別污染的來源源如有可能，超超糾偏限度的的情況下，發(fā)發(fā)現(xiàn)的微生物物都應該鑒定定至種水平若超警戒限度度，可以使用用革蘭氏染色色等形態(tài)學鑒鑒別方法對發(fā)發(fā)現(xiàn)的微生物物進行分類43偏差原因的調調查導致環(huán)境偏差差的原因取樣和分析錯錯誤人員操操作不不規(guī)范范屏障措措施(Barrier)失效清潔和和消毒毒限度設設置不不適當當廠房設設計缺缺陷44趨勢分分析環(huán)境監(jiān)監(jiān)控的的結果果，需需要由由合格格的人人員，，在規(guī)規(guī)定的的周期期進行行總結結，以以確認認系統(tǒng)統(tǒng)/過程是是否處處于合合適的的控制制狀態(tài)態(tài)下目的：：確認系系統(tǒng)/過程是是否處處于合合適的的控制制狀態(tài)態(tài)當發(fā)生生偏差差時，，有助助于形形成糾糾偏措措施和和/或預防防措施施45趨勢分分析需要進進行趨趨勢分分析的的數(shù)據(jù)據(jù)包括括：空氣樣樣(沉降菌菌/浮游菌菌/懸浮粒粒子)表面樣樣人員樣樣產品直直接接接觸的的壓縮縮空氣氣水系統(tǒng)統(tǒng)(生物載載荷/TOC/電導率率/內毒素素)壓差/溫度/濕度微生物物鑒定定46趨勢分析析趨勢分析析至少需需要4個數(shù)據(jù)點點為了確認認區(qū)域/設備是運運行于控控制范圍圍內，應應在規(guī)定定的時間間間隔下下進行趨趨勢分析析。基于于質量風風險控制制的原則則，設置置趨勢分分析的頻頻率、需需要進行行評估的的數(shù)據(jù)的的范圍若出現(xiàn)持持續(xù)偏差差于普通通數(shù)據(jù)水水平的情情況，則則說明出出現(xiàn)了不不利趨勢勢adversetrend(AT)。應進行行偏差調調查，這這些情況況包括：：警戒限度度下陽性性結果數(shù)數(shù)量的增增加某區(qū)域中中超警戒戒限度或或者超糾糾偏限度度監(jiān)控結結果數(shù)量量的增加加47監(jiān)測頻率趨勢分析頻率連續(xù)監(jiān)控系統(tǒng)連續(xù)(定期復核)每天、每半周或者每周每月每兩周或者每月每季度每季度每年每六個月每兩年48監(jiān)測頻率率和趨勢勢分析頻頻率趨勢分析析示例49趨勢分析析示例50CompareItem比較項目Year20112011年Year20122012年3rdQuarter第三季度4thQuarter第四季度1stQuarter第一季度SettlingPlateMonitoring沉降平板監(jiān)控QtyofSitesfoundwithmicroorganism發(fā)現(xiàn)有微生物生長的取樣點數(shù)111Times/percentofmicroorganismdetected微生物檢出次數(shù)/百分比7/26.92%6/25.00%7/35.00%OOS超標000AirsamplerMonitoring空氣取樣器監(jiān)控QtyofSitesfoundwithmicroorganism發(fā)現(xiàn)有微生物生長的取樣點數(shù)111Times/percentofmicroorganismdetected微生物檢出次數(shù)/百分比8/30.77%8/33.33%7/35.00%OOS超標000RodacTest表面監(jiān)控QtyofSitesfoundwithmicroorganism發(fā)現(xiàn)有微生物生長的取樣點數(shù)112Times/percentofmicroorganismdetected微生物檢出次數(shù)/百分比1/2.56%2/5.56%3/9.1%OOS超標000受訓范圍圍應包括括工作于于環(huán)境控控制區(qū)內內的所有有人員包括生產產操作人人員、環(huán)環(huán)境監(jiān)測測人員、、現(xiàn)場維維修人員員培訓內容容GMP培訓，SOP培訓無菌工藝藝的基本本原理，，基礎知知識培訓訓生產和操操作程序序與產品品污染的的相關性性無菌操作作技術，，潔凈室室行為基本無菌菌操作技技術更衣驗證證人員培訓訓513.微生物鑒鑒定微生物鑒鑒定微生物鑒鑒定是潔潔凈區(qū)域域控制的的一個重重要手段段，卻往往往在日日常工作作中容易易被忽視視53微生物鑒鑒定目的1潔凈區(qū)域域是一個個人工制制造的環(huán)環(huán)境，它它建立在在：對進入該該區(qū)域的的人員以以及物料料控制對清潔消消毒措施施的嚴格格執(zhí)行54微生物鑒鑒定目的2通過微生生物鑒定定，可以以幫助我我們：了解潔凈凈區(qū)域中中的微生生物，也也就能夠夠使用合合適的方方法控制制和限制制這個區(qū)區(qū)域中的的微生物物，在產產品污染染發(fā)生前前就能采采取合適適的糾正正措施排除生產環(huán)環(huán)境中的致致病菌用于偏差調調查和趨勢勢分析55微生物鑒定定應與具體使使用情況相相結合，例例如：無菌關鍵區(qū)區(qū)域，鑒定定至種水平平，甚至株株水平在非無菌區(qū)區(qū)域，鑒定定至屬水平平，甚至只只需革蘭氏氏染色大部分的微微生物鑒定定都是基于革革蘭氏染色色56微生物鑒定定示例來源鑒定水平A/B/C級區(qū)域沉降、浮游、表面樣所有分離微生物鑒定至種水平人員樣WFI成品和原料(微生物限度測試)無菌測試純化水超警戒限度，鑒定至種/屬水平清潔驗證排除控制菌和目標菌D級區(qū)域沉降、浮游、表面樣超糾偏限度時，革蘭氏染色分類飲用水57微生物鑒定定微生物鑒定定的步驟分離純化記錄菌落形形態(tài)特征革蘭氏染色色顯微鏡觀察察細胞形態(tài)態(tài)基本的生化化反應(若需要)使用微生物物鑒定試劑劑盒或者鑒鑒定系統(tǒng)進進行鑒定判讀和記錄錄鑒定結果果58表型性狀類別特性菌落特性菌落形態(tài)、顏色、大小、產色素單個微生物細胞形態(tài)、大小、革蘭氏染色情況、有否芽孢生理學特性生長溫度、pH范圍、是否厭氧生化特性利用的碳源、是否發(fā)酵抑制特性耐受膽鹽、抗生素敏感性血清學特性凝集反應化學分類微生物毒素59微生物鑒定定基于微生物物表型性狀狀的微生物物鑒定系統(tǒng)統(tǒng)：API、Vitek、Crystal、Biolog基于基因技技術的微生生物鑒定系系統(tǒng)：QualiconRiboprinter/Diversilabs/MicroSEQ60微生物鑒定定選擇用于環(huán)環(huán)境監(jiān)控樣樣品分析的的微生物鑒鑒定系統(tǒng)：：監(jiān)控區(qū)域的的級別與產產品的類型型樣品數(shù)量費用分析員維護61微生物鑒定定數(shù)據(jù)的應應用微生物鑒定定數(shù)據(jù)應用用的難點：：復雜，無法法用統(tǒng)計學學工具分析析，對分析析者的要求求高對其意義的的認知缺乏乏系統(tǒng)性定期回顧匯匯總直觀地了解解潔凈區(qū)域域中微生物物的組成62潔凈區(qū)域中中的微生物物組成分類發(fā)現(xiàn)概率革蘭氏陽性球菌75-90%產芽孢、革蘭氏陽性桿菌10–25%革蘭氏陽性桿菌氧化酶陽性、革蘭氏陰性桿菌(非發(fā)酵)氧化酶陰性、革蘭氏陰性桿菌(發(fā)酵)酵母菌1-2%霉菌63微生物鑒定定數(shù)據(jù)回顧顧A級區(qū)域B級區(qū)域人員樣Gram+球菌(Staphylococcusaureus)81%(5%)77%(10%)87%(6%)產芽孢、革蘭氏陽性桿菌6%3%4%非產芽孢、革蘭氏陽性桿菌8%12%3%氧化酶陽性、革蘭氏陰性桿菌5%8%6%氧化酶陰性、革蘭氏陰性桿菌<1%<1%<1%酵母菌0%0%0%霉菌0%0%0%64微生物鑒定定數(shù)據(jù)的應應用當潔凈區(qū)域域中微生物物的組成發(fā)發(fā)生明顯變變化的時候候，可能是是某種污染染源沒有得得到有效控控制，或者者發(fā)生了偏偏差作為各種消毒毒劑的選擇、、消毒程序的的開發(fā)、清潔潔驗證、偏差差調查等的背背景資料654.培養(yǎng)基模擬灌灌裝內容培養(yǎng)基灌裝目目標試驗設計頻率和灌裝批批次灌裝時間/灌灌裝量灌裝速度/環(huán)環(huán)境條件/培培養(yǎng)基灌裝樣品的培培養(yǎng)和檢查培養(yǎng)基灌裝評評價/可接受受標準/總結結報告陽性結果的調調查/培養(yǎng)基基灌裝實驗的的常見缺陷劑型舉例最差條件討論論培養(yǎng)基灌裝目目標對無菌工藝進進行驗證，并并確保有能力力進行無菌產產品生產。To“detectflawsorweaknesses,whichmaynotbenormallyobservable””andtomakecorrectionsinordertoeliminateroutesofcontamination發(fā)現(xiàn)通常不能能發(fā)現(xiàn)的缺陷陷或薄弱環(huán)節(jié)節(jié)，并進行改改進以消除污污染途徑[Noble,P.,PDAJournalofPharmaceuticalScienceandTechnology,July/August2001.]“Mediafillsshouldnotbeusedtojustifypracticesthatposeunnecessarycontaminationrisks.””–FDAcGMPAsepticProcessing培養(yǎng)基模擬灌灌裝不得用于于證明那些可可能帶來不必必要污染風險險的操作的合合理性。－－FDAcGMP無菌菌工藝指南試驗設計盡可能的模擬擬實際生產過過程包含和正常生生產中出現(xiàn)污污染相同的風風險因素體現(xiàn)生產中可可能出現(xiàn)的最最壞情況：流流程、生產環(huán)環(huán)境與操作者者培養(yǎng)基灌裝試試驗中所進行行模擬的條件件和活動的原原則應明確定定義頻率率和和批批次次數(shù)數(shù)在生生產產線線首首次次確確認認中中，，應應至至少少成成功功地地進進行行3個個連連續(xù)續(xù)的的獨獨立立批批次次灌灌裝裝此后后，，每每條條灌灌裝裝線線應應每每半半年年進進行行一一次次確確認認，，來來評評估估無無菌菌工工藝藝的的受受控控狀狀態(tài)態(tài)當數(shù)據(jù)顯顯示工藝藝過程可可能不受受控時：：如果培養(yǎng)養(yǎng)基灌裝裝失敗的的調查發(fā)發(fā)現(xiàn)原因因明確：：進行糾糾正并重重新進行行(基于于調查的的結果重重復1-3批））如果調查查結果沒沒有確定定原因：：對可能能的原因因進行糾糾正并進進行3批批模擬灌灌裝灌裝量通常，合合理的初初始灌裝裝批量范范圍是5000-10000瓶。當當實際生生產批量量小于5000時，每每批培養(yǎng)養(yǎng)基灌裝裝數(shù)量應應與實際際批量相相同根據(jù)工藝藝設計的的情況，，當污染染的可能能性比較較高時（（例如：：手工操操作密集集的灌裝裝線），，通常應應灌裝更更大數(shù)量量，一般般采用全全生產批批量或接接近生產產批量。。灌裝體積積每只容器器的灌裝裝體積不不少于總總容積的的1/3同樣，灌灌裝體積積也不宜宜過大既要考慮慮到瓶倒倒轉或旋旋轉時，，培養(yǎng)基基能充分分接觸到到容器和和密封件件的內表表面，又又要保證證容器內內有足夠夠的氧氣氣支持微微生物生生長。灌裝量（（續(xù)）灌裝的數(shù)數(shù)量應足足夠用來來能準確確模擬生生產中有有代表性性的活動動。這些些活動應應包括以以下方面面但不局局限于這這些：設備安裝裝和生產產中的無無菌操作作干預：類類型和適適宜的次次數(shù)典型/常規(guī)規(guī)操作非典型/非常常規(guī)操作作人數(shù)班次更換換額外更衣衣多日灌裝裝灌裝時間間所持續(xù)的的時間應應證明是是合理的的應足夠長長，用于于對過程程，環(huán)境境和操作作人員進進行挑戰(zhàn)戰(zhàn)和考驗驗包含所有有必需的的操作和和干預考慮實際際的生產產工藝手工操作作密集的的工藝：：整個灌灌裝周期期長生產周周期：其其它方法法可以被被接受，，如采用捆綁綁方法，，培養(yǎng)基基灌裝在在多個生生產批結結束后進進行間歇地進進行培養(yǎng)養(yǎng)基灌裝裝，時間間跨度覆覆蓋生產產全過程程灌裝速度度和環(huán)境境條件灌裝速度度培養(yǎng)基灌灌裝程序序應該充充分考慮慮到實際際生產中中灌裝速速度的范范圍環(huán)境條件件培養(yǎng)基灌灌裝試驗驗的條件件應能充充分代表表實際的的生產情情況在某種程程度上，，SOP中允許許更苛刻刻的條件件（例如如：最多多人員數(shù)數(shù)和增加加活動車車程度）），這些些應該包包括在內內。培養(yǎng)基通常，使使用大豆豆酪蛋白白消化培培養(yǎng)基。。特殊情情況下，，應考慮慮采用厭厭氧培養(yǎng)養(yǎng)基（例例如：硫硫乙醇酸酸鹽培養(yǎng)養(yǎng)基）選擇使用用的培養(yǎng)養(yǎng)基應被被證明能能有利于于革蘭氏氏陽性和和革蘭氏氏陰性細細菌、酵酵母菌、、霉菌（（例如：：藥典指指示菌）），以及及環(huán)境中中分離出出來的微微生物的的生長灌裝樣品品的培養(yǎng)養(yǎng)和檢查查溫度應適適合環(huán)境境菌的生生長任何時候候不能超超出20-35oC培養(yǎng)溫度度可以維維持在目目標溫度度的+2.5oC范圍圍內培養(yǎng)時間間：14天（1個溫度度或2個個溫度））FDA-20-35℃，目標值值±2.5℃，，不少于于14天天；如選選擇兩個個溫度，，則每一一溫度下下至少培培養(yǎng)7天天，從低低溫開始始。PIC-20-25℃下下至少14天，，或，先先20-25℃℃下7天天，然然后30-35℃下7天。目檢人員員應接受受陽性瓶瓶檢查的的培訓培養(yǎng)基灌灌裝評價價去除培養(yǎng)養(yǎng)基灌裝裝樣品的的標準:培養(yǎng)基灌裝中中的干預活動動應模擬實際際商業(yè)批生產產的情況。在在批生產記錄錄中應記錄，，并詳細說明明關于去除培培養(yǎng)基灌裝樣樣品的數(shù)量。。培養(yǎng)基灌裝試試驗的每一次次干預必須在在書面SOP中有詳細描描述，包括干干預類型和去去除的培養(yǎng)基基灌裝樣品數(shù)數(shù)量培養(yǎng)基灌裝批批記錄應記錄錄所有進行的的干預以及去去除的灌裝樣樣品數(shù)量灌裝樣品數(shù)量量的清點和物物料平衡：完完整（密閉））和非完整的的樣品培養(yǎng)所有完整整的樣品（包包括存在外觀觀缺陷）可接受標準目標是零污染染任何污染樣品品都顯示了潛潛在的無菌保保證問題。所所有污染樣品品都要進行全全面的、書面面的調查。培養(yǎng)基灌裝實實驗應建立推推薦的可接受受標準培養(yǎng)基灌裝實實驗中，單條條灌裝線反復復出現(xiàn)污染事事件，不管可可接受標準是是多少，都是是應采取行動動的信號。陽性結果的調調查(一)調查的范圍應應包括環(huán)境微生物監(jiān)監(jiān)測數(shù)據(jù)，空空氣懸浮粒子子監(jiān)測數(shù)據(jù)CIP設備，，清潔、消毒毒程序的執(zhí)行行情況培養(yǎng)基、設備備和零件的滅滅菌工藝，滅滅菌釜的校正正情況高效過濾器檢檢測(空氣氣懸浮粒子水水平，過濾器器檢漏，風速速測量，密封封系統(tǒng)檢查，，使用年限等等)除菌過濾器完完整性房間氣流型式式與壓差人員操作技術術培訓情況陽性結果的調調查(二)調查的范圍還還應包括以往產品無菌菌檢查實驗結結果人員衛(wèi)生狀況況監(jiān)測數(shù)據(jù)培養(yǎng)基灌裝實實驗中的干預預方式分析該區(qū)域近期是是否有過維修修活動，生產產線的改造情情況該生產線培養(yǎng)養(yǎng)基灌封實驗驗歷史數(shù)據(jù)已滅菌物品的的儲存條件培養(yǎng)基灌封過過程中的異常常事件陽性污染菌與與環(huán)境監(jiān)測污污染菌的鑒別別陽性結果的調調查(三)調查結論與風風險評估培養(yǎng)基灌封實實驗結果有效效暫停生產，直直至確定污染染來源并采取取有效的糾偏偏措施。再驗證合格后后，產品方可可放行。對培養(yǎng)基灌封封實驗后和此此前所生產的的產品，進行行風險評估培養(yǎng)基灌封實實驗結果無效效→重新進行行培養(yǎng)基灌封封實驗條件1無菌灌裝區(qū)的的物理條件不不滿足要求條件2人員未按照正正常生產程序序操作總結報告最終報告中應應包括以下內內容模擬的最差條條件事件清單環(huán)境監(jiān)測結果果微生物鑒別結結果培養(yǎng)基的營養(yǎng)養(yǎng)檢查實驗結結果培養(yǎng)條件、結結果讀取日、、結果讀取人人、每位參與與者的灌裝瓶瓶數(shù)等信息。。結論（結果是是否可以接受受）合格證書工藝驗證/再驗證合格證證書人員資格確認認證書培養(yǎng)基灌裝實實驗的常見缺缺陷在最佳條件下下進行試驗在培養(yǎng)過程中中或結束后剔剔除灌裝樣品品灌裝樣品沒有有進行物料平平衡失敗調查不恰恰當凍干制劑對培培養(yǎng)基灌封的的要求凍干制劑的典典型生產流程程配制→灌裝→→凍干→加塞塞→軋蓋第一種方式，，模擬裝載/卸載過程，縮縮短放置時間間（首選）容器內灌封好好培養(yǎng)基，以以半壓塞狀態(tài)態(tài)裝入凍干機機凍干機內部分分抽真空（500mbar），在室溫放放置一定的時時間，不得冷冷凍。用無菌空氣破破真空（不使使用惰性氣體體），全壓塞塞軋蓋缺點:真空度不能過過高，不能造造成培養(yǎng)基沸沸騰。注意，若所使使用的容器透透明度不高，，應將內容物物倒出進行檢檢查。凍干制劑培養(yǎng)養(yǎng)基灌封試驗驗的特殊性對產品在凍干干機內放置步步驟的模擬凍干制劑對培培養(yǎng)基灌封的的要求第二種方式，，模擬凍干時時間半壓塞產品在在凍干機腔室室內的放置時時間同于正常常工藝。缺點：耗時長長第三種方式，，以經稀釋的的培養(yǎng)基模擬擬凍干過程容器內灌封好好經稀釋的培培養(yǎng)基，以半半壓塞狀態(tài)裝裝入凍干機模擬凍干過程程，直到容器器內的培養(yǎng)基基大致達到正正常濃度為止止。缺點：耗時長長，需開發(fā)特特殊的凍干程程序，營養(yǎng)支支持性不均一一，影響微生生物的存活力力。粉針劑對培養(yǎng)養(yǎng)基灌封的要要求第一種方法在灌裝線上直直接灌裝液體體培養(yǎng)基，灌灌裝后壓塞-軋蓋或熔封封。第二種方法先灌裝干粉培培養(yǎng)基，再加加入注射用水水第三種方法先灌裝惰性劑劑，再加入液液體培養(yǎng)基要點采用第二、三三種方法時，，所用惰性劑劑或干粉培養(yǎng)養(yǎng)基需事先經經過輻射滅菌菌。常用惰性劑有有聚乙二醇8000、羧羧甲基纖維素素、乳糖。混懸劑/半固固體制劑對培培養(yǎng)基灌封的的要求懸浮劑需要模擬攪拌拌或循環(huán)流動動的過程。如果有無菌添添加過程，也也應進行模擬擬。半固體制劑需要將液體培培養(yǎng)基增稠到到適當粘度。?？蛇x用瓊脂或或羧甲基纖維維素作為增稠稠劑，也可選選用其它試劑劑，但要證明明其沒有抑制制細菌或真菌菌的作用。在培養(yǎng)結束后后，需將培養(yǎng)養(yǎng)基從塑料或或金屬管中擠擠出檢查其混混濁度和真菌菌菌落，也可可進行無菌檢檢查實驗。如果選擇顯色色培養(yǎng)基遇到到污染物變色色的方法，則則需要對其進進行驗證。最差條件的設設計（1）儲存時間灌封設備、灌灌封部件、儲儲罐、無菌物物料、藥液在在實際灌封前前能夠放置的的最長時間1.灌封設設備、灌封部部件、儲罐、、無菌物料需需要再滅菌(除菌)的時時間間隔最差條件:用超出出保存時間間的灌封設設備、灌封封部件、儲儲罐、無菌菌物料參與與培養(yǎng)基灌灌封2.產品品從無菌過過濾到灌封封加塞完成成所需要的的時間最差條件：：無菌過濾濾后存放在在儲罐內的的培養(yǎng)基模模擬實際生生產時產品品的最大儲儲存時間后后再灌封產品在灌裝裝后的儲存存時間應在在培養(yǎng)基灌灌封中驗證證最差條件的的設計（2）灌封的持續(xù)續(xù)時間最保守的設設計：在培培養(yǎng)基灌封封試驗中，，模擬用時時最長的瓶瓶子滿批量量生產所需需要的時間間，其中包包括正常的的干擾時間間（換班、、設備維修修）。其他的設計計：1.在生產產完成后接接著進行培培養(yǎng)基灌封封實驗2.為了減減少灌封瓶瓶數(shù)，在每每批實驗剛剛開始及結結束前均