瘧原蟲鏡檢血片的制作與染色課件

瘧原蟲鏡檢血片

的制作與染色1.材料(1)載玻片：玻片使用前應(yīng)清洗。新玻片應(yīng)先浸入有液態(tài)洗滌劑的清水中10~20分鐘，然后用干凈棉巾逐個(gè)擦拭，再用清水沖洗干凈，涼干，最后用干凈、柔軟的棉巾將玻片擦亮。已用過的玻片應(yīng)先浸泡于洗滌劑溶液中1~2天，或浸泡于煮沸的5％肥皂水中1~2小時(shí)，再移到新配置的洗滌劑溶液中1~2小時(shí)，逐個(gè)擦去玻片上舊的血膜痕跡，用清水漂洗干凈，再將玻片擦干擦亮。洗凈的玻片每10~20張用白紙包好放入塑料袋內(nèi)，保存于干燥環(huán)境中備用。(2)采血針：使用一次性釆血針。(3)玻片盒：(4)75％乙醇棉球：用于采血前后的消毒。(5)標(biāo)簽記號筆：用于玻片上書寫號碼。血涂片的制作

2.采血部位及取血方法采血部位以耳垂較為合適，也可在手指末端采血，嬰兒可從拇趾或足跟取血。先用75％乙醇棉球消毒取血部位后，以一次性采血針迅速刺入取血部位1~2mm深，然后用左手大拇指、食指和右手中指協(xié)同擠出血滴。3.涂制厚血膜

取玻片2張，1張作載片，1張作推片（具有光滑邊緣）。用右手拇指和食指夾持推片側(cè)緣中部，用推片的左下角刮取血液4~5μl，再用該端中部刮取血液1~1.5μl。將左下角的血滴涂于載片的中央偏右處，由里向外劃圈涂成直徑為0.8~1cm的圓形厚血膜（厚度以1個(gè)油鏡視野內(nèi)可見到5~10個(gè)白細(xì)胞為宜）。厚血膜的位置，位于玻片右1/3處。厚血膜外觀：圓形厚薄均勻，無劃痕。過厚易于脫落，過薄達(dá)不到檢出率的要求。4.推制薄血膜用干棉球抹凈玻片角上的血漬，然后將推片下緣平抵載玻片的中線，當(dāng)血液在載玻片與推片之間向兩側(cè)擴(kuò)展至約2cm寬時(shí)，使兩玻片保持25~35°角，從右向左迅速向前推成舌狀薄血膜，厚度應(yīng)以紅細(xì)胞之間互相接觸而不相互重疊為佳。薄血膜外觀：舌狀厚薄均勻，無劃痕。位置：位于玻片1/2～1/3處。5.厚、薄血膜的位置

每張載玻片上可做1個(gè)薄血膜和1個(gè)厚血膜，如圖5.染色前血膜的保存血膜制成后，立即將受檢者號碼寫在玻片上，血膜朝下插入直豎的標(biāo)本盒內(nèi)，讓血膜自然干燥后才能染色。血膜放置時(shí)間，夏天不宜超過48小時(shí)，冬天不宜超過72小時(shí)，否則厚血膜會自然固定而不能溶血，影響鏡檢。不能及時(shí)染色的血膜，可先用甲醇固定薄血膜，將厚血膜溶血，晾干后包好，放入干燥器中，置于冰箱內(nèi)保存。臨用時(shí)，將干燥器放置室溫中1~2小時(shí)后取出血片。

2.染色用水

常用的染液的稀釋用水和染色的沖洗用水，是中性的蒸餾水或經(jīng)煮沸過濾的冷開水，也可用井水、河水、泉水或雨水。為了使血膜著色較好，應(yīng)用pH7.0～7.2水效果最佳?？膳渲凭彌_液用于染液的稀釋和染色后的沖洗。配制pH6.6~7.4緩沖液時(shí)，先制備好兩種貯備液。貯備液Ⅰ為每1000ml蒸餾水含9.5g磷酸氫二鈉，貯備液Ⅱ?yàn)槊?000ml蒸餾水含9.07g磷酸二氫鉀。配制pH6.6~7.4的緩沖液時(shí)，將兩種貯備液按一定比例混合后，用蒸餾水稀釋成各種濃度的溶液。血片制作和染色質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)好血片制作質(zhì)量:

厚血膜：血量4.0～5.0ul,位置玻片右1／3稍偏右,直徑0.8～1.0cm，外觀圓形厚膜均勻。薄血膜：血量1.5～2.0ul，位置玻片1／2～1／3處，外觀舌狀厚薄均勻；染色質(zhì)量外觀蘭紫色；清潔度外觀光潔無油灰。

理想的染色結(jié)果是紅細(xì)胞為淡紅或淡紫紅色，瘧原蟲的胞質(zhì)呈藍(lán)色，核為紫紅色，瘧色素為棕褐色。2.推制薄血膜3.固定薄血膜5.稀釋染液及染色6.漂洗制作血膜的注意事項(xiàng)

1.剛涂制的血膜要平放，注意防塵、防蟲。厚血膜未干前勿使血片傾斜，以免血膜傾向一側(cè)，造成血膜厚薄不均，厚處不易溶血和著色而影響檢查結(jié)果；晾干血膜時(shí)應(yīng)注意防塵、防止蒼蠅、蟑螂等昆蟲吮吸血膜；干后應(yīng)及時(shí)裝入標(biāo)本盒并蓋嚴(yán)。2.血膜應(yīng)自然干燥。切忌在毒太陽下曬或火烤，干透后才能用甲醇固定薄血膜。夏天標(biāo)本盡可能24-48h內(nèi)固定染色；冬天也不能超過72h。放置時(shí)間越久，厚血膜越不易溶血，染色效果也差。若不能及時(shí)染色，薄血膜宜先用甲醇固定（1-3分鐘）然后用過濾清水對厚血膜溶血，晾干固定后裝入盒內(nèi)蓋嚴(yán)，待以后染色。3.厚血膜干燥時(shí)不要加熱，加熱會使原蟲變形，影響鏡檢結(jié)果。4.使用前載玻片一定要清潔，不然會影響血片制作和鏡檢結(jié)果。5.配置母液時(shí)過濾可除去雜質(zhì)顆粒，有助于提高鏡檢質(zhì)量。6.固定薄血膜時(shí)不要將甲醇觸碰到厚血膜。7.沖洗染液時(shí)，不要沖走厚血膜。影響血膜染色質(zhì)量的因素血片染色好壞，除與玻片的清潔程度、血膜制作的質(zhì)量和染色技術(shù)等有關(guān)外，還與下列因素有關(guān):(1)染劑和溶劑的質(zhì)量：染料、甲醇和甘油如不純，常使配成的染液偏酸或偏堿，影響染色效果。因此，必須用分析純的甲醇和中性甘油，配制時(shí)所用器具必須干凈無水。新配制的染液應(yīng)先試染，以酸堿度最適宜的水稀釋，觀察染色是否理想，否則需重新制備染液。(2)染液的新舊：新配制的染液，一般染色力較弱，且常呈堿性。染液放置時(shí)間稍長，染色力逐漸增加，故應(yīng)在染色前1~2周先將染液制備好。盛染液的瓶子應(yīng)密封，以免影響染液質(zhì)量。(3)染液的稀釋濃度：染液濃度高，著色快，各種細(xì)胞著色深，薛氏點(diǎn)、茂氏點(diǎn)等粗大顯著；染液濃度低，著色慢，但各種細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)著色均勻、清晰，如環(huán)狀體、子孢子及瘧色素等顏色分明，但薛氏點(diǎn)、茂氏點(diǎn)不夠清楚。染液稀釋后，一般在半小時(shí)內(nèi)使用，時(shí)間太長也會影響染色效果。吉姆薩（Giemsa）染液由天青、伊紅組成。染料中天青是堿性的,伊紅是酸性的。染色的原理是基于在酸性染料中具有染色作用的陰離子和細(xì)胞內(nèi)的堿性物質(zhì)相結(jié)合，而堿性染料中的陽離子和細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)相結(jié)合，所以酸性的細(xì)胞成分被堿性染料所染色，而堿性的細(xì)胞組分則被酸性染料染色。嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞