實驗四 細(xì)胞顯微操作技術(shù)課件_第1頁
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文檔簡介

一、目的要求練習(xí)針刺細(xì)胞（未受精卵、去核卵、早期胚胎細(xì)胞或體外培養(yǎng)細(xì)胞）；學(xué)習(xí)微吸管制備；了解顯微移植技術(shù)（細(xì)胞核、外源基因）二、原理采用顯微操作系統(tǒng)（倒置顯微鏡/體視顯微鏡+顯微操作器）將供體物（基因、細(xì)胞核或細(xì)胞其他成分）直接注入宿主細(xì)胞（去核卵母細(xì)胞、胚胎細(xì)胞或體外培養(yǎng)的細(xì)胞）中，研究供體物的功能或者獲得轉(zhuǎn)基因動物的技術(shù)。實驗四細(xì)胞顯微操作技術(shù)利用顯微操作系統(tǒng)將外源目的基因（DNA或RNA）直接注入到受體細(xì)胞或受精卵的核中，使外源基因整合到受體細(xì)胞的基因組內(nèi)，培養(yǎng)/篩選，獲得轉(zhuǎn)基因動物/性狀分析；顯微注射是目前轉(zhuǎn)基因效率較好的一種轉(zhuǎn)基因方法，可直接用不含有原核載體DNA片段的外源基因進行轉(zhuǎn)移；外源基因的長度不受限制,可達100kb；實驗周期相對比較短。它的不足之處是：需要昂貴精密的設(shè)備；顯微注射操作復(fù)雜；導(dǎo)入外源基因整合位點和拷貝數(shù)無法控制；常導(dǎo)致插入位點附近宿主DNA片段缺失、重組等突變，可造成動物嚴(yán)重的生理缺陷。外源基因?qū)耄ɑ虺聊?、過表達、轉(zhuǎn)基因動物）三、實驗材料斑馬魚

Daniosp.胚胎2-cell4-cell8-cell主要儀器和用具倒置顯微鏡；顯微操作儀；拉針儀主要試劑酚紅/曙紅四、顯微注射操作過程

注射針制備注射針內(nèi)裝液使用無菌的微量加樣器從微注射針的后部加入待注射樣品；注射針安裝和定位（1）將裝液后的針頭游離端安在連接器上，然后旋緊連接器以固定針頭，再將其固定到微操作儀的托針管上；（2）把載有待注射樣本的培養(yǎng)皿放在顯微鏡載物臺上，用低倍物鏡對準(zhǔn)細(xì)胞調(diào)焦；（3）顯微鏡下使用微操作儀移動注射針，直到針頭的陰影在視野的中心上方；（4）使用工作用放大倍數(shù)，調(diào)準(zhǔn)焦距，找到細(xì)胞和針尖。顯微注射（1）使針尖對準(zhǔn)細(xì)胞的待注射部位（細(xì)胞與針尖在同一焦面上），旋轉(zhuǎn)推進旋鈕，針刺入細(xì)胞內(nèi)（卵膜、細(xì)胞膜、核膜）；（2）旋轉(zhuǎn)加樣旋鈕，將樣本加入，并離開細(xì)胞。注射作業(yè)簡述細(xì)胞顯微

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