海藻糖含量檢測試劑盒說明書-可見分光光度法UPLC-MS-4112

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可見分光光度法UPLC-MS-411250T/48S試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體50mL×1瓶2-8℃保存試劑一粉劑×2瓶2-8℃保存標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×1支2-8℃保存溶液的配制：1、標(biāo)準(zhǔn)品：10mg海藻糖。臨用前加1mL蒸餾水，溶液濃度為10mg/mL，2-8℃保存兩周；218mL32mL2-8℃海藻糖存在于大量有機(jī)體中，包括細(xì)菌、藻類、酵母、植物、昆蟲和其他無脊椎動物。由于海藻糖具有獨特的不同于其他碳水化合物的生物學(xué)特性，能在干旱、高溫、脫水、冷凍、高滲透壓及毒性物質(zhì)等惡劣環(huán)境下保護(hù)生物體細(xì)胞蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、核酸等組分不受損害。﹑﹑測定。Trehalose+H2SO4+Anthrone FurfuralDerivatives（620nm）最低檢出限：0.0016mg/mL線性范圍：0.003125-0.1mg/mL注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。1mL一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）15001mL200w31030次45min3~58000g10min20.1g1mL3~58000g，常溫離心10min，取上清。3、血清（漿）的處理：吸取約100μL血清（漿），加入0.9mL提取液，充分混勻，室溫靜置45min，振蕩3~5次，冷卻后，8000g，常溫離心10min，取上清。二、測定步驟1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至620nm，蒸餾水調(diào)零。2、調(diào)節(jié)水浴鍋至95℃。3、標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：將標(biāo)準(zhǔn)品用蒸餾水稀釋到0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0mg/mL。4、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋表序號蒸餾水體積（μL）稀釋后濃度（mg/mL）11015013501215005000.130.15005000.0540.055005000.02550.0255005000.012560.01255005000.0062570.006255005000.0031258-05000（即空白管）實驗中每個標(biāo)準(zhǔn)管需0.25mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。50.25mL1mLEP10min（1mL620nmAΔA=A-A（x，gLAyA60.25mL1mLEP95℃10min（1mL620nm處測吸光值A(chǔ)。三、海藻糖含量計算1、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將ΔA測定（y，A測定）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。2、按樣本質(zhì)量計算：(mg/g)=3(mg/mg4海藻糖含量(μg/104cell)=（1000×V1×x）÷(500×V1÷V2)=2x5、按血清（漿）體積含量計算：海藻糖含量（mg/mL）＝(V1×x)÷(V3×V1÷V2)=10x1000：單位換算系數(shù)，1mg/mL=1000μg/mL；V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25mL；V2：