乙酸激酶（ACK）活性檢測試劑盒說明書-紫外分光光度法UPLC-MS-4334

電話：400-998-2324郵箱：service_uplc_ms@163.com網址：本產品僅供科學研究使用！請勿用于臨床、診斷、食品、化妝品檢測等用途！-上海液質檢測技術有限公司第第頁乙酸激酶（ACK）活性檢測試劑盒說明書注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。貨號：UPLC-MS-4334規(guī)格：50T/48S

紫外分光光度法產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系工作人員。試劑名稱規(guī)格保存條件提取液液體50mL×1瓶4℃保存試劑一液體30mL×1瓶4℃保存試劑二粉劑×1瓶4℃保存試劑三粉劑×2瓶-20℃保存試劑四粉劑×2瓶-20℃保存試劑五粉劑×1支-20℃保存試劑六液體95μL×1瓶4℃保存試劑七液體110μL×1瓶-20℃保存試劑八粉劑×1瓶4℃保存試劑九粉劑×1支4℃保存溶液的配制：1、提取液：臨用前將試劑九加入到提取液中，并于4℃保存；2、試劑二：臨用前每瓶加入4mL雙蒸水，充分溶解待用。用不完的試劑仍4℃保存；33mL雙蒸水，充分溶解待用；用不完的試劑-20℃保存；42mL雙蒸水，充分溶解待用；用不完的試劑-20℃保存；51mL雙蒸水，充分溶解待用；用不完的試劑-20℃保存；6EP43:457（V:V）備用，現用現配；7EP現用現配；8、試劑八：臨用前加入5mL雙蒸水，充分溶解待用。用不完的試劑仍4℃保存；9、工作液：吸取0.3mL試劑二、1mL試劑三、0.65mL試劑四、0.2mL試劑五、0.2mL試劑六、0.2mL試劑七、1mL試劑八混勻，也可根據比例現用現配，于冰上備用。產品說明：ACK廣泛存在于生物體內，催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP，是細菌碳代謝和能量代謝的關鍵酶，尤其是在古細菌甲烷合成代謝中起著中樞作用。催化乙酸鈉和ATP生成乙酰磷酸和ADP，（2）丙酮酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙酮酸，（3）乳酸脫氫酶催化丙酮酸和NADH生成乳酸和NAD+，（4）在340nm下測定NADH氧化生成NAD+速率，即可反映ACK活性。注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。需自備的儀器和用品：臺式離心機、紫外分光光度計、水浴鍋、1mL石英比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰、蒸餾水。操作步驟：一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）1、細菌或細胞處理：5001mL細胞（20%31030次，15000g，4℃20分鐘，取上清，置冰上待測。2、組織處理：0.1g1mL提取液進行冰浴勻漿；15000g，4℃203、血清（漿）：直接檢測。二、測定步驟1、紫外分光光度計預熱30min以上，調節(jié)波長至340nm，蒸餾水調零。2、將試劑一于37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）保溫15min。3、操作表：試劑名稱測定管空白管蒸餾水（μL）-100試劑一（μL）545545工作液（μL）355355樣本（μL）100-1mL340nm20秒時的初始吸37℃（哺乳動物25℃（其它物種3迅速取出比色皿并擦干，340nm320A2ΔA測定=A1-A2，ΔA空白=A1-A2ΔA=ΔA測定-ΔA空白。三、ACK活力計算按樣本蛋白濃度計算：單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。ACK（U/mgprot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V樣)÷T=536×ΔA÷Cpr按樣本質量計算：單位的定義：每g組織每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。ACK（U/g質量）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V提取×W)÷T=536×ΔA÷W按細菌或細胞數量計算：單位的定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。ACK（U/104cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣÷V提取×500)÷T=1.072×ΔA按血清體積計算：單位的定義：每mL血清（漿）中消耗1nmol的NADH定義為一個酶活力單位。ACK（U/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=536×ΔAV樣本質量，g；500：細菌或細胞總數，500萬；109：單位換算系數，1mol=109nmol。注意事項：1、測定過程中樣本和所有試劑在冰上放置，以免變性和失活。2、比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾