腫瘤生物治療進展課件培訓講義

腫瘤生物治療進展課件腫瘤生物治療進展課件1（優(yōu)選）腫瘤生物治療進展課件（優(yōu)選）腫瘤生物治療進展課件21894,WilliamB.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣泛擴散的肉瘤患者，其腫瘤部位發(fā)生鏈球菌感染腫瘤完全消退是否是由于鏈球菌感染而導致腫瘤消退呢？January12,1862–April16,1936Astory1894,WilliamB.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣3Coley采取了大膽的行動!注射活的鏈球菌治療沒有治愈希望的、不能手術的肉瘤患者腫瘤完全消退!Coley采取了大膽的行動!注射活的鏈球菌治療沒有治愈希望4滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對1000患者治療，約40%的到明顯的治療效果Coley與他的女兒Dr.HelenColeyNauts利用細菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!!!Coley是腫瘤生物治療的鼻祖滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對10005現(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準干擾素上市。抗病毒抗腫瘤現(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國食品藥品監(jiān)督管理局（FD6腫瘤的發(fā)生癌基因突變/抑癌基因缺失或基因表達調(diào)控失常，腫瘤細胞的信號通路與正常細胞的信號通路存在一定的差異。腫瘤的發(fā)生7

生物治療借助腫瘤細胞與正常細胞之間的差異，以核酸、蛋白、細胞和小分子化合物為治療介質(zhì)，以腫瘤特異性信號通路為主要作用靶點，發(fā)展腫瘤選擇性強、毒副反應低、高治療指數(shù)的治療技術和藥物。生物治療借助腫瘤細胞與正常細胞之間的差異，以核酸、蛋8有足夠的臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見的腫瘤，而且能延長腫瘤患者的生存期，改善預后。這種治療水平保障了生物治療成為繼手術、放療、化療之后的第四種腫瘤治療策略。有足夠的臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見的腫瘤，而且9CTL機體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機制為維持TIL的存活，誘導腫瘤消失②細胞癌變過程中使原本不表達的基因被激活；對細胞殘片及病原體進行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細胞或其它免疫細胞，令其對病原體作出反應。1986年,Rosenberg及其同事應用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉移。TLR配體已經(jīng)通過多種途徑應用Coley采取了大膽的行動!巨噬細胞腫瘤浸潤的淋巴細胞(TIL)抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)大規(guī)模培養(yǎng)臨床應用NK細胞系與LAK細胞相比，CIK細胞的增殖能力和細胞毒活性更強；CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細胞，單核細胞、巨噬細胞和DC細胞對所需細胞進行擴增培養(yǎng)已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種遇到抗原后,成為活化的淋巴細胞,并進一步分化為全功能的淋巴細胞,即效應淋巴細胞?？贵w改變腫瘤細胞的粘附特性CpGB,中度IFNα誘導劑,增強抗原特異性免疫應答;激活補體系統(tǒng)溶解腫瘤細胞二、生物治療技術和藥物分類目前已用于臨床的生物治療技術和藥物主要包括細胞因子單克隆抗體免疫效應細胞免疫刺激劑基因藥物和免疫毒素作用于特定分子靶點的非細胞毒性小分子藥物CTL二、生物治療技術和藥物分類目前已用于臨床的生物治療技術10三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細菌：結核菌葡萄球菌真菌病毒：流感脊髓灰質(zhì)炎寄生蟲：絳蟲瘧原蟲蠕蟲攻擊防御三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細菌：真菌病毒：寄生蟲：攻擊防御11免疫系統(tǒng)人體的防御體系清除細菌、病毒、外來異物；消除體內(nèi)衰老細胞以及發(fā)生突變的細胞(有的突變細胞會變成癌細胞)。對于健康的人來說，其免疫系統(tǒng)的強大足以及時清除突變的癌細胞。免疫系統(tǒng)人體的防御體系清除細菌、病毒、外來異物；12NK細胞被認為是抗腫瘤免疫的關鍵效應細胞IL-2(100~500IU/ml)NK細胞是機體早期抗病毒的重要成員活化的NK細胞釋放大量細胞因子,如IFN,TNF/,GMCSF,IL12。吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細胞LAKsTLR配體已經(jīng)通過多種途徑應用⑤某些基因產(chǎn)物尤其是信號轉導分子的過度表達；（1）CTL殺傷靶細胞的機制Coley,紐約外科醫(yī)生1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈對所需細胞進行擴增培養(yǎng)細胞因子介導的腫瘤抑制作用:5×105/ml)×25ml/bag在人類,TLR9主要表達于B細胞和pDCsCpGODN可直接和間接活化NK、T和B細胞，單核細胞、巨噬細胞和DC細胞無功能活性---初始淋巴細胞在抗腫瘤免疫中，巨噬細胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細胞的特異性免疫應答。是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。許多腫瘤細胞也表達，并利用TLRs利用多種策略促進自身的增殖與生存:（1）CTL殺傷靶細胞的機制消除體內(nèi)衰老細胞以及發(fā)生突變的細胞(有的突變細胞會變成癌細胞)。機體免疫系統(tǒng)和癌細胞相互作用的結果決定了癌癥的最終演變。清除期平衡期逃逸期NK細胞被認為是抗腫瘤免疫的關鍵效應細胞機體免疫系統(tǒng)和癌細胞13對于癌癥病人來說，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識別、殺滅癌癥細胞;另一方面，癌癥細胞的大量增殖會進一步抑患者的免疫功能，而且癌癥細胞有多種機制來逃脫免疫細胞的識別與殺傷。對于癌癥病人來說，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識別、殺滅141.什么是免疫？我們生存在一個充滿復雜感染源的、敵對的世界里，我們的機體可以利用許多機制來防御外來微生物的侵襲，保護機體健康，這種防御能力被稱為免疫。1.什么是免疫？15免疫的類型天然免疫反應先天就具備的對某種病原體的免疫力,具有遺傳性，是機體抵御病原體侵襲的第一道防線；獲得性免疫反應后天獲得、具有針對性、具有免疫記憶性。免疫的類型天然免疫反應先天就具備的對某種病原體的免疫力,具有162.免疫系統(tǒng)的組成免疫器官骨髓、胸腺、脾臟、淋巴結、扁桃體、小腸集合淋巴結、闌尾等；免疫組織消化道、

呼吸道粘膜內(nèi)存在的許多無被膜的淋巴組織；免疫細胞淋巴細胞、單核吞噬細胞等免疫分子補體、免疫球蛋白、細胞因子等2.免疫系統(tǒng)的組成173.免疫系統(tǒng)分布3.免疫系統(tǒng)分布18免疫系統(tǒng)功能功能生理性(有利)病理性(不利)免疫防御防御病原微生物侵害超敏反應/免疫缺陷免疫自穩(wěn)清除損傷或衰老的細胞自身免疫病免疫監(jiān)視清除復制錯誤/突變細胞細胞癌變/持續(xù)感染免疫系統(tǒng)功能功能生理性(有利)病理性(不利)免疫防御防御194.發(fā)揮免疫應答的成員？免疫細胞免疫分子4.發(fā)揮免疫應答的成員？免疫細胞20天然免疫系統(tǒng)肥大細胞、單核/巨噬細胞、中性/嗜堿性粒細胞、樹突狀細胞、自然殺傷細胞；特異性免疫細胞T細胞、B細胞天然免疫系統(tǒng)21對細胞殘片及病原體進行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細胞或其它免疫細胞，令其對病原體作出反應。在抗腫瘤免疫中，巨噬細胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細胞的特異性免疫應答。作為清道夫細胞清除機體死亡細胞和細胞碎片。巨噬細胞（M）對細胞殘片及病原體進行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細胞22在不同組織中其名稱不同細胞名稱位置肺泡巨噬細胞肺泡組織細胞結締組織庫佛氏細胞肝神經(jīng)膠質(zhì)細胞神經(jīng)組織上皮樣細胞肉芽腫蝕骨細胞骨竇內(nèi)皮細胞脾系膜細胞腎在不同組織中其名稱不同細胞名稱位置肺泡巨噬細胞肺泡組織細胞結23粒細胞:中性粒細胞-吞噬并殺滅病原微生物；嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞-抵抗寄生蟲，與過敏反應有關。顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細胞活化時釋放并殺滅病原體。粒細胞:顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細胞活化時釋放并殺滅24DC細胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細胞初始T細胞活化的T細胞DC是天然免疫和獲得性免疫應答之間的橋梁

樹突狀細胞(DC)DC細胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細胞初始T細胞活化的T細胞25天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應答之間的橋梁

天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應答之間的橋26淋巴細胞:

TBNK獲得性免疫天然免疫淋巴細胞:

TBNK獲得性免疫天然免疫27紅細胞淋巴細胞:小,無特征HE染色電鏡觀察無功能活性---初始淋巴細胞

遇到抗原后,成為活化的淋巴細胞,并進一步分化為全功能的淋巴細胞,即效應淋巴細胞。

紅細胞淋巴細胞:小,無特征HE染色電鏡觀察無功能活性--28B淋巴細胞(B細胞)T淋巴細胞(T細胞)B-細胞受體(BCR)抗體-免疫球蛋白膜型免疫球蛋白T-細胞受體(TCR)殺傷活化調(diào)節(jié)獲得性免疫細胞記憶性T細胞記憶性B細胞B淋巴細胞(B細胞)T淋巴細胞(T細胞)B-細胞29活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細胞---CD8+T細胞輔助性T細胞為其它細胞的活化和功能提供必須的信號---CD4+T細胞調(diào)節(jié)性T細胞抑制其它淋巴細胞的活性并協(xié)助控制免疫應答效應性T細胞調(diào)節(jié)殺傷活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細胞---CD8+T細胞輔助性30自然殺傷細胞

（Naturalkillercells，NK）形態(tài)比T、B細胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細胞系。是天然免疫的重要成員,在獲得性免疫應答之前對控制病毒感染非常重要；在外周血單個核細胞中占10%15%，淋巴結和組織中較少。自然殺傷細胞

（Naturalkillercells，N31不表達抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。不表達抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。32NK細胞是機體早期抗病毒的重要成員NK細胞是機體早期抗病毒的重要成員33四、抗腫瘤免疫機制免疫細胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？四、抗腫瘤免疫機制免疫細胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？34免疫系統(tǒng)識別“自我”與“非我”腫瘤細胞表達腫瘤抗原免疫系統(tǒng)識別“自我”與“非我”351.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原(TSA):僅在腫瘤細胞上表達;腫瘤相關性抗原(TAA):在某些腫瘤細胞上表達，也在某些正常細胞上表達。泛指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中新出現(xiàn)或過度表達的抗原物質(zhì)。1.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原(TSA):僅在腫瘤細36機體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機制為①基因突變；②細胞癌變過程中使原本不表達的基因被激活；③抗原合成過程的某些環(huán)節(jié)發(fā)生異常（如糖基化異常導致蛋白質(zhì)特殊降解產(chǎn)物的產(chǎn)生）；④胚胎時期抗原或分化抗原的異常、異位表達；⑤某些基因產(chǎn)物尤其是信號轉導分子的過度表達；⑥外源性基因（如病毒基因）的表達。機體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機制為①基因突變；371．感應階段：

1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈2）T細胞對抗原的識別2.反應階段3.效應階段2.獲得性細胞免疫應答的基本過程1．感應階段：2.反應階段3.效應階段2.獲得性細胞免疫應38APC感應階段反應階段效應階段抗原遞呈細胞CD8+TAPC感應階段反應階段效應階段抗原遞呈細胞CD8+T39抗原遞呈功能MHC限制性APCAPC抗原遞呈功能APCAPC40B細胞漿細胞（產(chǎn)生抗體）T細胞細胞毒性T細胞（CTL）輔助性T細胞(Th)感染部位滯留在淋巴組織中活化B細胞骨髓產(chǎn)生抗體釋放到血液中效應細胞B細胞漿細胞（產(chǎn)生抗體）T細胞細胞毒性T細胞（CTL）輔助41CTL細胞介導的免疫應答可直接殺傷腫瘤細胞;Th細胞可以活化免疫系統(tǒng)的其它成分，在控制具有免疫原性腫瘤細胞的生長中起重要的作用。CTL細胞介導的免疫應答可直接殺傷腫瘤細胞;42（1）CTL殺傷靶細胞的機制靶細胞CTL循環(huán)凋亡解離CTL胞外分泌顆粒CTL與靶細胞結合CTL細胞質(zhì)重排（1）CTL殺傷靶細胞的機制靶細胞CTL循環(huán)凋亡解離CTL胞43(2)體液免疫體液免疫為B細胞介導的免疫，B細胞受抗原刺激后活化、增殖、分化，形成漿細胞并分泌抗體，由于主要是血清或血漿中的抗體發(fā)揮免疫效應，故稱為體液免疫。(2)體液免疫體液免疫為B細胞介導的免疫，B細胞受抗原刺激后44許多腫瘤細胞也表達TLREX-Vivo10serum-freemedia+形態(tài)比T、B細胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細胞系。不表達抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。TLR激動劑直接用作抗腫瘤藥物是一把“雙刃劍”篩選分離不同細胞進行培養(yǎng)對所需細胞進行擴增培養(yǎng)在抗腫瘤免疫中，巨噬細胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細胞的特異性免疫應答。YT,NK-YS,HANK-1,NK-92,NKL,KHYG-1，NKG其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈HPV-相關的皮膚惡性腫瘤(淺表性基底細胞癌sBCC),III期臨床研究表明組織學清除率為79–82%；2%humanlow-toxicityABserum預防復發(fā)和轉移，根治腫瘤；2%);CD3?CD56+NK細胞含量小(～2%)，培養(yǎng)14天時，37.EBV-positive是一類模式識別受體，能夠識別微生物的特異性成分和某些宿主分子，構成防御很多病原體的第一道防線，在天然免疫系統(tǒng)中起著決定性的作用。三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。清除淋巴細胞，減少與TIL競爭細胞因子,如IL-7和IL-15;遇到抗原后,成為活化的淋巴細胞,并進一步分化為全功能的淋巴細胞,即效應淋巴細胞。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解?？贵w的抗腫瘤機制?許多腫瘤細胞也表達TLR抗體的抗腫瘤機制?45A.激活補體系統(tǒng)溶解腫瘤細胞A.激活補體系統(tǒng)溶解腫瘤細胞46跨膜孔道跨膜孔道47B.抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)B.抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)48C.抗體的調(diào)理作用腫瘤細胞巨噬細胞抗體與腫瘤細胞表面的相應抗原結合溶酶體被調(diào)理的腫瘤細胞結合到M的FcR上，并被M吞噬形成吞噬體吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細胞抗體C.抗體的調(diào)理作用腫瘤細胞巨噬細胞抗體與腫瘤細胞表面的相應49D.抗體的封閉作用細胞惡變后其表面可過表達某些受體，這些受體與其相應的配體結合后可刺激腫瘤細胞生長。針對這些受體的抗體可通過封閉腫瘤細胞表面的受體阻礙其功能，從而抑制腫瘤細胞的增殖。D.抗體的封閉作用50CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細胞，單核細胞、巨噬細胞和DC細胞有20項臨床試驗在進行,Imiquimod有做疫苗佐劑的臨床試驗有10項。細胞惡變后其表面可過表達某些受體，這些受體與其相應的配體結合后可刺激腫瘤細胞生長。此外，TLR連接天然免疫與獲得性免疫。M還可通過ADCC殺傷腫瘤細胞7%為CD3+CD8+CD56+的自然殺傷T(NKT)細胞，是CIK中最強的細胞毒性細胞。Coley采取了大膽的行動!EX-Vivo10serum-freemedia+1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈干擾素(IFN)抑制細胞增生，引起多種腫瘤細胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉移，是巨噬細胞主要的活化因子。1986年,Rosenberg及其同事應用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉移。利用細菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!!!抗體與腫瘤細胞膜表面的抗原結合后，可干擾腫瘤細胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細胞的生長和轉移。CTL細胞介導的免疫應答可直接殺傷腫瘤細胞;RPMI1640medium通過產(chǎn)生各種免疫抑制因子抑制免疫應答，促進細胞增殖和腫瘤血管形成,誘導產(chǎn)生細胞保護和抗凋亡因子。PlatesorFlasksLAK細胞是細胞毒性效應淋巴細胞，其細胞毒活性不受MHC限制，能夠殺傷原代腫瘤細胞和NK抵抗的腫瘤細胞系,在功能上與NK細胞不同。誘導I型IFNs的產(chǎn)生腫瘤患者體內(nèi)難于產(chǎn)生對腫瘤應答的T細胞,甚至在體外最佳條件下也難于大規(guī)模培養(yǎng)。直徑大于2cm的活檢腫瘤組織，剪碎，培養(yǎng)基中E.抗體改變腫瘤細胞的粘附特性抗體與腫瘤細胞膜表面的抗原結合后，可干擾腫瘤細胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細胞的生長和轉移。CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細胞，單核細胞、巨噬51抗腫瘤抗體雖然能夠通過上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認為，體液免疫在抗腫瘤免疫中只處于從屬地位。細胞免疫在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用抗腫瘤抗體雖然能夠通過上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認為，體液523.天然免疫應答（1）自然殺傷細胞（NK）NK是機體重要的免疫細胞，對于抗腫瘤、抗病毒感染非常重要。3.天然免疫應答（1）自然殺傷細胞（NK）53NK細胞抗腫瘤機制A.釋放毒性顆粒:NK細胞含有毒性酶，穿孔蛋白-穿孔素，穿透細胞膜并誘導細胞凋亡。NK靶細胞NK細胞抗腫瘤機制A.釋放毒性顆粒:NK細胞含有毒性酶，穿54B.細胞因子介導的腫瘤抑制作用:活化的NK細胞釋放大量細胞因子,如IFN,TNF/,GMCSF,IL12。干擾素(IFN)抑制細胞增生，引起多種腫瘤細胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉移，是巨噬細胞主要的活化因子。B.細胞因子介導的腫瘤抑制作用:55C.抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用(ADCC)C.抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用(ADCC)56（2）巨噬細胞（M)活化的M與腫瘤細胞結合后通過溶酶體酶等直接殺傷腫瘤細胞；（2）巨噬細胞（M)活化的M與腫瘤細胞結合后通過溶酶57五、過繼性免疫效應細胞治療鑒定TIL殺傷腫瘤的活性干擾素(IFN)抑制細胞增生，引起多種腫瘤細胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉移，是巨噬細胞主要的活化因子。吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細胞CpGC,兼具CpGA和CpGB的免疫刺激能力。對于健康的人來說，其免疫系統(tǒng)的強大足以及時清除突變的癌細胞。免疫細胞在體外處理，可繞過腫瘤患者體內(nèi)免疫障礙的種種機制。④胚胎時期抗原或分化抗原的異常、異位表達；活化具有殺傷活性的mDC亞群的活化。其中CD3+CD56+T和CD3?CD56+NK細胞發(fā)揮細胞殺傷作用。大規(guī)模培養(yǎng)臨床應用NK細胞系Coley,紐約外科醫(yī)生IL-2(100~500IU/ml)滯留在淋巴組織中活化B細胞癌變前的光線性角化病治療。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。TLR3,4,7/8和TLR9激動劑被列入美國國立癌癥研究所（NCI）免疫治療腫瘤藥物，具有強大的抗腫瘤潛力。JBiomedicineandBiotechnology,2011嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞-抵抗寄生蟲，與過敏反應有關。EBV-positive不表達抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。活化的M還可分泌TNF、NO等細胞毒性因子而間接殺傷腫瘤細胞；抗原遞呈作用殺傷腫瘤分泌細胞因子IL-1IL-6TNF-IL-8GM-CSF酶溶菌酶酸性水解酶賴氨酸酶酯酶膠原蛋白酶彈性纖維蛋白酶前列腺素補體成分纖維蛋白結合蛋白凝血因子其它因子五、過繼性免疫效應細胞治療活化的M還可分泌TNF、NO等細58M還可通過ADCC殺傷腫瘤細胞巨噬細胞活化的巨噬細胞M還可通過ADCC殺傷腫瘤細胞巨噬細胞活化的巨噬細胞59作為遞呈抗原的APC，活化T細胞；抗原T細胞受體T淋巴細胞抗原遞呈細胞（M）抗原肽T淋巴細胞T細胞受體MHC-抗原肽復合物作為遞呈抗原的APC，活化T細胞；抗原T細胞受體T淋巴細胞抗60五、過繼性免疫效應細胞治療過繼性免疫效應細胞治療（Adoptivecellularimmunotherapy，ACI）是轉輸體外培養(yǎng)、修飾的效應細胞，如淋巴細胞和其它免疫細胞，治療疾病。細胞治療可以被認為是利用自體或異體細胞，替換、修復或增強受損傷組織的或系統(tǒng)的生物功能的一種策略。五、過繼性免疫效應細胞治療過繼性免疫效應細胞治療（Adopt61腫瘤生物治療進展課件培訓講義62ACI治療腫瘤具有抗腫瘤活性的免疫細胞轉輸給腫瘤患者，清除術后和化療后的殘留腫瘤細胞；預防復發(fā)和轉移，根治腫瘤；毒副作用低，特異性高；是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。ACI治療腫瘤63I.非特異性免疫細胞NK細胞巨噬細胞DCsLAKsCIKsTLR激動劑刺激免疫細胞II.抗原特異性T細胞CTLTILACI的類型：I.非特異性免疫細胞ACI的類型：64I.非特異性免疫細胞I.非特異性免疫細胞651.NK細胞用于過繼轉輸1.NK細胞用于過繼轉輸66Science.2011,7;331(6013):44–49.NK細胞被認為是抗腫瘤免疫的關鍵效應細胞

Science.2011,7;331(6013):467腫瘤可以發(fā)展多種機制逃逸NK細胞的攻擊或者誘導NK細胞功能缺陷

NK細胞在腫瘤患者中功能低下JBiomedicineandBiotechnology,2011免疫監(jiān)視功能缺陷免疫抑制腫瘤可以發(fā)展多種機制逃逸NK細胞的攻擊或者誘導NK細胞功能缺68Systemadministration細胞因子自體NK細胞(IL-2,IL-12,IL-15,IL-18,IL-21,typeIIFNs，免疫調(diào)節(jié)藥物

)體內(nèi)活化NK細胞治療腫瘤的策略

抗體(anti-HER-2MAb;anti-CD20MAb;anti-EGFRMab)InfusionADCCSystemadministration細胞因子自體NK69NATUREIMMUNOLOGY2008,9(5):486In1980NATUREIMMUNOLOGY2008,9(5):470Table2ClinicaltrialsusingstrategiestomodulateNKcellfunctions(continued)Table2Clinicaltrialsusing71Table2ClinicaltrialsusingstrategiestomodulateNKcellfunctions(continued)Rituximab:anti-CD20;Trastuzumab:anti-HER2;Daclizumab:anti-IL-2RaTable2Clinicaltrialsusing72Exvivo自體NK細胞單倍體相合的NK細胞細胞因子(IL-2,IL-12,IL-15,IL-18,IL-21,type-1IFNs，免疫調(diào)節(jié)藥物

)通過細胞因子刺激,腫瘤患者的本身的NK細胞難于有效回復抗腫瘤功能

自身免疫細胞在體外活化Exvivo自體NK細胞細胞因子(IL-2,IL-73NK細胞的臨床應用(1)原代NK細胞通過免疫磁珠的方法純健康供體NK細胞,這些NK細胞具有正常的細胞表面標志、胞內(nèi)細胞因子、穿孔素和顆粒酶B。NK細胞的臨床應用(1)原代NK細胞74供者患者供者患者75過繼轉輸原代NK細胞原代NK細胞在體外擴增和活化1321天,大大提高轉移的腎細胞癌患者的臨床反應。過繼轉輸原代NK細胞76NK細胞在外周血中的比例低(10–15%)，不能持續(xù)增殖；產(chǎn)生高純度的、大量的自體或異基因活化NK細胞非常難，并費時、費力；每個患者或者供者的NK的差異性對臨床常規(guī)治療帶來困難。

障礙/困難NK細胞在外周血中的比例低(10–15%)，不能持續(xù)增殖；77YT,NK-YS,HANK-1,NK-92,NKL,KHYG-1，NKG(2)NK細胞系JapanEBV-positiveWesterncountriesChinaYT,NK-YS,HANK-1,NK-92,NKL,78NK92cellsNK-92cell:CD56brightCD16-高效廣譜抗腫瘤作用，表達大量活化型受體；高水平表達與細胞凋亡途徑有關的分子及細胞毒效應分子；對惡性黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、白血病淋巴瘤等都具有高效的殺傷活性。NK92cellsNK-92cell:CD56bri79NK92細胞容易大量擴增，適合標準化培養(yǎng)，已經(jīng)用于臨床試驗，是目前最強的、適于臨床應用的NK細胞系。NK92細胞容易大量擴增，適合標準化培養(yǎng)，已經(jīng)用于臨床試驗，80NKcelllineInstrumentCulturemediumCytokineinmediumStartingcellnumberCultureTime(days)HarvestedcellnumberViabilityNK-921-LVuelifeculturebagEX-Vivo10serum-freemedia+aminoacidsand2.5%humanABplasmaIL-2(500IU/ml)(2.5×105/ml)×25ml/bag15-17>1×109/bag≥80%ControlledstirredbioreactorOptimizedclinicl-grademediaIL-2(100~500IU/ml)1×107/bioreactor11-16>1010/bioreactor>95%NKG*WAVEBioreactorα-MEMmedium10%fetalbovineserum+10%horseserumIL-2(100IU/ml)(1×105/ml)×200ml/bag12-14>1010/bag>90%NKLPlatesorFlasksRPMI1640medium10%heat-inactivatedhumanABserumIL-2(100pM)----KHYG-1PlatesorFlasksRPMI1640medium2%humanlow-toxicityABserumIL-2(450IU/ml)----大規(guī)模培養(yǎng)臨床應用NK細胞系NKcelllineInstrumentCulture812.淋巴因子活化的殺傷細胞（LAK）1980年,Rosenberg及其同事建立了一種IL2刺激產(chǎn)生大量的淋巴細胞的新方法,這些淋巴細胞可以殺傷新鮮的、沒有培養(yǎng)的、原代轉移的腫瘤細胞。LAK細胞是細胞毒性效應淋巴細胞，其細胞毒活性不受MHC限制，能夠殺傷原代腫瘤細胞和NK抵抗的腫瘤細胞系,在功能上與NK細胞不同。2.淋巴因子活化的殺傷細胞（LAK）1980年,Ros82LAK細胞表現(xiàn)出較好的耐受性，以一定的間隔時間重復輸注，以保持一定數(shù)量的新鮮的LAK細胞。1984年,Rosenberg及其同事被FDA批準，IL2和LAK用于治療25例腫瘤患者，包括腎細胞癌、黑色素瘤、肺癌或結腸癌。LAK細胞表現(xiàn)出較好的耐受性，以一定的間隔時間重復輸注，以保83LAK細胞的制備腫瘤患者的外周血單個核細胞（PBMCs）在體外擴增，IL2刺激，培養(yǎng)約5天。培養(yǎng)后的LAK是異質(zhì)性的，含有CD3CD56+,CD3+CD56+和CD3+CD56細胞；其中CD3+CD56+T和CD3?CD56+NK細胞發(fā)揮細胞殺傷作用。LAK細胞的制備84臨床研究證明,LAK細胞對轉移性腫瘤如腎細胞癌和黑色素瘤有一定療效。臨床研究證明,LAK細胞對轉移性腫瘤如腎細胞癌和黑色素瘤有85LAK/IL2的主要限制是其毒性全身應用IL2通常是造成副作用的主要原因，包括煩躁,發(fā)熱,寒冷,頭痛,惡心,嘔吐,皮疹,水腫，25%患者可以發(fā)生副反應。男性呼吸道窘迫綜合征、肝臟毒性和脈管炎有報道。LAK/IL2的主要限制是其毒性863.細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK）CIK是通過培養(yǎng)外周血淋巴細胞(PBL)，培養(yǎng)第一天在培養(yǎng)基中加入IFN-1000u/ml,24小時后加入抗CD3抗體50ng/ml和IL-2300IU/ml。定期加入IL-2,培養(yǎng)基常規(guī)性換液，培養(yǎng)21–28天。3.細胞因子誘導的殺傷細胞（CIK）CIK是通過培養(yǎng)外周87患者淋巴細胞體外患者自體CIK患者淋巴細胞體外患者自體CIK88CIK細胞中CD3+CD4+(37.4%)、CD3+CD8+(64.2%);CD3?CD56+NK細胞含量小(～2%)，培養(yǎng)14天時，37.7%為CD3+CD8+CD56+的

自然殺傷T(NKT)細胞，是CIK中最強的細胞毒性細胞。與LAK細胞相比，CIK細胞的增殖能力和細胞毒活性更強；CIK細胞在識別和殺傷靶細胞時是非MHC限制性的。CIK細胞中CD3+CD4+(37.4%)、CD89CIK的第一例臨床試驗是在1999年，由SchmidtWolf等在德國進行，自體CIK細胞轉入IL2基因，轉述給10例腫瘤患者，包括轉移性腎癌、結腸癌和淋巴瘤。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。除了3例患者有發(fā)熱的癥狀外，沒有嚴重的副反應。CIK的第一例臨床試驗是在1999年，由SchmidtWo90一項來自中國的報道，用CIK輔助治療急性白血病,19例接受1–4個療程自體CIK細胞輸注聯(lián)合化療的患者中,73.4%在隨后的4年中維持持續(xù)緩解,只作化療的患者僅為27.3%。作為免疫治療方式,CIK治療腫瘤量較小的患者有效或者作為輔助治療,不適合用于治療腫瘤量較大的患者。一項來自中國的報道，用CIK輔助治療急性白血病,19例接受91CIK的機制:釋放炎癥因子,如IFN,TNF,穿孔素,顆粒酶B殺傷腫瘤細胞;通過FasFasL途徑誘導腫瘤細胞凋亡。CIK已經(jīng)成功用于臨床治療胃癌、結腸癌、淋巴瘤、白血病等。CIK的機制:92腫瘤生物治療進展課件培訓講義93II.抗原特異性T細胞II.抗原特異性T細胞94T細胞在抗腫瘤的免疫應答中細胞免疫起著主要作用，特別是CTL，它是抗腫瘤免疫的主要效應細胞，故也應是用于過繼免疫治療的最佳細胞。T細胞在抗腫瘤的免疫應答中細胞免疫起著主要作用，特別是CTL95T細胞活化抗原遞呈細胞腫瘤細胞腫瘤抗原腫瘤抗原表達識別與殺傷腫瘤細胞抗原的識別與遞呈淋巴結CD8+T細胞CD8+T細胞血液循環(huán)腫瘤血管遷移T細胞活化抗原遞呈細胞腫瘤細胞腫瘤抗原腫瘤抗原表達識別與殺傷96Flood發(fā)現(xiàn)CTL在體內(nèi)聚集到腫瘤部位的能力強于LAK和NK，且能特異性地殺傷腫瘤細胞。Flood發(fā)現(xiàn)CTL在體內(nèi)聚集到腫瘤部位的能力強于LAK和N97實驗顯示，腫瘤疫苗在體內(nèi)應用可增加體內(nèi)的腫瘤特異性CTL的數(shù)量，但到一定水平時候，體內(nèi)的CTL到達平穩(wěn)期而不再增加，這主要是由于體內(nèi)存在的特異性及非特異性免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡限制了CTL的擴增。所以，利用細胞因子或免疫刺激劑直接活化腫瘤患者體內(nèi)CTL受到限制。實驗顯示，腫瘤疫苗在體內(nèi)應用可增加體內(nèi)的腫瘤特異性CTL的數(shù)98在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡，大量擴增免疫效應細胞。在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡，大量擴增免疫效應細胞。99轉輸抗原特異性T細胞因為腫瘤相關抗原TAA是“自身”抗原，免疫系統(tǒng)難于識別；腫瘤患者體內(nèi)難于產(chǎn)生對腫瘤應答的T細胞,甚至在體外最佳條件下也難于大規(guī)模培養(yǎng)。轉輸抗原特異性T細胞因為腫瘤相關抗原TAA是“自身”抗原，免1004.腫瘤浸潤的淋巴細胞(TIL)1986年,Rosenberg及其同事應用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉移。之后很快在1988年首次報道了利用TIL治療轉移性黑色素瘤能夠誘導腫瘤緩解。4.腫瘤浸潤的淋巴細胞(TIL)1986年,Rose101如何制備TIL?大約需要5–6周如何制備TIL?大約需要5–6周102TIL增殖:粘附的腫瘤細胞死亡或被淋巴細胞殺死而消失生長2–4周鑒定TIL殺傷腫瘤的活性直徑大于2cm的活檢腫瘤組織，剪碎，培養(yǎng)基中快速擴增:抗CD3抗體,IL-2和滅活的同種異體PBMCs飼養(yǎng)細胞，2周轉輸患者挑選應答最強的細胞克隆TIL增殖:粘附的腫瘤細胞死亡或被淋巴細胞殺死而消失生長2–103維持TIL的存活，誘導腫瘤消失清除淋巴細胞，減少與TIL競爭細胞因子,如IL-7和IL-15;清除內(nèi)源性Treg.維持TIL的存活，誘導腫瘤消失清除淋巴細胞，減少與TIL104

六、TLR配體激活的免疫效應細

什么是TLR？Tolllikereceptor，Toll樣受體。是一類模式識別受體，能夠識別微生物的特異性成分和某些宿主分子，構成防御很多病原體的第一道防線，在天然免疫系統(tǒng)中起著決定性的作用。此外，TLR連接天然免疫與獲得性免疫。六、TLR配體激活的免疫效應細什么是TLR？105已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種細胞膜內(nèi)體已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種細胞膜內(nèi)體106TLR1廣泛表達于單核細胞、T和B淋巴細胞、DC細胞、多形核白細胞、NK細胞；TLR2/4/5主要分布于除T、B、NK細胞以外的免疫細胞；TLR3主要表達于未成熟的DC等；TLR7TLR9主要表達于單核細胞、DC細胞核巨噬細胞。TLR1廣泛表達于單核細胞、T和B淋巴細胞、DC細胞、多形核107腫瘤生物治療進展課件培訓講義108TLRs與腫瘤免疫治療TLRs與腫瘤免疫治療109

腫瘤免疫逃逸的策略12345免疫抑制分子招募Treg共刺激分子缺失促凋亡分子腫瘤免疫逃逸的策略12345免疫抑制分子招募Treg共刺激110通過活化TLRs激活免疫系統(tǒng)，打破腫瘤介導的免疫抑制狀態(tài)，發(fā)揮抗腫瘤作用。作為腫瘤生物治療的關鍵問題是打破腫瘤導致的免疫耐受狀態(tài)！通過活化TLRs激活免疫系統(tǒng)，打破腫瘤介導的免疫抑制111TLR配體已經(jīng)通過多種途徑應用外用乳膏

靜脈注射

口服

瘤內(nèi)注射

皮下注射

TLR配體已經(jīng)通過多種途徑應用外用乳膏靜脈注射口服瘤內(nèi)112TLR3,4,7/8和TLR9激動劑被列入美國國立癌癥研究所（NCI）免疫治療腫瘤藥物，具有強大的抗腫瘤潛力。TLR3,4,7/8和TLR9激動劑被列入美國國立癌癥研究所1131.TLR7激動劑(1)天然ssRNA及其衍生物:通過內(nèi)吞進入細胞，然后與TLR7相互作用。TLR7ssRNA：單鏈RNA1.TLR7激動劑(1)天然ssRNA及其衍生物:TLR7114DC產(chǎn)生IL-12和I型IFN活化NK細胞，產(chǎn)生IFN-并增強細胞毒作用殺傷腫瘤細胞，抑制腫瘤生長TLR-7激動劑ssRNA機制:DC產(chǎn)生IL-12和I型IFN活化NK細胞，產(chǎn)生IFN-并115(2)合成的TLR7激動劑Imiquimod(咪喹莫特):HPV-相關的皮膚惡性腫瘤

(淺表性基底細胞癌

sBCC),III期臨床研究表明組織學清除率為79–82%；癌變前的光線性角化病治療。外用乳膏

(2)合成的TLR7激動劑Imiquimod(咪喹莫特):116機制:誘導細胞因子如IFNγ和IL12產(chǎn)生;增強腫瘤特異性CTLs的活化；活化具有殺傷活性的mDC亞群的活化。機制:117

有20項臨床試驗在進行,Imiquimod有做疫苗佐劑的臨床試驗有10項。有20項臨床試驗在進行,Imiquimod有做疫苗118PolyI:C(多聚肌苷酸胞苷酸),合成的病毒dsRNA類似物誘導I型IFNs的產(chǎn)生分子式:(C10H13N4O8P)x.(C9H14N3O8P)x2.TLR3激動劑dsRNA：雙鏈RNAPolyI:C(多聚肌苷酸胞苷酸),合成的病毒dsRN119成熟DC,其活化抗原特異性T細胞的能力增強,CD4+T細胞向Th1方向分化，分泌大量IFN。成熟DC,其活化抗原特異性T細胞的能力增強,CD4+T120OvariancancerpatientsOvariancancerpatients121在人類,TLR9主要表達于B細胞和pDCsCpGODNs（人工合成的非甲基化雙鏈寡核苷酸），分為三種類型:CpGA,NK細胞強刺激劑，誘導pDCs產(chǎn)生;CpGB,中度IFNα誘導劑,增強抗原特異性免疫應答;CpGC,兼具CpGA和CpGB的免疫刺激能力。只有CpG-B型進入臨床3.TLR9激動劑在人類,TLR9主要表達于B細胞和pDCs只有CpG-122已經(jīng)對以下人類腫瘤進行評價:腎細胞癌、惡性膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、皮膚性T淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤。機制:pDC和mDC活化,Th1類細胞因子譜,減少引流淋巴結中的Treg,增強腫瘤特異性T淋巴細胞和NK細胞的免疫應答。已經(jīng)對以下人類腫瘤進行評價:123聯(lián)合治療:單克隆抗體化療放療細胞因子，包括GMCSF,IFNa,IL18和IL21CpGODNs與抗原、抗體或DC細胞CpGODN作為疫苗佐劑聯(lián)合治療:124CpGODNs作為疫苗佐劑CpGODNs作為疫苗佐劑125CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細胞，單核細胞、巨噬細胞和DC細胞CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細胞，單核細126

CpG-ODN活化天然免疫和獲得性免疫殺傷腫瘤細胞ThCTLCpG-ODN活化天然免疫和獲得性免疫殺傷腫瘤細胞Th127障礙/困惑!障礙/困惑!128許多腫瘤細胞也表達TLR許多腫瘤細胞也表達TLR129許多腫瘤細胞也表達，并利用TLRs利用多種策略促進自身的增殖與生存:通過產(chǎn)生各種免疫抑制因子抑制免疫應答，促進細胞增殖和腫瘤血管形成,誘導產(chǎn)生細胞保護和抗凋亡因子。許多腫瘤細胞也表達，并利用TLRs利用多種策略促進自身的增殖130TLR激動劑直接用作抗腫瘤藥物是一把“雙刃劍”TLR激動劑直接用作抗腫瘤藥物是一把“雙刃劍”131TLR配體激活的免疫效應細胞抽取外周血分離目的細胞：NK、T…篩選分離不同細胞進行培養(yǎng)對培養(yǎng)的細胞進行監(jiān)測分析對所需細胞進行擴增培養(yǎng)可以和化療藥物聯(lián)合應用將培養(yǎng)好的細胞回輸給患者+TLR激動劑TLR配體激活的免疫效應細胞抽取外周血分離目的細胞：NK、T132隨著免疫細胞生物學及免疫分子生物學的高速發(fā)展，免疫細胞治療已成為腫瘤患者放、化療后輔助治療的重要手段之一，其對于促進患者免疫系統(tǒng)的重建、消除殘留病灶及骨髓凈化都具有良好效果。隨著免疫細胞生物學及免疫分子生物學的高速發(fā)展，免疫細133過繼性免疫治療主要優(yōu)點1.免疫細胞在體外處理，可繞過腫瘤患者體內(nèi)免疫障礙的種種機制。如新鮮分離的腫瘤浸潤性淋巴細胞(TIL)往往缺乏抗腫瘤效應，而在體外一定條件下培養(yǎng)一段時間后可恢復特異性抗腫瘤作用。過繼性免疫治療主要優(yōu)點1.免疫細胞在體外處理，可繞過腫1342.免疫細胞的活化及效應過程往往由一些細胞因子介導，而目前利用生物技術可大規(guī)模生產(chǎn)多種細胞因子、腫瘤抗原或多肽，這使體外大量擴增抗腫瘤免疫細胞成為可能。2.免疫細胞的活化及效應過程往往由一些細胞因子介導，而目前135腫瘤生物治療進展課件腫瘤生物治療進展課件136（優(yōu)選）腫瘤生物治療進展課件（優(yōu)選）腫瘤生物治療進展課件1371894,WilliamB.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣泛擴散的肉瘤患者，其腫瘤部位發(fā)生鏈球菌感染腫瘤完全消退是否是由于鏈球菌感染而導致腫瘤消退呢？January12,1862–April16,1936Astory1894,WilliamB.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣138Coley采取了大膽的行動!注射活的鏈球菌治療沒有治愈希望的、不能手術的肉瘤患者腫瘤完全消退!Coley采取了大膽的行動!注射活的鏈球菌治療沒有治愈希望139滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對1000患者治療，約40%的到明顯的治療效果Coley與他的女兒Dr.HelenColeyNauts利用細菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!!!Coley是腫瘤生物治療的鼻祖滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對1000140現(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準干擾素上市?？共《究鼓[瘤現(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國食品藥品監(jiān)督管理局（FD141腫瘤的發(fā)生癌基因突變/抑癌基因缺失或基因表達調(diào)控失常，腫瘤細胞的信號通路與正常細胞的信號通路存在一定的差異。腫瘤的發(fā)生142

生物治療借助腫瘤細胞與正常細胞之間的差異，以核酸、蛋白、細胞和小分子化合物為治療介質(zhì)，以腫瘤特異性信號通路為主要作用靶點，發(fā)展腫瘤選擇性強、毒副反應低、高治療指數(shù)的治療技術和藥物。生物治療借助腫瘤細胞與正常細胞之間的差異，以核酸、蛋143有足夠的臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見的腫瘤，而且能延長腫瘤患者的生存期，改善預后。這種治療水平保障了生物治療成為繼手術、放療、化療之后的第四種腫瘤治療策略。有足夠的臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見的腫瘤，而且144CTL機體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機制為維持TIL的存活，誘導腫瘤消失②細胞癌變過程中使原本不表達的基因被激活；對細胞殘片及病原體進行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細胞或其它免疫細胞，令其對病原體作出反應。1986年,Rosenberg及其同事應用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉移。TLR配體已經(jīng)通過多種途徑應用Coley采取了大膽的行動!巨噬細胞腫瘤浸潤的淋巴細胞(TIL)抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)大規(guī)模培養(yǎng)臨床應用NK細胞系與LAK細胞相比，CIK細胞的增殖能力和細胞毒活性更強；CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細胞，單核細胞、巨噬細胞和DC細胞對所需細胞進行擴增培養(yǎng)已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種遇到抗原后,成為活化的淋巴細胞,并進一步分化為全功能的淋巴細胞,即效應淋巴細胞?？贵w改變腫瘤細胞的粘附特性CpGB,中度IFNα誘導劑,增強抗原特異性免疫應答;激活補體系統(tǒng)溶解腫瘤細胞二、生物治療技術和藥物分類目前已用于臨床的生物治療技術和藥物主要包括細胞因子單克隆抗體免疫效應細胞免疫刺激劑基因藥物和免疫毒素作用于特定分子靶點的非細胞毒性小分子藥物CTL二、生物治療技術和藥物分類目前已用于臨床的生物治療技術145三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細菌：結核菌葡萄球菌真菌病毒：流感脊髓灰質(zhì)炎寄生蟲：絳蟲瘧原蟲蠕蟲攻擊防御三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細菌：真菌病毒：寄生蟲：攻擊防御146免疫系統(tǒng)人體的防御體系清除細菌、病毒、外來異物；消除體內(nèi)衰老細胞以及發(fā)生突變的細胞(有的突變細胞會變成癌細胞)。對于健康的人來說，其免疫系統(tǒng)的強大足以及時清除突變的癌細胞。免疫系統(tǒng)人體的防御體系清除細菌、病毒、外來異物；147NK細胞被認為是抗腫瘤免疫的關鍵效應細胞IL-2(100~500IU/ml)NK細胞是機體早期抗病毒的重要成員活化的NK細胞釋放大量細胞因子,如IFN,TNF/,GMCSF,IL12。吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細胞LAKsTLR配體已經(jīng)通過多種途徑應用⑤某些基因產(chǎn)物尤其是信號轉導分子的過度表達；（1）CTL殺傷靶細胞的機制Coley,紐約外科醫(yī)生1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈對所需細胞進行擴增培養(yǎng)細胞因子介導的腫瘤抑制作用:5×105/ml)×25ml/bag在人類,TLR9主要表達于B細胞和pDCsCpGODN可直接和間接活化NK、T和B細胞，單核細胞、巨噬細胞和DC細胞無功能活性---初始淋巴細胞在抗腫瘤免疫中，巨噬細胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細胞的特異性免疫應答。是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。許多腫瘤細胞也表達，并利用TLRs利用多種策略促進自身的增殖與生存:（1）CTL殺傷靶細胞的機制消除體內(nèi)衰老細胞以及發(fā)生突變的細胞(有的突變細胞會變成癌細胞)。機體免疫系統(tǒng)和癌細胞相互作用的結果決定了癌癥的最終演變。清除期平衡期逃逸期NK細胞被認為是抗腫瘤免疫的關鍵效應細胞機體免疫系統(tǒng)和癌細胞148對于癌癥病人來說，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識別、殺滅癌癥細胞;另一方面，癌癥細胞的大量增殖會進一步抑患者的免疫功能，而且癌癥細胞有多種機制來逃脫免疫細胞的識別與殺傷。對于癌癥病人來說，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識別、殺滅1491.什么是免疫？我們生存在一個充滿復雜感染源的、敵對的世界里，我們的機體可以利用許多機制來防御外來微生物的侵襲，保護機體健康，這種防御能力被稱為免疫。1.什么是免疫？150免疫的類型天然免疫反應先天就具備的對某種病原體的免疫力,具有遺傳性，是機體抵御病原體侵襲的第一道防線；獲得性免疫反應后天獲得、具有針對性、具有免疫記憶性。免疫的類型天然免疫反應先天就具備的對某種病原體的免疫力,具有1512.免疫系統(tǒng)的組成免疫器官骨髓、胸腺、脾臟、淋巴結、扁桃體、小腸集合淋巴結、闌尾等；免疫組織消化道、

呼吸道粘膜內(nèi)存在的許多無被膜的淋巴組織；免疫細胞淋巴細胞、單核吞噬細胞等免疫分子補體、免疫球蛋白、細胞因子等2.免疫系統(tǒng)的組成1523.免疫系統(tǒng)分布3.免疫系統(tǒng)分布153免疫系統(tǒng)功能功能生理性(有利)病理性(不利)免疫防御防御病原微生物侵害超敏反應/免疫缺陷免疫自穩(wěn)清除損傷或衰老的細胞自身免疫病免疫監(jiān)視清除復制錯誤/突變細胞細胞癌變/持續(xù)感染免疫系統(tǒng)功能功能生理性(有利)病理性(不利)免疫防御防御1544.發(fā)揮免疫應答的成員？免疫細胞免疫分子4.發(fā)揮免疫應答的成員？免疫細胞155天然免疫系統(tǒng)肥大細胞、單核/巨噬細胞、中性/嗜堿性粒細胞、樹突狀細胞、自然殺傷細胞；特異性免疫細胞T細胞、B細胞天然免疫系統(tǒng)156對細胞殘片及病原體進行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細胞或其它免疫細胞，令其對病原體作出反應。在抗腫瘤免疫中，巨噬細胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細胞的特異性免疫應答。作為清道夫細胞清除機體死亡細胞和細胞碎片。巨噬細胞（M）對細胞殘片及病原體進行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細胞157在不同組織中其名稱不同細胞名稱位置肺泡巨噬細胞肺泡組織細胞結締組織庫佛氏細胞肝神經(jīng)膠質(zhì)細胞神經(jīng)組織上皮樣細胞肉芽腫蝕骨細胞骨竇內(nèi)皮細胞脾系膜細胞腎在不同組織中其名稱不同細胞名稱位置肺泡巨噬細胞肺泡組織細胞結158粒細胞:中性粒細胞-吞噬并殺滅病原微生物；嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞-抵抗寄生蟲，與過敏反應有關。顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細胞活化時釋放并殺滅病原體。粒細胞:顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細胞活化時釋放并殺滅159DC細胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細胞初始T細胞活化的T細胞DC是天然免疫和獲得性免疫應答之間的橋梁

樹突狀細胞(DC)DC細胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細胞初始T細胞活化的T細胞160天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應答之間的橋梁

天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應答之間的橋161淋巴細胞:

TBNK獲得性免疫天然免疫淋巴細胞:

TBNK獲得性免疫天然免疫162紅細胞淋巴細胞:小,無特征HE染色電鏡觀察無功能活性---初始淋巴細胞

遇到抗原后,成為活化的淋巴細胞,并進一步分化為全功能的淋巴細胞,即效應淋巴細胞。

紅細胞淋巴細胞:小,無特征HE染色電鏡觀察無功能活性--163B淋巴細胞(B細胞)T淋巴細胞(T細胞)B-細胞受體(BCR)抗體-免疫球蛋白膜型免疫球蛋白T-細胞受體(TCR)殺傷活化調(diào)節(jié)獲得性免疫細胞記憶性T細胞記憶性B細胞B淋巴細胞(B細胞)T淋巴細胞(T細胞)B-細胞164活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細胞---CD8+T細胞輔助性T細胞為其它細胞的活化和功能提供必須的信號---CD4+T細胞調(diào)節(jié)性T細胞抑制其它淋巴細胞的活性并協(xié)助控制免疫應答效應性T細胞調(diào)節(jié)殺傷活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細胞---CD8+T細胞輔助性165自然殺傷細胞

（Naturalkillercells，NK）形態(tài)比T、B細胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細胞系。是天然免疫的重要成員,在獲得性免疫應答之前對控制病毒感染非常重要；在外周血單個核細胞中占10%15%，淋巴結和組織中較少。自然殺傷細胞

（Naturalkillercells，N166不表達抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。不表達抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。167NK細胞是機體早期抗病毒的重要成員NK細胞是機體早期抗病毒的重要成員168四、抗腫瘤免疫機制免疫細胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？四、抗腫瘤免疫機制免疫細胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？169免疫系統(tǒng)識別“自我”與“非我”腫瘤細胞表達腫瘤抗原免疫系統(tǒng)識別“自我”與“非我”1701.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原(TSA):僅在腫瘤細胞上表達;腫瘤相關性抗原(TAA):在某些腫瘤細胞上表達，也在某些正常細胞上表達。泛指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中新出現(xiàn)或過度表達的抗原物質(zhì)。1.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原(TSA):僅在腫瘤細171機體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機制為①基因突變；②細胞癌變過程中使原本不表達的基因被激活；③抗原合成過程的某些環(huán)節(jié)發(fā)生異常（如糖基化異常導致蛋白質(zhì)特殊降解產(chǎn)物的產(chǎn)生）；④胚胎時期抗原或分化抗原的異常、異位表達；⑤某些基因產(chǎn)物尤其是信號轉導分子的過度表達；⑥外源性基因（如病毒基因）的表達。機體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機制為①基因突變；1721．感應階段：

1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈2）T細胞對抗原的識別2.反應階段3.效應階段2.獲得性細胞免疫應答的基本過程1．感應階段：2.反應階段3.效應階段2.獲得性細胞免疫應173APC感應階段反應階段效應階段抗原遞呈細胞CD8+TAPC感應階段反應階段效應階段抗原遞呈細胞CD8+T174抗原遞呈功能MHC限制性APCAPC抗原遞呈功能APCAPC175B細胞漿細胞（產(chǎn)生抗體）T細胞細胞毒性T細胞（CTL）輔助性T細胞(Th)感染部位滯留在淋巴組織中活化B細胞骨髓產(chǎn)生抗體釋放到血液中效應細胞B細胞漿細胞（產(chǎn)生抗體）T細胞細胞毒性T細胞（CTL）輔助176CTL細胞介導的免疫應答可直接殺傷腫瘤細胞;Th細胞可以活化免疫系統(tǒng)的其它成分，在控制具有免疫原性腫瘤細胞的生長中起重要的作用。CTL細胞介導的免疫應答可直接殺傷腫瘤細胞;177（1）CTL殺傷靶細胞的機制靶細胞CTL循環(huán)凋亡解離CTL胞外分泌顆粒CTL與靶細胞結合CTL細胞質(zhì)重排（1）CTL殺傷靶細胞的機制靶細胞CTL循環(huán)凋亡解離CTL胞178(2)體液免疫體液免疫為B細胞介導的免疫，B細胞受抗原刺激后活化、增殖、分化，形成漿細胞并分泌抗體，由于主要是血清或血漿中的抗體發(fā)揮免疫效應，故稱為體液免疫。(2)體液免疫體液免疫為B細胞介導的免疫，B細胞受抗原刺激后179許多腫瘤細胞也表達TLREX-Vivo10serum-freemedia+形態(tài)比T、B細胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細胞系。不表達抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。TLR激動劑直接用作抗腫瘤藥物是一把“雙刃劍”篩選分離不同細胞進行培養(yǎng)對所需細胞進行擴增培養(yǎng)在抗腫瘤免疫中，巨噬細胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細胞的特異性免疫應答。YT,NK-YS,HANK-1,NK-92,NKL,KHYG-1，NKG其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈HPV-相關的皮膚惡性腫瘤(淺表性基底細胞癌sBCC),III期臨床研究表明組織學清除率為79–82%；2%humanlow-toxicityABserum預防復發(fā)和轉移，根治腫瘤；2%);CD3?CD56+NK細胞含量小(～2%)，培養(yǎng)14天時，37.EBV-positive是一類模式識別受體，能夠識別微生物的特異性成分和某些宿主分子，構成防御很多病原體的第一道防線，在天然免疫系統(tǒng)中起著決定性的作用。三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。清除淋巴細胞，減少與TIL競爭細胞因子,如IL-7和IL-15;遇到抗原后,成為活化的淋巴細胞,并進一步分化為全功能的淋巴細胞,即效應淋巴細胞。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。抗體的抗腫瘤機制?許多腫瘤細胞也表達TLR抗體的抗腫瘤機制?180A.激活補體系統(tǒng)溶解腫瘤細胞A.激活補體系統(tǒng)溶解腫瘤細胞181跨膜孔道跨膜孔道182B.抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)B.抗體依賴性細胞介導的細胞毒作用(ADCC)183C.抗體的調(diào)理作用腫瘤細胞巨噬細胞抗體與腫瘤細胞表面的相應抗原結合溶酶體被調(diào)理的腫瘤細胞結合到M的FcR上，并被M吞噬形成吞噬體吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細胞抗體C.抗體的調(diào)理作用腫瘤細胞巨噬細胞抗體與腫瘤細胞表面的相應184D.抗體的封閉作用細胞惡變后其表面可過表達某些受體，這些受體與其相應的配體結合后可刺激腫瘤細胞生長。針對這些受體的抗體可通過封閉腫瘤細胞表面的受體阻礙其功能，從而抑制腫瘤細胞的增殖。D.抗體的封閉作用185CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細胞，單核細胞、巨噬細胞和DC細胞有20項臨床試驗在進行,Imiquimod有做疫苗佐劑的臨床試驗有10項。細胞惡變后其表面可過表達某些受體，這些受體與其相應的配體結合后可刺激腫瘤細胞生長。此外，TLR連接天然免疫與獲得性免疫。M還可通過ADCC殺傷腫瘤細胞7%為CD3+CD8+CD56+的自然殺傷T(NKT)細胞，是CIK中最強的細胞毒性細胞。Coley采取了大膽的行動!EX-Vivo10serum-freemedia+1）抗原遞呈細胞（APC）對外源性抗原的加工、處理、遞呈干擾素(IFN)抑制細胞增生，引起多種腫瘤細胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉移，是巨噬細胞主要的活化因子。1986年,Rosenberg及其同事應用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉移。利用細菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!!!抗體與腫瘤細胞膜表面的抗原結合后，可干擾腫瘤細胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細胞的生長和轉移。CTL細胞介導的免疫應答可直接殺傷腫瘤細胞;RPMI1640medium通過產(chǎn)生各種免疫抑制因子抑制免疫應答，促進細胞增殖和腫瘤血管形成,誘導產(chǎn)生細胞保護和抗凋亡因子。PlatesorFlasksLAK細胞是細胞毒性效應淋巴細胞，其細胞毒活性不受MHC限制，能夠殺傷原代腫瘤細胞和NK抵抗的腫瘤細胞系,在功能上與NK細胞不同。誘導I型IFNs的產(chǎn)生腫瘤患者體內(nèi)難于產(chǎn)生對腫瘤應答的T細胞,甚至在體外最佳條件下也難于大規(guī)模培養(yǎng)。直徑大于2cm的活檢腫瘤組織，剪碎，培養(yǎng)基中E.抗體改變腫瘤細胞的粘附特性抗體與腫瘤細胞膜表面的抗原結合后，可干擾腫瘤細胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細胞的生長和轉移。CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細胞，單核細胞、巨噬186抗腫瘤抗體雖然能夠通過上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認為，體液免疫在抗腫瘤免疫中只處于從屬地位。細胞免疫在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用抗腫瘤抗體雖然能夠通過上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認為，體液1873.天然免疫應答（1）自然殺傷細胞（NK）NK是機體重要的免疫細胞，對于抗腫瘤、抗病毒感染非常重要。3.天然免疫應答（1）自然殺傷細胞（NK）188NK細胞抗腫瘤機制A.釋放毒性顆粒:NK細胞含有毒性酶，穿孔蛋白-穿孔素，穿透細胞膜并誘導細胞凋亡。NK靶細胞NK細胞抗腫瘤機制A.釋放毒性顆粒:NK細胞含有毒性酶，穿189B.細胞因子介導的腫瘤抑制作用:活化的NK細胞釋放大量細胞因子,如IFN,TNF/,GMCSF,IL12。干擾素(IFN)抑制細胞增生，引起多種腫瘤細胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉移，是巨噬細胞主要的活化因子。B.細胞因子介導的腫瘤抑制作用:190C.抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用(ADCC)C.抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用(ADCC)191（2）巨噬細胞（M)活化的M與腫瘤細胞結合后通過溶酶體酶等直接殺傷腫瘤細胞；（2）巨噬細胞（M)活化的M與腫瘤細胞結合后通過溶酶192五、過繼性免疫效應細胞治療鑒定TIL殺傷腫瘤的活性干擾素(IFN)抑制細胞增生，引起多種腫瘤細胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉移，是巨噬細胞主要的活化因子。吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細胞CpGC,兼具CpGA和CpGB的免疫刺激能力。對于健康的人來說，其免疫系統(tǒng)的強大足以及時清除突變的癌細胞。免疫細胞在體外處理，可繞過腫瘤患者體內(nèi)免疫障礙的種種機制。④胚胎時期抗原或分化抗原的異常、異位表達；活化具有殺傷活性的mDC亞群的活化。其中CD3+CD56+T和CD3?CD56+NK細胞發(fā)揮細胞殺傷作用。大規(guī)模培養(yǎng)臨床應用NK細胞系Coley,紐約外科醫(yī)生IL-2(100~500IU/ml)滯留在淋巴組織中活化B細胞癌變前的光線性角化病治療。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。TLR3,4,7/8和TLR9激動劑被列入美國國立癌癥研究所（NCI）免疫治療腫瘤藥物，具有強大的抗腫瘤潛力。JBiomedicineandBiotechnology,2011嗜酸性粒細胞和嗜堿性粒細胞-抵抗寄生蟲，與過敏反應有關。EBV-positive不表達抗原特異性受體，也不形成免疫記憶?；罨腗還可分泌TNF、NO等細胞毒性因子而間接殺傷腫瘤細胞；抗原遞呈作用殺傷腫瘤分泌細胞因子IL-1IL-6TNF-IL-8GM-CSF酶溶菌酶酸性水解酶賴氨酸酶酯酶膠原蛋白酶彈性纖維蛋白酶前列腺素補體成分纖維蛋白結合蛋白凝血因子其它因子五、過繼性免疫效應細胞治療活化的M還可分泌TNF、NO等細193M還可通過ADCC殺傷腫瘤細胞巨噬細胞活化的巨噬細胞M還可通過ADCC殺傷腫瘤細胞巨噬細胞活化的巨噬細胞194作為遞呈抗原的APC，活化T細胞；抗原T細胞受體T淋巴細胞抗原遞呈細胞（M）抗原肽T淋巴細胞T細胞受體MHC-抗原肽復合物作為遞呈抗原的APC，活化T細胞；抗原T細胞受體T淋巴細胞抗195五、過繼性免疫效應細胞治療過繼性免疫效應細胞治療（Adoptivecellularimmunotherapy，ACI）是轉輸體外培養(yǎng)、修飾的效應細胞，如淋巴細胞和其它免疫細胞，治療疾病。細胞治療可以被認為是利用自體或異體細胞，替換、修復或增強受損傷組織的或系統(tǒng)的生物功能的一種策略。五、過繼性免疫效應細胞治療過繼性免疫效應細胞治療（Adopt196腫瘤生物治療進展課件培訓講義197ACI治療腫瘤具有抗腫瘤活性的免疫細胞轉輸給腫瘤患者，清除術后和化療后的殘留腫瘤細胞；預防復發(fā)和轉移，根治腫瘤；毒副作用低，特異性高；是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。ACI治療腫瘤198I.非特異性免疫細胞NK細胞巨噬細胞DCsLAKsCIKsTLR激動劑刺激免疫細胞II.抗原特異性T細胞CTLTILACI的類型：I.非特異性免疫細胞ACI的類型：199I.非特異性免疫細胞I.非特異性免疫細胞2001.NK細胞用于過繼轉輸1.NK細胞用于過繼轉輸201Science.2011,7;331(6013):44–49.NK細胞被認為是抗腫瘤免疫