腫瘤生物治療進(jìn)展課件培訓(xùn)講義

腫瘤生物治療進(jìn)展課件腫瘤生物治療進(jìn)展課件1（優(yōu)選）腫瘤生物治療進(jìn)展課件（優(yōu)選）腫瘤生物治療進(jìn)展課件21894,WilliamB.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣泛擴(kuò)散的肉瘤患者，其腫瘤部位發(fā)生鏈球菌感染腫瘤完全消退是否是由于鏈球菌感染而導(dǎo)致腫瘤消退呢？January12,1862–April16,1936Astory1894,WilliamB.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣3Coley采取了大膽的行動(dòng)!注射活的鏈球菌治療沒有治愈希望的、不能手術(shù)的肉瘤患者腫瘤完全消退!Coley采取了大膽的行動(dòng)!注射活的鏈球菌治療沒有治愈希望4滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對(duì)1000患者治療，約40%的到明顯的治療效果Coley與他的女兒Dr.HelenColeyNauts利用細(xì)菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導(dǎo)部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!!!Coley是腫瘤生物治療的鼻祖滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對(duì)10005現(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)干擾素上市?？共《究鼓[瘤現(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FD6腫瘤的發(fā)生癌基因突變/抑癌基因缺失或基因表達(dá)調(diào)控失常，腫瘤細(xì)胞的信號(hào)通路與正常細(xì)胞的信號(hào)通路存在一定的差異。腫瘤的發(fā)生7

生物治療借助腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的差異，以核酸、蛋白、細(xì)胞和小分子化合物為治療介質(zhì)，以腫瘤特異性信號(hào)通路為主要作用靶點(diǎn)，發(fā)展腫瘤選擇性強(qiáng)、毒副反應(yīng)低、高治療指數(shù)的治療技術(shù)和藥物。生物治療借助腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的差異，以核酸、蛋8有足夠的臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見的腫瘤，而且能延長(zhǎng)腫瘤患者的生存期，改善預(yù)后。這種治療水平保障了生物治療成為繼手術(shù)、放療、化療之后的第四種腫瘤治療策略。有足夠的臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見的腫瘤，而且9CTL機(jī)體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機(jī)制為維持TIL的存活，誘導(dǎo)腫瘤消失②細(xì)胞癌變過程中使原本不表達(dá)的基因被激活；對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細(xì)胞或其它免疫細(xì)胞，令其對(duì)病原體作出反應(yīng)。1986年,Rosenberg及其同事應(yīng)用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉(zhuǎn)移。TLR配體已經(jīng)通過多種途徑應(yīng)用Coley采取了大膽的行動(dòng)!巨噬細(xì)胞腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞(TIL)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)大規(guī)模培養(yǎng)臨床應(yīng)用NK細(xì)胞系與LAK細(xì)胞相比，CIK細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞毒活性更強(qiáng)；CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細(xì)胞，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和DC細(xì)胞對(duì)所需細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種遇到抗原后,成為活化的淋巴細(xì)胞,并進(jìn)一步分化為全功能的淋巴細(xì)胞,即效應(yīng)淋巴細(xì)胞?？贵w改變腫瘤細(xì)胞的粘附特性CpGB,中度IFNα誘導(dǎo)劑,增強(qiáng)抗原特異性免疫應(yīng)答;激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞二、生物治療技術(shù)和藥物分類目前已用于臨床的生物治療技術(shù)和藥物主要包括細(xì)胞因子單克隆抗體免疫效應(yīng)細(xì)胞免疫刺激劑基因藥物和免疫毒素作用于特定分子靶點(diǎn)的非細(xì)胞毒性小分子藥物CTL二、生物治療技術(shù)和藥物分類目前已用于臨床的生物治療技術(shù)10三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細(xì)菌：結(jié)核菌葡萄球菌真菌病毒：流感脊髓灰質(zhì)炎寄生蟲：絳蟲瘧原蟲蠕蟲攻擊防御三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細(xì)菌：真菌病毒：寄生蟲：攻擊防御11免疫系統(tǒng)人體的防御體系清除細(xì)菌、病毒、外來異物；消除體內(nèi)衰老細(xì)胞以及發(fā)生突變的細(xì)胞(有的突變細(xì)胞會(huì)變成癌細(xì)胞)。對(duì)于健康的人來說，其免疫系統(tǒng)的強(qiáng)大足以及時(shí)清除突變的癌細(xì)胞。免疫系統(tǒng)人體的防御體系清除細(xì)菌、病毒、外來異物；12NK細(xì)胞被認(rèn)為是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞IL-2(100~500IU/ml)NK細(xì)胞是機(jī)體早期抗病毒的重要成員活化的NK細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子,如IFN,TNF/,GMCSF,IL12。吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細(xì)胞LAKsTLR配體已經(jīng)通過多種途徑應(yīng)用⑤某些基因產(chǎn)物尤其是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的過度表達(dá)；（1）CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制Coley,紐約外科醫(yī)生1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈對(duì)所需細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)細(xì)胞因子介導(dǎo)的腫瘤抑制作用:5×105/ml)×25ml/bag在人類,TLR9主要表達(dá)于B細(xì)胞和pDCsCpGODN可直接和間接活化NK、T和B細(xì)胞，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和DC細(xì)胞無功能活性---初始淋巴細(xì)胞在抗腫瘤免疫中，巨噬細(xì)胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答。是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。許多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)，并利用TLRs利用多種策略促進(jìn)自身的增殖與生存:（1）CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制消除體內(nèi)衰老細(xì)胞以及發(fā)生突變的細(xì)胞(有的突變細(xì)胞會(huì)變成癌細(xì)胞)。機(jī)體免疫系統(tǒng)和癌細(xì)胞相互作用的結(jié)果決定了癌癥的最終演變。清除期平衡期逃逸期NK細(xì)胞被認(rèn)為是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞機(jī)體免疫系統(tǒng)和癌細(xì)胞13對(duì)于癌癥病人來說，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識(shí)別、殺滅癌癥細(xì)胞;另一方面，癌癥細(xì)胞的大量增殖會(huì)進(jìn)一步抑患者的免疫功能，而且癌癥細(xì)胞有多種機(jī)制來逃脫免疫細(xì)胞的識(shí)別與殺傷。對(duì)于癌癥病人來說，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識(shí)別、殺滅141.什么是免疫？我們生存在一個(gè)充滿復(fù)雜感染源的、敵對(duì)的世界里，我們的機(jī)體可以利用許多機(jī)制來防御外來微生物的侵襲，保護(hù)機(jī)體健康，這種防御能力被稱為免疫。1.什么是免疫？15免疫的類型天然免疫反應(yīng)先天就具備的對(duì)某種病原體的免疫力,具有遺傳性，是機(jī)體抵御病原體侵襲的第一道防線；獲得性免疫反應(yīng)后天獲得、具有針對(duì)性、具有免疫記憶性。免疫的類型天然免疫反應(yīng)先天就具備的對(duì)某種病原體的免疫力,具有162.免疫系統(tǒng)的組成免疫器官骨髓、胸腺、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾等；免疫組織消化道、

呼吸道粘膜內(nèi)存在的許多無被膜的淋巴組織；免疫細(xì)胞淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞等免疫分子補(bǔ)體、免疫球蛋白、細(xì)胞因子等2.免疫系統(tǒng)的組成173.免疫系統(tǒng)分布3.免疫系統(tǒng)分布18免疫系統(tǒng)功能功能生理性(有利)病理性(不利)免疫防御防御病原微生物侵害超敏反應(yīng)/免疫缺陷免疫自穩(wěn)清除損傷或衰老的細(xì)胞自身免疫病免疫監(jiān)視清除復(fù)制錯(cuò)誤/突變細(xì)胞細(xì)胞癌變/持續(xù)感染免疫系統(tǒng)功能功能生理性(有利)病理性(不利)免疫防御防御194.發(fā)揮免疫應(yīng)答的成員？免疫細(xì)胞免疫分子4.發(fā)揮免疫應(yīng)答的成員？免疫細(xì)胞20天然免疫系統(tǒng)肥大細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、中性/嗜堿性粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞；特異性免疫細(xì)胞T細(xì)胞、B細(xì)胞天然免疫系統(tǒng)21對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細(xì)胞或其它免疫細(xì)胞，令其對(duì)病原體作出反應(yīng)。在抗腫瘤免疫中，巨噬細(xì)胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答。作為清道夫細(xì)胞清除機(jī)體死亡細(xì)胞和細(xì)胞碎片。巨噬細(xì)胞（M）對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細(xì)胞22在不同組織中其名稱不同細(xì)胞名稱位置肺泡巨噬細(xì)胞肺泡組織細(xì)胞結(jié)締組織庫(kù)佛氏細(xì)胞肝神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)組織上皮樣細(xì)胞肉芽腫蝕骨細(xì)胞骨竇內(nèi)皮細(xì)胞脾系膜細(xì)胞腎在不同組織中其名稱不同細(xì)胞名稱位置肺泡巨噬細(xì)胞肺泡組織細(xì)胞結(jié)23粒細(xì)胞:中性粒細(xì)胞-吞噬并殺滅病原微生物；嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞-抵抗寄生蟲，與過敏反應(yīng)有關(guān)。顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細(xì)胞活化時(shí)釋放并殺滅病原體。粒細(xì)胞:顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細(xì)胞活化時(shí)釋放并殺滅24DC細(xì)胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細(xì)胞初始T細(xì)胞活化的T細(xì)胞DC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋梁

樹突狀細(xì)胞(DC)DC細(xì)胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細(xì)胞初始T細(xì)胞活化的T細(xì)胞25天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋梁

天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋26淋巴細(xì)胞:

TBNK獲得性免疫天然免疫淋巴細(xì)胞:

TBNK獲得性免疫天然免疫27紅細(xì)胞淋巴細(xì)胞:小,無特征HE染色電鏡觀察無功能活性---初始淋巴細(xì)胞

遇到抗原后,成為活化的淋巴細(xì)胞,并進(jìn)一步分化為全功能的淋巴細(xì)胞,即效應(yīng)淋巴細(xì)胞。

紅細(xì)胞淋巴細(xì)胞:小,無特征HE染色電鏡觀察無功能活性--28B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)B-細(xì)胞受體(BCR)抗體-免疫球蛋白膜型免疫球蛋白T-細(xì)胞受體(TCR)殺傷活化調(diào)節(jié)獲得性免疫細(xì)胞記憶性T細(xì)胞記憶性B細(xì)胞B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)B-細(xì)胞29活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細(xì)胞---CD8+T細(xì)胞輔助性T細(xì)胞為其它細(xì)胞的活化和功能提供必須的信號(hào)---CD4+T細(xì)胞調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制其它淋巴細(xì)胞的活性并協(xié)助控制免疫應(yīng)答效應(yīng)性T細(xì)胞調(diào)節(jié)殺傷活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細(xì)胞---CD8+T細(xì)胞輔助性30自然殺傷細(xì)胞

（Naturalkillercells，NK）形態(tài)比T、B細(xì)胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細(xì)胞系。是天然免疫的重要成員,在獲得性免疫應(yīng)答之前對(duì)控制病毒感染非常重要；在外周血單個(gè)核細(xì)胞中占10%15%，淋巴結(jié)和組織中較少。自然殺傷細(xì)胞

（Naturalkillercells，N31不表達(dá)抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。不表達(dá)抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。32NK細(xì)胞是機(jī)體早期抗病毒的重要成員NK細(xì)胞是機(jī)體早期抗病毒的重要成員33四、抗腫瘤免疫機(jī)制免疫細(xì)胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？四、抗腫瘤免疫機(jī)制免疫細(xì)胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？34免疫系統(tǒng)識(shí)別“自我”與“非我”腫瘤細(xì)胞表達(dá)腫瘤抗原免疫系統(tǒng)識(shí)別“自我”與“非我”351.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原(TSA):僅在腫瘤細(xì)胞上表達(dá);腫瘤相關(guān)性抗原(TAA):在某些腫瘤細(xì)胞上表達(dá)，也在某些正常細(xì)胞上表達(dá)。泛指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中新出現(xiàn)或過度表達(dá)的抗原物質(zhì)。1.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原(TSA):僅在腫瘤細(xì)36機(jī)體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機(jī)制為①基因突變；②細(xì)胞癌變過程中使原本不表達(dá)的基因被激活；③抗原合成過程的某些環(huán)節(jié)發(fā)生異常（如糖基化異常導(dǎo)致蛋白質(zhì)特殊降解產(chǎn)物的產(chǎn)生）；④胚胎時(shí)期抗原或分化抗原的異常、異位表達(dá)；⑤某些基因產(chǎn)物尤其是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的過度表達(dá)；⑥外源性基因（如病毒基因）的表達(dá)。機(jī)體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機(jī)制為①基因突變；371．感應(yīng)階段：

1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈2）T細(xì)胞對(duì)抗原的識(shí)別2.反應(yīng)階段3.效應(yīng)階段2.獲得性細(xì)胞免疫應(yīng)答的基本過程1．感應(yīng)階段：2.反應(yīng)階段3.效應(yīng)階段2.獲得性細(xì)胞免疫應(yīng)38APC感應(yīng)階段反應(yīng)階段效應(yīng)階段抗原遞呈細(xì)胞CD8+TAPC感應(yīng)階段反應(yīng)階段效應(yīng)階段抗原遞呈細(xì)胞CD8+T39抗原遞呈功能MHC限制性APCAPC抗原遞呈功能APCAPC40B細(xì)胞漿細(xì)胞（產(chǎn)生抗體）T細(xì)胞細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）輔助性T細(xì)胞(Th)感染部位滯留在淋巴組織中活化B細(xì)胞骨髓產(chǎn)生抗體釋放到血液中效應(yīng)細(xì)胞B細(xì)胞漿細(xì)胞（產(chǎn)生抗體）T細(xì)胞細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）輔助41CTL細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可直接殺傷腫瘤細(xì)胞;Th細(xì)胞可以活化免疫系統(tǒng)的其它成分，在控制具有免疫原性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)中起重要的作用。CTL細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可直接殺傷腫瘤細(xì)胞;42（1）CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制靶細(xì)胞CTL循環(huán)凋亡解離CTL胞外分泌顆粒CTL與靶細(xì)胞結(jié)合CTL細(xì)胞質(zhì)重排（1）CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制靶細(xì)胞CTL循環(huán)凋亡解離CTL胞43(2)體液免疫體液免疫為B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，B細(xì)胞受抗原刺激后活化、增殖、分化，形成漿細(xì)胞并分泌抗體，由于主要是血清或血漿中的抗體發(fā)揮免疫效應(yīng)，故稱為體液免疫。(2)體液免疫體液免疫為B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，B細(xì)胞受抗原刺激后44許多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)TLREX-Vivo10serum-freemedia+形態(tài)比T、B細(xì)胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細(xì)胞系。不表達(dá)抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。TLR激動(dòng)劑直接用作抗腫瘤藥物是一把“雙刃劍”篩選分離不同細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)對(duì)所需細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)在抗腫瘤免疫中，巨噬細(xì)胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答。YT,NK-YS,HANK-1,NK-92,NKL,KHYG-1，NKG其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈HPV-相關(guān)的皮膚惡性腫瘤(淺表性基底細(xì)胞癌sBCC),III期臨床研究表明組織學(xué)清除率為79–82%；2%humanlow-toxicityABserum預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，根治腫瘤；2%);CD3?CD56+NK細(xì)胞含量小(～2%)，培養(yǎng)14天時(shí)，37.EBV-positive是一類模式識(shí)別受體，能夠識(shí)別微生物的特異性成分和某些宿主分子，構(gòu)成防御很多病原體的第一道防線，在天然免疫系統(tǒng)中起著決定性的作用。三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。清除淋巴細(xì)胞，減少與TIL競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞因子,如IL-7和IL-15;遇到抗原后,成為活化的淋巴細(xì)胞,并進(jìn)一步分化為全功能的淋巴細(xì)胞,即效應(yīng)淋巴細(xì)胞。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。抗體的抗腫瘤機(jī)制?許多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)TLR抗體的抗腫瘤機(jī)制?45A.激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞A.激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞46跨膜孔道跨膜孔道47B.抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)B.抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)48C.抗體的調(diào)理作用腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞抗體與腫瘤細(xì)胞表面的相應(yīng)抗原結(jié)合溶酶體被調(diào)理的腫瘤細(xì)胞結(jié)合到M的FcR上，并被M吞噬形成吞噬體吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細(xì)胞抗體C.抗體的調(diào)理作用腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞抗體與腫瘤細(xì)胞表面的相應(yīng)49D.抗體的封閉作用細(xì)胞惡變后其表面可過表達(dá)某些受體，這些受體與其相應(yīng)的配體結(jié)合后可刺激腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。針對(duì)這些受體的抗體可通過封閉腫瘤細(xì)胞表面的受體阻礙其功能，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。D.抗體的封閉作用50CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細(xì)胞，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和DC細(xì)胞有20項(xiàng)臨床試驗(yàn)在進(jìn)行,Imiquimod有做疫苗佐劑的臨床試驗(yàn)有10項(xiàng)。細(xì)胞惡變后其表面可過表達(dá)某些受體，這些受體與其相應(yīng)的配體結(jié)合后可刺激腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。此外，TLR連接天然免疫與獲得性免疫。M還可通過ADCC殺傷腫瘤細(xì)胞7%為CD3+CD8+CD56+的自然殺傷T(NKT)細(xì)胞，是CIK中最強(qiáng)的細(xì)胞毒性細(xì)胞。Coley采取了大膽的行動(dòng)!EX-Vivo10serum-freemedia+1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈干擾素(IFN)抑制細(xì)胞增生，引起多種腫瘤細(xì)胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，是巨噬細(xì)胞主要的活化因子。1986年,Rosenberg及其同事應(yīng)用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉(zhuǎn)移。利用細(xì)菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導(dǎo)部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!!!抗體與腫瘤細(xì)胞膜表面的抗原結(jié)合后，可干擾腫瘤細(xì)胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。CTL細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可直接殺傷腫瘤細(xì)胞;RPMI1640medium通過產(chǎn)生各種免疫抑制因子抑制免疫應(yīng)答，促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤血管形成,誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞保護(hù)和抗凋亡因子。PlatesorFlasksLAK細(xì)胞是細(xì)胞毒性效應(yīng)淋巴細(xì)胞，其細(xì)胞毒活性不受MHC限制，能夠殺傷原代腫瘤細(xì)胞和NK抵抗的腫瘤細(xì)胞系,在功能上與NK細(xì)胞不同。誘導(dǎo)I型IFNs的產(chǎn)生腫瘤患者體內(nèi)難于產(chǎn)生對(duì)腫瘤應(yīng)答的T細(xì)胞,甚至在體外最佳條件下也難于大規(guī)模培養(yǎng)。直徑大于2cm的活檢腫瘤組織，剪碎，培養(yǎng)基中E.抗體改變腫瘤細(xì)胞的粘附特性抗體與腫瘤細(xì)胞膜表面的抗原結(jié)合后，可干擾腫瘤細(xì)胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細(xì)胞，單核細(xì)胞、巨噬51抗腫瘤抗體雖然能夠通過上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認(rèn)為，體液免疫在抗腫瘤免疫中只處于從屬地位。細(xì)胞免疫在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用抗腫瘤抗體雖然能夠通過上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認(rèn)為，體液523.天然免疫應(yīng)答（1）自然殺傷細(xì)胞（NK）NK是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，對(duì)于抗腫瘤、抗病毒感染非常重要。3.天然免疫應(yīng)答（1）自然殺傷細(xì)胞（NK）53NK細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制A.釋放毒性顆粒:NK細(xì)胞含有毒性酶，穿孔蛋白-穿孔素，穿透細(xì)胞膜并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。NK靶細(xì)胞NK細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制A.釋放毒性顆粒:NK細(xì)胞含有毒性酶，穿54B.細(xì)胞因子介導(dǎo)的腫瘤抑制作用:活化的NK細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子,如IFN,TNF/,GMCSF,IL12。干擾素(IFN)抑制細(xì)胞增生，引起多種腫瘤細(xì)胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，是巨噬細(xì)胞主要的活化因子。B.細(xì)胞因子介導(dǎo)的腫瘤抑制作用:55C.抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)C.抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)56（2）巨噬細(xì)胞（M)活化的M與腫瘤細(xì)胞結(jié)合后通過溶酶體酶等直接殺傷腫瘤細(xì)胞；（2）巨噬細(xì)胞（M)活化的M與腫瘤細(xì)胞結(jié)合后通過溶酶57五、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療鑒定TIL殺傷腫瘤的活性干擾素(IFN)抑制細(xì)胞增生，引起多種腫瘤細(xì)胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，是巨噬細(xì)胞主要的活化因子。吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細(xì)胞CpGC,兼具CpGA和CpGB的免疫刺激能力。對(duì)于健康的人來說，其免疫系統(tǒng)的強(qiáng)大足以及時(shí)清除突變的癌細(xì)胞。免疫細(xì)胞在體外處理，可繞過腫瘤患者體內(nèi)免疫障礙的種種機(jī)制。④胚胎時(shí)期抗原或分化抗原的異常、異位表達(dá)；活化具有殺傷活性的mDC亞群的活化。其中CD3+CD56+T和CD3?CD56+NK細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞殺傷作用。大規(guī)模培養(yǎng)臨床應(yīng)用NK細(xì)胞系Coley,紐約外科醫(yī)生IL-2(100~500IU/ml)滯留在淋巴組織中活化B細(xì)胞癌變前的光線性角化病治療。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。TLR3,4,7/8和TLR9激動(dòng)劑被列入美國(guó)國(guó)立癌癥研究所（NCI）免疫治療腫瘤藥物，具有強(qiáng)大的抗腫瘤潛力。JBiomedicineandBiotechnology,2011嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞-抵抗寄生蟲，與過敏反應(yīng)有關(guān)。EBV-positive不表達(dá)抗原特異性受體，也不形成免疫記憶?；罨腗還可分泌TNF、NO等細(xì)胞毒性因子而間接殺傷腫瘤細(xì)胞；抗原遞呈作用殺傷腫瘤分泌細(xì)胞因子IL-1IL-6TNF-IL-8GM-CSF酶溶菌酶酸性水解酶賴氨酸酶酯酶膠原蛋白酶彈性纖維蛋白酶前列腺素補(bǔ)體成分纖維蛋白結(jié)合蛋白凝血因子其它因子五、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療活化的M還可分泌TNF、NO等細(xì)58M還可通過ADCC殺傷腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞活化的巨噬細(xì)胞M還可通過ADCC殺傷腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞活化的巨噬細(xì)胞59作為遞呈抗原的APC，活化T細(xì)胞；抗原T細(xì)胞受體T淋巴細(xì)胞抗原遞呈細(xì)胞（M）抗原肽T淋巴細(xì)胞T細(xì)胞受體MHC-抗原肽復(fù)合物作為遞呈抗原的APC，活化T細(xì)胞；抗原T細(xì)胞受體T淋巴細(xì)胞抗60五、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療（Adoptivecellularimmunotherapy，ACI）是轉(zhuǎn)輸體外培養(yǎng)、修飾的效應(yīng)細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞和其它免疫細(xì)胞，治療疾病。細(xì)胞治療可以被認(rèn)為是利用自體或異體細(xì)胞，替換、修復(fù)或增強(qiáng)受損傷組織的或系統(tǒng)的生物功能的一種策略。五、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療（Adopt61腫瘤生物治療進(jìn)展課件培訓(xùn)講義62ACI治療腫瘤具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)輸給腫瘤患者，清除術(shù)后和化療后的殘留腫瘤細(xì)胞；預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，根治腫瘤；毒副作用低，特異性高；是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。ACI治療腫瘤63I.非特異性免疫細(xì)胞NK細(xì)胞巨噬細(xì)胞DCsLAKsCIKsTLR激動(dòng)劑刺激免疫細(xì)胞II.抗原特異性T細(xì)胞CTLTILACI的類型：I.非特異性免疫細(xì)胞ACI的類型：64I.非特異性免疫細(xì)胞I.非特異性免疫細(xì)胞651.NK細(xì)胞用于過繼轉(zhuǎn)輸1.NK細(xì)胞用于過繼轉(zhuǎn)輸66Science.2011,7;331(6013):44–49.NK細(xì)胞被認(rèn)為是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞

Science.2011,7;331(6013):467腫瘤可以發(fā)展多種機(jī)制逃逸NK細(xì)胞的攻擊或者誘導(dǎo)NK細(xì)胞功能缺陷

NK細(xì)胞在腫瘤患者中功能低下JBiomedicineandBiotechnology,2011免疫監(jiān)視功能缺陷免疫抑制腫瘤可以發(fā)展多種機(jī)制逃逸NK細(xì)胞的攻擊或者誘導(dǎo)NK細(xì)胞功能缺68Systemadministration細(xì)胞因子自體NK細(xì)胞(IL-2,IL-12,IL-15,IL-18,IL-21,typeIIFNs，免疫調(diào)節(jié)藥物

)體內(nèi)活化NK細(xì)胞治療腫瘤的策略

抗體(anti-HER-2MAb;anti-CD20MAb;anti-EGFRMab)InfusionADCCSystemadministration細(xì)胞因子自體NK69NATUREIMMUNOLOGY2008,9(5):486In1980NATUREIMMUNOLOGY2008,9(5):470Table2ClinicaltrialsusingstrategiestomodulateNKcellfunctions(continued)Table2Clinicaltrialsusing71Table2ClinicaltrialsusingstrategiestomodulateNKcellfunctions(continued)Rituximab:anti-CD20;Trastuzumab:anti-HER2;Daclizumab:anti-IL-2RaTable2Clinicaltrialsusing72Exvivo自體NK細(xì)胞單倍體相合的NK細(xì)胞細(xì)胞因子(IL-2,IL-12,IL-15,IL-18,IL-21,type-1IFNs，免疫調(diào)節(jié)藥物

)通過細(xì)胞因子刺激,腫瘤患者的本身的NK細(xì)胞難于有效回復(fù)抗腫瘤功能

自身免疫細(xì)胞在體外活化Exvivo自體NK細(xì)胞細(xì)胞因子(IL-2,IL-73NK細(xì)胞的臨床應(yīng)用(1)原代NK細(xì)胞通過免疫磁珠的方法純健康供體NK細(xì)胞,這些NK細(xì)胞具有正常的細(xì)胞表面標(biāo)志、胞內(nèi)細(xì)胞因子、穿孔素和顆粒酶B。NK細(xì)胞的臨床應(yīng)用(1)原代NK細(xì)胞74供者患者供者患者75過繼轉(zhuǎn)輸原代NK細(xì)胞原代NK細(xì)胞在體外擴(kuò)增和活化1321天,大大提高轉(zhuǎn)移的腎細(xì)胞癌患者的臨床反應(yīng)。過繼轉(zhuǎn)輸原代NK細(xì)胞76NK細(xì)胞在外周血中的比例低(10–15%)，不能持續(xù)增殖；產(chǎn)生高純度的、大量的自體或異基因活化NK細(xì)胞非常難，并費(fèi)時(shí)、費(fèi)力；每個(gè)患者或者供者的NK的差異性對(duì)臨床常規(guī)治療帶來困難。

障礙/困難NK細(xì)胞在外周血中的比例低(10–15%)，不能持續(xù)增殖；77YT,NK-YS,HANK-1,NK-92,NKL,KHYG-1，NKG(2)NK細(xì)胞系JapanEBV-positiveWesterncountriesChinaYT,NK-YS,HANK-1,NK-92,NKL,78NK92cellsNK-92cell:CD56brightCD16-高效廣譜抗腫瘤作用，表達(dá)大量活化型受體；高水平表達(dá)與細(xì)胞凋亡途徑有關(guān)的分子及細(xì)胞毒效應(yīng)分子；對(duì)惡性黑色素瘤、前列腺癌、乳腺癌、白血病淋巴瘤等都具有高效的殺傷活性。NK92cellsNK-92cell:CD56bri79NK92細(xì)胞容易大量擴(kuò)增，適合標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)，已經(jīng)用于臨床試驗(yàn)，是目前最強(qiáng)的、適于臨床應(yīng)用的NK細(xì)胞系。NK92細(xì)胞容易大量擴(kuò)增，適合標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)，已經(jīng)用于臨床試驗(yàn)，80NKcelllineInstrumentCulturemediumCytokineinmediumStartingcellnumberCultureTime(days)HarvestedcellnumberViabilityNK-921-LVuelifeculturebagEX-Vivo10serum-freemedia+aminoacidsand2.5%humanABplasmaIL-2(500IU/ml)(2.5×105/ml)×25ml/bag15-17>1×109/bag≥80%ControlledstirredbioreactorOptimizedclinicl-grademediaIL-2(100~500IU/ml)1×107/bioreactor11-16>1010/bioreactor>95%NKG*WAVEBioreactorα-MEMmedium10%fetalbovineserum+10%horseserumIL-2(100IU/ml)(1×105/ml)×200ml/bag12-14>1010/bag>90%NKLPlatesorFlasksRPMI1640medium10%heat-inactivatedhumanABserumIL-2(100pM)----KHYG-1PlatesorFlasksRPMI1640medium2%humanlow-toxicityABserumIL-2(450IU/ml)----大規(guī)模培養(yǎng)臨床應(yīng)用NK細(xì)胞系NKcelllineInstrumentCulture812.淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞（LAK）1980年,Rosenberg及其同事建立了一種IL2刺激產(chǎn)生大量的淋巴細(xì)胞的新方法,這些淋巴細(xì)胞可以殺傷新鮮的、沒有培養(yǎng)的、原代轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞。LAK細(xì)胞是細(xì)胞毒性效應(yīng)淋巴細(xì)胞，其細(xì)胞毒活性不受MHC限制，能夠殺傷原代腫瘤細(xì)胞和NK抵抗的腫瘤細(xì)胞系,在功能上與NK細(xì)胞不同。2.淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞（LAK）1980年,Ros82LAK細(xì)胞表現(xiàn)出較好的耐受性，以一定的間隔時(shí)間重復(fù)輸注，以保持一定數(shù)量的新鮮的LAK細(xì)胞。1984年,Rosenberg及其同事被FDA批準(zhǔn)，IL2和LAK用于治療25例腫瘤患者，包括腎細(xì)胞癌、黑色素瘤、肺癌或結(jié)腸癌。LAK細(xì)胞表現(xiàn)出較好的耐受性，以一定的間隔時(shí)間重復(fù)輸注，以保83LAK細(xì)胞的制備腫瘤患者的外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）在體外擴(kuò)增，IL2刺激，培養(yǎng)約5天。培養(yǎng)后的LAK是異質(zhì)性的，含有CD3CD56+,CD3+CD56+和CD3+CD56細(xì)胞；其中CD3+CD56+T和CD3?CD56+NK細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞殺傷作用。LAK細(xì)胞的制備84臨床研究證明,LAK細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)移性腫瘤如腎細(xì)胞癌和黑色素瘤有一定療效。臨床研究證明,LAK細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)移性腫瘤如腎細(xì)胞癌和黑色素瘤有85LAK/IL2的主要限制是其毒性全身應(yīng)用IL2通常是造成副作用的主要原因，包括煩躁,發(fā)熱,寒冷,頭痛,惡心,嘔吐,皮疹,水腫，25%患者可以發(fā)生副反應(yīng)。男性呼吸道窘迫綜合征、肝臟毒性和脈管炎有報(bào)道。LAK/IL2的主要限制是其毒性863.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）CIK是通過培養(yǎng)外周血淋巴細(xì)胞(PBL)，培養(yǎng)第一天在培養(yǎng)基中加入IFN-1000u/ml,24小時(shí)后加入抗CD3抗體50ng/ml和IL-2300IU/ml。定期加入IL-2,培養(yǎng)基常規(guī)性換液，培養(yǎng)21–28天。3.細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）CIK是通過培養(yǎng)外周87患者淋巴細(xì)胞體外患者自體CIK患者淋巴細(xì)胞體外患者自體CIK88CIK細(xì)胞中CD3+CD4+(37.4%)、CD3+CD8+(64.2%);CD3?CD56+NK細(xì)胞含量小(～2%)，培養(yǎng)14天時(shí)，37.7%為CD3+CD8+CD56+的

自然殺傷T(NKT)細(xì)胞，是CIK中最強(qiáng)的細(xì)胞毒性細(xì)胞。與LAK細(xì)胞相比，CIK細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞毒活性更強(qiáng)；CIK細(xì)胞在識(shí)別和殺傷靶細(xì)胞時(shí)是非MHC限制性的。CIK細(xì)胞中CD3+CD4+(37.4%)、CD89CIK的第一例臨床試驗(yàn)是在1999年，由SchmidtWolf等在德國(guó)進(jìn)行，自體CIK細(xì)胞轉(zhuǎn)入IL2基因，轉(zhuǎn)述給10例腫瘤患者，包括轉(zhuǎn)移性腎癌、結(jié)腸癌和淋巴瘤。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。除了3例患者有發(fā)熱的癥狀外，沒有嚴(yán)重的副反應(yīng)。CIK的第一例臨床試驗(yàn)是在1999年，由SchmidtWo90一項(xiàng)來自中國(guó)的報(bào)道，用CIK輔助治療急性白血病,19例接受1–4個(gè)療程自體CIK細(xì)胞輸注聯(lián)合化療的患者中,73.4%在隨后的4年中維持持續(xù)緩解,只作化療的患者僅為27.3%。作為免疫治療方式,CIK治療腫瘤量較小的患者有效或者作為輔助治療,不適合用于治療腫瘤量較大的患者。一項(xiàng)來自中國(guó)的報(bào)道，用CIK輔助治療急性白血病,19例接受91CIK的機(jī)制:釋放炎癥因子,如IFN,TNF,穿孔素,顆粒酶B殺傷腫瘤細(xì)胞;通過FasFasL途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。CIK已經(jīng)成功用于臨床治療胃癌、結(jié)腸癌、淋巴瘤、白血病等。CIK的機(jī)制:92腫瘤生物治療進(jìn)展課件培訓(xùn)講義93II.抗原特異性T細(xì)胞II.抗原特異性T細(xì)胞94T細(xì)胞在抗腫瘤的免疫應(yīng)答中細(xì)胞免疫起著主要作用，特別是CTL，它是抗腫瘤免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞，故也應(yīng)是用于過繼免疫治療的最佳細(xì)胞。T細(xì)胞在抗腫瘤的免疫應(yīng)答中細(xì)胞免疫起著主要作用，特別是CTL95T細(xì)胞活化抗原遞呈細(xì)胞腫瘤細(xì)胞腫瘤抗原腫瘤抗原表達(dá)識(shí)別與殺傷腫瘤細(xì)胞抗原的識(shí)別與遞呈淋巴結(jié)CD8+T細(xì)胞CD8+T細(xì)胞血液循環(huán)腫瘤血管遷移T細(xì)胞活化抗原遞呈細(xì)胞腫瘤細(xì)胞腫瘤抗原腫瘤抗原表達(dá)識(shí)別與殺傷96Flood發(fā)現(xiàn)CTL在體內(nèi)聚集到腫瘤部位的能力強(qiáng)于LAK和NK，且能特異性地殺傷腫瘤細(xì)胞。Flood發(fā)現(xiàn)CTL在體內(nèi)聚集到腫瘤部位的能力強(qiáng)于LAK和N97實(shí)驗(yàn)顯示，腫瘤疫苗在體內(nèi)應(yīng)用可增加體內(nèi)的腫瘤特異性CTL的數(shù)量，但到一定水平時(shí)候，體內(nèi)的CTL到達(dá)平穩(wěn)期而不再增加，這主要是由于體內(nèi)存在的特異性及非特異性免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)限制了CTL的擴(kuò)增。所以，利用細(xì)胞因子或免疫刺激劑直接活化腫瘤患者體內(nèi)CTL受到限制。實(shí)驗(yàn)顯示，腫瘤疫苗在體內(nèi)應(yīng)用可增加體內(nèi)的腫瘤特異性CTL的數(shù)98在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，大量擴(kuò)增免疫效應(yīng)細(xì)胞。在體外培養(yǎng)可突破此調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，大量擴(kuò)增免疫效應(yīng)細(xì)胞。99轉(zhuǎn)輸抗原特異性T細(xì)胞因?yàn)槟[瘤相關(guān)抗原TAA是“自身”抗原，免疫系統(tǒng)難于識(shí)別；腫瘤患者體內(nèi)難于產(chǎn)生對(duì)腫瘤應(yīng)答的T細(xì)胞,甚至在體外最佳條件下也難于大規(guī)模培養(yǎng)。轉(zhuǎn)輸抗原特異性T細(xì)胞因?yàn)槟[瘤相關(guān)抗原TAA是“自身”抗原，免1004.腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞(TIL)1986年,Rosenberg及其同事應(yīng)用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉(zhuǎn)移。之后很快在1988年首次報(bào)道了利用TIL治療轉(zhuǎn)移性黑色素瘤能夠誘導(dǎo)腫瘤緩解。4.腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞(TIL)1986年,Rose101如何制備TIL?大約需要5–6周如何制備TIL?大約需要5–6周102TIL增殖:粘附的腫瘤細(xì)胞死亡或被淋巴細(xì)胞殺死而消失生長(zhǎng)2–4周鑒定TIL殺傷腫瘤的活性直徑大于2cm的活檢腫瘤組織，剪碎，培養(yǎng)基中快速擴(kuò)增:抗CD3抗體,IL-2和滅活的同種異體PBMCs飼養(yǎng)細(xì)胞，2周轉(zhuǎn)輸患者挑選應(yīng)答最強(qiáng)的細(xì)胞克隆TIL增殖:粘附的腫瘤細(xì)胞死亡或被淋巴細(xì)胞殺死而消失生長(zhǎng)2–103維持TIL的存活，誘導(dǎo)腫瘤消失清除淋巴細(xì)胞，減少與TIL競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞因子,如IL-7和IL-15;清除內(nèi)源性Treg.維持TIL的存活，誘導(dǎo)腫瘤消失清除淋巴細(xì)胞，減少與TIL104

六、TLR配體激活的免疫效應(yīng)細(xì)

什么是TLR？Tolllikereceptor，Toll樣受體。是一類模式識(shí)別受體，能夠識(shí)別微生物的特異性成分和某些宿主分子，構(gòu)成防御很多病原體的第一道防線，在天然免疫系統(tǒng)中起著決定性的作用。此外，TLR連接天然免疫與獲得性免疫。六、TLR配體激活的免疫效應(yīng)細(xì)什么是TLR？105已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種細(xì)胞膜內(nèi)體已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種細(xì)胞膜內(nèi)體106TLR1廣泛表達(dá)于單核細(xì)胞、T和B淋巴細(xì)胞、DC細(xì)胞、多形核白細(xì)胞、NK細(xì)胞；TLR2/4/5主要分布于除T、B、NK細(xì)胞以外的免疫細(xì)胞；TLR3主要表達(dá)于未成熟的DC等；TLR7TLR9主要表達(dá)于單核細(xì)胞、DC細(xì)胞核巨噬細(xì)胞。TLR1廣泛表達(dá)于單核細(xì)胞、T和B淋巴細(xì)胞、DC細(xì)胞、多形核107腫瘤生物治療進(jìn)展課件培訓(xùn)講義108TLRs與腫瘤免疫治療TLRs與腫瘤免疫治療109

腫瘤免疫逃逸的策略12345免疫抑制分子招募Treg共刺激分子缺失促凋亡分子腫瘤免疫逃逸的策略12345免疫抑制分子招募Treg共刺激110通過活化TLRs激活免疫系統(tǒng)，打破腫瘤介導(dǎo)的免疫抑制狀態(tài)，發(fā)揮抗腫瘤作用。作為腫瘤生物治療的關(guān)鍵問題是打破腫瘤導(dǎo)致的免疫耐受狀態(tài)！通過活化TLRs激活免疫系統(tǒng)，打破腫瘤介導(dǎo)的免疫抑制111TLR配體已經(jīng)通過多種途徑應(yīng)用外用乳膏

靜脈注射

口服

瘤內(nèi)注射

皮下注射

TLR配體已經(jīng)通過多種途徑應(yīng)用外用乳膏靜脈注射口服瘤內(nèi)112TLR3,4,7/8和TLR9激動(dòng)劑被列入美國(guó)國(guó)立癌癥研究所（NCI）免疫治療腫瘤藥物，具有強(qiáng)大的抗腫瘤潛力。TLR3,4,7/8和TLR9激動(dòng)劑被列入美國(guó)國(guó)立癌癥研究所1131.TLR7激動(dòng)劑(1)天然ssRNA及其衍生物:通過內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞，然后與TLR7相互作用。TLR7ssRNA：?jiǎn)捂淩NA1.TLR7激動(dòng)劑(1)天然ssRNA及其衍生物:TLR7114DC產(chǎn)生IL-12和I型IFN活化NK細(xì)胞，產(chǎn)生IFN-并增強(qiáng)細(xì)胞毒作用殺傷腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤生長(zhǎng)TLR-7激動(dòng)劑ssRNA機(jī)制:DC產(chǎn)生IL-12和I型IFN活化NK細(xì)胞，產(chǎn)生IFN-并115(2)合成的TLR7激動(dòng)劑Imiquimod(咪喹莫特):HPV-相關(guān)的皮膚惡性腫瘤

(淺表性基底細(xì)胞癌

sBCC),III期臨床研究表明組織學(xué)清除率為79–82%；癌變前的光線性角化病治療。外用乳膏

(2)合成的TLR7激動(dòng)劑Imiquimod(咪喹莫特):116機(jī)制:誘導(dǎo)細(xì)胞因子如IFNγ和IL12產(chǎn)生;增強(qiáng)腫瘤特異性CTLs的活化；活化具有殺傷活性的mDC亞群的活化。機(jī)制:117

有20項(xiàng)臨床試驗(yàn)在進(jìn)行,Imiquimod有做疫苗佐劑的臨床試驗(yàn)有10項(xiàng)。有20項(xiàng)臨床試驗(yàn)在進(jìn)行,Imiquimod有做疫苗118PolyI:C(多聚肌苷酸胞苷酸),合成的病毒dsRNA類似物誘導(dǎo)I型IFNs的產(chǎn)生分子式:(C10H13N4O8P)x.(C9H14N3O8P)x2.TLR3激動(dòng)劑dsRNA：雙鏈RNAPolyI:C(多聚肌苷酸胞苷酸),合成的病毒dsRN119成熟DC,其活化抗原特異性T細(xì)胞的能力增強(qiáng),CD4+T細(xì)胞向Th1方向分化，分泌大量IFN。成熟DC,其活化抗原特異性T細(xì)胞的能力增強(qiáng),CD4+T120OvariancancerpatientsOvariancancerpatients121在人類,TLR9主要表達(dá)于B細(xì)胞和pDCsCpGODNs（人工合成的非甲基化雙鏈寡核苷酸），分為三種類型:CpGA,NK細(xì)胞強(qiáng)刺激劑，誘導(dǎo)pDCs產(chǎn)生;CpGB,中度IFNα誘導(dǎo)劑,增強(qiáng)抗原特異性免疫應(yīng)答;CpGC,兼具CpGA和CpGB的免疫刺激能力。只有CpG-B型進(jìn)入臨床3.TLR9激動(dòng)劑在人類,TLR9主要表達(dá)于B細(xì)胞和pDCs只有CpG-122已經(jīng)對(duì)以下人類腫瘤進(jìn)行評(píng)價(jià):腎細(xì)胞癌、惡性膠質(zhì)瘤、黑色素瘤、皮膚性T淋巴瘤和非何杰金氏淋巴瘤。機(jī)制:pDC和mDC活化,Th1類細(xì)胞因子譜,減少引流淋巴結(jié)中的Treg,增強(qiáng)腫瘤特異性T淋巴細(xì)胞和NK細(xì)胞的免疫應(yīng)答。已經(jīng)對(duì)以下人類腫瘤進(jìn)行評(píng)價(jià):123聯(lián)合治療:單克隆抗體化療放療細(xì)胞因子，包括GMCSF,IFNa,IL18和IL21CpGODNs與抗原、抗體或DC細(xì)胞CpGODN作為疫苗佐劑聯(lián)合治療:124CpGODNs作為疫苗佐劑CpGODNs作為疫苗佐劑125CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細(xì)胞，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和DC細(xì)胞CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細(xì)胞，單核細(xì)126

CpG-ODN活化天然免疫和獲得性免疫殺傷腫瘤細(xì)胞ThCTLCpG-ODN活化天然免疫和獲得性免疫殺傷腫瘤細(xì)胞Th127障礙/困惑!障礙/困惑!128許多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)TLR許多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)TLR129許多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)，并利用TLRs利用多種策略促進(jìn)自身的增殖與生存:通過產(chǎn)生各種免疫抑制因子抑制免疫應(yīng)答，促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤血管形成,誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞保護(hù)和抗凋亡因子。許多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)，并利用TLRs利用多種策略促進(jìn)自身的增殖130TLR激動(dòng)劑直接用作抗腫瘤藥物是一把“雙刃劍”TLR激動(dòng)劑直接用作抗腫瘤藥物是一把“雙刃劍”131TLR配體激活的免疫效應(yīng)細(xì)胞抽取外周血分離目的細(xì)胞：NK、T…篩選分離不同細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析對(duì)所需細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)可以和化療藥物聯(lián)合應(yīng)用將培養(yǎng)好的細(xì)胞回輸給患者+TLR激動(dòng)劑TLR配體激活的免疫效應(yīng)細(xì)胞抽取外周血分離目的細(xì)胞：NK、T132隨著免疫細(xì)胞生物學(xué)及免疫分子生物學(xué)的高速發(fā)展，免疫細(xì)胞治療已成為腫瘤患者放、化療后輔助治療的重要手段之一，其對(duì)于促進(jìn)患者免疫系統(tǒng)的重建、消除殘留病灶及骨髓凈化都具有良好效果。隨著免疫細(xì)胞生物學(xué)及免疫分子生物學(xué)的高速發(fā)展，免疫細(xì)133過繼性免疫治療主要優(yōu)點(diǎn)1.免疫細(xì)胞在體外處理，可繞過腫瘤患者體內(nèi)免疫障礙的種種機(jī)制。如新鮮分離的腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞(TIL)往往缺乏抗腫瘤效應(yīng)，而在體外一定條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后可恢復(fù)特異性抗腫瘤作用。過繼性免疫治療主要優(yōu)點(diǎn)1.免疫細(xì)胞在體外處理，可繞過腫1342.免疫細(xì)胞的活化及效應(yīng)過程往往由一些細(xì)胞因子介導(dǎo)，而目前利用生物技術(shù)可大規(guī)模生產(chǎn)多種細(xì)胞因子、腫瘤抗原或多肽，這使體外大量擴(kuò)增抗腫瘤免疫細(xì)胞成為可能。2.免疫細(xì)胞的活化及效應(yīng)過程往往由一些細(xì)胞因子介導(dǎo)，而目前135腫瘤生物治療進(jìn)展課件腫瘤生物治療進(jìn)展課件136（優(yōu)選）腫瘤生物治療進(jìn)展課件（優(yōu)選）腫瘤生物治療進(jìn)展課件1371894,WilliamB.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣泛擴(kuò)散的肉瘤患者，其腫瘤部位發(fā)生鏈球菌感染腫瘤完全消退是否是由于鏈球菌感染而導(dǎo)致腫瘤消退呢？January12,1862–April16,1936Astory1894,WilliamB.Coley,紐約外科醫(yī)生一位廣138Coley采取了大膽的行動(dòng)!注射活的鏈球菌治療沒有治愈希望的、不能手術(shù)的肉瘤患者腫瘤完全消退!Coley采取了大膽的行動(dòng)!注射活的鏈球菌治療沒有治愈希望139滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對(duì)1000患者治療，約40%的到明顯的治療效果Coley與他的女兒Dr.HelenColeyNauts利用細(xì)菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導(dǎo)部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!!!Coley是腫瘤生物治療的鼻祖滅活的鏈球菌和變形桿菌的混合物（Coley毒素）對(duì)1000140現(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)干擾素上市?？共《究鼓[瘤現(xiàn)代腫瘤生物治療起始于1986年美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FD141腫瘤的發(fā)生癌基因突變/抑癌基因缺失或基因表達(dá)調(diào)控失常，腫瘤細(xì)胞的信號(hào)通路與正常細(xì)胞的信號(hào)通路存在一定的差異。腫瘤的發(fā)生142

生物治療借助腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的差異，以核酸、蛋白、細(xì)胞和小分子化合物為治療介質(zhì)，以腫瘤特異性信號(hào)通路為主要作用靶點(diǎn)，發(fā)展腫瘤選擇性強(qiáng)、毒副反應(yīng)低、高治療指數(shù)的治療技術(shù)和藥物。生物治療借助腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的差異，以核酸、蛋143有足夠的臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見的腫瘤，而且能延長(zhǎng)腫瘤患者的生存期，改善預(yù)后。這種治療水平保障了生物治療成為繼手術(shù)、放療、化療之后的第四種腫瘤治療策略。有足夠的臨床證據(jù)表明，生物治療不僅能治療臨床可見的腫瘤，而且144CTL機(jī)體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機(jī)制為維持TIL的存活，誘導(dǎo)腫瘤消失②細(xì)胞癌變過程中使原本不表達(dá)的基因被激活；對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細(xì)胞或其它免疫細(xì)胞，令其對(duì)病原體作出反應(yīng)。1986年,Rosenberg及其同事應(yīng)用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉(zhuǎn)移。TLR配體已經(jīng)通過多種途徑應(yīng)用Coley采取了大膽的行動(dòng)!巨噬細(xì)胞腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞(TIL)抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)大規(guī)模培養(yǎng)臨床應(yīng)用NK細(xì)胞系與LAK細(xì)胞相比，CIK細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞毒活性更強(qiáng)；CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細(xì)胞，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和DC細(xì)胞對(duì)所需細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)已經(jīng)鑒定的人TLRs有11種遇到抗原后,成為活化的淋巴細(xì)胞,并進(jìn)一步分化為全功能的淋巴細(xì)胞,即效應(yīng)淋巴細(xì)胞?？贵w改變腫瘤細(xì)胞的粘附特性CpGB,中度IFNα誘導(dǎo)劑,增強(qiáng)抗原特異性免疫應(yīng)答;激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞二、生物治療技術(shù)和藥物分類目前已用于臨床的生物治療技術(shù)和藥物主要包括細(xì)胞因子單克隆抗體免疫效應(yīng)細(xì)胞免疫刺激劑基因藥物和免疫毒素作用于特定分子靶點(diǎn)的非細(xì)胞毒性小分子藥物CTL二、生物治療技術(shù)和藥物分類目前已用于臨床的生物治療技術(shù)145三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細(xì)菌：結(jié)核菌葡萄球菌真菌病毒：流感脊髓灰質(zhì)炎寄生蟲：絳蟲瘧原蟲蠕蟲攻擊防御三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用細(xì)菌：真菌病毒：寄生蟲：攻擊防御146免疫系統(tǒng)人體的防御體系清除細(xì)菌、病毒、外來異物；消除體內(nèi)衰老細(xì)胞以及發(fā)生突變的細(xì)胞(有的突變細(xì)胞會(huì)變成癌細(xì)胞)。對(duì)于健康的人來說，其免疫系統(tǒng)的強(qiáng)大足以及時(shí)清除突變的癌細(xì)胞。免疫系統(tǒng)人體的防御體系清除細(xì)菌、病毒、外來異物；147NK細(xì)胞被認(rèn)為是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞IL-2(100~500IU/ml)NK細(xì)胞是機(jī)體早期抗病毒的重要成員活化的NK細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子,如IFN,TNF/,GMCSF,IL12。吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細(xì)胞LAKsTLR配體已經(jīng)通過多種途徑應(yīng)用⑤某些基因產(chǎn)物尤其是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的過度表達(dá)；（1）CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制Coley,紐約外科醫(yī)生1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈對(duì)所需細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)細(xì)胞因子介導(dǎo)的腫瘤抑制作用:5×105/ml)×25ml/bag在人類,TLR9主要表達(dá)于B細(xì)胞和pDCsCpGODN可直接和間接活化NK、T和B細(xì)胞，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和DC細(xì)胞無功能活性---初始淋巴細(xì)胞在抗腫瘤免疫中，巨噬細(xì)胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答。是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。許多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)，并利用TLRs利用多種策略促進(jìn)自身的增殖與生存:（1）CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制消除體內(nèi)衰老細(xì)胞以及發(fā)生突變的細(xì)胞(有的突變細(xì)胞會(huì)變成癌細(xì)胞)。機(jī)體免疫系統(tǒng)和癌細(xì)胞相互作用的結(jié)果決定了癌癥的最終演變。清除期平衡期逃逸期NK細(xì)胞被認(rèn)為是抗腫瘤免疫的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞機(jī)體免疫系統(tǒng)和癌細(xì)胞148對(duì)于癌癥病人來說，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識(shí)別、殺滅癌癥細(xì)胞;另一方面，癌癥細(xì)胞的大量增殖會(huì)進(jìn)一步抑患者的免疫功能，而且癌癥細(xì)胞有多種機(jī)制來逃脫免疫細(xì)胞的識(shí)別與殺傷。對(duì)于癌癥病人來說，普遍存在免疫系統(tǒng)低下，不能有效地識(shí)別、殺滅1491.什么是免疫？我們生存在一個(gè)充滿復(fù)雜感染源的、敵對(duì)的世界里，我們的機(jī)體可以利用許多機(jī)制來防御外來微生物的侵襲，保護(hù)機(jī)體健康，這種防御能力被稱為免疫。1.什么是免疫？150免疫的類型天然免疫反應(yīng)先天就具備的對(duì)某種病原體的免疫力,具有遺傳性，是機(jī)體抵御病原體侵襲的第一道防線；獲得性免疫反應(yīng)后天獲得、具有針對(duì)性、具有免疫記憶性。免疫的類型天然免疫反應(yīng)先天就具備的對(duì)某種病原體的免疫力,具有1512.免疫系統(tǒng)的組成免疫器官骨髓、胸腺、脾臟、淋巴結(jié)、扁桃體、小腸集合淋巴結(jié)、闌尾等；免疫組織消化道、

呼吸道粘膜內(nèi)存在的許多無被膜的淋巴組織；免疫細(xì)胞淋巴細(xì)胞、單核吞噬細(xì)胞等免疫分子補(bǔ)體、免疫球蛋白、細(xì)胞因子等2.免疫系統(tǒng)的組成1523.免疫系統(tǒng)分布3.免疫系統(tǒng)分布153免疫系統(tǒng)功能功能生理性(有利)病理性(不利)免疫防御防御病原微生物侵害超敏反應(yīng)/免疫缺陷免疫自穩(wěn)清除損傷或衰老的細(xì)胞自身免疫病免疫監(jiān)視清除復(fù)制錯(cuò)誤/突變細(xì)胞細(xì)胞癌變/持續(xù)感染免疫系統(tǒng)功能功能生理性(有利)病理性(不利)免疫防御防御1544.發(fā)揮免疫應(yīng)答的成員？免疫細(xì)胞免疫分子4.發(fā)揮免疫應(yīng)答的成員？免疫細(xì)胞155天然免疫系統(tǒng)肥大細(xì)胞、單核/巨噬細(xì)胞、中性/嗜堿性粒細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞；特異性免疫細(xì)胞T細(xì)胞、B細(xì)胞天然免疫系統(tǒng)156對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細(xì)胞或其它免疫細(xì)胞，令其對(duì)病原體作出反應(yīng)。在抗腫瘤免疫中，巨噬細(xì)胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答。作為清道夫細(xì)胞清除機(jī)體死亡細(xì)胞和細(xì)胞碎片。巨噬細(xì)胞（M）對(duì)細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌（即吞噬以及消化），并激活淋巴細(xì)胞157在不同組織中其名稱不同細(xì)胞名稱位置肺泡巨噬細(xì)胞肺泡組織細(xì)胞結(jié)締組織庫(kù)佛氏細(xì)胞肝神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞神經(jīng)組織上皮樣細(xì)胞肉芽腫蝕骨細(xì)胞骨竇內(nèi)皮細(xì)胞脾系膜細(xì)胞腎在不同組織中其名稱不同細(xì)胞名稱位置肺泡巨噬細(xì)胞肺泡組織細(xì)胞結(jié)158粒細(xì)胞:中性粒細(xì)胞-吞噬并殺滅病原微生物；嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞-抵抗寄生蟲，與過敏反應(yīng)有關(guān)。顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細(xì)胞活化時(shí)釋放并殺滅病原體。粒細(xì)胞:顆粒中含有多種酶和毒性蛋白，在細(xì)胞活化時(shí)釋放并殺滅159DC細(xì)胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細(xì)胞初始T細(xì)胞活化的T細(xì)胞DC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋梁

樹突狀細(xì)胞(DC)DC細(xì)胞攝取病原體后變?yōu)槌墒斓腄C細(xì)胞初始T細(xì)胞活化的T細(xì)胞160天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋梁

天然免疫獲得性免疫DCDC是天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答之間的橋161淋巴細(xì)胞:

TBNK獲得性免疫天然免疫淋巴細(xì)胞:

TBNK獲得性免疫天然免疫162紅細(xì)胞淋巴細(xì)胞:小,無特征HE染色電鏡觀察無功能活性---初始淋巴細(xì)胞

遇到抗原后,成為活化的淋巴細(xì)胞,并進(jìn)一步分化為全功能的淋巴細(xì)胞,即效應(yīng)淋巴細(xì)胞。

紅細(xì)胞淋巴細(xì)胞:小,無特征HE染色電鏡觀察無功能活性--163B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)B-細(xì)胞受體(BCR)抗體-免疫球蛋白膜型免疫球蛋白T-細(xì)胞受體(TCR)殺傷活化調(diào)節(jié)獲得性免疫細(xì)胞記憶性T細(xì)胞記憶性B細(xì)胞B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)B-細(xì)胞164活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細(xì)胞---CD8+T細(xì)胞輔助性T細(xì)胞為其它細(xì)胞的活化和功能提供必須的信號(hào)---CD4+T細(xì)胞調(diào)節(jié)性T細(xì)胞抑制其它淋巴細(xì)胞的活性并協(xié)助控制免疫應(yīng)答效應(yīng)性T細(xì)胞調(diào)節(jié)殺傷活化殺傷病毒或胞內(nèi)病原體感染的細(xì)胞---CD8+T細(xì)胞輔助性165自然殺傷細(xì)胞

（Naturalkillercells，NK）形態(tài)比T、B細(xì)胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細(xì)胞系。是天然免疫的重要成員,在獲得性免疫應(yīng)答之前對(duì)控制病毒感染非常重要；在外周血單個(gè)核細(xì)胞中占10%15%，淋巴結(jié)和組織中較少。自然殺傷細(xì)胞

（Naturalkillercells，N166不表達(dá)抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。不表達(dá)抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。167NK細(xì)胞是機(jī)體早期抗病毒的重要成員NK細(xì)胞是機(jī)體早期抗病毒的重要成員168四、抗腫瘤免疫機(jī)制免疫細(xì)胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？四、抗腫瘤免疫機(jī)制免疫細(xì)胞如何發(fā)揮抗腫瘤作用？169免疫系統(tǒng)識(shí)別“自我”與“非我”腫瘤細(xì)胞表達(dá)腫瘤抗原免疫系統(tǒng)識(shí)別“自我”與“非我”1701.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原(TSA):僅在腫瘤細(xì)胞上表達(dá);腫瘤相關(guān)性抗原(TAA):在某些腫瘤細(xì)胞上表達(dá)，也在某些正常細(xì)胞上表達(dá)。泛指在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中新出現(xiàn)或過度表達(dá)的抗原物質(zhì)。1.什么是腫瘤抗原？腫瘤特異性抗原(TSA):僅在腫瘤細(xì)171機(jī)體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機(jī)制為①基因突變；②細(xì)胞癌變過程中使原本不表達(dá)的基因被激活；③抗原合成過程的某些環(huán)節(jié)發(fā)生異常（如糖基化異常導(dǎo)致蛋白質(zhì)特殊降解產(chǎn)物的產(chǎn)生）；④胚胎時(shí)期抗原或分化抗原的異常、異位表達(dá)；⑤某些基因產(chǎn)物尤其是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的過度表達(dá)；⑥外源性基因（如病毒基因）的表達(dá)。機(jī)體產(chǎn)生腫瘤抗原的可能機(jī)制為①基因突變；1721．感應(yīng)階段：

1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈2）T細(xì)胞對(duì)抗原的識(shí)別2.反應(yīng)階段3.效應(yīng)階段2.獲得性細(xì)胞免疫應(yīng)答的基本過程1．感應(yīng)階段：2.反應(yīng)階段3.效應(yīng)階段2.獲得性細(xì)胞免疫應(yīng)173APC感應(yīng)階段反應(yīng)階段效應(yīng)階段抗原遞呈細(xì)胞CD8+TAPC感應(yīng)階段反應(yīng)階段效應(yīng)階段抗原遞呈細(xì)胞CD8+T174抗原遞呈功能MHC限制性APCAPC抗原遞呈功能APCAPC175B細(xì)胞漿細(xì)胞（產(chǎn)生抗體）T細(xì)胞細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）輔助性T細(xì)胞(Th)感染部位滯留在淋巴組織中活化B細(xì)胞骨髓產(chǎn)生抗體釋放到血液中效應(yīng)細(xì)胞B細(xì)胞漿細(xì)胞（產(chǎn)生抗體）T細(xì)胞細(xì)胞毒性T細(xì)胞（CTL）輔助176CTL細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可直接殺傷腫瘤細(xì)胞;Th細(xì)胞可以活化免疫系統(tǒng)的其它成分，在控制具有免疫原性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)中起重要的作用。CTL細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可直接殺傷腫瘤細(xì)胞;177（1）CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制靶細(xì)胞CTL循環(huán)凋亡解離CTL胞外分泌顆粒CTL與靶細(xì)胞結(jié)合CTL細(xì)胞質(zhì)重排（1）CTL殺傷靶細(xì)胞的機(jī)制靶細(xì)胞CTL循環(huán)凋亡解離CTL胞178(2)體液免疫體液免疫為B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，B細(xì)胞受抗原刺激后活化、增殖、分化，形成漿細(xì)胞并分泌抗體，由于主要是血清或血漿中的抗體發(fā)揮免疫效應(yīng)，故稱為體液免疫。(2)體液免疫體液免疫為B細(xì)胞介導(dǎo)的免疫，B細(xì)胞受抗原刺激后179許多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)TLREX-Vivo10serum-freemedia+形態(tài)比T、B細(xì)胞大，胞質(zhì)中有特殊的顆粒，含有毒性蛋白,不需要特異性免疫刺激，即能夠在體外殺傷某些腫瘤細(xì)胞系。不表達(dá)抗原特異性受體，也不形成免疫記憶。TLR激動(dòng)劑直接用作抗腫瘤藥物是一把“雙刃劍”篩選分離不同細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)對(duì)所需細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)在抗腫瘤免疫中，巨噬細(xì)胞具有抗原遞呈功能，參與調(diào)節(jié)T細(xì)胞的特異性免疫應(yīng)答。YT,NK-YS,HANK-1,NK-92,NKL,KHYG-1，NKG其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈HPV-相關(guān)的皮膚惡性腫瘤(淺表性基底細(xì)胞癌sBCC),III期臨床研究表明組織學(xué)清除率為79–82%；2%humanlow-toxicityABserum預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，根治腫瘤；2%);CD3?CD56+NK細(xì)胞含量小(～2%)，培養(yǎng)14天時(shí)，37.EBV-positive是一類模式識(shí)別受體，能夠識(shí)別微生物的特異性成分和某些宿主分子，構(gòu)成防御很多病原體的第一道防線，在天然免疫系統(tǒng)中起著決定性的作用。三、免疫系統(tǒng)在抗腫瘤中的作用其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。清除淋巴細(xì)胞，減少與TIL競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞因子,如IL-7和IL-15;遇到抗原后,成為活化的淋巴細(xì)胞,并進(jìn)一步分化為全功能的淋巴細(xì)胞,即效應(yīng)淋巴細(xì)胞。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解?？贵w的抗腫瘤機(jī)制?許多腫瘤細(xì)胞也表達(dá)TLR抗體的抗腫瘤機(jī)制?180A.激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞A.激活補(bǔ)體系統(tǒng)溶解腫瘤細(xì)胞181跨膜孔道跨膜孔道182B.抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)B.抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)183C.抗體的調(diào)理作用腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞抗體與腫瘤細(xì)胞表面的相應(yīng)抗原結(jié)合溶酶體被調(diào)理的腫瘤細(xì)胞結(jié)合到M的FcR上，并被M吞噬形成吞噬體吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細(xì)胞抗體C.抗體的調(diào)理作用腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞抗體與腫瘤細(xì)胞表面的相應(yīng)184D.抗體的封閉作用細(xì)胞惡變后其表面可過表達(dá)某些受體，這些受體與其相應(yīng)的配體結(jié)合后可刺激腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。針對(duì)這些受體的抗體可通過封閉腫瘤細(xì)胞表面的受體阻礙其功能，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。D.抗體的封閉作用185CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細(xì)胞，單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和DC細(xì)胞有20項(xiàng)臨床試驗(yàn)在進(jìn)行,Imiquimod有做疫苗佐劑的臨床試驗(yàn)有10項(xiàng)。細(xì)胞惡變后其表面可過表達(dá)某些受體，這些受體與其相應(yīng)的配體結(jié)合后可刺激腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。此外，TLR連接天然免疫與獲得性免疫。M還可通過ADCC殺傷腫瘤細(xì)胞7%為CD3+CD8+CD56+的自然殺傷T(NKT)細(xì)胞，是CIK中最強(qiáng)的細(xì)胞毒性細(xì)胞。Coley采取了大膽的行動(dòng)!EX-Vivo10serum-freemedia+1）抗原遞呈細(xì)胞（APC）對(duì)外源性抗原的加工、處理、遞呈干擾素(IFN)抑制細(xì)胞增生，引起多種腫瘤細(xì)胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，是巨噬細(xì)胞主要的活化因子。1986年,Rosenberg及其同事應(yīng)用TIL在小鼠模型中證明,聯(lián)合自體TIL和環(huán)磷酰胺可以緩解腫瘤轉(zhuǎn)移。利用細(xì)菌成分活化免疫系統(tǒng)，可以誘導(dǎo)部分晚期腫瘤患者的持續(xù)緩解!!!抗體與腫瘤細(xì)胞膜表面的抗原結(jié)合后，可干擾腫瘤細(xì)胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。CTL細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答可直接殺傷腫瘤細(xì)胞;RPMI1640medium通過產(chǎn)生各種免疫抑制因子抑制免疫應(yīng)答，促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤血管形成,誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞保護(hù)和抗凋亡因子。PlatesorFlasksLAK細(xì)胞是細(xì)胞毒性效應(yīng)淋巴細(xì)胞，其細(xì)胞毒活性不受MHC限制，能夠殺傷原代腫瘤細(xì)胞和NK抵抗的腫瘤細(xì)胞系,在功能上與NK細(xì)胞不同。誘導(dǎo)I型IFNs的產(chǎn)生腫瘤患者體內(nèi)難于產(chǎn)生對(duì)腫瘤應(yīng)答的T細(xì)胞,甚至在體外最佳條件下也難于大規(guī)模培養(yǎng)。直徑大于2cm的活檢腫瘤組織，剪碎，培養(yǎng)基中E.抗體改變腫瘤細(xì)胞的粘附特性抗體與腫瘤細(xì)胞膜表面的抗原結(jié)合后，可干擾腫瘤細(xì)胞的粘附特性，阻止其克隆形成及與血管內(nèi)皮的粘附，從而有助于控制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。CpGODN可直接和間接活化NK、T和B細(xì)胞，單核細(xì)胞、巨噬186抗腫瘤抗體雖然能夠通過上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認(rèn)為，體液免疫在抗腫瘤免疫中只處于從屬地位。細(xì)胞免疫在抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用抗腫瘤抗體雖然能夠通過上述幾種方式發(fā)揮作用，但一般認(rèn)為，體液1873.天然免疫應(yīng)答（1）自然殺傷細(xì)胞（NK）NK是機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，對(duì)于抗腫瘤、抗病毒感染非常重要。3.天然免疫應(yīng)答（1）自然殺傷細(xì)胞（NK）188NK細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制A.釋放毒性顆粒:NK細(xì)胞含有毒性酶，穿孔蛋白-穿孔素，穿透細(xì)胞膜并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。NK靶細(xì)胞NK細(xì)胞抗腫瘤機(jī)制A.釋放毒性顆粒:NK細(xì)胞含有毒性酶，穿189B.細(xì)胞因子介導(dǎo)的腫瘤抑制作用:活化的NK細(xì)胞釋放大量細(xì)胞因子,如IFN,TNF/,GMCSF,IL12。干擾素(IFN)抑制細(xì)胞增生，引起多種腫瘤細(xì)胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，是巨噬細(xì)胞主要的活化因子。B.細(xì)胞因子介導(dǎo)的腫瘤抑制作用:190C.抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)C.抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)191（2）巨噬細(xì)胞（M)活化的M與腫瘤細(xì)胞結(jié)合后通過溶酶體酶等直接殺傷腫瘤細(xì)胞；（2）巨噬細(xì)胞（M)活化的M與腫瘤細(xì)胞結(jié)合后通過溶酶192五、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療鑒定TIL殺傷腫瘤的活性干擾素(IFN)抑制細(xì)胞增生，引起多種腫瘤細(xì)胞凋亡,抗腫瘤新生血管形成，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，是巨噬細(xì)胞主要的活化因子。吞噬溶酶體形成，殺傷腫瘤細(xì)胞CpGC,兼具CpGA和CpGB的免疫刺激能力。對(duì)于健康的人來說，其免疫系統(tǒng)的強(qiáng)大足以及時(shí)清除突變的癌細(xì)胞。免疫細(xì)胞在體外處理，可繞過腫瘤患者體內(nèi)免疫障礙的種種機(jī)制。④胚胎時(shí)期抗原或分化抗原的異常、異位表達(dá)；活化具有殺傷活性的mDC亞群的活化。其中CD3+CD56+T和CD3?CD56+NK細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞殺傷作用。大規(guī)模培養(yǎng)臨床應(yīng)用NK細(xì)胞系Coley,紐約外科醫(yī)生IL-2(100~500IU/ml)滯留在淋巴組織中活化B細(xì)胞癌變前的光線性角化病治療。其中，1例患濾泡性淋巴瘤者完全緩解。TLR3,4,7/8和TLR9激動(dòng)劑被列入美國(guó)國(guó)立癌癥研究所（NCI）免疫治療腫瘤藥物，具有強(qiáng)大的抗腫瘤潛力。JBiomedicineandBiotechnology,2011嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞-抵抗寄生蟲，與過敏反應(yīng)有關(guān)。EBV-positive不表達(dá)抗原特異性受體，也不形成免疫記憶?；罨腗還可分泌TNF、NO等細(xì)胞毒性因子而間接殺傷腫瘤細(xì)胞；抗原遞呈作用殺傷腫瘤分泌細(xì)胞因子IL-1IL-6TNF-IL-8GM-CSF酶溶菌酶酸性水解酶賴氨酸酶酯酶膠原蛋白酶彈性纖維蛋白酶前列腺素補(bǔ)體成分纖維蛋白結(jié)合蛋白凝血因子其它因子五、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療活化的M還可分泌TNF、NO等細(xì)193M還可通過ADCC殺傷腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞活化的巨噬細(xì)胞M還可通過ADCC殺傷腫瘤細(xì)胞巨噬細(xì)胞活化的巨噬細(xì)胞194作為遞呈抗原的APC，活化T細(xì)胞；抗原T細(xì)胞受體T淋巴細(xì)胞抗原遞呈細(xì)胞（M）抗原肽T淋巴細(xì)胞T細(xì)胞受體MHC-抗原肽復(fù)合物作為遞呈抗原的APC，活化T細(xì)胞；抗原T細(xì)胞受體T淋巴細(xì)胞抗195五、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療（Adoptivecellularimmunotherapy，ACI）是轉(zhuǎn)輸體外培養(yǎng)、修飾的效應(yīng)細(xì)胞，如淋巴細(xì)胞和其它免疫細(xì)胞，治療疾病。細(xì)胞治療可以被認(rèn)為是利用自體或異體細(xì)胞，替換、修復(fù)或增強(qiáng)受損傷組織的或系統(tǒng)的生物功能的一種策略。五、過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療過繼性免疫效應(yīng)細(xì)胞治療（Adopt196腫瘤生物治療進(jìn)展課件培訓(xùn)講義197ACI治療腫瘤具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)輸給腫瘤患者，清除術(shù)后和化療后的殘留腫瘤細(xì)胞；預(yù)防復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，根治腫瘤；毒副作用低，特異性高；是聯(lián)合治療腫瘤的重要部分。ACI治療腫瘤198I.非特異性免疫細(xì)胞NK細(xì)胞巨噬細(xì)胞DCsLAKsCIKsTLR激動(dòng)劑刺激免疫細(xì)胞II.抗原特異性T細(xì)胞CTLTILACI的類型：I.非特異性免疫細(xì)胞ACI的類型：199I.非特異性免疫細(xì)胞I.非特異性免疫細(xì)胞2001.NK細(xì)胞用于過繼轉(zhuǎn)輸1.NK細(xì)胞用于過繼轉(zhuǎn)輸201Science.2011,7;331(6013):44–49.NK細(xì)胞被認(rèn)為是抗腫瘤免疫