白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件

白血病分子生物學(xué)白血病的分子機(jī)制白血病的分子檢測(cè)白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病分子生物學(xué)白血病的分子機(jī)制1白血病的分子機(jī)制基因(gene)：合成有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA所必需的全部核酸序列。癌基因(oncogene)：細(xì)胞或病毒中存在的，能誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化并使之獲得新生物特征的基因。癌基因活化的方式：

點(diǎn)突變?nèi)旧w重排基因擴(kuò)增抑癌基因(tumorsuppressorgenes)：指一類基因，其產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖起負(fù)調(diào)控的作用，并能潛在抑制細(xì)胞的惡變。

白血病的分子機(jī)制基因(gene)：合成有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或2白血病的分子機(jī)制白血病的分子機(jī)制3白血病的分子機(jī)制增殖過度分化阻斷凋亡受抑白血病的分子機(jī)制增殖過度4“二次打擊”學(xué)說D.GaryGillilandBestPractice&ResearchClinicalHaematology.2003;16:409-417“二次打擊”學(xué)說D.GaryGillilandBest5白血病的分子檢測(cè)SouthernblotNorthernblotWesternblotFISHPCR測(cè)序芯片白血病的分子檢測(cè)Southernblot6白血病的分子檢測(cè)PCR反應(yīng)原理白血病的分子檢測(cè)PCR反應(yīng)原理7N=N0x(1+E)n

N：擴(kuò)增子數(shù)量N0：起始模板數(shù)量E：擴(kuò)增效率n：循環(huán)數(shù)白血病的分子檢測(cè)PCR理論方程N(yùn)=N0x(1+E)n白血病的分子檢測(cè)PCR理8白血病的分子檢測(cè)PCR方法優(yōu)點(diǎn)快速靈敏特異PCR方法缺點(diǎn)假陽(yáng)性假陰性白血病的分子檢測(cè)PCR方法優(yōu)點(diǎn)9白血病的分子檢測(cè)PCR：僅適用于染色體斷裂點(diǎn)叢集于相對(duì)小的范圍內(nèi)（<2kb），如T-ALL中SIL-TAL1。

RT-PCR：可用于染色體斷裂點(diǎn)跨越很大的區(qū)域的融合基因。

巢式RT-PCR：可顯著提高反應(yīng)的特異性，增加擴(kuò)增效率。RQ-PCR：可定量擴(kuò)增產(chǎn)物。白血病的分子檢測(cè)PCR：僅適用于染色體斷裂點(diǎn)叢集于相對(duì)小的范10白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR（Real-timeQuantitativePCR）熒光標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物熒光標(biāo)記引物特異性熒光標(biāo)記探針

TaqMan探針、分子信標(biāo)、雜交雙探針熒光染料直接結(jié)合擴(kuò)增產(chǎn)物

SYBRGreenI與DNA雙鏈結(jié)合動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR（Real-timeQuant11TaqMan探針法特異性高多重基因定量成本較高TaqMan探針法特異性高12SYBRGreenI法成本低最適合初步篩查熔解曲線功能無法多重檢測(cè)無模板特異性靈敏度低SYBRGreenI法成本低13白血病的分子檢測(cè)CT值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著增長(zhǎng)（穿過閾值線）時(shí)的循環(huán)次數(shù)CT值與起始模板量成反比白血病的分子檢測(cè)CT值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著增長(zhǎng)（穿過閾14白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR的檢測(cè)系統(tǒng)：該系統(tǒng)內(nèi)置了96孔PCR儀，且在每個(gè)反應(yīng)孔上均有一個(gè)監(jiān)測(cè)探頭用于檢測(cè)PCR反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度。平均每8-12秒就檢測(cè)一次，以達(dá)到實(shí)時(shí)檢測(cè)的目的。系統(tǒng)中的電腦系統(tǒng)同時(shí)不斷地分析來自檢測(cè)系統(tǒng)的信息，不斷計(jì)算每個(gè)反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度，并最終得到CT值。該系統(tǒng)可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的CT值和拷貝數(shù)自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算未知樣品中的目的基因拷貝數(shù)。白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR的檢測(cè)系統(tǒng)：15白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR方法優(yōu)點(diǎn)：

靈敏而特異起點(diǎn)定量閉管化學(xué)（污染的風(fēng)險(xiǎn)低）沒有PCR后處理（無需走膠，拍照等）高度自動(dòng)化定性：?jiǎn)螖?shù)據(jù)點(diǎn)測(cè)定定量：多數(shù)據(jù)點(diǎn)測(cè)定能做基因分型及SNP鑒定白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR方法優(yōu)點(diǎn)：16見于~50%核型正常的AML患者，而在伴低危/高危核型患者中極少見是無特異分子異常的急性白血病患者理想的MRD檢測(cè)指標(biāo)為研究白血病的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)在隨訪患者中檢測(cè)到高水平HOX11L2說明白血病細(xì)胞的存在，強(qiáng)烈預(yù)示復(fù)發(fā)，而完全緩解患者HOX11L2表達(dá)水平迅速降低，并維持在一個(gè)低水平。對(duì)≤2歲的嬰幼兒急性白血病患者應(yīng)常規(guī)進(jìn)行MLL-AF4融合基因的檢測(cè)以篩選出高?；颊撸o予強(qiáng)化治療提高生存率GaryGillilandBestPractice&ResearchClinicalHaematology.TEL基因重排是獨(dú)立預(yù)后因素，RT-PCR檢測(cè)TEL-AML1融合基因能將低危險(xiǎn)度與高危險(xiǎn)度的ALL患者區(qū)分開來。由于PML基因斷裂點(diǎn)不同產(chǎn)生3種不同的PML-RARα異構(gòu)體由于PML基因斷裂點(diǎn)不同產(chǎn)生3種不同的PML-RARα異構(gòu)體SYBRGreenI法巢式RT-PCR：可顯著提高反應(yīng)的特異性，增加擴(kuò)增效率。白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用突變熱點(diǎn)位于codon12,13和61熒光標(biāo)記引物HOX11基因異常表達(dá)最新研究采用RQ-PCR檢測(cè)CBFβ-MYH11轉(zhuǎn)錄本水平來評(píng)價(jià)M4Eo患者M(jìn)RD情況，預(yù)示復(fù)發(fā)沒有PCR后處理（無需走膠，拍照等）V-J重排：Lκ,Lλ,TCRA,TCRG目前，此突變的預(yù)后價(jià)值各研究組報(bào)道不一，尚待進(jìn)一步證實(shí)以上結(jié)果提示C-KIT突變與M2b密切相關(guān)(R=0.RQ-PCR的操作流程從細(xì)胞或組織中抽提DNA或RNA用PCR或RT-PCR擴(kuò)增特異片段將PCR產(chǎn)物克隆到合適的載體上純化，定量和系列稀釋質(zhì)粒DNA或RNA體外轉(zhuǎn)錄成RNA片段（僅用于RNA樣品）構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線（CTυlgcopy）樣品的定量檢測(cè)校正樣品基因拷貝數(shù)見于~50%核型正常的AML患者，而在伴低危/高危核型患者中17白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件18白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病的分子生物學(xué)檢查對(duì)白血病診斷分型及預(yù)后判斷有以下幾方面意義：補(bǔ)充MIC檢查的不足發(fā)現(xiàn)新的亞型監(jiān)測(cè)白血病的微小殘留病灶（MRD）為研究白血病的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病的分子生物學(xué)檢查對(duì)白血病診斷分19白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用PCR方法檢測(cè)MRD常用的分子標(biāo)志

白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用PCR方法檢測(cè)M20AML1-ETOt(8;21)(q22;q22)6~8%原發(fā)性AML，在M2中的陽(yáng)性率為20~40%，在M2b中陽(yáng)性率為90%少見于M4和M1，極少見于MDS和骨髓增生綜合癥AML1-ETO+白血病細(xì)胞有一定程度的分化能力，能分化至較成熟的嗜中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，且對(duì)化療反應(yīng)較敏感AML1-ETO+患者對(duì)大劑量阿糖胞苷治療效果好，具有較高的緩解率，無病生存期長(zhǎng)，預(yù)后較其他AML亞型（M3除外）好AML1-ETOt(8;21)(q22;q22)21AML1-ETO對(duì)初發(fā)患者進(jìn)行t(8;21)和AML1-ETO融合基因的檢測(cè)對(duì)其預(yù)后判斷及治療方案的制定相當(dāng)重要AML1-ETO定性結(jié)果不能用于評(píng)價(jià)患者M(jìn)RD情況RQ-PCR能實(shí)時(shí)反映體內(nèi)AML1-ETO水平。連續(xù)定量AML1-ETO轉(zhuǎn)錄本水平可判定有高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者，以便及早治療干預(yù)以防血液學(xué)復(fù)發(fā)AML1-ETO對(duì)初發(fā)患者進(jìn)行t(8;21)和AML1-ET22

AML1-陰性ETO+AML1-陰性23C-KIT基因突變C-KIT為III型受體酪氨酸激酶家族（還包括c-FMS，PDGFRβ和c-KIT）成員之一AML1-ETO可誘導(dǎo)性表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠，并不導(dǎo)致白血病發(fā)生C-KIT突變可見于伴inv(16)的M4以及伴t(8;21)的M2患者26/54例(48.1%)M2b患者中檢測(cè)到C-KIT基因突變57例不伴t(8;21)的其他類型血液腫瘤患者均未檢測(cè)到C-KIT基因突變以上結(jié)果提示C-KIT突變與M2b密切相關(guān)(R=0.94,P<0.01)C-KIT基因突變C-KIT為III型受體酪氨酸激酶家族（還24C-KIT基因突變C-KIT基因結(jié)構(gòu)JMC-KIT基因突變C-KIT基因結(jié)構(gòu)JM25C-KIT基因突變外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)C-KIT基因突變外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)262%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，還可見于治療相關(guān)白血病，尤接受topoisomeraseII抑制劑治療的患者V-D-J重排：IgH,TCRB,TCRDRQ-PCR的檢測(cè)系統(tǒng)：APL累及的RARα基因及其伙伴基因結(jié)構(gòu)示意圖突變熱點(diǎn)位于codon12,13和61HOX11基因異常表達(dá)常規(guī)遺傳學(xué)方法檢測(cè)不到這一異常，而SIL-TAL1融合處特異的序列能作為這類患者特異的分子標(biāo)志用于PCR檢測(cè)inv(16)(p13;q22)及t(16;16)(p13;q22)t(8;21)(q22;q22)連續(xù)定量AML1-ETO轉(zhuǎn)錄本水平可判定有高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者，以便及早治療干預(yù)以防血液學(xué)復(fù)發(fā)PCR：僅適用于染色體斷裂點(diǎn)叢集于相對(duì)小的范圍內(nèi)（<2kb），如T-ALL中SIL-TAL1。CBFβ-MYH11具有多種變異型，其中最常見的為A型，占80%此基因突變主要見于MPD和MDS，另可存在于部分AML尤M26~8%原發(fā)性AML，在M2中的陽(yáng)性率為20~40%，在M2b中陽(yáng)性率為90%在隨訪患者中檢測(cè)到高水平HOX11L2說明白血病細(xì)胞的存在，強(qiáng)烈預(yù)示復(fù)發(fā)，而完全緩解患者HOX11L2表達(dá)水平迅速降低，并維持在一個(gè)低水平。伴TAL1異常的患者血象表現(xiàn)為高白細(xì)胞計(jì)數(shù)，高血紅蛋白含量，免疫表型為CD2+/CD10–SYBRGreenI與DNA雙鏈結(jié)合連續(xù)定量AML1-ETO轉(zhuǎn)錄本水平可判定有高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者，以便及早治療干預(yù)以防血液學(xué)復(fù)發(fā)APL累及的RARα基因及其伙伴基因結(jié)構(gòu)示意圖RQ-PCR：可定量擴(kuò)增產(chǎn)物。C-KIT基因突變生存曲線2%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，還可見于27PML-RARαt(15;17)(q22;q21)98%M3患者繼t(15;17)之后，又先后發(fā)現(xiàn)4種M3特異的累及RARα的變異性染色體易位：t(11;17)(q23;q21)，t(5;17)(q35;q21)，t(11;17)(q13;q21)以及dup(17)(q21.3;q23)，分別產(chǎn)生PLZF-RARα，NPM-RARα，NuMA-RARα和STAT5b-RARα融合基因臨床上，具有PLZF-RARα或STAT5b-RARα融合基因患者對(duì)ATRA治療不敏感，其余三種染色體易位患者經(jīng)ATRA治療可獲完全緩解

PML-RARαt(15;17)(q22;q21)28PML-RARαAPL累及的RARα基因及其伙伴基因結(jié)構(gòu)示意圖

PML-RARαAPL累及的RARα基因及其伙伴基因結(jié)構(gòu)示意29PML-RARα由于PML基因斷裂點(diǎn)不同產(chǎn)生3種不同的PML-RARα異構(gòu)體

約55%的M3患者為L(zhǎng)型，40%為S型，5%為V型，且每位患者只表達(dá)一種PML-RARα融合蛋白形態(tài)學(xué)上S型白血病細(xì)胞常為低分化的并且這些患者可見繼發(fā)細(xì)胞遺傳學(xué)異常，V型APL患者的白血病細(xì)胞體外對(duì)ATRA的敏感度低

PML-RARα由于PML基因斷裂點(diǎn)不同產(chǎn)生3種不同的PML30PML-RARαRT-PCR檢測(cè)PML-RARα是敏感且特異的APL診斷方法，還能用于治療后MRD監(jiān)測(cè)。PML-RARα陽(yáng)性提示的分子復(fù)發(fā)常早于臨床復(fù)發(fā)3-6個(gè)月，為臨床采取進(jìn)一步治療措施提供了保障RQ-PCR能有效反映患者在發(fā)病、治療、緩解、復(fù)發(fā)整個(gè)過程的白血病細(xì)胞負(fù)荷，在MRD監(jiān)測(cè)中比RT-PCR具有更高價(jià)值

PML-RARαRT-PCR檢測(cè)PML-RARα是敏感且特異31L+陰性S+L+陰性S+32FLT3基因突變Fms-relatedtyrosinekinase3FLT3為III型受體酪氨酸激酶家族（還包括c-FMS，PDGFRβ和c-KIT）成員之一，該類受體因在造血過程中造血細(xì)胞的增殖和存活中發(fā)揮重要調(diào)控作用綜合國(guó)外各研究報(bào)道，F(xiàn)LT3-ITD和D835突變?cè)贏ML中陽(yáng)性率分別為24%(385/1585)和7%(30/429)，總陽(yáng)性率超過30%，使其成為AML中最普遍發(fā)生突變的靶基因許多臨床研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)LT3突變還與臨床預(yù)后密切相關(guān)，尤對(duì)60歲以下的AML患者，F(xiàn)LT3突變患者預(yù)后較差，且可獨(dú)立于核型之外FLT3基因突變Fms-relatedtyrosinek33FLT3基因突變FLT3基因突變34FLT3基因突變FLT3基因主要突變類型FLT3基因突變FLT3基因主要突變類型35FLT3基因突變mut-FLT3信號(hào)通路FLT3基因突變mut-FLT3信號(hào)通路36補(bǔ)充MIC檢查的不足巢式RT-PCR：可顯著提高反應(yīng)的特異性，增加擴(kuò)增效率。RQ-PCR的檢測(cè)系統(tǒng)：目前，此突變的預(yù)后價(jià)值各研究組報(bào)道不一，尚待進(jìn)一步證實(shí)C-KIT為III型受體酪氨酸激酶家族（還包括c-FMS，PDGFRβ和c-KIT）成員之一FLT3基因主要突變類型在隨訪患者中檢測(cè)到高水平HOX11L2說明白血病細(xì)胞的存在，強(qiáng)烈預(yù)示復(fù)發(fā)，而完全緩解患者HOX11L2表達(dá)水平迅速降低，并維持在一個(gè)低水平。~2x106Ig,~3x106TCRαβ,~5x103TCRγδ此基因突變存在于11-30%AML目前，此突變的預(yù)后價(jià)值各研究組報(bào)道不一，尚待進(jìn)一步證實(shí)伴TAL1異常的患者血象表現(xiàn)為高白細(xì)胞計(jì)數(shù)，高血紅蛋白含量，免疫表型為CD2+/CD10–AML1(RUNX1)SYBRGreenI法NorthernblotNorthernblotCT值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著增長(zhǎng)（穿過閾值線）時(shí)的循環(huán)次數(shù)~2x106Ig,~3x106TCRαβ,~5x103TCRγδt(6;9)(p23;q34)TCRB重排TCRA重排TCRαβ表達(dá)HOX11基因異常表達(dá)FLT3基因突變外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)補(bǔ)充MIC檢查的不足FLT3基因突變外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)37CBFβ-MYH11inv(16)(p13;q22)及t(16;16)(p13;q22)主要見于M4Eo，10%不伴異常嗜酸細(xì)胞M4，少見于M2CBFβ-MYH11融合蛋白通過干擾核心結(jié)合因子（corebindingfactor,CBF）的轉(zhuǎn)錄激活作用而致病具有CBFβ-MYH11的患者對(duì)化療敏感，預(yù)后較好，故提高檢測(cè)率尤具臨床意義

CBFβ-MYH11inv(16)(p13;q22)及t(138CBFβ-MYH11CBFβ-MYH11具有多種變異型，其中最常見的為A型，占80%RT-PCR檢測(cè)CBFβ-MYH11進(jìn)行MRD監(jiān)測(cè)顯示，大部分患者在完全緩解時(shí)PCR轉(zhuǎn)陰，但仍有小部分長(zhǎng)期存活者PCR仍為陽(yáng)性最新研究采用RQ-PCR檢測(cè)CBFβ-MYH11轉(zhuǎn)錄本水平來評(píng)價(jià)M4Eo患者M(jìn)RD情況，預(yù)示復(fù)發(fā)

CBFβ-MYH11CBFβ-MYH11具有多種變異型，其中39白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件40NPM基因突變Nucleophosmin，為核-漿穿梭蛋白，調(diào)控p53-ARF通路見于~50%核型正常的AML患者，而在伴低危/高危核型患者中極少見主要見于M4/M5中第12號(hào)外顯子的插入/缺失伴此突變患者WBC計(jì)數(shù)高目前，此突變的預(yù)后價(jià)值各研究組報(bào)道不一，尚待進(jìn)一步證實(shí)NPM基因突變Nucleophosmin，為核-漿穿梭蛋白，41DEK-CANt(6;9)(p23;q34)主要見于M2或M4，也見于M1，MDS-RAEB伴DEK-CAN的患者年齡一般較輕，且預(yù)后較差此類患者進(jìn)行分子監(jiān)測(cè)有助于判斷患者預(yù)后，調(diào)整治療方案

DEK-CANt(6;9)(p23;q34)42N-RAS基因突變?yōu)镽AS基因家族成員之一，染色體定位于1p32.2。具有GTP/GDP結(jié)合和GTPase活性，調(diào)控正常細(xì)胞的生長(zhǎng)此基因突變存在于11-30%AML突變熱點(diǎn)位于codon12,13和61在inv(16)/t(16;16),inv(3)/t(3;3)中突變率較高，而在t(15;17)中低伴此突變患者外周血WBC計(jì)數(shù)低該突變預(yù)后意義尚不明N-RAS基因突變?yōu)镽AS基因家族成員之一，染色體定位于1p43WT-1基因高表達(dá)Wilmstumor1是無特異分子異常的急性白血病患者理想的MRD檢測(cè)指標(biāo)伴此基因高表達(dá)者預(yù)后差，且表達(dá)程度與預(yù)后相關(guān)WT-1基因高表達(dá)Wilmstumor144BCR-ABLt(9;22)(q34;q11)15~30%成人ALL及3~5%兒童ALL

9號(hào)染色體的斷裂點(diǎn)與CML相同，但22號(hào)染色體斷裂點(diǎn)具有異質(zhì)性

此融合蛋白p190刺激細(xì)胞增殖的能力比p210要強(qiáng)。在轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)中觀察到p190誘發(fā)的白血病具有起病早、發(fā)展快和惡性程度高的特點(diǎn)BCR-ABL+ALL患者預(yù)后差，5年存活率<20%，因此這些患者在緩解后需進(jìn)行骨髓移植治療

BCR-ABLt(9;22)(q34;q11)45BCR-ABL對(duì)于自體或異體移植ALL患者，移植前后BCR-ABL的有無以及BCR-ABL的轉(zhuǎn)錄本類型與預(yù)后有關(guān)BCR-ABL對(duì)于自體或異體移植ALL患者，移植前后BCR-46IgH重排λ重排IgH/λ表達(dá)熒光標(biāo)記引物CT值與起始模板量成反比少見于M4和M1，極少見于MDS和骨髓增生綜合癥PML-RARα陽(yáng)性提示的分子復(fù)發(fā)常早于臨床復(fù)發(fā)3-6個(gè)月，為臨床采取進(jìn)一步治療措施提供了保障Fms-relatedtyrosinekinase3κ錯(cuò)誤重排/缺失伴NOTCH1基因突變的成年T-ALL患者預(yù)后較差為研究白血病的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)20%的兒童T-ALL~2x106Ig,~3x106TCRαβ,~5x103TCRγδRT-PCR檢測(cè)PML-RARα是敏感且特異的APL診斷方法，還能用于治療后MRD監(jiān)測(cè)。突變熱點(diǎn)位于codon12,13和61熒光標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物最新研究采用RQ-PCR檢測(cè)CBFβ-MYH11轉(zhuǎn)錄本水平來評(píng)價(jià)M4Eo患者M(jìn)RD情況，預(yù)示復(fù)發(fā)N=N0x(1+E)nBCR-ABL+ALL患者預(yù)后差，5年存活率<20%，因此這些患者在緩解后需進(jìn)行骨髓移植治療第12號(hào)外顯子的插入/缺失V-D-J重排：IgH,TCRB,TCRD2003;16:409-417

e1a2+陰性IgH重排λ重排I47E2A-PBX1t(1;19)(q23;p13)5~6%兒童ALL和3%成人ALL此類患者具有高的白細(xì)胞計(jì)數(shù)，高的血清乳酸脫氫酶及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，預(yù)后差，平均無病生存期（DFS）僅6個(gè)月，3年DFS為20%，需給予這些患者強(qiáng)化治療才能獲得較好的預(yù)后核型和E2A-PBX1檢測(cè)對(duì)此類患者的診斷和治療方案的選擇至關(guān)重要E2A-PBX1的預(yù)后價(jià)值需更多的臨床研究證實(shí)E2A-PBX1t(1;19)(q23;p13)48白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件49TEL-AML1t(12;21)(p13;q22)25%兒童ALL，是兒童ALL中最常見的分子異常目前為止尚未在T-ALL，AML或NHL中發(fā)現(xiàn)t(12;21)，在嬰兒白血病中極少報(bào)道，在成人白血病患者中頻率很低（<2%）此類患者發(fā)病年齡?。?歲~10歲），WBC計(jì)數(shù)低（<50000/L），免疫表型為前B-ALL此類患者對(duì)治療反應(yīng)佳，完全緩解時(shí)間長(zhǎng)，預(yù)后好

TEL-AML1t(12;21)(p13;q22)50TEL-AML1由于12p和21q末端在常規(guī)顯帶中很相似，因此常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)方法檢出率僅0.05%，需應(yīng)用FISH或RT-PCR方法提高檢測(cè)陽(yáng)性率TEL基因重排是獨(dú)立預(yù)后因素，RT-PCR檢測(cè)TEL-AML1融合基因能將低危險(xiǎn)度與高危險(xiǎn)度的ALL患者區(qū)分開來。因此早期檢測(cè)TEL-AML1融合基因?qū)εR床預(yù)后，確定合適的治療方案都有重要意義TEL-AML1由于12p和21q末端在常規(guī)顯帶中很相似，因51白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件52MLL相關(guān)融合基因累及MLL基因的分子異常見于5.2%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，還可見于治療相關(guān)白血病，尤接受topoisomeraseII抑制劑治療的患者M(jìn)LL基因涉及五十余種染色體易位，產(chǎn)生不同的融合蛋白，且每種融合蛋白都與特定的白血病表型相關(guān)。最常見的有：

t(4;11)(q21;q23)MLL-AF4融合基因ALLt(9;11)(p22;q23)MLL-AF9融合基因AMLt(11;19)(p13;q23)MLL-ENL融合基因AML及ALLMLL相關(guān)融合基因累及MLL基因的分子異常見于5.2%AM53MLL相關(guān)融合基因至今，MLL相關(guān)融合蛋白的致病性還不清楚，推測(cè)其可能具有雙重作用：

——融合蛋白可能獲得新的功能，促使細(xì)胞轉(zhuǎn)化

——MLL發(fā)生斷裂后，缺失鋅指結(jié)構(gòu)域的MLL不能與DNA結(jié)合，失去其轉(zhuǎn)錄活化功能，使受MLL調(diào)節(jié)的靶基因（HOX基因）表達(dá)異常，也影響造血細(xì)胞的發(fā)育

MLL相關(guān)融合基因至今，MLL相關(guān)融合蛋白的致病性還不清楚，54MLL-AF4t(4;11)(q21;q23)t(4;11)的發(fā)生率在不同年齡段是不同的，在嬰兒ALL中最多見，為50~70%，而在兒童和成人中較低，分別為2%和3~6%此類患者發(fā)病年齡低（通常<2歲），白細(xì)胞計(jì)數(shù)高，常伴有內(nèi)臟巨大并累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)此類患者病情兇險(xiǎn)，預(yù)后差?；颊邔?duì)標(biāo)準(zhǔn)治療方案很可能無效，需給予強(qiáng)化治療。目前應(yīng)用高劑量Ara-C治療，使這些患者預(yù)后有所提高

MLL-AF4t(4;11)(q21;q23)55MLL-AF4對(duì)≤2歲的嬰幼兒急性白血病患者應(yīng)常規(guī)進(jìn)行MLL-AF4融合基因的檢測(cè)以篩選出高危患者，給予強(qiáng)化治療提高生存率RT-PCR可在所有t(4;11)患者初發(fā)時(shí)檢測(cè)到MLL-AF4融合基因。由于該融合基因累及的2個(gè)基因的斷裂點(diǎn)變異性較大，因此PCR應(yīng)包括所有斷裂點(diǎn)以免產(chǎn)生假陰性結(jié)果

MLL-AF4對(duì)≤2歲的嬰幼兒急性白血病患者應(yīng)常規(guī)進(jìn)行MLL56t(15;17)(q22;q21)綜合國(guó)外各研究報(bào)道，F(xiàn)LT3-ITD和D835突變?cè)贏ML中陽(yáng)性率分別為24%(385/1585)和7%(30/429)，總陽(yáng)性率超過30%，使其成為AML中最普遍發(fā)生突變的靶基因連續(xù)定量AML1-ETO轉(zhuǎn)錄本水平可判定有高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者，以便及早治療干預(yù)以防血液學(xué)復(fù)發(fā)25%兒童ALL，是兒童ALL中最常見的分子異常1p32缺失，SIL-TAL1融合基因AML1-ETO+患者對(duì)大劑量阿糖胞苷治療效果好，具有較高的緩解率，無病生存期長(zhǎng)，預(yù)后較其他AML亞型（M3除外）好AML1-陰性基因(gene)：合成有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA所必需的全部核酸序列。以上結(jié)果提示C-KIT突變與M2b密切相關(guān)(R=0.對(duì)初發(fā)患者進(jìn)行t(8;21)和AML1-ETO融合基因的檢測(cè)對(duì)其預(yù)后判斷及治療方案的制定相當(dāng)重要伴DEK-CAN的患者年齡一般較輕，且預(yù)后較差RQ-PCR：可定量擴(kuò)增產(chǎn)物。FLT3為III型受體酪氨酸激酶家族（還包括c-FMS，PDGFRβ和c-KIT）成員之一，該類受體因在造血過程中造血細(xì)胞的增殖和存活中發(fā)揮重要調(diào)控作用inv(16)(p13;q22)及t(16;16)(p13;q22)E2A-PBX1的預(yù)后價(jià)值需更多的臨床研究證實(shí)TCRB重排TCRA重排TCRαβ表達(dá)HOX11基因異常表達(dá)PML-RARα陽(yáng)性提示的分子復(fù)發(fā)常早于臨床復(fù)發(fā)3-6個(gè)月，為臨床采取進(jìn)一步治療措施提供了保障系統(tǒng)中的電腦系統(tǒng)同時(shí)不斷地分析來自檢測(cè)系統(tǒng)的信息，不斷計(jì)算每個(gè)反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度，并最終得到CT值。白血病的分子生物學(xué)檢查對(duì)白血病診斷分型及預(yù)后判斷有以下幾方面意義：t(15;17)(q22;q21)57TAL1基因重排

t(1;14)(p32;q11)，TAL1-TCRδ融合基因

3%T-ALL

易位使TAL1基因與TCRδ位點(diǎn)并置，其5′端正常轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)被TCRδ5′部分所取代，而后者在T細(xì)胞中有高表達(dá)

TAL1基因重排t(1;14)(p32;q11)，TAL158TAL1基因重排1p32缺失，SIL-TAL1融合基因

16~26%T-ALL該重組僅見于T-ALL，是T-ALL的一個(gè)有用的克隆標(biāo)志缺失部分可能為TAL1基因的調(diào)控序列，使TAL1基因表達(dá)失控，導(dǎo)致與染色體易位相似的表型常規(guī)遺傳學(xué)方法檢測(cè)不到這一異常，而SIL-TAL1融合處特異的序列能作為這類患者特異的分子標(biāo)志用于PCR檢測(cè)TAL1基因重排1p32缺失，SIL-TAL1融合基因59白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件60TAL1基因重排TAL1異常僅見于T-ALL，尚未見于B-ALL，AML和T細(xì)胞NHL，是兒童T-ALL中最常見非隨機(jī)遺傳缺陷，是監(jiān)測(cè)大多數(shù)T-ALL的侯選基因伴TAL1異常的患者血象表現(xiàn)為高白細(xì)胞計(jì)數(shù)，高血紅蛋白含量，免疫表型為CD2+/CD10–盡管在治療反應(yīng)上，有TAL1重排患者和無TAL1重排患者無顯著差異，但伴TAL1重排患者4年無事件生存率（EFS）高于不伴TAL1重排的患者，分別為59±11%和44±7%，提示伴TAL1重排患者預(yù)后較好

TAL1基因重排TAL1異常僅見于T-ALL，尚未見于B-A61HOX11基因異常表達(dá)

t(10;14)(q24;q11)，t(7;10)(q34;q24)7%的T-ALL易位使HOX11基因受控于TCRδ和TCRβ基因調(diào)控序列，導(dǎo)致其異常表達(dá)另有部分HOX11高表達(dá)患者核型正常伴有此種異常的患者對(duì)聯(lián)合化療反應(yīng)好，預(yù)后也較其他T-ALL患者要好，完全緩解率為100%，平均無病生存期為46個(gè)月，3年無病生存率為75%HOX11基因異常表達(dá)t(10;14)(q24;q11)62HOX11L2基因異常表達(dá)t(5;14)(q35;q32)20%的兒童T-ALL易位使HOX11L2基因處于CTIP2調(diào)控元件的控制下，而CTIP2基因在T淋巴細(xì)胞分化時(shí)高度表達(dá)在隨訪患者中檢測(cè)到高水平HOX11L2說明白血病細(xì)胞的存在，強(qiáng)烈預(yù)示復(fù)發(fā)，而完全緩解患者HOX11L2表達(dá)水平迅速降低，并維持在一個(gè)低水平?？梢奌OX11L2的表達(dá)水平可作為MRD檢測(cè)的標(biāo)志

HOX11L2基因異常表達(dá)t(5;14)(q35;q32)63NOTCH1基因突變NOTCH1信號(hào)對(duì)CLP(commonlymphoidprogenitors)向T細(xì)胞定向以及前T細(xì)胞受體復(fù)合物組裝是必須的35-50%T-ALL患者存在此基因突變伴NOTCH1基因突變的成年T-ALL患者預(yù)后較差NOTCH1基因突變NOTCH1信號(hào)對(duì)CLP(common64NOTCH1基因突變NOTCH1基因結(jié)構(gòu)NOTCH1基因突變NOTCH1基因結(jié)構(gòu)65NOTCH1基因突變生存曲線NOTCH1基因突變生存曲線66BCR-ABLt(9;22)(q34;q11)>90%CML患者BCR-ABL融合蛋白（p210）的酪氨酸蛋白激酶活性較正常ABL高，可能是BCR對(duì)ABL激酶活性調(diào)節(jié)區(qū)的作用所致由于<5%CML患者為隱匿性Ph染色體，因此無Ph染色體CML患者還需使用更靈敏的分子檢測(cè)手段如FISH或RT-PCR檢測(cè)BCR-ABL融合基因RT-PCR還能區(qū)分e1-a2和b2-a2/b3-a2二種BCR-ABL轉(zhuǎn)錄本，從而區(qū)分ALL患者與CML急淋變患者，進(jìn)而分別對(duì)兩種不同患者采用不同的治療方案BCR-ABLt(9;22)(q34;q11)67BCR-ABL巢式RT-PCR檢測(cè)BCR-ABL融合基因用于CML移植患者移植后MRD監(jiān)測(cè)。可在患者血液學(xué)復(fù)發(fā)前的6~24個(gè)月骨髓檢測(cè)就呈陽(yáng)性。RQ-PCR還能動(dòng)態(tài)觀察患者治療后BCR-ABL轉(zhuǎn)錄本水平變化情況，反映療效。BCR-ABL巢式RT-PCR檢測(cè)BCR-ABL融合基因用于68

b3a2+b2a2+陰性b3a2+b2a2+陰性69GATA2基因突變調(diào)控早期造血干細(xì)胞增殖分化的轉(zhuǎn)錄因子，維持造血干祖細(xì)胞的增殖和自我更新能力CML急變患者中新發(fā)現(xiàn)GATA2基因突變，而CML慢性期、加速期，AML（M1-M7），MDS，ALL，CLL，淋巴瘤和骨髓瘤患者，以及正常對(duì)照均未發(fā)現(xiàn)該突變，可見GATA2基因突變僅與CML急變相關(guān)，是CML疾病進(jìn)展過程中的獲得性突變?？偘l(fā)生率為12.5%（5/40），且均造成CML急粒單變GATA2基因突變與CML患者疾病進(jìn)展和預(yù)后的關(guān)系有待進(jìn)一步闡明GATA2基因突變調(diào)控早期造血干細(xì)胞增殖分化的轉(zhuǎn)錄因子，維持70JAK2基因突變Januskinase2此基因突變主要見于MPD和MDS，另可存在于部分AML尤M2突變?yōu)閂617F突變?nèi)コ薐AK2JH2負(fù)性調(diào)控，導(dǎo)致該基因的持續(xù)活化，賦予細(xì)胞增殖存活優(yōu)勢(shì)JAK2可成為靶向治療的靶點(diǎn)JAK2基因突變Januskinase271MDS相關(guān)基因異常Delta樣(Dlk)基因編碼Dlk蛋白在MDS明顯增高者55%，而AML僅10%，可能是MDS特異性基因，但作為診斷MDS的標(biāo)志基因尚待進(jìn)一步確定MDS相關(guān)基因異常Delta樣(Dlk)基因編碼Dlk蛋白在72MDS相關(guān)基因異常RAS此原癌基因超家族編碼鳥苷三磷酸水解酶(GTPase)調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)相關(guān)信號(hào)ras癌基因的活化，尤其是N-ras的激活可在約35%的MDS患者中發(fā)生FMS為集落刺激因子1，控制單核-巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)、分化及功能fms基因的突變可在16%的MDS患者中發(fā)現(xiàn)ras和fms突變主要見于粒-單細(xì)胞分化的疾病，即MDS中的CMML，患者生存期短，轉(zhuǎn)AML多MDS相關(guān)基因異常RAS73MDS相關(guān)基因異常p53在MDS時(shí)，p53突變較少見(<5%)，但在較為進(jìn)展的病例中可高達(dá)15%p53突變意味著化療耐藥和生存期縮短，因而是一種有意義的預(yù)后指標(biāo)FLT310%MDS有FLT3點(diǎn)突變，加快進(jìn)展為AML，但FLT3-ITD少見AML1(RUNX1)為MDS較常見的點(diǎn)突變，發(fā)生率25%，導(dǎo)致核心結(jié)合因子(CBF)亞單位正常功能缺失，易轉(zhuǎn)化AMLMDS相關(guān)基因異常p5374Ig/TCR基因重排Ig/TCR基因重排檢測(cè)，對(duì)決定白血病的細(xì)胞來源系列乃至分化階段，有重大意義在B系A(chǔ)LL中分別有95%，54%，55%和33%的患者有IgH，TCRδ，TCRγ和TCRβ基因重排，在T-ALL中相應(yīng)的基因重排率分別為14%，68%，91%和89%由于重排的多樣性，重排的Ig和TCR基因連結(jié)區(qū)序列在各淋巴(前體)細(xì)胞中是不同的，因而每位患者有其各自特異的Ig/TCR基因重排序列，這一特定的Ig/TCR基因重排序列可作為該惡性克隆的分子標(biāo)志，在分子水平進(jìn)行診斷分型，還可通過PCR檢測(cè)緩解期患者有無初發(fā)時(shí)的Ig/TCR基因重排來追蹤殘余白血病細(xì)胞，用于預(yù)后判斷Ig/TCR基因重排Ig/TCR基因重排檢測(cè)，對(duì)決定白血病的75Ig/TCR基因重排Ig的基因由Lκ，Lλ和H三個(gè)基因組組成，分別編碼Lκ鏈，Lλ鏈和H鏈。L和H基因又由編碼Ig分子的V區(qū)和C區(qū)基因構(gòu)成。B細(xì)胞分化：IgH重排κ重排IgH/κ表達(dá)IgH重排λ重排IgH/λ表達(dá)

κ錯(cuò)誤重排/缺失Ig/TCR基因重排Ig的基因由Lκ，Lλ和H三個(gè)基因組組成76為MDS較常見的點(diǎn)突變，發(fā)生率25%，導(dǎo)致核心結(jié)合因子(CBF)亞單位正常功能缺失，易轉(zhuǎn)化AML少見于M4和M1，極少見于MDS和骨髓增生綜合癥RQ-PCR還能動(dòng)態(tài)觀察患者治療后BCR-ABL轉(zhuǎn)錄本水平變化情況，反映療效。CML急變患者中新發(fā)現(xiàn)GATA2基因突變，而CML慢性期、加速期，AML（M1-M7），MDS，ALL，CLL，淋巴瘤和骨髓瘤患者，以及正常對(duì)照均未發(fā)現(xiàn)該突變，可見GATA2基因突變僅與CML急變相關(guān)，是CML疾病進(jìn)展過程中的獲得性突變。是無特異分子異常的急性白血病患者理想的MRD檢測(cè)指標(biāo)系統(tǒng)中的電腦系統(tǒng)同時(shí)不斷地分析來自檢測(cè)系統(tǒng)的信息，不斷計(jì)算每個(gè)反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度，并最終得到CT值。伴此基因高表達(dá)者預(yù)后差，且表達(dá)程度與預(yù)后相關(guān)t(6;9)(p23;q34)Northernblot臨床上，具有PLZF-RARα或STAT5b-RARα融合基因患者對(duì)ATRA治療不敏感，其余三種染色體易位患者經(jīng)ATRA治療可獲完全緩解易位使TAL1基因與TCRδ位點(diǎn)并置，其5′端正常轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)被TCRδ5′部分所取代，而后者在T細(xì)胞中有高表達(dá)CBFβ-MYH11具有多種變異型，其中最常見的為A型，占80%V-D-J重排：IgH,TCRB,TCRD白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用突變熱點(diǎn)位于codon12,13和61RT-PCR可在所有t(4;11)患者初發(fā)時(shí)檢測(cè)到MLL-AF4融合基因。伴DEK-CAN的患者年齡一般較輕，且預(yù)后較差A(yù)ML1-ETO可誘導(dǎo)性表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠，并不導(dǎo)致白血病發(fā)生最新研究采用RQ-PCR檢測(cè)CBFβ-MYH11轉(zhuǎn)錄本水平來評(píng)價(jià)M4Eo患者M(jìn)RD情況，預(yù)示復(fù)發(fā)由于PML基因斷裂點(diǎn)不同產(chǎn)生3種不同的PML-RARα異構(gòu)體Ig/TCR基因重排TCR由兩條肽鏈組成，αβ鏈或γδ鏈，不論是哪一種肽鏈，其胞膜外區(qū)均包括兩部分，即V區(qū)和C區(qū)。相應(yīng)的編碼基因?yàn)門CRA,TCRB,TCRG和TCRD。T細(xì)胞分化：TCRD重排TCRG重排TCRγδ表達(dá)TCRB重排TCRA重排TCRαβ表達(dá)

TCRD缺失為MDS較常見的點(diǎn)突變，發(fā)生率25%，導(dǎo)致核心結(jié)合因子(CB77Ig/TCR基因重排Ig/TCR基因多樣性的機(jī)制組合造成的多樣性~2x106Ig,~3x106TCRαβ,~5x103TCRγδ連接造成的多樣性>1012Ig和TCR

體細(xì)胞高頻突變?cè)斐傻亩鄻有詢H限于成熟B淋巴細(xì)胞Ig/TCR基因重排Ig/TCR基因多樣性的機(jī)制78Ig/TCR基因重排V-D-J重排：IgH,TCRB,TCRDV-J重排：Lκ,Lλ,TCRA,TCRGIg/TCR基因重排V-D-J重排：IgH,TCRB,TCR79Ig/TCR基因重排Ig/TCR基因重排80謝謝！謝謝！81白血病的分子檢測(cè)PCR反應(yīng)原理白血病的分子檢測(cè)PCR反應(yīng)原理82白血病的分子檢測(cè)PCR方法優(yōu)點(diǎn)快速靈敏特異PCR方法缺點(diǎn)假陽(yáng)性假陰性白血病的分子檢測(cè)PCR方法優(yōu)點(diǎn)83PML-RARαRT-PCR檢測(cè)PML-RARα是敏感且特異的APL診斷方法，還能用于治療后MRD監(jiān)測(cè)。PML-RARα陽(yáng)性提示的分子復(fù)發(fā)常早于臨床復(fù)發(fā)3-6個(gè)月，為臨床采取進(jìn)一步治療措施提供了保障RQ-PCR能有效反映患者在發(fā)病、治療、緩解、復(fù)發(fā)整個(gè)過程的白血病細(xì)胞負(fù)荷，在MRD監(jiān)測(cè)中比RT-PCR具有更高價(jià)值

PML-RARαRT-PCR檢測(cè)PML-RARα是敏感且特異84DEK-CANt(6;9)(p23;q34)主要見于M2或M4，也見于M1，MDS-RAEB伴DEK-CAN的患者年齡一般較輕，且預(yù)后較差此類患者進(jìn)行分子監(jiān)測(cè)有助于判斷患者預(yù)后，調(diào)整治療方案

DEK-CANt(6;9)(p23;q34)85白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件86MLL-AF4對(duì)≤2歲的嬰幼兒急性白血病患者應(yīng)常規(guī)進(jìn)行MLL-AF4融合基因的檢測(cè)以篩選出高?；颊撸o予強(qiáng)化治療提高生存率RT-PCR可在所有t(4;11)患者初發(fā)時(shí)檢測(cè)到MLL-AF4融合基因。由于該融合基因累及的2個(gè)基因的斷裂點(diǎn)變異性較大，因此PCR應(yīng)包括所有斷裂點(diǎn)以免產(chǎn)生假陰性結(jié)果

MLL-AF4對(duì)≤2歲的嬰幼兒急性白血病患者應(yīng)常規(guī)進(jìn)行MLL87TAL1基因重排TAL1異常僅見于T-ALL，尚未見于B-ALL，AML和T細(xì)胞NHL，是兒童T-ALL中最常見非隨機(jī)遺傳缺陷，是監(jiān)測(cè)大多數(shù)T-ALL的侯選基因伴TAL1異常的患者血象表現(xiàn)為高白細(xì)胞計(jì)數(shù)，高血紅蛋白含量，免疫表型為CD2+/CD10–盡管在治療反應(yīng)上，有TAL1重排患者和無TAL1重排患者無顯著差異，但伴TAL1重排患者4年無事件生存率（EFS）高于不伴TAL1重排的患者，分別為59±11%和44±7%，提示伴TAL1重排患者預(yù)后較好

TAL1基因重排TAL1異常僅見于T-ALL，尚未見于B-A88HOX11L2基因異常表達(dá)t(5;14)(q35;q32)20%的兒童T-ALL易位使HOX11L2基因處于CTIP2調(diào)控元件的控制下，而CTIP2基因在T淋巴細(xì)胞分化時(shí)高度表達(dá)在隨訪患者中檢測(cè)到高水平HOX11L2說明白血病細(xì)胞的存在，強(qiáng)烈預(yù)示復(fù)發(fā)，而完全緩解患者HOX11L2表達(dá)水平迅速降低，并維持在一個(gè)低水平?？梢奌OX11L2的表達(dá)水平可作為MRD檢測(cè)的標(biāo)志

HOX11L2基因異常表達(dá)t(5;14)(q35;q32)89白血病分子生物學(xué)白血病的分子機(jī)制白血病的分子檢測(cè)白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病分子生物學(xué)白血病的分子機(jī)制90白血病的分子機(jī)制基因(gene)：合成有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA所必需的全部核酸序列。癌基因(oncogene)：細(xì)胞或病毒中存在的，能誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化并使之獲得新生物特征的基因。癌基因活化的方式：

點(diǎn)突變?nèi)旧w重排基因擴(kuò)增抑癌基因(tumorsuppressorgenes)：指一類基因，其產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖起負(fù)調(diào)控的作用，并能潛在抑制細(xì)胞的惡變。

白血病的分子機(jī)制基因(gene)：合成有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或91白血病的分子機(jī)制白血病的分子機(jī)制92白血病的分子機(jī)制增殖過度分化阻斷凋亡受抑白血病的分子機(jī)制增殖過度93“二次打擊”學(xué)說D.GaryGillilandBestPractice&ResearchClinicalHaematology.2003;16:409-417“二次打擊”學(xué)說D.GaryGillilandBest94白血病的分子檢測(cè)SouthernblotNorthernblotWesternblotFISHPCR測(cè)序芯片白血病的分子檢測(cè)Southernblot95白血病的分子檢測(cè)PCR反應(yīng)原理白血病的分子檢測(cè)PCR反應(yīng)原理96N=N0x(1+E)n

N：擴(kuò)增子數(shù)量N0：起始模板數(shù)量E：擴(kuò)增效率n：循環(huán)數(shù)白血病的分子檢測(cè)PCR理論方程N(yùn)=N0x(1+E)n白血病的分子檢測(cè)PCR理97白血病的分子檢測(cè)PCR方法優(yōu)點(diǎn)快速靈敏特異PCR方法缺點(diǎn)假陽(yáng)性假陰性白血病的分子檢測(cè)PCR方法優(yōu)點(diǎn)98白血病的分子檢測(cè)PCR：僅適用于染色體斷裂點(diǎn)叢集于相對(duì)小的范圍內(nèi)（<2kb），如T-ALL中SIL-TAL1。

RT-PCR：可用于染色體斷裂點(diǎn)跨越很大的區(qū)域的融合基因。

巢式RT-PCR：可顯著提高反應(yīng)的特異性，增加擴(kuò)增效率。RQ-PCR：可定量擴(kuò)增產(chǎn)物。白血病的分子檢測(cè)PCR：僅適用于染色體斷裂點(diǎn)叢集于相對(duì)小的范99白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR（Real-timeQuantitativePCR）熒光標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物熒光標(biāo)記引物特異性熒光標(biāo)記探針

TaqMan探針、分子信標(biāo)、雜交雙探針熒光染料直接結(jié)合擴(kuò)增產(chǎn)物

SYBRGreenI與DNA雙鏈結(jié)合動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR（Real-timeQuant100TaqMan探針法特異性高多重基因定量成本較高TaqMan探針法特異性高101SYBRGreenI法成本低最適合初步篩查熔解曲線功能無法多重檢測(cè)無模板特異性靈敏度低SYBRGreenI法成本低102白血病的分子檢測(cè)CT值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著增長(zhǎng)（穿過閾值線）時(shí)的循環(huán)次數(shù)CT值與起始模板量成反比白血病的分子檢測(cè)CT值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著增長(zhǎng)（穿過閾103白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR的檢測(cè)系統(tǒng)：該系統(tǒng)內(nèi)置了96孔PCR儀，且在每個(gè)反應(yīng)孔上均有一個(gè)監(jiān)測(cè)探頭用于檢測(cè)PCR反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度。平均每8-12秒就檢測(cè)一次，以達(dá)到實(shí)時(shí)檢測(cè)的目的。系統(tǒng)中的電腦系統(tǒng)同時(shí)不斷地分析來自檢測(cè)系統(tǒng)的信息，不斷計(jì)算每個(gè)反應(yīng)管中的熒光強(qiáng)度，并最終得到CT值。該系統(tǒng)可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的CT值和拷貝數(shù)自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算未知樣品中的目的基因拷貝數(shù)。白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR的檢測(cè)系統(tǒng)：104白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR方法優(yōu)點(diǎn)：

靈敏而特異起點(diǎn)定量閉管化學(xué)（污染的風(fēng)險(xiǎn)低）沒有PCR后處理（無需走膠，拍照等）高度自動(dòng)化定性：?jiǎn)螖?shù)據(jù)點(diǎn)測(cè)定定量：多數(shù)據(jù)點(diǎn)測(cè)定能做基因分型及SNP鑒定白血病的分子檢測(cè)RQ-PCR方法優(yōu)點(diǎn)：105見于~50%核型正常的AML患者，而在伴低危/高危核型患者中極少見是無特異分子異常的急性白血病患者理想的MRD檢測(cè)指標(biāo)為研究白血病的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)在隨訪患者中檢測(cè)到高水平HOX11L2說明白血病細(xì)胞的存在，強(qiáng)烈預(yù)示復(fù)發(fā)，而完全緩解患者HOX11L2表達(dá)水平迅速降低，并維持在一個(gè)低水平。對(duì)≤2歲的嬰幼兒急性白血病患者應(yīng)常規(guī)進(jìn)行MLL-AF4融合基因的檢測(cè)以篩選出高?；颊撸o予強(qiáng)化治療提高生存率GaryGillilandBestPractice&ResearchClinicalHaematology.TEL基因重排是獨(dú)立預(yù)后因素，RT-PCR檢測(cè)TEL-AML1融合基因能將低危險(xiǎn)度與高危險(xiǎn)度的ALL患者區(qū)分開來。由于PML基因斷裂點(diǎn)不同產(chǎn)生3種不同的PML-RARα異構(gòu)體由于PML基因斷裂點(diǎn)不同產(chǎn)生3種不同的PML-RARα異構(gòu)體SYBRGreenI法巢式RT-PCR：可顯著提高反應(yīng)的特異性，增加擴(kuò)增效率。白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用突變熱點(diǎn)位于codon12,13和61熒光標(biāo)記引物HOX11基因異常表達(dá)最新研究采用RQ-PCR檢測(cè)CBFβ-MYH11轉(zhuǎn)錄本水平來評(píng)價(jià)M4Eo患者M(jìn)RD情況，預(yù)示復(fù)發(fā)沒有PCR后處理（無需走膠，拍照等）V-J重排：Lκ,Lλ,TCRA,TCRG目前，此突變的預(yù)后價(jià)值各研究組報(bào)道不一，尚待進(jìn)一步證實(shí)以上結(jié)果提示C-KIT突變與M2b密切相關(guān)(R=0.RQ-PCR的操作流程從細(xì)胞或組織中抽提DNA或RNA用PCR或RT-PCR擴(kuò)增特異片段將PCR產(chǎn)物克隆到合適的載體上純化，定量和系列稀釋質(zhì)粒DNA或RNA體外轉(zhuǎn)錄成RNA片段（僅用于RNA樣品）構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線（CTυlgcopy）樣品的定量檢測(cè)校正樣品基因拷貝數(shù)見于~50%核型正常的AML患者，而在伴低危/高危核型患者中106白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件107白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病的分子生物學(xué)檢查對(duì)白血病診斷分型及預(yù)后判斷有以下幾方面意義：補(bǔ)充MIC檢查的不足發(fā)現(xiàn)新的亞型監(jiān)測(cè)白血病的微小殘留病灶（MRD）為研究白血病的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用白血病的分子生物學(xué)檢查對(duì)白血病診斷分108白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用PCR方法檢測(cè)MRD常用的分子標(biāo)志

白血病分子檢測(cè)的臨床應(yīng)用PCR方法檢測(cè)M109AML1-ETOt(8;21)(q22;q22)6~8%原發(fā)性AML，在M2中的陽(yáng)性率為20~40%，在M2b中陽(yáng)性率為90%少見于M4和M1，極少見于MDS和骨髓增生綜合癥AML1-ETO+白血病細(xì)胞有一定程度的分化能力，能分化至較成熟的嗜中性粒細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞，且對(duì)化療反應(yīng)較敏感AML1-ETO+患者對(duì)大劑量阿糖胞苷治療效果好，具有較高的緩解率，無病生存期長(zhǎng)，預(yù)后較其他AML亞型（M3除外）好AML1-ETOt(8;21)(q22;q22)110AML1-ETO對(duì)初發(fā)患者進(jìn)行t(8;21)和AML1-ETO融合基因的檢測(cè)對(duì)其預(yù)后判斷及治療方案的制定相當(dāng)重要AML1-ETO定性結(jié)果不能用于評(píng)價(jià)患者M(jìn)RD情況RQ-PCR能實(shí)時(shí)反映體內(nèi)AML1-ETO水平。連續(xù)定量AML1-ETO轉(zhuǎn)錄本水平可判定有高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者，以便及早治療干預(yù)以防血液學(xué)復(fù)發(fā)AML1-ETO對(duì)初發(fā)患者進(jìn)行t(8;21)和AML1-ET111

AML1-陰性ETO+AML1-陰性112C-KIT基因突變C-KIT為III型受體酪氨酸激酶家族（還包括c-FMS，PDGFRβ和c-KIT）成員之一AML1-ETO可誘導(dǎo)性表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠，并不導(dǎo)致白血病發(fā)生C-KIT突變可見于伴inv(16)的M4以及伴t(8;21)的M2患者26/54例(48.1%)M2b患者中檢測(cè)到C-KIT基因突變57例不伴t(8;21)的其他類型血液腫瘤患者均未檢測(cè)到C-KIT基因突變以上結(jié)果提示C-KIT突變與M2b密切相關(guān)(R=0.94,P<0.01)C-KIT基因突變C-KIT為III型受體酪氨酸激酶家族（還113C-KIT基因突變C-KIT基因結(jié)構(gòu)JMC-KIT基因突變C-KIT基因結(jié)構(gòu)JM114C-KIT基因突變外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)C-KIT基因突變外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)1152%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，還可見于治療相關(guān)白血病，尤接受topoisomeraseII抑制劑治療的患者V-D-J重排：IgH,TCRB,TCRDRQ-PCR的檢測(cè)系統(tǒng)：APL累及的RARα基因及其伙伴基因結(jié)構(gòu)示意圖突變熱點(diǎn)位于codon12,13和61HOX11基因異常表達(dá)常規(guī)遺傳學(xué)方法檢測(cè)不到這一異常，而SIL-TAL1融合處特異的序列能作為這類患者特異的分子標(biāo)志用于PCR檢測(cè)inv(16)(p13;q22)及t(16;16)(p13;q22)t(8;21)(q22;q22)連續(xù)定量AML1-ETO轉(zhuǎn)錄本水平可判定有高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者，以便及早治療干預(yù)以防血液學(xué)復(fù)發(fā)PCR：僅適用于染色體斷裂點(diǎn)叢集于相對(duì)小的范圍內(nèi)（<2kb），如T-ALL中SIL-TAL1。CBFβ-MYH11具有多種變異型，其中最常見的為A型，占80%此基因突變主要見于MPD和MDS，另可存在于部分AML尤M26~8%原發(fā)性AML，在M2中的陽(yáng)性率為20~40%，在M2b中陽(yáng)性率為90%在隨訪患者中檢測(cè)到高水平HOX11L2說明白血病細(xì)胞的存在，強(qiáng)烈預(yù)示復(fù)發(fā)，而完全緩解患者HOX11L2表達(dá)水平迅速降低，并維持在一個(gè)低水平。伴TAL1異常的患者血象表現(xiàn)為高白細(xì)胞計(jì)數(shù)，高血紅蛋白含量，免疫表型為CD2+/CD10–SYBRGreenI與DNA雙鏈結(jié)合連續(xù)定量AML1-ETO轉(zhuǎn)錄本水平可判定有高復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的患者，以便及早治療干預(yù)以防血液學(xué)復(fù)發(fā)APL累及的RARα基因及其伙伴基因結(jié)構(gòu)示意圖RQ-PCR：可定量擴(kuò)增產(chǎn)物。C-KIT基因突變生存曲線2%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，還可見于116PML-RARαt(15;17)(q22;q21)98%M3患者繼t(15;17)之后，又先后發(fā)現(xiàn)4種M3特異的累及RARα的變異性染色體易位：t(11;17)(q23;q21)，t(5;17)(q35;q21)，t(11;17)(q13;q21)以及dup(17)(q21.3;q23)，分別產(chǎn)生PLZF-RARα，NPM-RARα，NuMA-RARα和STAT5b-RARα融合基因臨床上，具有PLZF-RARα或STAT5b-RARα融合基因患者對(duì)ATRA治療不敏感，其余三種染色體易位患者經(jīng)ATRA治療可獲完全緩解

PML-RARαt(15;17)(q22;q21)117PML-RARαAPL累及的RARα基因及其伙伴基因結(jié)構(gòu)示意圖

PML-RARαAPL累及的RARα基因及其伙伴基因結(jié)構(gòu)示意118PML-RARα由于PML基因斷裂點(diǎn)不同產(chǎn)生3種不同的PML-RARα異構(gòu)體

約55%的M3患者為L(zhǎng)型，40%為S型，5%為V型，且每位患者只表達(dá)一種PML-RARα融合蛋白形態(tài)學(xué)上S型白血病細(xì)胞常為低分化的并且這些患者可見繼發(fā)細(xì)胞遺傳學(xué)異常，V型APL患者的白血病細(xì)胞體外對(duì)ATRA的敏感度低

PML-RARα由于PML基因斷裂點(diǎn)不同產(chǎn)生3種不同的PML119PML-RARαRT-PCR檢測(cè)PML-RARα是敏感且特異的APL診斷方法，還能用于治療后MRD監(jiān)測(cè)。PML-RARα陽(yáng)性提示的分子復(fù)發(fā)常早于臨床復(fù)發(fā)3-6個(gè)月，為臨床采取進(jìn)一步治療措施提供了保障RQ-PCR能有效反映患者在發(fā)病、治療、緩解、復(fù)發(fā)整個(gè)過程的白血病細(xì)胞負(fù)荷，在MRD監(jiān)測(cè)中比RT-PCR具有更高價(jià)值

PML-RARαRT-PCR檢測(cè)PML-RARα是敏感且特異120L+陰性S+L+陰性S+121FLT3基因突變Fms-relatedtyrosinekinase3FLT3為III型受體酪氨酸激酶家族（還包括c-FMS，PDGFRβ和c-KIT）成員之一，該類受體因在造血過程中造血細(xì)胞的增殖和存活中發(fā)揮重要調(diào)控作用綜合國(guó)外各研究報(bào)道，F(xiàn)LT3-ITD和D835突變?cè)贏ML中陽(yáng)性率分別為24%(385/1585)和7%(30/429)，總陽(yáng)性率超過30%，使其成為AML中最普遍發(fā)生突變的靶基因許多臨床研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)LT3突變還與臨床預(yù)后密切相關(guān)，尤對(duì)60歲以下的AML患者，F(xiàn)LT3突變患者預(yù)后較差，且可獨(dú)立于核型之外FLT3基因突變Fms-relatedtyrosinek122FLT3基因突變FLT3基因突變123FLT3基因突變FLT3基因主要突變類型FLT3基因突變FLT3基因主要突變類型124FLT3基因突變mut-FLT3信號(hào)通路FLT3基因突變mut-FLT3信號(hào)通路125補(bǔ)充MIC檢查的不足巢式RT-PCR：可顯著提高反應(yīng)的特異性，增加擴(kuò)增效率。RQ-PCR的檢測(cè)系統(tǒng)：目前，此突變的預(yù)后價(jià)值各研究組報(bào)道不一，尚待進(jìn)一步證實(shí)C-KIT為III型受體酪氨酸激酶家族（還包括c-FMS，PDGFRβ和c-KIT）成員之一FLT3基因主要突變類型在隨訪患者中檢測(cè)到高水平HOX11L2說明白血病細(xì)胞的存在，強(qiáng)烈預(yù)示復(fù)發(fā)，而完全緩解患者HOX11L2表達(dá)水平迅速降低，并維持在一個(gè)低水平。~2x106Ig,~3x106TCRαβ,~5x103TCRγδ此基因突變存在于11-30%AML目前，此突變的預(yù)后價(jià)值各研究組報(bào)道不一，尚待進(jìn)一步證實(shí)伴TAL1異常的患者血象表現(xiàn)為高白細(xì)胞計(jì)數(shù)，高血紅蛋白含量，免疫表型為CD2+/CD10–AML1(RUNX1)SYBRGreenI法NorthernblotNorthernblotCT值：熒光信號(hào)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著增長(zhǎng)（穿過閾值線）時(shí)的循環(huán)次數(shù)~2x106Ig,~3x106TCRαβ,~5x103TCRγδt(6;9)(p23;q34)TCRB重排TCRA重排TCRαβ表達(dá)HOX11基因異常表達(dá)FLT3基因突變外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)補(bǔ)充MIC檢查的不足FLT3基因突變外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)126CBFβ-MYH11inv(16)(p13;q22)及t(16;16)(p13;q22)主要見于M4Eo，10%不伴異常嗜酸細(xì)胞M4，少見于M2CBFβ-MYH11融合蛋白通過干擾核心結(jié)合因子（corebindingfactor,CBF）的轉(zhuǎn)錄激活作用而致病具有CBFβ-MYH11的患者對(duì)化療敏感，預(yù)后較好，故提高檢測(cè)率尤具臨床意義

CBFβ-MYH11inv(16)(p13;q22)及t(1127CBFβ-MYH11CBFβ-MYH11具有多種變異型，其中最常見的為A型，占80%RT-PCR檢測(cè)CBFβ-MYH11進(jìn)行MRD監(jiān)測(cè)顯示，大部分患者在完全緩解時(shí)PCR轉(zhuǎn)陰，但仍有小部分長(zhǎng)期存活者PCR仍為陽(yáng)性最新研究采用RQ-PCR檢測(cè)CBFβ-MYH11轉(zhuǎn)錄本水平來評(píng)價(jià)M4Eo患者M(jìn)RD情況，預(yù)示復(fù)發(fā)

CBFβ-MYH11CBFβ-MYH11具有多種變異型，其中128白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件129NPM基因突變Nucleophosmin，為核-漿穿梭蛋白，調(diào)控p53-ARF通路見于~50%核型正常的AML患者，而在伴低危/高危核型患者中極少見主要見于M4/M5中第12號(hào)外顯子的插入/缺失伴此突變患者WBC計(jì)數(shù)高目前，此突變的預(yù)后價(jià)值各研究組報(bào)道不一，尚待進(jìn)一步證實(shí)NPM基因突變Nucleophosmin，為核-漿穿梭蛋白，130DEK-CANt(6;9)(p23;q34)主要見于M2或M4，也見于M1，MDS-RAEB伴DEK-CAN的患者年齡一般較輕，且預(yù)后較差此類患者進(jìn)行分子監(jiān)測(cè)有助于判斷患者預(yù)后，調(diào)整治療方案

DEK-CANt(6;9)(p23;q34)131N-RAS基因突變?yōu)镽AS基因家族成員之一，染色體定位于1p32.2。具有GTP/GDP結(jié)合和GTPase活性，調(diào)控正常細(xì)胞的生長(zhǎng)此基因突變存在于11-30%AML突變熱點(diǎn)位于codon12,13和61在inv(16)/t(16;16),inv(3)/t(3;3)中突變率較高，而在t(15;17)中低伴此突變患者外周血WBC計(jì)數(shù)低該突變預(yù)后意義尚不明N-RAS基因突變?yōu)镽AS基因家族成員之一，染色體定位于1p132WT-1基因高表達(dá)Wilmstumor1是無特異分子異常的急性白血病患者理想的MRD檢測(cè)指標(biāo)伴此基因高表達(dá)者預(yù)后差，且表達(dá)程度與預(yù)后相關(guān)WT-1基因高表達(dá)Wilmstumor1133BCR-ABLt(9;22)(q34;q11)15~30%成人ALL及3~5%兒童ALL

9號(hào)染色體的斷裂點(diǎn)與CML相同，但22號(hào)染色體斷裂點(diǎn)具有異質(zhì)性

此融合蛋白p190刺激細(xì)胞增殖的能力比p210要強(qiáng)。在轉(zhuǎn)基因試驗(yàn)中觀察到p190誘發(fā)的白血病具有起病早、發(fā)展快和惡性程度高的特點(diǎn)BCR-ABL+ALL患者預(yù)后差，5年存活率<20%，因此這些患者在緩解后需進(jìn)行骨髓移植治療

BCR-ABLt(9;22)(q34;q11)134BCR-ABL對(duì)于自體或異體移植ALL患者，移植前后BCR-ABL的有無以及BCR-ABL的轉(zhuǎn)錄本類型與預(yù)后有關(guān)BCR-ABL對(duì)于自體或異體移植ALL患者，移植前后BCR-135IgH重排λ重排IgH/λ表達(dá)熒光標(biāo)記引物CT值與起始模板量成反比少見于M4和M1，極少見于MDS和骨髓增生綜合癥PML-RARα陽(yáng)性提示的分子復(fù)發(fā)常早于臨床復(fù)發(fā)3-6個(gè)月，為臨床采取進(jìn)一步治療措施提供了保障Fms-relatedtyrosinekinase3κ錯(cuò)誤重排/缺失伴NOTCH1基因突變的成年T-ALL患者預(yù)后較差為研究白血病的發(fā)病機(jī)制打下基礎(chǔ)20%的兒童T-ALL~2x106Ig,~3x106TCRαβ,~5x103TCRγδRT-PCR檢測(cè)PML-RARα是敏感且特異的APL診斷方法，還能用于治療后MRD監(jiān)測(cè)。突變熱點(diǎn)位于codon12,13和61熒光標(biāo)記擴(kuò)增產(chǎn)物最新研究采用RQ-PCR檢測(cè)CBFβ-MYH11轉(zhuǎn)錄本水平來評(píng)價(jià)M4Eo患者M(jìn)RD情況，預(yù)示復(fù)發(fā)N=N0x(1+E)nBCR-ABL+ALL患者預(yù)后差，5年存活率<20%，因此這些患者在緩解后需進(jìn)行骨髓移植治療第12號(hào)外顯子的插入/缺失V-D-J重排：IgH,TCRB,TCRD2003;16:409-417

e1a2+陰性IgH重排λ重排I136E2A-PBX1t(1;19)(q23;p13)5~6%兒童ALL和3%成人ALL此類患者具有高的白細(xì)胞計(jì)數(shù)，高的血清乳酸脫氫酶及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，預(yù)后差，平均無病生存期（DFS）僅6個(gè)月，3年DFS為20%，需給予這些患者強(qiáng)化治療才能獲得較好的預(yù)后核型和E2A-PBX1檢測(cè)對(duì)此類患者的診斷和治療方案的選擇至關(guān)重要E2A-PBX1的預(yù)后價(jià)值需更多的臨床研究證實(shí)E2A-PBX1t(1;19)(q23;p13)137白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件138TEL-AML1t(12;21)(p13;q22)25%兒童ALL，是兒童ALL中最常見的分子異常目前為止尚未在T-ALL，AML或NHL中發(fā)現(xiàn)t(12;21)，在嬰兒白血病中極少報(bào)道，在成人白血病患者中頻率很低（<2%）此類患者發(fā)病年齡?。?歲~10歲），WBC計(jì)數(shù)低（<50000/L），免疫表型為前B-ALL此類患者對(duì)治療反應(yīng)佳，完全緩解時(shí)間長(zhǎng)，預(yù)后好

TEL-AML1t(12;21)(p13;q22)139TEL-AML1由于12p和21q末端在常規(guī)顯帶中很相似，因此常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)方法檢出率僅0.05%，需應(yīng)用FISH或RT-PCR方法提高檢測(cè)陽(yáng)性率TEL基因重排是獨(dú)立預(yù)后因素，RT-PCR檢測(cè)TEL-AML1融合基因能將低危險(xiǎn)度與高危險(xiǎn)度的ALL患者區(qū)分開來。因此早期檢測(cè)TEL-AML1融合基因?qū)εR床預(yù)后，確定合適的治療方案都有重要意義TEL-AML1由于12p和21q末端在常規(guī)顯帶中很相似，因140白血病分子生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)課件141MLL相關(guān)融合基因累及MLL基因的分子異常見于5.2%AML，22%ALL和混合性白血病及某些淋巴瘤，還可見于治療相關(guān)白血病，尤接受topoisomeraseII抑制劑治療的患者M(jìn)LL基因涉及五十余種染色體易位，產(chǎn)生不同的融合蛋白，且每種融合蛋白都與特定的白血病表型相關(guān)。最常見的有：

t(4;11)(q21;q23)MLL-AF4融合基因ALLt(9;11)(p22;q23)MLL-AF9融合基因AMLt(11;19)(p13;q23)MLL-ENL融合基因AML及ALLMLL相關(guān)融合基因累及MLL基因的分子異常見于5.2%AM142MLL相關(guān)融合基因至今，MLL相關(guān)融合蛋白的致病性還不清楚，推測(cè)其可能具有雙重作用：

——融合蛋白可能獲得新的功能，促使細(xì)胞轉(zhuǎn)化