微量定容測壓法測定種子的呼吸速率

微量定容測壓法測定種子的呼吸速率一、原理微量檢壓計(jì)不僅用來研究有機(jī)體或部分組織的呼吸作用和發(fā)酵作用，而且也可以研究有關(guān)O2與CO2及其他氣體交換的反應(yīng)。如光合作用、酶的活性等。近年來又利用此法測定線粒體的呼吸強(qiáng)度，以鑒定雜種優(yōu)勢，為育種工作中對雜種的遺傳性狀研究法開辟了一條新途徑，因此廣泛用于植物生理、生化研究。測壓法的原理是在固定體積并保持恒溫的密閉系統(tǒng)中，氣體產(chǎn)生或消失的總量，可以利用氣體定律計(jì)算求得。二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料待測的小麥、水稻萌發(fā)種子。（二）儀器設(shè)備瓦布格呼吸計(jì)（微量呼吸檢壓計(jì)），移液管，量筒，小鑷子，稱量瓶，橡皮筋數(shù)根；吸水紙。試劑（1）20%KOH。（2）凡士林。（3）Brodie氏溶液；NaCl23g，牛膽酸鈉5g，溶于500mL水中，另加少許染料（酸性品紅）使溶液染色，并加數(shù)滴濃麝香草酚酒精溶液作為防腐劑。三、實(shí)驗(yàn)步驟（一）種子吸氧量的測定（1）取不同處理種子若干（體積約0.5mL左右），稱其鮮重，然后用排水法測定其體積，先用濾紙將種子外面水分吸干，另取10mL量筒一個，內(nèi)盛4～5mL的水，將種子放入量筒內(nèi)觀察水分上升體積，二次水分體積之差即為種子體積，將種子取出，用濾紙吸干附在種子外表的水分，然后將種子放入反應(yīng)瓶的底部，再加0.5mL水。（2）在中央小槽內(nèi)加入20%KOH0.2mL，為了增大吸收CO2的能力，可用1cm×2cm濾紙折疊后插入中央小槽內(nèi)，并在中央小槽口上涂上少量凡士林，防止堿液逸出。（3）側(cè)管的玻璃棒涂以凡士林后塞緊。壓力計(jì)口亦涂上凡士林和反應(yīng)瓶連接，轉(zhuǎn)動反應(yīng)瓶，使封口凡士林呈透明為止，然后用橡皮筋將反應(yīng)瓶固定在壓力計(jì)上（圖2-20-1）。（4）將壓力計(jì)固定在水槽上，并打開活塞，平衡10~15min，在此過程中要檢查反應(yīng)瓶是否漏氣。（二）空白試驗(yàn)（作溫壓計(jì)用）因壓力計(jì)左管口是與大氣相通，實(shí)驗(yàn)時室內(nèi)氣壓或水槽溫度微小變化對讀數(shù)均有影響，為此，必須進(jìn)行校正。校正方法：即反應(yīng)瓶中除不加種子外，其他處理與測壓計(jì)完全相同。測壓計(jì)與溫壓計(jì)兩者的關(guān)系如表2-20-1：（三）測定當(dāng)反應(yīng)瓶內(nèi)溫度與水槽溫度平衡后，將壓力計(jì)上的活塞關(guān)閉。開始振蕩，并記錄開始時間，每隔15min記錄測壓計(jì)及混壓計(jì)左管液面高度，讀數(shù)時關(guān)閉振蕩器，并將壓力計(jì)的右管液面調(diào)整k50wm.c，再記錄左管液面高度，共計(jì)4次實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將反應(yīng)瓶中的種子用小鑷子取出，放置稱量瓶內(nèi)，在105℃烘箱中烘至恒重，稱其重量。另將反應(yīng)瓶上的凡士林用軟紙揩拭干凈、再用自來水沖洗后，置于洗滌液中浸泡0.5h，