HPV的講課資料(市級(jí))課件

人乳頭狀瘤病毒感染與宮頸癌的關(guān)系

1977年Laverty在電鏡中觀察到宮頸癌活檢組織中存在人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)顆粒,70年代末ZurHausen首先提出人乳頭瘤病毒與宮頸癌發(fā)病可能有關(guān)的假想后,國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了大量的研究,并獲取了許多證據(jù),1995年國(guó)際癌癥協(xié)會(huì)(IARC)專(zhuān)題討論會(huì)的學(xué)者們認(rèn)為:HPV感染是宮頸癌的主要病因。HPV的歷程人乳頭瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）是一種感染皮膚和粘膜鱗狀上皮細(xì)胞的小DNA病毒，病毒外層為衣殼蛋白組成的外殼，內(nèi)部包裹著病毒核酸。HPV的結(jié)構(gòu)HPV病毒顆粒直徑約55nm,由72個(gè)病毒殼粒包被。HPV的結(jié)構(gòu)(外觀)HPV的結(jié)構(gòu)(基因組)HPV基因由3個(gè)部分組成早期區(qū)(earlyregion,E)含有E1、E2、E4、E5、E6、E7共6個(gè)基因,是維持病毒復(fù)制、編碼病毒蛋白、維持細(xì)胞內(nèi)病毒的高拷貝數(shù)的基因晚期區(qū)(lateregion,L)長(zhǎng)控制區(qū)(longcontrolregion,LCR)E2調(diào)控蛋白E2蛋白通過(guò)與病毒DNA結(jié)合抑制病毒基因轉(zhuǎn)錄。HPV基因整合宿主DNA后，往往丟失E2基因，從而失去對(duì)E6、E7基因的控制，導(dǎo)致細(xì)胞癌變病毒DNAE2蛋白E7癌蛋白

E7蛋白較小，約100個(gè)氨基酸，同樣具有兩個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)。E7蛋白是HPV致癌的關(guān)鍵分子，E7分為CR1、CR2、CR3和C端結(jié)構(gòu)域。E7蛋白結(jié)合pRB蛋白使轉(zhuǎn)錄因子E2F被釋放。E2F是一類(lèi)轉(zhuǎn)錄激活因子，一般情況下受pRB蛋白的負(fù)調(diào)控，當(dāng)pBR與E2F解離后，E2F即可激活基因轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)了眾多細(xì)胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。。E7蛋白還可以結(jié)合RB相關(guān)的porket蛋白pRB、p107、p130等，導(dǎo)致這些蛋白通過(guò)泛素途徑降解。高危HPV整合時(shí)

E2斷裂、E6、E7激活

E6與P53結(jié)合，激活c-myc,H-ras，凋亡↓

E7與Rb結(jié)合，激活P16、cyclinE，增殖↑激活端粒酶等使細(xì)胞增殖和永生化

FerenczyA,FrancoE.Lancetncol,2002;3:11HPV整合是宮頸癌發(fā)生的關(guān)鍵

當(dāng)某一未知基因組與任何已知型別HPV進(jìn)行雜交，其同源性小于50％時(shí)，被稱(chēng)為是一個(gè)獨(dú)立的新型；而雜交的同源性大于50％，則稱(chēng)為一個(gè)亞型；如果僅出現(xiàn)限制性?xún)?nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的數(shù)目不同，則被認(rèn)為是一個(gè)突變株。據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)，到目前為止，從不同人病灶組織中，已鑒定出HPV達(dá)70多個(gè)亞型，有資料報(bào)道為100種以上HPV型。HPV分型HPV分型目前世界上已發(fā)現(xiàn)的110余種HPV,大約35種型別涉及生殖道感染，約20種與腫瘤有關(guān)。根據(jù)不同型別HPV與癌發(fā)生的危險(xiǎn)性高低分為高危型和低危型2種。

危險(xiǎn)性型別引起疾病高危型HPV16,18,31,33,35,39,4551,52,56,58,59,68,73,82等

高度子宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CINⅡ、Ⅲ)和宮頸癌低危型HPV6,11,40,42,43,44,54,61,70,72,81,cp6108等

生殖道尤其是陰道下部及肛周皮膚的濕疣類(lèi)病變和低度子宮頸上皮內(nèi)瘤樣變(CINⅠ)

HPV大家族，超過(guò)100個(gè)亞型

根據(jù)是否會(huì)誘發(fā)宮頸癌可分為低危：6、11、42、43、44

高危：16、18、31、33、35、39、45、51、

52、56、58、59、66及68型低危HPV基因組不能整合進(jìn)宿主細(xì)胞染色體高危HPV基因組能整合進(jìn)宿主細(xì)胞染色體

FerenczyA,FrancoE.LancetOncol,2002;3:11HPV的分型HPV感染途徑性接觸傳播丈夫陰莖HPV的存在可使妻子宮頸受染的危險(xiǎn)增加9倍，相同的HPV亞型可以在性伴侶中檢出，與此相反，處女通常是檢測(cè)不到HPV感染直接皮膚接觸也被認(rèn)為是主要的傳播方式母嬰傳播母親生殖道的HPV感染也可以傳播至她們的嬰兒的口腔中

HPV感染潛伏期

低危型HPV感染平均持續(xù)時(shí)間是4.8個(gè)月，高危型HPV感染平均持續(xù)時(shí)間大概是8個(gè)月。HPV感染的最常見(jiàn)的結(jié)局是沒(méi)有明顯的臨床表現(xiàn)，絕大部分會(huì)被機(jī)體免疫力自動(dòng)清除。Richardson,etal.2003

HPV的感染是非系統(tǒng)性感染，只局限于最初的感染的部位，感染部位的先天性免疫是阻止感染的第一道防線。主要由局部細(xì)胞因子和非特異性的效應(yīng)細(xì)胞，如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞。先天性免疫

HPV感染后可以激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性體液免疫和細(xì)胞免疫。針對(duì)衣殼蛋白L的IgG和IgA中和抗體在病毒感染的早期較為重要，針對(duì)早期蛋白的細(xì)胞免疫反應(yīng)對(duì)最終清除病毒可能更為重要。獲得性免疫HPV的感染過(guò)程HPV檢測(cè)方法1.PCR-HPV2.IIC23.原位雜交REVERSELINEBLOT(RLB)PCR結(jié)合雜交的方法高危型感染低危型感染其原理是利用對(duì)抗體捕獲信號(hào)的放大和化學(xué)發(fā)光信號(hào)的檢測(cè)?；緦?shí)驗(yàn)步驟如下：

1、樣本DNA雙鏈被釋放并分解為核苷酸單鏈；

2、DNA單鏈與RNA探針結(jié)合為RNA-DNA雜交體；

3、特異性抗體將RNA-DNA雜交體固定在試管壁或微孔壁上；

4、結(jié)合有堿性磷酸酶的多個(gè)第二抗體與RNA-DNA雜交體結(jié)合，使信號(hào)放大；

5、堿性磷酸酶使酶底物發(fā)光。雜交捕獲(HC)試驗(yàn)HPV的流行病學(xué)WoodmanetalHPV檢測(cè)陰性并開(kāi)始活動(dòng)平均1年者2011例隨訪3年?HPV感染率44％?最常見(jiàn)亞型16型

?246例出現(xiàn)細(xì)胞涂片異常

?28例進(jìn)展為HSIL

Lancet,2001;9:357正常人群的HPV感染Beby-DefouxAetalHPV感染7.3%HR-HPV：5.3%；LR-HPV：2.4%；Mixed-HPV：0.9%；unknown-HPV:0.5%常見(jiàn)型別的順序：16、58、18、30、33

JMedVirol2004;73(2):262-8正常人群的HPV感染正常人群的HPV感染北京市正常人群：23.9%HR-HPV：19.5%，LR-HPV：4.4%，Mixed-HPV：2.0%分布前10位的亞型：16、58、52、68、CP8304、31、33、59、18and11。

——國(guó)家十五科技攻關(guān)項(xiàng)目BeerensEetalHR-HPV：ASCUS72%;HSIL94.5%Mixed-HPV：HSIL35.8%常見(jiàn)型別：16、52、51、31；18型罕見(jiàn)

Cytopathology2005;16(4):199-205高危人群HPV的感染高危人群HPV的感染北大醫(yī)院2285名門(mén)診高危人群：HPV感染率：57.1%HR-HPV:41.0%;LR-HPV:7.2%;Mixed-HPV：8.9%HPV感染常見(jiàn)亞型是HPV16、58、52、53、33、6和CP8304。人群HPV感染高峰年齡在30~34歲

——國(guó)家十五科研攻關(guān)項(xiàng)目

中國(guó)實(shí)用婦科與產(chǎn)科雜志；22（6），444-445HPV與細(xì)胞學(xué)結(jié)果的關(guān)系ShlayJetal.195例細(xì)胞涂片為ASCUS后平均64（12－430）天行陰道鏡檢查和HPV檢測(cè)，陰道鏡異常再行活檢結(jié)果:高危HPV總陽(yáng)性率31.3%CINI36.4%CINII-III93.3%

ObstetGynecol,2000;96:410HPV分型檢測(cè)與ASCUSLeeetal457例細(xì)胞學(xué)診斷為ASCUS/LSIL，行HPV檢測(cè)和活檢

LSIL且高危HPV陽(yáng)性者,22.7%為CINII/IIILSIL但高危HPV陰性者，僅1％為CINII/III

ArchPatholLabMed,2001;125:1453HPV檢測(cè)與ASCUS\LSILNobbenhuis等，觀察353例HPV感染者.1年消退率平均消退時(shí)間低危HPV細(xì)胞輕、中度68％5個(gè)月重度53％6個(gè)月高危HPV細(xì)胞輕度37％17個(gè)月中度34％24個(gè)月重度12％>60個(gè)月

BrJCancer,2002;87:75HPV隨訪在宮頸病變中的作用HPV隨訪在宮頸病變中的作用MoscickiABetal187名LSIL，每4個(gè)月檢測(cè)一次細(xì)胞學(xué)、陰道鏡、HPVDNA。三次細(xì)胞學(xué)均為陰性為轉(zhuǎn)歸一年后轉(zhuǎn)歸：61%（95%CI53-71）三年后轉(zhuǎn)歸：91%（95%CI84-99）提示：HPV感染轉(zhuǎn)陰與LSIL的轉(zhuǎn)歸有相關(guān)性

Lancet2004;364(9446):1678-83

●HPV感染先于細(xì)胞學(xué)發(fā)生●HPV感染消退也先于細(xì)胞學(xué)消退HPV感染與細(xì)胞學(xué)病例LEEP術(shù)后：HPV（-）HPV感染與各級(jí)宮頸疾病Plummeretal10058例宮頸癌，8550宮頸鱗癌，1508宮頸腺癌和宮頸腺鱗癌HPV16感染與宮頸癌的相關(guān)具有普遍意義宮頸鱗癌：HPV16占46-63%；

HPV18占10-14%宮頸腺癌和宮頸腺鱗癌：HPV18占37-41%；

HPV16占26-36%。HPV分型與宮頸癌HPV分型檢測(cè)與宮頸病變北大醫(yī)院463例（CIN）宮頸病變中，HPV陽(yáng)性率76.9%,HR-HPV73.4%;LR-HPV12.1%;M-HPV31.3%（其中2型感染98例、3型感染31例、4型感染10例、5型感染4例、6型感染2例，多型感染都至少有一種高危型存在）。

——國(guó)家十五科研攻關(guān)項(xiàng)目HPV分型檢測(cè)與CIN1\炎癥CIN1\炎癥HR-HPV：77.1%常見(jiàn)亞型分別是：HPV16、58、52、33、31、18和51型，且均為高危亞型感染。

——國(guó)家十五科研攻關(guān)項(xiàng)目CIN2\3HR-HPV:94.0%，常見(jiàn)亞型：HPV16、33、58、31和52型LogisticRegression分析：HPV16、33和31與CIN2\3相關(guān)，是主要致病型。

——國(guó)家十五科研攻關(guān)項(xiàng)目

中國(guó)婦產(chǎn)科臨床雜志；7（4）：253-256.HPV分型檢測(cè)與宮頸病變CIN2\3HPV在宮頸治療前后的比較宮頸治療前后HPV的變化HoufflinDebangeVetalLEEP治療205例CIN2或3的患者術(shù)前：HPV陽(yáng)性94.1%術(shù)后：HPV陽(yáng)性34.6%提示：治療后HPV仍為陽(yáng)性，復(fù)發(fā)的可能性大

GynecolOncol2003;90(3):287-92宮頸治療前后HPV的變化北大醫(yī)院2005年LEEP治療256例CIN2或3的患者術(shù)前：HPV陽(yáng)性