微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)課件

微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1特點(diǎn)：小簡(jiǎn)低微生物原核生物界原生生物界真菌界病毒界一、微生物：是一切肉眼看不見(jiàn)或看不清楚的微小生物的總稱(chēng)．1、分類(lèi)特點(diǎn)：小簡(jiǎn)低微生物原核生物界原生生物界真菌2芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌.芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓3菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉4碳源氮源生長(zhǎng)因子無(wú)機(jī)鹽水微生物需要的五大類(lèi)營(yíng)養(yǎng)要素物質(zhì)碳源微生物需要的五大類(lèi)營(yíng)養(yǎng)要素物質(zhì)5概念來(lái)源作用碳源凡是能為微生物提供所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)無(wú)機(jī)碳源

CO2NaHCO3等有機(jī)碳源

糖類(lèi)(葡萄糖)脂肪酸花生粉餅石油等①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②異養(yǎng)微生物的能源1、微生物的碳源藍(lán)藻和酵母菌分別能利用哪類(lèi)碳源物質(zhì)？思考概念來(lái)源作用碳源凡是能為微生物提供所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)無(wú)機(jī)碳6概念來(lái)源作用氮源無(wú)機(jī)氮源N2、NH4+、NO3-、NH3等有機(jī)氮源尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁㎞元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N的代謝產(chǎn)物2、微生物的氮源概念來(lái)源作用氮源無(wú)機(jī)氮源有機(jī)氮源凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁㎞元素的7概念成分作用為什么需要補(bǔ)充？常見(jiàn)的生長(zhǎng)因子微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物有機(jī)物酶和核酸的組成成分缺乏合成這些物質(zhì)所需酶或合成能力有限維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等3.生長(zhǎng)因子概念微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物3.生長(zhǎng)因子8微生物種類(lèi)生長(zhǎng)因子需要量/mL腸膜乳狀桿菌胱氨酸5μg白喉棒桿菌β-丙氨酸1.5μg破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌尿嘧啶0-4μg阿拉伯聚糖乳桿菌泛酸0.02μg糞鏈球菌葉酸200μg干酪乳桿菌生物素1μg幾種微生物所需的生長(zhǎng)因子微生物種類(lèi)生長(zhǎng)因子需要量/mL腸膜乳狀桿菌胱氨酸5μg9固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基的種類(lèi)圖1、根據(jù)物理性質(zhì)分合成培養(yǎng)基——成分明確，常用于分類(lèi)、鑒定天然培養(yǎng)基——成分不明確，常用于工業(yè)生產(chǎn)2、根據(jù)化學(xué)成分分——用于微生物的分離計(jì)數(shù)——觀察微生物的運(yùn)動(dòng)，鑒定菌種——常用于工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基的種類(lèi)圖1、根據(jù)物理性質(zhì)分合成培養(yǎng)基—10固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基需加入凝固劑，如瓊脂固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基需加入凝固劑，如瓊脂11◆鑒別培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類(lèi)的微生物，如加伊紅和美藍(lán)，和大腸桿菌的代謝產(chǎn)物結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤，可以用來(lái)鑒別大腸桿菌3、根據(jù)用途分◆選擇培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)，如加高濃度的食鹽，抑制多種細(xì)菌生長(zhǎng)，分離到金黃色葡萄球菌◆鑒別培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別12選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基分離自生固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基13①、目的要明確根據(jù)所培養(yǎng)的微生物的種類(lèi)、培養(yǎng)的目的配制②、營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例，最重要為碳源和氮源的比，如：谷氨酸生產(chǎn)中C:N=4:1，菌體數(shù)↑谷氨酸↓。C:N=3:1，菌體數(shù)↓谷氨酸↑。③、pH要適宜

細(xì)菌pH6.5~7.5放線菌pH7.5~8.5真菌pH5.0~6.0（三）培養(yǎng)基的配制原則①、目的要明確（三）培養(yǎng)基的配制原則14（四）培養(yǎng)基的配置稱(chēng)量溶化調(diào)PH培養(yǎng)基的分裝加棉塞包扎,貼標(biāo)簽加熱不斷攪拌名稱(chēng)日期制作者ＮaＯＨ、ＨＣl（四）培養(yǎng)基的配置稱(chēng)量溶化調(diào)PH培養(yǎng)基的分裝加棉塞包扎,貼標(biāo)152、滅菌2、滅菌163、擱置斜面50℃時(shí)，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)總長(zhǎng)的一半增加培養(yǎng)基與菌種的接觸面積3、擱置斜面50℃時(shí)，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)總長(zhǎng)的一半增加培養(yǎng)基與菌17要點(diǎn)歸納要點(diǎn)歸納18（一）培養(yǎng)基

知識(shí)要點(diǎn)：1．培養(yǎng)基的用途和種類(lèi)，指出培養(yǎng)基可分為液體和固體兩大類(lèi)；2．不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方；3．盡管培養(yǎng)基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。（二）無(wú)菌技術(shù)知識(shí)要點(diǎn)：1．無(wú)菌技術(shù)的概念；2．消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別；3．常用的消毒與滅菌的方法，接種環(huán)灼燒滅菌的方法。（一）培養(yǎng)基（二）無(wú)菌技術(shù)191、器具環(huán)境、操作者的滅菌、消毒2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種、純化6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存3.微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序臨時(shí)保藏長(zhǎng)期保藏恒溫箱1、器具環(huán)境、操作者的滅菌、消毒3.微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操201．培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？

提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2．為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？

答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

（二）倒平板操作的討論1．培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。213．平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠。將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快地?fù)]發(fā)。4．在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。3．平板冷凝后，為什么要將平板倒置？22（三）平板劃線操作的討論1．為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個(gè)菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。（三）平板劃線操作的討論232．在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？

答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3．在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？

答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少。每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而成的菌落。2．在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？24（四）涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？

提示：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周?chē)鹊?。（四）涂布平板操作的討?5培養(yǎng)基菌種管口并齊斜面水平擰松棉塞微生物接種培養(yǎng)基菌種管口并齊微生物接種26燒灼接種環(huán)燒灼接種環(huán)27取下棉塞（不能放下）燒灼管口取下棉塞（不能放下）28冷卻接種環(huán)，挑取菌種冷卻接種環(huán)，挑取菌種29蛇形畫(huà)線蛇形畫(huà)線30燒灼管口，加上棉塞，燒灼接種環(huán)燒灼管口，加上棉塞，燒灼接種環(huán)31無(wú)菌技術(shù)消毒與滅菌的區(qū)別？消毒及滅菌的定義：

1.消毒定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過(guò)程。

2.滅菌的定義：以化學(xué)劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌之過(guò)程。

無(wú)菌技術(shù)消毒與滅菌的區(qū)別？消毒及滅菌的定義：

1.消毒定義：32無(wú)菌技術(shù)消毒的方法：1、100℃煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min3、用酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒4、氯氣消毒水源5、紫外線消毒……無(wú)菌技術(shù)消毒的方法：33無(wú)菌技術(shù)滅菌的方法：1、灼燒滅菌2、干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。3、高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.無(wú)菌技術(shù)滅菌的方法：34

1．無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？

答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。

2．請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請(qǐng)選擇合適的方法。

(1)培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿(2)玻棒、試管、燒瓶和吸管(3)實(shí)驗(yàn)操作者的雙手

答：(1)、(2)需要滅菌；(3)需要消毒。1．無(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污351、不超過(guò)試管的1/52、不要將培養(yǎng)基沾在試管口及上段1、不超過(guò)試管的1/5361、目的：防止雜菌污染，保證通氣良好2、注意：2/3在管口內(nèi)1、目的：防止雜菌污染，保證通氣良好37微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)38特點(diǎn)：小簡(jiǎn)低微生物原核生物界原生生物界真菌界病毒界一、微生物：是一切肉眼看不見(jiàn)或看不清楚的微小生物的總稱(chēng)．1、分類(lèi)特點(diǎn)：小簡(jiǎn)低微生物原核生物界原生生物界真菌39芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對(duì)干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時(shí)以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時(shí)候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個(gè)細(xì)菌.芽孢有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個(gè)橢圓40菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落：?jiǎn)蝹€(gè)或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，就會(huì)形成一個(gè)肉41碳源氮源生長(zhǎng)因子無(wú)機(jī)鹽水微生物需要的五大類(lèi)營(yíng)養(yǎng)要素物質(zhì)碳源微生物需要的五大類(lèi)營(yíng)養(yǎng)要素物質(zhì)42概念來(lái)源作用碳源凡是能為微生物提供所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)無(wú)機(jī)碳源

CO2NaHCO3等有機(jī)碳源

糖類(lèi)(葡萄糖)脂肪酸花生粉餅石油等①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②異養(yǎng)微生物的能源1、微生物的碳源藍(lán)藻和酵母菌分別能利用哪類(lèi)碳源物質(zhì)？思考概念來(lái)源作用碳源凡是能為微生物提供所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)無(wú)機(jī)碳43概念來(lái)源作用氮源無(wú)機(jī)氮源N2、NH4+、NO3-、NH3等有機(jī)氮源尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁㎞元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N的代謝產(chǎn)物2、微生物的氮源概念來(lái)源作用氮源無(wú)機(jī)氮源有機(jī)氮源凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁㎞元素的44概念成分作用為什么需要補(bǔ)充？常見(jiàn)的生長(zhǎng)因子微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物有機(jī)物酶和核酸的組成成分缺乏合成這些物質(zhì)所需酶或合成能力有限維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等3.生長(zhǎng)因子概念微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物3.生長(zhǎng)因子45微生物種類(lèi)生長(zhǎng)因子需要量/mL腸膜乳狀桿菌胱氨酸5μg白喉棒桿菌β-丙氨酸1.5μg破傷風(fēng)梭狀芽孢桿菌尿嘧啶0-4μg阿拉伯聚糖乳桿菌泛酸0.02μg糞鏈球菌葉酸200μg干酪乳桿菌生物素1μg幾種微生物所需的生長(zhǎng)因子微生物種類(lèi)生長(zhǎng)因子需要量/mL腸膜乳狀桿菌胱氨酸5μg46固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基的種類(lèi)圖1、根據(jù)物理性質(zhì)分合成培養(yǎng)基——成分明確，常用于分類(lèi)、鑒定天然培養(yǎng)基——成分不明確，常用于工業(yè)生產(chǎn)2、根據(jù)化學(xué)成分分——用于微生物的分離計(jì)數(shù)——觀察微生物的運(yùn)動(dòng)，鑒定菌種——常用于工業(yè)生產(chǎn)固體培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基的種類(lèi)圖1、根據(jù)物理性質(zhì)分合成培養(yǎng)基—47固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基需加入凝固劑，如瓊脂固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基需加入凝固劑，如瓊脂48◆鑒別培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類(lèi)的微生物，如加伊紅和美藍(lán)，和大腸桿菌的代謝產(chǎn)物結(jié)合，使菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤，可以用來(lái)鑒別大腸桿菌3、根據(jù)用途分◆選擇培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)，如加高濃度的食鹽，抑制多種細(xì)菌生長(zhǎng)，分離到金黃色葡萄球菌◆鑒別培養(yǎng)基——在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別49選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基分離自生固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基50①、目的要明確根據(jù)所培養(yǎng)的微生物的種類(lèi)、培養(yǎng)的目的配制②、營(yíng)養(yǎng)要協(xié)調(diào)注意各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例，最重要為碳源和氮源的比，如：谷氨酸生產(chǎn)中C:N=4:1，菌體數(shù)↑谷氨酸↓。C:N=3:1，菌體數(shù)↓谷氨酸↑。③、pH要適宜

細(xì)菌pH6.5~7.5放線菌pH7.5~8.5真菌pH5.0~6.0（三）培養(yǎng)基的配制原則①、目的要明確（三）培養(yǎng)基的配制原則51（四）培養(yǎng)基的配置稱(chēng)量溶化調(diào)PH培養(yǎng)基的分裝加棉塞包扎,貼標(biāo)簽加熱不斷攪拌名稱(chēng)日期制作者ＮaＯＨ、ＨＣl（四）培養(yǎng)基的配置稱(chēng)量溶化調(diào)PH培養(yǎng)基的分裝加棉塞包扎,貼標(biāo)522、滅菌2、滅菌533、擱置斜面50℃時(shí)，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)總長(zhǎng)的一半增加培養(yǎng)基與菌種的接觸面積3、擱置斜面50℃時(shí)，斜面長(zhǎng)度不超過(guò)總長(zhǎng)的一半增加培養(yǎng)基與菌54要點(diǎn)歸納要點(diǎn)歸納55（一）培養(yǎng)基

知識(shí)要點(diǎn)：1．培養(yǎng)基的用途和種類(lèi)，指出培養(yǎng)基可分為液體和固體兩大類(lèi)；2．不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方；3．盡管培養(yǎng)基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。（二）無(wú)菌技術(shù)知識(shí)要點(diǎn)：1．無(wú)菌技術(shù)的概念；2．消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別；3．常用的消毒與滅菌的方法，接種環(huán)灼燒滅菌的方法。（一）培養(yǎng)基（二）無(wú)菌技術(shù)561、器具環(huán)境、操作者的滅菌、消毒2、培養(yǎng)基的配制3、培養(yǎng)基的滅菌4、倒平板5、微生物接種、純化6、恒溫箱中培養(yǎng)7、菌種的保存3.微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操作程序臨時(shí)保藏長(zhǎng)期保藏恒溫箱1、器具環(huán)境、操作者的滅菌、消毒3.微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的基本操571．培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？

提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，就可以進(jìn)行倒平板了。2．為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？

答：通過(guò)灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。

（二）倒平板操作的討論1．培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。583．平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

答：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠。將平板倒置，既可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，又可以避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快地?fù)]發(fā)。4．在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。3．平板冷凝后，為什么要將平板倒置？59（三）平板劃線操作的討論1．為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到單個(gè)菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。（三）平板劃線操作的討論602．在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？

答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3．在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開(kāi)始劃線？

答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少。每次從上一次劃線的末端開(kāi)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而成的菌落。2．在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？61（四）涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無(wú)菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無(wú)菌操作？

提示：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸