實驗13 地衣酚法測定RNA含量 - 華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院新 …

實驗13地衣酚法測定RNA含量-華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院新…實驗13地衣酚法測定RNA含量-華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院新…實驗13地衣酚法測定RNA含量-華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院新…實驗13地衣酚法測定RNA含量-華南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院新…編制僅供參考審核批準生效日期地址：電話：傳真:郵編:實驗13地衣酚法測定RNA含量一、目的學(xué)習和掌握測定RNA含量的定糖法（地衣酚法）的原理和操作技術(shù)。二、原理核糖核酸與濃鹽酸共熱時，即發(fā)生降解，形成的核糖繼而轉(zhuǎn)變成糖醛，后者與3，5—二羥基甲苯（地衣酚）反應(yīng)呈鮮綠色，該反應(yīng)需用三氯化鐵或氯化銅作催化劑，反應(yīng)產(chǎn)物在670nm處有最大吸收，RNA濃度在20~200微克/毫升范圍內(nèi)，光密度與RNA的濃度成正比關(guān)系，在反應(yīng)液中如混有DNA或其他雜質(zhì)。也能給出類似的顏色。因此測定RNA時可先測定DNA的含量，再計算RNA的含量。地衣酚法只能測定RNA中與嘌呤連接的核糖，不同來源的RNA所含嘌呤與嘧啶的比例各不相同，因此，用所測得的核糖量來換算各種RNA的含量存在誤差。最好用被測樣品相同來源的純化RNA作RNA-核糖標準曲線，然后從曲線求得被測樣品的RNA含量。三、材料、試劑和器具（一）試劑1、RNA標準溶液：取酵母RNA配成200微克/毫升的標準溶液（如不溶，可滴加氫氧化銨溶液，調(diào)至pH=）2、樣品溶液：RNA濃度在20~100微克/毫升范圍內(nèi)。（自己提?。?、地衣酚試劑，先配制%三氯化鐵濃鹽酸溶液（A、R）。使用前再用上述溶液為溶劑配成%的地衣酚溶液。（臨用時配制）（二）器具1、試管及管架2、水浴鍋3、移液管（1，2，5ml）4、可見光分光光度計四、操作步驟（一）RNA標準曲線的制作取8支試管，編號，按下表加入試劑管號試劑01234567RNA標準液0蒸餾水21..80地衣酚試劑22222222加畢，搖勻，置沸水浴中加熱15分鐘，冷卻，測值。以值為縱坐標，RNA含量（微克/毫升）為橫坐標作圖繪制標準曲線。（二）樣品的測定取~毫升樣品液于試管中，加蒸餾水稀釋至2毫升，后加2毫升地衣酚試劑搖勻，于沸水中煮15分鐘，冷卻，測。根據(jù)測得的光密度值，從標準曲線上查出相當該光密度的RNA的含量，按下式計算樣品中RNA的百分含量。RNA含量/毫升待測液=標準曲線查得值×稀釋倍數(shù)RNA產(chǎn)率（%）=含量/毫升×總體積×100新鮮肝重（g）×106五、注意事項樣品中蛋白質(zhì)含量較高時，應(yīng)先用5%三氯乙酸溶液沉淀蛋白質(zhì)后再測定。六、實驗報告附上繪制標準曲線圖，并計算RNA的含量及