組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件

組織病理學(xué)制片技術(shù)組織病理學(xué)制片技術(shù)1（優(yōu)選）組織病理學(xué)制片技術(shù)（優(yōu)選）組織病理學(xué)制片技術(shù)2目的和要求

AimsandRequirements了解生物組織的特點(diǎn)及取材的注意事項(xiàng)；熟悉切片的原理、一般要求及注意事項(xiàng)；掌握石蠟切片制作技術(shù)；目的和要求

AimsandRequirements了解生3病理學(xué)常用的觀察手段

Thecommonsurveymeansinpathology1、大體標(biāo)本觀察主要用肉眼、量尺及各種衡器等輔助工具，對(duì)所檢標(biāo)本的大小、形狀、色澤、重量、表面及切面、病灶特點(diǎn)進(jìn)行觀察及測(cè)量。2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。病理學(xué)常用的觀察手段

Thecommonsurveym4病理學(xué)標(biāo)本的種類(lèi)

Typesofpathologicsamples1、活體組織檢查(Biopsy)簡(jiǎn)稱活檢，從患者活體局部切取、鉗咬、細(xì)針吸取和摘取等手術(shù)方法獲取病變組織進(jìn)行病理檢查。2、脫落細(xì)胞學(xué)檢查(Exfoliativecytologicalexam)對(duì)患者痰液、胸腹水、尿液以及陰道刮片、食管拉網(wǎng)、纖維胃/支氣管鏡所取得的材料進(jìn)行涂片，以檢查脫落細(xì)胞，是早期發(fā)現(xiàn)和診斷腫瘤的好方法。病理學(xué)標(biāo)本的種類(lèi)

Typesofpathologics53、尸體解剖(Autopsy)通過(guò)尸檢可查出病因和病變，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和確診某些傳染病、新發(fā)現(xiàn)的疾病，積累經(jīng)驗(yàn)，提高診療水平。4、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(Animalexperiment)根據(jù)研究需要，在動(dòng)物身上復(fù)制人類(lèi)某些疾病的模型、進(jìn)行觀察研究，了解疾病的病因、發(fā)病機(jī)制及藥物療效等。5、組織/細(xì)胞培養(yǎng)(TissueandCellculture)將某種組織或單細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)，來(lái)研究各種病因作用下組織、細(xì)胞的病理變化及治療效果。3、尸體解剖(Autopsy)通過(guò)尸檢可查出病因和病變，及時(shí)6病理技術(shù)的應(yīng)用Applicationofpathologictechnique幫助臨床查明死因(尸檢);手術(shù)后病變標(biāo)本，明確診斷(臨床活檢);為教學(xué)、科研提供資料;病理技術(shù)的應(yīng)用幫助臨床查明死因(尸檢);7取材(Samplecollection)→固定(Fixation)→脫水(Dehydration)→透明(Transparentizing)→浸蠟(Paraffinsoaking)→包埋(Embedding)第一節(jié)組織處理

Tissueprocessing取材(Samplecollection)→固定(Fixat8

1.人為因素

2.標(biāo)本大小

3.取材時(shí)間

4.包埋方向

5.邊緣標(biāo)記一、取材(Samplescollection)1.人為因素一、取材(Samplescollecti96.小標(biāo)本的處理方法

7.特殊情況取材

8.取材數(shù)量

9.清除多余成分10.重復(fù)取材11.核對(duì)取材12.剩余組織存放6.小標(biāo)本的處理方法10二、固定(Fixation)固定就是用物理或化學(xué)方法，阻止組織細(xì)胞離體或培養(yǎng)細(xì)胞脫離生存環(huán)境后發(fā)生形態(tài)學(xué)變化。(一)固定的目的1.迅速阻斷組織細(xì)胞離體后的自溶性變化，防止腐敗，盡量保持組織細(xì)胞生活狀態(tài)下的形態(tài)結(jié)構(gòu)。2.使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，并保持原有的空間位置。3.固定劑有硬化作用,增加組織的硬度,便于制片。4.組織中的各種物質(zhì)經(jīng)固定后產(chǎn)生對(duì)染料的親和力，利于染色和觀察。二、固定(Fixation)固定就是用物理或化學(xué)方法，阻止組11（二）常用的固定方法1.浸泡固定法2.灌注固定法3.細(xì)胞涂片的固定方法4.微波固定法5.蒸氣固定法（二）常用的固定方法1.浸泡固定法12（三）常用的固定液1.單純固定液(1)甲醛(formaldehyde)(2)酒精(alcohol)(3)苦味酸(picricacid)

(4)丙酮(acetone)(5)醋酸(aceticacid)

（三）常用的固定液1.單純固定液132.混合固定液(1)Bouin液用于結(jié)締組織及脂肪染色；(2)Zenker液常用于三色染色；(3)4%多聚甲醛磷酸二氫鈉氫氧化鈉液；2.混合固定液14（四）固定后的處理1.一般固定液(甲醛等)固定組織后，用流水沖洗以清除組織內(nèi)的固定液終止固定。2.含有乙醇、乙酸及苦味酸的固定液，組織固定后不需要或不能用水沖洗。3.含有鉻酸、重鉻酸鉀和鋨酸的固定液，組織固定后應(yīng)充分水洗，一般為12~24h。4.用含汞的固定液固定組織后，要進(jìn)行脫汞處理，可在組織脫水前或切片染色前進(jìn)行，一般多在染色前脫汞。其方法為切片脫蠟入水后，入0.5%碘乙醇5~10min，水洗后再入3%~5%硫代硫酸鈉或95%乙醇1~2min，再充分水洗，蒸餾水洗后進(jìn)行染色。（四）固定后的處理15石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片了解生物組織的特點(diǎn)及取材的注意事項(xiàng)；因此在浸蠟和包埋前，必須進(jìn)行脫水。（五）固定時(shí)的注意事項(xiàng)切片時(shí)刀是由下向上運(yùn)動(dòng)，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂縫，應(yīng)將組織硬脆難切的部分放在上端(如皮膚組織的表皮部分，胃腸等組織的漿膜面等)。不能使載片接觸取血部位的皮膚。掌握石蠟切片制作技術(shù)；2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。組織速凍的方法很多，常用方法為液氮和干冰~丙酮法。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。先用清潔液浸泡12~24h,流水充分沖洗后,用蒸餾水洗3~5遍,95%酒精浸泡2h,用綢布擦干或用烘箱烤干備用。酶組織化學(xué)染色組織的固定應(yīng)置于冰箱4℃固定。組織脫水、透明和浸蠟；用含汞的固定液固定組織后，要進(jìn)行脫汞處理，可在組織脫水前或切片染色前進(jìn)行，一般多在染色前脫汞。石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片1、活體組織檢查(Biopsy)簡(jiǎn)稱活檢，從患者活體局部切取、鉗咬、細(xì)針吸取和摘取等手術(shù)方法獲取病變組織進(jìn)行病理檢查。將盛有異戊烷的小燒杯放入裝有液氮的大保溫杯或冰壺內(nèi)，攪拌異戊烷待杯底出現(xiàn)一層白色糊狀物時(shí)，放入包埋好的組織塊，數(shù)秒鐘即可取出，按上述方法保存。其方法為切片脫蠟入水后，入0.目前也有用環(huán)己酮作為透明劑，環(huán)己酮為無(wú)色無(wú)毒液體，可與苯、二甲苯和酒精等相混合，也可溶解石蠟。用含汞的固定液固定組織后，要進(jìn)行脫汞處理，可在組織脫水前或切片染色前進(jìn)行，一般多在染色前脫汞。（五）固定時(shí)的注意事項(xiàng)1.標(biāo)本應(yīng)新鮮并及時(shí)取材，快速放入固定液中。特殊標(biāo)本應(yīng)單獨(dú)固定和存放。2.固定液的用量一般固定液用量為組織塊體積的10~20倍，貴重的固定液不少于3~5倍。避免組織緊貼容器底部，影響固定效果。對(duì)于特殊染色的組織(如神經(jīng)染色及酶組織化學(xué)染色等)固定時(shí)應(yīng)考慮組織塊的大小、固定液種類(lèi)、固定時(shí)間和溫度等。酶組織化學(xué)染色組織的固定應(yīng)置于冰箱4℃固定。石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片（五）固定時(shí)的注意事項(xiàng)163.防止組織變形柔軟或較薄的組織先平鋪在吸水紙上，再投入固定劑中；含氣或脂肪多的組織易浮于液面，可在組織表面覆蓋棉花以達(dá)到充分固定。4.固定液的穿透性一般固定液在24h內(nèi)不能穿透厚度大于2~3mm的實(shí)體組織或5mm的多孔疏松組織，故取材組織塊的厚度原則上不應(yīng)超過(guò)3~4mm。5.固定時(shí)間固定的時(shí)間與固定液的種類(lèi)、組織類(lèi)型、塊大小、溫度等有關(guān)。一般1.5cm×1.5cm×0.2~0.3cm大小的組織塊,固定時(shí)間為12~24h。6.固定溫度大多數(shù)可在室溫(25℃)固定，在低溫(如4℃)固定時(shí)，固定時(shí)間要相應(yīng)延長(zhǎng)。3.防止組織變形柔軟或較薄的組織先平鋪在吸水紙上，再17三、脫水(Dehydration)組織經(jīng)固定和水洗后含大量水分，水與石蠟不能混溶。因此在浸蠟和包埋前，必須進(jìn)行脫水。常見(jiàn)的脫水劑有乙醇、正丁醇、丙酮等。為防止水份丟失過(guò)快，造成組織變形，一般采用梯度脫水法。也就是使脫水劑的濃度逐漸升高，脫水過(guò)程盡量緩和，減少組織變形。三、脫水(Dehydration)18四、透明(Transparentizing)常用的透明劑有二甲苯、苯、甲苯、氯仿、環(huán)己酮、苯甲酸甲酯、香柏油、冬青油和苯胺油等。目前也有用環(huán)己酮作為透明劑，環(huán)己酮為無(wú)色無(wú)毒液體，可與苯、二甲苯和酒精等相混合，也可溶解石蠟。而且脫水時(shí)組織不收縮變硬，用于快速石蠟切片效果較好。四、透明(Transparentizing)常用的透明劑有二19五、浸蠟(Paraffinwaxsoaking)用熔化的切片石蠟逐漸替換組織中二甲苯的過(guò)程。五、浸蠟(Paraffinwaxsoaking)用熔化的20組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件21組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件22六、組織的包埋和包埋方法(Embedding)（一）常規(guī)石蠟包埋（二）脫落細(xì)胞標(biāo)本的包埋（三）微小標(biāo)本的包埋六、組織的包埋和包埋方法23組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件24組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件25組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件26組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件27第二節(jié)組織切片法

(Tissuesectioning)

組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、樹(shù)脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法等。常用的切片工具包括組織切片機(jī)、切片刀和自動(dòng)磨刀機(jī)等。第二節(jié)組織切片法

(Tissuesectioning)28組織中的各種物質(zhì)經(jīng)固定后產(chǎn)生對(duì)染料的親和力，利于染色和觀察。取材(Samplecollection)→固定(Fixation)→脫水(Dehydration)→透明(Transparentizing)→浸蠟(Paraffinsoaking)→包埋(Embedding)（五）固定時(shí)的注意事項(xiàng)（三）微小標(biāo)本的包埋另一種為一次性鋼刀片，是一種薄型切片刀片，用于普通石蠟切片。固定就是用物理或化學(xué)方法，阻止組織細(xì)胞離體或培養(yǎng)細(xì)胞脫離生存環(huán)境后發(fā)生形態(tài)學(xué)變化。特殊標(biāo)本應(yīng)單獨(dú)固定和存放。調(diào)整蠟塊與刀的位置，使蠟塊切面與刀刃接近。常用的透明劑有二甲苯、苯、甲苯、氯仿、環(huán)己酮、苯甲酸甲酯、香柏油、冬青油和苯胺油等。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。病理學(xué)標(biāo)本的種類(lèi)

Typesofpathologicsamples標(biāo)本主要來(lái)源于建株的培養(yǎng)細(xì)胞，短期培養(yǎng)細(xì)胞和外周血等。2、組織切片的觀察取正常或病變組織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。②組織凍結(jié)后，將樣品托固定到樣品臺(tái)上；（二）半導(dǎo)體制冷切片機(jī)幫助臨床查明死因(尸檢);石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片入95%酒精浸泡2~3h，無(wú)水酒精浸泡20min，倒掉酒精放60℃烘箱烤干備用。在組織塊復(fù)溫時(shí)，應(yīng)在37℃加溫速融，自然復(fù)溫將造成組織結(jié)構(gòu)破壞。負(fù)責(zé)診斷的醫(yī)師應(yīng)親自檢查大體標(biāo)本，做多切面詳細(xì)檢查，必要時(shí)可在解剖鏡下觀察。②重鉻酸鉀:濃硫酸:蒸餾水=2:3:25;一、組織切片機(jī)和切片刀1.石蠟切片機(jī)

2.火棉膠切片機(jī)

3.恒冷箱切片機(jī)

4.震動(dòng)切片機(jī)

石蠟切片機(jī)震動(dòng)切片機(jī)恒冷箱切片機(jī)組織中的各種物質(zhì)經(jīng)固定后產(chǎn)生對(duì)染料的親和力，利于染色和觀察。29切片刀切片刀是切片機(jī)的重要部件，常見(jiàn)的有兩種一種為可重復(fù)使用的鋼刀，一般有4cm、8cm、14cm、18cm、20～24cm等，根據(jù)切片刀的形態(tài)，有平凹型、深平凹型、平楔型、雙凹型。另一種為一次性鋼刀片，是一種薄型切片刀片，用于普通石蠟切片。使用時(shí)固定在特制的刀架上。切片刀30各種切片刀的剖面圖a平凹形

b深平凹形

c平楔形

d雙凹形各種切片刀的剖面圖a平凹形b深平凹形c平31石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片32二、組織切片(Tissuesectioning)石蠟切片仍是目前各種切片制作方法中最常用、最普遍的一種方法。二、組織切片(Tissuesectioning)石蠟切片仍33(一)切片前的準(zhǔn)備1.備齊常用器具,如玻片、毛筆和鉛筆或刻字筆。2.檢查切片機(jī)的工作狀態(tài),將固件都擰緊，檢查切片刀是否鋒利,切片刀質(zhì)量是保證切片的關(guān)鍵。如果使用一次性刀片,應(yīng)根據(jù)切片情況及時(shí)調(diào)整刀刃位置。(一)切片前的準(zhǔn)備343.清潔玻片的方法（1）新載玻片的處理先用清潔液浸泡12~24h,流水充分沖洗后,用蒸餾水洗3~5遍,95%酒精浸泡2h,用綢布擦干或用烘箱烤干備用。清潔液是用重鉻酸鉀和濃硫酸按比例配成的洗液。常用的有以下幾種配方①重鉻酸鉀(g):濃硫酸(ml):蒸餾水(ml)=1:1:10;②重鉻酸鉀:濃硫酸:蒸餾水=2:3:25;③重鉻酸鉀:濃硫酸:蒸餾水=2:5:15。3.清潔玻片的方法35（2）蓋玻片的處理蓋玻片可按以上方法處理，但因蓋玻片很薄，以上處理程序應(yīng)縮短。清潔液浸泡2h，流水沖洗。也可用以下方法清洗:蓋玻片立排于臥式染缸(排2行，中間隔以載玻片)。松緊度以玻片可輕松轉(zhuǎn)動(dòng)為好，以下步驟應(yīng)保持液體進(jìn)入每個(gè)玻片間隙，玻片之間不能有氣泡。用1%鹽酸酒精浸泡2h，然后流水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗數(shù)次。入95%酒精浸泡2~3h，無(wú)水酒精浸泡20min，倒掉酒精放60℃烘箱烤干備用。（2）蓋玻片的處理蓋玻片可按以上方法處理，但因蓋玻片很薄，以36（二）切片制作過(guò)程1.蠟塊在冰箱中預(yù)冷，然后固定在切片機(jī)上。將切片刀裝在刀架上。調(diào)整蠟塊與刀的位置，使蠟塊切面與刀刃接近。2.切片機(jī)多為輪轉(zhuǎn)式，使用時(shí)左手執(zhí)毛筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機(jī)轉(zhuǎn)輪。先修出標(biāo)本，直到組織全部暴露于切面為止，標(biāo)本過(guò)小時(shí)修塊應(yīng)多加注意，大標(biāo)本要切全。切出蠟帶后，用毛筆輕輕挑起一端，用鑷子夾起另一端，正面向上放入展片水槽中(水溫一般低于蠟熔點(diǎn)10~12℃)，待切片展平后，即可進(jìn)行撈片。（二）切片制作過(guò)程373.切片時(shí)刀是由下向上運(yùn)動(dòng)，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂縫，應(yīng)將組織硬脆難切的部分放在上端(如皮膚組織的表皮部分，胃腸等組織的漿膜面等)。4.撈片時(shí)注意組織片的擺放位置，盡量整齊美觀。要留出貼標(biāo)簽的空間，5.撈片時(shí)注意在切片和玻片之間不要留有氣泡。撈好的切片應(yīng)在60℃左右烤箱內(nèi)烤至少30min。以防染色時(shí)脫片。3.切片時(shí)刀是由下向上運(yùn)動(dòng)，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)38組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件39血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣泛，制備厚薄適宜、分布均勻、染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的基本技術(shù)之一。五、浸蠟(Paraffinwaxsoaking)2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察?？梼?nèi)的固定液終止固定。（優(yōu)選）組織病理學(xué)制片技術(shù)組織的取材和固定；4、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(Animalexperiment)根據(jù)研究需要，在動(dòng)物身上復(fù)制人類(lèi)某些疾病的模型、進(jìn)行觀察研究，了解疾病的病因、發(fā)病機(jī)制及藥物療效等。消毒先按摩取血部位，使血流通暢；2、組織切片的觀察取正常或病變組織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。2、組織切片的觀察取正常或病變組織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。（1）新載玻片的處理血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣泛，制備厚薄適宜、分布均勻、染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的基本技術(shù)之一。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。（五）固定時(shí)的注意事項(xiàng)使用時(shí)固定在特制的刀架上。切片時(shí)刀是由下向上運(yùn)動(dòng)，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂縫，應(yīng)將組織硬脆難切的部分放在上端(如皮膚組織的表皮部分，胃腸等組織的漿膜面等)。取材和切片的剩余組織須進(jìn)一步做石蠟切片進(jìn)行對(duì)照，有利于病理醫(yī)師對(duì)照閱片，不斷提高觀察冰凍切片的水平。2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣40組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件41（三）石蠟切片制作時(shí)的注意事項(xiàng)(Attentions)1.組織的取材和固定；2.組織脫水、透明和浸蠟；3.切片組織塊固定不牢時(shí)；4.切片刀和切片機(jī)；5.特殊要求切片的制作。（三）石蠟切片制作時(shí)的注意事項(xiàng)42第三節(jié)冰凍切片法

(Frozensectioning)冰凍切片可用于新鮮組織、甲醛固定的組織和低溫冰箱冷藏的組織塊等。已固定的組織塊經(jīng)流水沖洗后再進(jìn)行切片。第三節(jié)冰凍切片法

(Frozensectioning)冰43一、冰凍切片法（一）恒冷箱切片機(jī)提前開(kāi)機(jī)預(yù)冷，一般工作溫度設(shè)定在22℃左右。待刀臺(tái)、樣品臺(tái)和箱內(nèi)達(dá)到設(shè)置溫度后即可切片。順序如下①將組織用OCT粘在樣品托后放置在速凍臺(tái)上；②組織凍結(jié)后，將樣品托固定到樣品臺(tái)上；③調(diào)整組織切面與刀刃位置，初步修出組織切面后，放下防卷板，關(guān)閉觀察窗，開(kāi)始切片。④切出的切片粘貼到載玻片上，直接凍存或吹干固定。（二）半導(dǎo)體制冷切片機(jī)一、冰凍切片法44二、冰凍組織的取材及保存方法（一）取材負(fù)責(zé)診斷的醫(yī)師應(yīng)親自檢查大體標(biāo)本，做多切面詳細(xì)檢查，必要時(shí)可在解剖鏡下觀察。選取最具代表性的組織制片，必要時(shí)應(yīng)多點(diǎn)取材。如切面有特殊要求，應(yīng)向技術(shù)人員說(shuō)明。取材和切片的剩余組織須進(jìn)一步做石蠟切片進(jìn)行對(duì)照，有利于病理醫(yī)師對(duì)照閱片，不斷提高觀察冰凍切片的水平。二、冰凍組織的取材及保存方法（一）取材45（二）保存方法組織速凍的方法很多，常用方法為液氮和干冰~丙酮法。1.液氮法將組織塊平放于瓶蓋或標(biāo)本盒等適當(dāng)容器內(nèi)，緩慢放入盛有液氮的容器內(nèi)。當(dāng)組織塊凍結(jié)后，取出用鋁箔包好，做好標(biāo)記后入液氮罐或70℃低溫冰箱保存?？杀４鏀?shù)月至數(shù)年。如短期內(nèi)使用，可保存于30℃冰箱。（二）保存方法462.干冰丙酮法將組織塊放入盛有OCT包埋劑的標(biāo)本盒內(nèi)，使組織塊完全浸沒(méi)。將丙酮倒入盛有10g干冰的保溫杯調(diào)成糊狀。將裝有組織塊的標(biāo)本盒放入保溫杯，待包埋劑成白色凍塊時(shí)，取出如上法保存。此法組織速凍快，組織結(jié)構(gòu)保存好。2.干冰丙酮法將組織塊放入盛有OCT包埋劑的標(biāo)本盒內(nèi)，使組473.異戊烷液氮法此法的優(yōu)點(diǎn)可防止冰晶破壞組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，對(duì)含水較多的組織適宜用此法進(jìn)行速凍。先用甲基纖維素包埋組織塊。將盛有異戊烷的小燒杯放入裝有液氮的大保溫杯或冰壺內(nèi)，攪拌異戊烷待杯底出現(xiàn)一層白色糊狀物時(shí)，放入包埋好的組織塊，數(shù)秒鐘即可取出，按上述方法保存。3.異戊烷液氮法此法的優(yōu)點(diǎn)可防止冰晶破壞組織細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)48（三）注意事項(xiàng)1.液氮速凍時(shí)，標(biāo)本盒不能直接浸入液氮，以免組織膨脹破碎。2.速凍的包埋劑應(yīng)適量。3.新鮮組織不能放入10℃冰箱內(nèi)緩慢冷卻，否則組織內(nèi)水分可逐漸析出形成冰晶，造成組織結(jié)構(gòu)破壞。4.冷凍后的組織塊應(yīng)密封保存，防止失水。5.在組織塊復(fù)溫時(shí)，應(yīng)在37℃加溫速融，自然復(fù)溫將造成組織結(jié)構(gòu)破壞。（三）注意事項(xiàng)49第四節(jié)脫落細(xì)胞制片技術(shù)

PreparationofExfoliativecytologicsamples脫落細(xì)胞標(biāo)本包括胸水、腹水、尿液、腦脊液穿刺液和一些涂片、刷片及印片的細(xì)胞，在臨床上具有非常重要的診斷價(jià)值。第四節(jié)脫落細(xì)胞制片技術(shù)

PreparationofE50一、細(xì)胞標(biāo)本的取材細(xì)胞標(biāo)本取材和制片方法一般有印片法、穿刺法、沉淀法和活細(xì)胞標(biāo)本的制備等。(一)印片法常用于活檢和手術(shù)標(biāo)本，新鮮標(biāo)本沿病灶中心剖開(kāi)，將載片輕壓于切面上，吹干后立即浸入固定液內(nèi)5~l0min，取出自然干燥，低溫儲(chǔ)存。優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，細(xì)胞抗原保存好。一、細(xì)胞標(biāo)本的取材51(二)穿刺液沉淀法常用于淋巴結(jié)、軟組織、肝、腎和肺等，穿剌液少，可直接涂片，細(xì)胞盡量涂均勻。穿刺液多，細(xì)胞豐富，可置離心管內(nèi)，以500rpm低速離心5~l0min，棄上清，將沉淀制成細(xì)胞懸液(2×105細(xì)胞/ml)。(二)穿刺液沉淀法52涂片鏡檢,以細(xì)胞較密不重疊為好。干燥后固定。胸水、腹水、尿液和腦脊液等如細(xì)胞較少時(shí)，也可用此方法制片。此法細(xì)胞保存好，操作簡(jiǎn)單。注意涂片時(shí)，盡量涂均勻。(三)單核細(xì)胞分離法主要用于外周血和胸腹水中淋巴細(xì)胞的分離。如為血性胸腹水，經(jīng)上述方法分離淋巴細(xì)胞然后在37℃培養(yǎng)30min，離心沉淀取上清，制成濃度為2×106細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液，吸50μl涂片，略干后固定l0min。涂片鏡檢,以細(xì)胞較密不重疊為好。干燥后固定。胸水、腹水、尿53組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件54組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件55宮頸脫落細(xì)胞涂片見(jiàn)分化不良細(xì)胞體積大、核深染；正常上皮細(xì)胞核小、胞漿豐富。12/17/202256宮頸脫落細(xì)胞涂片12/14/202256二、血涂片的制作血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣泛，制備厚薄適宜、分布均勻、染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的基本技術(shù)之一。(一)操作步驟1.消毒先按摩取血部位，使血流通暢；再用酒精消毒采血針和取血部位(如指尖)。2.取血待酒精干后，刺破皮膚，使血自然流出，勿擠。取干凈載片，讓血滴在離載片一端中4~5mm處，注意手指持握載片的邊緣，勿觸及其表面。不能使載片接觸取血部位的皮膚。二、血涂片的制作573.推片取一張邊緣光滑的載片。將其一端置于血滴前方，向后移動(dòng)到接觸血滴，使血液均勻分散在推片與載片的接觸處。然后使推片與載片呈30°~40°角，向另一端平穩(wěn)地推出。涂片推好后，通過(guò)搖擺使之快速干燥。4.染色用特種玻璃鉛筆在血膜兩側(cè)畫(huà)兩條線，防止染液外溢。再將瑞氏染液(伊紅亞甲基藍(lán))滴在血膜上，至染液淹沒(méi)全部血膜，染半分鐘。加等量蒸餾水(或緩沖液)與染液混合再染5分鐘。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。3.推片取一張邊緣光滑的載片。將其一端置于血滴前方，向后移58（二）注意事項(xiàng)活細(xì)胞標(biāo)本制備中玻片的清洗新玻片常有游離堿,因此應(yīng)用清洗液或10%鹽酸浸泡24h,然后再?gòu)氐浊逑?。用過(guò)的玻片可放入適量肥皂水或合成洗滌劑的清水中煮沸20min,再用熱水將肥皂和血膜洗去，用自來(lái)水反復(fù)沖洗,必要時(shí)再置95%乙醇中浸泡1h，然后擦干或烤干備用。一張良好的血片，要求厚薄適宜，頭體尾分明，分布均勻，邊緣整齊，兩側(cè)留有空隙。血片制好后最好立即固定染色，以免細(xì)胞溶解和發(fā)生退行性變。（二）注意事項(xiàng)59三、活細(xì)胞標(biāo)本的制備多用于科研，用于常規(guī)病理診斷的較少。標(biāo)本主要來(lái)源于建株的培養(yǎng)細(xì)胞，短期培養(yǎng)細(xì)胞和外周血等。細(xì)胞可直接培養(yǎng)在蓋玻片上，固定后即可進(jìn)行染色觀察或進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色或掃描電鏡標(biāo)本制備。也可培養(yǎng)于培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板內(nèi)，制成細(xì)胞懸液，收集一定的細(xì)胞還可進(jìn)行涂片?？梢越?jīng)離心后，進(jìn)行透射電鏡標(biāo)本制備。三、活細(xì)胞標(biāo)本的制備60組織病理學(xué)制片技術(shù)組織病理學(xué)制片技術(shù)61（優(yōu)選）組織病理學(xué)制片技術(shù)（優(yōu)選）組織病理學(xué)制片技術(shù)62目的和要求

AimsandRequirements了解生物組織的特點(diǎn)及取材的注意事項(xiàng)；熟悉切片的原理、一般要求及注意事項(xiàng)；掌握石蠟切片制作技術(shù)；目的和要求

AimsandRequirements了解生63病理學(xué)常用的觀察手段

Thecommonsurveymeansinpathology1、大體標(biāo)本觀察主要用肉眼、量尺及各種衡器等輔助工具，對(duì)所檢標(biāo)本的大小、形狀、色澤、重量、表面及切面、病灶特點(diǎn)進(jìn)行觀察及測(cè)量。2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。病理學(xué)常用的觀察手段

Thecommonsurveym64病理學(xué)標(biāo)本的種類(lèi)

Typesofpathologicsamples1、活體組織檢查(Biopsy)簡(jiǎn)稱活檢，從患者活體局部切取、鉗咬、細(xì)針吸取和摘取等手術(shù)方法獲取病變組織進(jìn)行病理檢查。2、脫落細(xì)胞學(xué)檢查(Exfoliativecytologicalexam)對(duì)患者痰液、胸腹水、尿液以及陰道刮片、食管拉網(wǎng)、纖維胃/支氣管鏡所取得的材料進(jìn)行涂片，以檢查脫落細(xì)胞，是早期發(fā)現(xiàn)和診斷腫瘤的好方法。病理學(xué)標(biāo)本的種類(lèi)

Typesofpathologics653、尸體解剖(Autopsy)通過(guò)尸檢可查出病因和病變，及時(shí)發(fā)現(xiàn)和確診某些傳染病、新發(fā)現(xiàn)的疾病，積累經(jīng)驗(yàn)，提高診療水平。4、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(Animalexperiment)根據(jù)研究需要，在動(dòng)物身上復(fù)制人類(lèi)某些疾病的模型、進(jìn)行觀察研究，了解疾病的病因、發(fā)病機(jī)制及藥物療效等。5、組織/細(xì)胞培養(yǎng)(TissueandCellculture)將某種組織或單細(xì)胞在適宜的培養(yǎng)基中體外培養(yǎng)，來(lái)研究各種病因作用下組織、細(xì)胞的病理變化及治療效果。3、尸體解剖(Autopsy)通過(guò)尸檢可查出病因和病變，及時(shí)66病理技術(shù)的應(yīng)用Applicationofpathologictechnique幫助臨床查明死因(尸檢);手術(shù)后病變標(biāo)本，明確診斷(臨床活檢);為教學(xué)、科研提供資料;病理技術(shù)的應(yīng)用幫助臨床查明死因(尸檢);67取材(Samplecollection)→固定(Fixation)→脫水(Dehydration)→透明(Transparentizing)→浸蠟(Paraffinsoaking)→包埋(Embedding)第一節(jié)組織處理

Tissueprocessing取材(Samplecollection)→固定(Fixat68

1.人為因素

2.標(biāo)本大小

3.取材時(shí)間

4.包埋方向

5.邊緣標(biāo)記一、取材(Samplescollection)1.人為因素一、取材(Samplescollecti696.小標(biāo)本的處理方法

7.特殊情況取材

8.取材數(shù)量

9.清除多余成分10.重復(fù)取材11.核對(duì)取材12.剩余組織存放6.小標(biāo)本的處理方法70二、固定(Fixation)固定就是用物理或化學(xué)方法，阻止組織細(xì)胞離體或培養(yǎng)細(xì)胞脫離生存環(huán)境后發(fā)生形態(tài)學(xué)變化。(一)固定的目的1.迅速阻斷組織細(xì)胞離體后的自溶性變化，防止腐敗，盡量保持組織細(xì)胞生活狀態(tài)下的形態(tài)結(jié)構(gòu)。2.使細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，并保持原有的空間位置。3.固定劑有硬化作用,增加組織的硬度,便于制片。4.組織中的各種物質(zhì)經(jīng)固定后產(chǎn)生對(duì)染料的親和力，利于染色和觀察。二、固定(Fixation)固定就是用物理或化學(xué)方法，阻止組71（二）常用的固定方法1.浸泡固定法2.灌注固定法3.細(xì)胞涂片的固定方法4.微波固定法5.蒸氣固定法（二）常用的固定方法1.浸泡固定法72（三）常用的固定液1.單純固定液(1)甲醛(formaldehyde)(2)酒精(alcohol)(3)苦味酸(picricacid)

(4)丙酮(acetone)(5)醋酸(aceticacid)

（三）常用的固定液1.單純固定液732.混合固定液(1)Bouin液用于結(jié)締組織及脂肪染色；(2)Zenker液常用于三色染色；(3)4%多聚甲醛磷酸二氫鈉氫氧化鈉液；2.混合固定液74（四）固定后的處理1.一般固定液(甲醛等)固定組織后，用流水沖洗以清除組織內(nèi)的固定液終止固定。2.含有乙醇、乙酸及苦味酸的固定液，組織固定后不需要或不能用水沖洗。3.含有鉻酸、重鉻酸鉀和鋨酸的固定液，組織固定后應(yīng)充分水洗，一般為12~24h。4.用含汞的固定液固定組織后，要進(jìn)行脫汞處理，可在組織脫水前或切片染色前進(jìn)行，一般多在染色前脫汞。其方法為切片脫蠟入水后，入0.5%碘乙醇5~10min，水洗后再入3%~5%硫代硫酸鈉或95%乙醇1~2min，再充分水洗，蒸餾水洗后進(jìn)行染色。（四）固定后的處理75石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片了解生物組織的特點(diǎn)及取材的注意事項(xiàng)；因此在浸蠟和包埋前，必須進(jìn)行脫水。（五）固定時(shí)的注意事項(xiàng)切片時(shí)刀是由下向上運(yùn)動(dòng)，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂縫，應(yīng)將組織硬脆難切的部分放在上端(如皮膚組織的表皮部分，胃腸等組織的漿膜面等)。不能使載片接觸取血部位的皮膚。掌握石蠟切片制作技術(shù)；2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。組織速凍的方法很多，常用方法為液氮和干冰~丙酮法。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。先用清潔液浸泡12~24h,流水充分沖洗后,用蒸餾水洗3~5遍,95%酒精浸泡2h,用綢布擦干或用烘箱烤干備用。酶組織化學(xué)染色組織的固定應(yīng)置于冰箱4℃固定。組織脫水、透明和浸蠟；用含汞的固定液固定組織后，要進(jìn)行脫汞處理，可在組織脫水前或切片染色前進(jìn)行，一般多在染色前脫汞。石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片1、活體組織檢查(Biopsy)簡(jiǎn)稱活檢，從患者活體局部切取、鉗咬、細(xì)針吸取和摘取等手術(shù)方法獲取病變組織進(jìn)行病理檢查。將盛有異戊烷的小燒杯放入裝有液氮的大保溫杯或冰壺內(nèi)，攪拌異戊烷待杯底出現(xiàn)一層白色糊狀物時(shí)，放入包埋好的組織塊，數(shù)秒鐘即可取出，按上述方法保存。其方法為切片脫蠟入水后，入0.目前也有用環(huán)己酮作為透明劑，環(huán)己酮為無(wú)色無(wú)毒液體，可與苯、二甲苯和酒精等相混合，也可溶解石蠟。用含汞的固定液固定組織后，要進(jìn)行脫汞處理，可在組織脫水前或切片染色前進(jìn)行，一般多在染色前脫汞。（五）固定時(shí)的注意事項(xiàng)1.標(biāo)本應(yīng)新鮮并及時(shí)取材，快速放入固定液中。特殊標(biāo)本應(yīng)單獨(dú)固定和存放。2.固定液的用量一般固定液用量為組織塊體積的10~20倍，貴重的固定液不少于3~5倍。避免組織緊貼容器底部，影響固定效果。對(duì)于特殊染色的組織(如神經(jīng)染色及酶組織化學(xué)染色等)固定時(shí)應(yīng)考慮組織塊的大小、固定液種類(lèi)、固定時(shí)間和溫度等。酶組織化學(xué)染色組織的固定應(yīng)置于冰箱4℃固定。石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片（五）固定時(shí)的注意事項(xiàng)763.防止組織變形柔軟或較薄的組織先平鋪在吸水紙上，再投入固定劑中；含氣或脂肪多的組織易浮于液面，可在組織表面覆蓋棉花以達(dá)到充分固定。4.固定液的穿透性一般固定液在24h內(nèi)不能穿透厚度大于2~3mm的實(shí)體組織或5mm的多孔疏松組織，故取材組織塊的厚度原則上不應(yīng)超過(guò)3~4mm。5.固定時(shí)間固定的時(shí)間與固定液的種類(lèi)、組織類(lèi)型、塊大小、溫度等有關(guān)。一般1.5cm×1.5cm×0.2~0.3cm大小的組織塊,固定時(shí)間為12~24h。6.固定溫度大多數(shù)可在室溫(25℃)固定，在低溫(如4℃)固定時(shí)，固定時(shí)間要相應(yīng)延長(zhǎng)。3.防止組織變形柔軟或較薄的組織先平鋪在吸水紙上，再77三、脫水(Dehydration)組織經(jīng)固定和水洗后含大量水分，水與石蠟不能混溶。因此在浸蠟和包埋前，必須進(jìn)行脫水。常見(jiàn)的脫水劑有乙醇、正丁醇、丙酮等。為防止水份丟失過(guò)快，造成組織變形，一般采用梯度脫水法。也就是使脫水劑的濃度逐漸升高，脫水過(guò)程盡量緩和，減少組織變形。三、脫水(Dehydration)78四、透明(Transparentizing)常用的透明劑有二甲苯、苯、甲苯、氯仿、環(huán)己酮、苯甲酸甲酯、香柏油、冬青油和苯胺油等。目前也有用環(huán)己酮作為透明劑，環(huán)己酮為無(wú)色無(wú)毒液體，可與苯、二甲苯和酒精等相混合，也可溶解石蠟。而且脫水時(shí)組織不收縮變硬，用于快速石蠟切片效果較好。四、透明(Transparentizing)常用的透明劑有二79五、浸蠟(Paraffinwaxsoaking)用熔化的切片石蠟逐漸替換組織中二甲苯的過(guò)程。五、浸蠟(Paraffinwaxsoaking)用熔化的80組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件81組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件82六、組織的包埋和包埋方法(Embedding)（一）常規(guī)石蠟包埋（二）脫落細(xì)胞標(biāo)本的包埋（三）微小標(biāo)本的包埋六、組織的包埋和包埋方法83組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件84組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件85組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件86組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件87第二節(jié)組織切片法

(Tissuesectioning)

組織切片法包括石蠟切片法、冰凍切片法、火棉膠切片法、樹(shù)脂包埋薄切片法和大組織石蠟切片法等。常用的切片工具包括組織切片機(jī)、切片刀和自動(dòng)磨刀機(jī)等。第二節(jié)組織切片法

(Tissuesectioning)88組織中的各種物質(zhì)經(jīng)固定后產(chǎn)生對(duì)染料的親和力，利于染色和觀察。取材(Samplecollection)→固定(Fixation)→脫水(Dehydration)→透明(Transparentizing)→浸蠟(Paraffinsoaking)→包埋(Embedding)（五）固定時(shí)的注意事項(xiàng)（三）微小標(biāo)本的包埋另一種為一次性鋼刀片，是一種薄型切片刀片，用于普通石蠟切片。固定就是用物理或化學(xué)方法，阻止組織細(xì)胞離體或培養(yǎng)細(xì)胞脫離生存環(huán)境后發(fā)生形態(tài)學(xué)變化。特殊標(biāo)本應(yīng)單獨(dú)固定和存放。調(diào)整蠟塊與刀的位置，使蠟塊切面與刀刃接近。常用的透明劑有二甲苯、苯、甲苯、氯仿、環(huán)己酮、苯甲酸甲酯、香柏油、冬青油和苯胺油等。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。病理學(xué)標(biāo)本的種類(lèi)

Typesofpathologicsamples標(biāo)本主要來(lái)源于建株的培養(yǎng)細(xì)胞，短期培養(yǎng)細(xì)胞和外周血等。2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。②組織凍結(jié)后，將樣品托固定到樣品臺(tái)上；（二）半導(dǎo)體制冷切片機(jī)幫助臨床查明死因(尸檢);石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片入95%酒精浸泡2~3h，無(wú)水酒精浸泡20min，倒掉酒精放60℃烘箱烤干備用。在組織塊復(fù)溫時(shí)，應(yīng)在37℃加溫速融，自然復(fù)溫將造成組織結(jié)構(gòu)破壞。負(fù)責(zé)診斷的醫(yī)師應(yīng)親自檢查大體標(biāo)本，做多切面詳細(xì)檢查，必要時(shí)可在解剖鏡下觀察。②重鉻酸鉀:濃硫酸:蒸餾水=2:3:25;一、組織切片機(jī)和切片刀1.石蠟切片機(jī)

2.火棉膠切片機(jī)

3.恒冷箱切片機(jī)

4.震動(dòng)切片機(jī)

石蠟切片機(jī)震動(dòng)切片機(jī)恒冷箱切片機(jī)組織中的各種物質(zhì)經(jīng)固定后產(chǎn)生對(duì)染料的親和力，利于染色和觀察。89切片刀切片刀是切片機(jī)的重要部件，常見(jiàn)的有兩種一種為可重復(fù)使用的鋼刀，一般有4cm、8cm、14cm、18cm、20～24cm等，根據(jù)切片刀的形態(tài)，有平凹型、深平凹型、平楔型、雙凹型。另一種為一次性鋼刀片，是一種薄型切片刀片，用于普通石蠟切片。使用時(shí)固定在特制的刀架上。切片刀90各種切片刀的剖面圖a平凹形

b深平凹形

c平楔形

d雙凹形各種切片刀的剖面圖a平凹形b深平凹形c平91石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片石蠟切片機(jī)用一次性鋼刀片92二、組織切片(Tissuesectioning)石蠟切片仍是目前各種切片制作方法中最常用、最普遍的一種方法。二、組織切片(Tissuesectioning)石蠟切片仍93(一)切片前的準(zhǔn)備1.備齊常用器具,如玻片、毛筆和鉛筆或刻字筆。2.檢查切片機(jī)的工作狀態(tài),將固件都擰緊，檢查切片刀是否鋒利,切片刀質(zhì)量是保證切片的關(guān)鍵。如果使用一次性刀片,應(yīng)根據(jù)切片情況及時(shí)調(diào)整刀刃位置。(一)切片前的準(zhǔn)備943.清潔玻片的方法（1）新載玻片的處理先用清潔液浸泡12~24h,流水充分沖洗后,用蒸餾水洗3~5遍,95%酒精浸泡2h,用綢布擦干或用烘箱烤干備用。清潔液是用重鉻酸鉀和濃硫酸按比例配成的洗液。常用的有以下幾種配方①重鉻酸鉀(g):濃硫酸(ml):蒸餾水(ml)=1:1:10;②重鉻酸鉀:濃硫酸:蒸餾水=2:3:25;③重鉻酸鉀:濃硫酸:蒸餾水=2:5:15。3.清潔玻片的方法95（2）蓋玻片的處理蓋玻片可按以上方法處理，但因蓋玻片很薄，以上處理程序應(yīng)縮短。清潔液浸泡2h，流水沖洗。也可用以下方法清洗:蓋玻片立排于臥式染缸(排2行，中間隔以載玻片)。松緊度以玻片可輕松轉(zhuǎn)動(dòng)為好，以下步驟應(yīng)保持液體進(jìn)入每個(gè)玻片間隙，玻片之間不能有氣泡。用1%鹽酸酒精浸泡2h，然后流水沖洗干凈，再用蒸餾水沖洗數(shù)次。入95%酒精浸泡2~3h，無(wú)水酒精浸泡20min，倒掉酒精放60℃烘箱烤干備用。（2）蓋玻片的處理蓋玻片可按以上方法處理，但因蓋玻片很薄，以96（二）切片制作過(guò)程1.蠟塊在冰箱中預(yù)冷，然后固定在切片機(jī)上。將切片刀裝在刀架上。調(diào)整蠟塊與刀的位置，使蠟塊切面與刀刃接近。2.切片機(jī)多為輪轉(zhuǎn)式，使用時(shí)左手執(zhí)毛筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機(jī)轉(zhuǎn)輪。先修出標(biāo)本，直到組織全部暴露于切面為止，標(biāo)本過(guò)小時(shí)修塊應(yīng)多加注意，大標(biāo)本要切全。切出蠟帶后，用毛筆輕輕挑起一端，用鑷子夾起另一端，正面向上放入展片水槽中(水溫一般低于蠟熔點(diǎn)10~12℃)，待切片展平后，即可進(jìn)行撈片。（二）切片制作過(guò)程973.切片時(shí)刀是由下向上運(yùn)動(dòng)，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂縫，應(yīng)將組織硬脆難切的部分放在上端(如皮膚組織的表皮部分，胃腸等組織的漿膜面等)。4.撈片時(shí)注意組織片的擺放位置，盡量整齊美觀。要留出貼標(biāo)簽的空間，5.撈片時(shí)注意在切片和玻片之間不要留有氣泡。撈好的切片應(yīng)在60℃左右烤箱內(nèi)烤至少30min。以防染色時(shí)脫片。3.切片時(shí)刀是由下向上運(yùn)動(dòng)，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)98組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件99血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣泛，制備厚薄適宜、分布均勻、染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的基本技術(shù)之一。五、浸蠟(Paraffinwaxsoaking)2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察?？梼?nèi)的固定液終止固定。（優(yōu)選）組織病理學(xué)制片技術(shù)組織的取材和固定；4、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(Animalexperiment)根據(jù)研究需要，在動(dòng)物身上復(fù)制人類(lèi)某些疾病的模型、進(jìn)行觀察研究，了解疾病的病因、發(fā)病機(jī)制及藥物療效等。消毒先按摩取血部位，使血流通暢；2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。（1）新載玻片的處理血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣泛，制備厚薄適宜、分布均勻、染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的基本技術(shù)之一。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。（五）固定時(shí)的注意事項(xiàng)使用時(shí)固定在特制的刀架上。切片時(shí)刀是由下向上運(yùn)動(dòng)，為得到完整的切片，防止組織出現(xiàn)刀紋裂縫，應(yīng)將組織硬脆難切的部分放在上端(如皮膚組織的表皮部分，胃腸等組織的漿膜面等)。取材和切片的剩余組織須進(jìn)一步做石蠟切片進(jìn)行對(duì)照，有利于病理醫(yī)師對(duì)照閱片，不斷提高觀察冰凍切片的水平。2、組織切片的觀察取正?；虿∽兘M織進(jìn)行切片、染色(HE染色最常用)在顯微鏡下進(jìn)行觀察。血涂片的顯微檢查是血液細(xì)胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣100組織病理學(xué)制片技術(shù)示范課件101（三）石蠟切片制作時(shí)的注意事項(xiàng)(Attentions)1.組織的取材和固定；2.組織脫水、透明和浸蠟；3.切片組織塊固定不牢時(shí)；4.切片刀和切片機(jī)；5.特殊要求切片的制作。（三）石蠟切片制作時(shí)的注意事項(xiàng)102第三節(jié)冰凍切片法

(Frozensectioning)冰凍切片可用于新鮮組織、甲醛固定的組織和低溫冰箱冷藏的組織塊等。已固定的組織塊經(jīng)流水沖洗后再進(jìn)行切片。第三節(jié)冰凍切片法

(Frozensectioning)冰103一、冰凍切片法（一）恒冷箱切片機(jī)提前開(kāi)機(jī)預(yù)冷，一般工作溫度設(shè)定在22℃左右。待刀臺(tái)、樣品臺(tái)和箱內(nèi)達(dá)到設(shè)置溫度后即可切片。順序如下①將組織用OCT粘在樣品托后放置在速凍臺(tái)上；②組織凍結(jié)后，將樣品托固定到樣品臺(tái)上；③調(diào)整組織切面與刀刃位置，初步修出組織切面后，放下防卷板，關(guān)閉觀察窗，開(kāi)始切片。④切出的切片粘貼到載玻片上，直接凍存或吹干固定。（二）半導(dǎo)體制冷切片機(jī)一、冰凍切片法104二、冰凍組織的取材及保存方法（一）取材負(fù)責(zé)診斷的醫(yī)師應(yīng)親自檢查大體標(biāo)本，做多切面詳細(xì)檢查，必要時(shí)可在解剖鏡下觀察。選取最具代表性的組織制片，必要時(shí)應(yīng)多點(diǎn)取材。如切面有特殊要求，應(yīng)向技術(shù)人員說(shuō)明。取材和切片的剩余組織須進(jìn)一步做石蠟切片進(jìn)行對(duì)照，有利于病理醫(yī)師對(duì)照閱片，不斷提高觀察冰凍切片的水平。二、冰凍組織的取材及保存方法（一）取材105（二）保存方法組織速凍的方法很多，常用方法為液氮和干冰~丙酮法。1.液氮法將組織塊平放于瓶蓋或標(biāo)本盒等適當(dāng)容器內(nèi)，緩慢放入盛有液氮的容器內(nèi)。當(dāng)組織塊凍結(jié)后，取出用鋁箔包好，做好標(biāo)記后入液氮罐或70℃低溫冰箱保存?？杀４鏀?shù)月至數(shù)年。如短期內(nèi)使用，可保存于30℃冰箱。（二）保存方法1062.干冰丙酮法將組織塊放入盛有OCT包埋劑的標(biāo)本盒內(nèi)，使組織塊完全浸沒(méi)。將丙酮倒入盛有10g干冰的保溫杯調(diào)成糊狀。將裝有組織塊的標(biāo)本盒放入保溫杯，待包埋劑成白色凍塊時(shí)，取出如上法保存。此法組織速凍快，組織結(jié)構(gòu)保存好。2.干冰丙酮法將組織塊放入盛有OCT包埋劑的標(biāo)