染色體涂染技術課件

6、紀律是自由的第一條件?！诟駹?、紀律是集體的面貌，集體的聲音，集體的動作，集體的表情，集體的信念?！R卡連柯8、我們現在必須完全保持黨的紀律，否則一切都會陷入污泥中。——馬克思9、學校沒有紀律便如磨坊沒有水?！涿兰~斯10、一個人應該：活潑而守紀律，天真而不幼稚，勇敢而魯莽，倔強而有原則，熱情而不沖動，樂觀而不盲目?！R克思染色體涂染技術染色體涂染技術6、紀律是自由的第一條件?！诟駹?、紀律是集體的面貌，集體的聲音，集體的動作，集體的表情，集體的信念?！R卡連柯8、我們現在必須完全保持黨的紀律，否則一切都會陷入污泥中?！R克思9、學校沒有紀律便如磨坊沒有水?！涿兰~斯10、一個人應該：活潑而守紀律，天真而不幼稚，勇敢而魯莽，倔強而有原則，熱情而不沖動，樂觀而不盲目?！R克思染色體涂染技術染色體涂染技術

Chromosomepaintingtechniques染色體涂染技術染色體涂染技術即將整條染色體、某條染色體臂（長臂或短臂）或者染色體某個片斷的DNA制備成探針，然后用熒光原位雜交的方法，將探針雜交到中期分裂相染色體上，在熒光顯微鏡下觀察熒光素在染色體上標記的顏色，從而分析和研究染色體的重組、畸變以及同源基因等的一種新技術。6、紀律是自由的第一條件。——黑格爾染色體涂染技術染色體涂染1染色體涂染技術課件染色體涂染技術課件3染色體涂染技術課件4染色體涂染技術課件51.染色體DNA探針的制備①流式細胞分類法（flowcytometry）

該法是用一種或多種熒光染料將懸浮液中的中期分裂相染色體染色。由于染色體大小、形態(tài)、組成和結構的不同，所染色的特征有其特異性，從而可以通過流式細胞術將特定的染色體收集起來。1.染色體DNA探針的制備①流式細胞分類法（fl61.染色體DNA探針的制備

①流式細胞分類法（flowcytometry）局限性：如果受試物的染色體形態(tài)單一、數目較多，如牛(2n=60)和狗(2n=78)的所有常染色體及綿羊(2n=54)和馬(2n=64)的大部分常染色體都是端位著絲點，因此，僅根據染色體的形態(tài)和大小很難將所有的染色體準確地區(qū)分開來。1.染色體DNA探針的制備①流式細胞分類法（flo71.染色體DNA探針的制備

②克隆基因庫或體細胞雜交株通過特定的克隆基因文庫或者特異性的體細胞雜交細胞系制備某條染色體整個或部分DNA探針。該法特異性強，準確性高，并且可以與功能遺傳學的研究結合起來，但對實驗室要求較高，取材來源和研究范圍有所限制。1.染色體DNA探針的制備②克隆基因庫或體細胞雜交8

1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PCR擴增

顯微切割(microdissection)技術是在顯微狀態(tài)或顯微鏡直視下直接或通過顯微操作系統(tǒng)對欲選取的材料進行切割分離并收集用于后續(xù)研究的技術。

染色體顯微切割分手工切割和激光切割法，倒置顯微鏡上裝配切割臂，安上硅化玻璃針，找到分散良好的分裂相來切割所需染色體片段。1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PC91.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PCR擴增

早在上世紀70年代，染色體顯微切割已應用于多線染色體的研究，是細胞生物學常用的實驗方法之一。當時由于無法直接擴增染色體DNA，所以必須在顯微鏡下反復切割若干拷貝的染色體，才能滿足實驗的要求這不僅費力耗時，而且要求實驗操作人員必須具備熟練的染色體分帶和鑒定經驗，才保證實驗的準確性。直到l989年Ludecke等將PCR擴增與染色體顯微切割結合起來，從而改進了這種實驗方法。對于同一條染色體，只要切割和收集5～10個拷貝，通過PCR擴增，即可滿足實驗要求。從而極大地提高了實驗技術的可行性和準確性。1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PC101.染色體DNA探針的制備

③通過染色體顯微切割和PCR擴增制備特異性的染色體DNA探針。相對而言，該方法具有直接、準確、簡便和應用范圍廣等優(yōu)點。1.染色體DNA探針的制備③通過染色體顯微切割和PC11

2.熒光原位雜交

fluorescentinsituhybridazation,FISH

什么是原位雜交？原位雜交是基于DNA分子復制原理而發(fā)展起來的一種技術。用帶有標記（放射性同位素、熒光染料等）的DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA）片段進行雜交，然后用放射自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在及定位。2.熒光原位雜交

fluorescent122.熒光原位雜交熒光原位雜交是在20世紀80年代末在放射性原為雜交技術的基礎上發(fā)展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。探針首先與某種介導分子結合，雜交后再通過免疫細胞化學過程連接上熒光染料。2.熒光原位雜交熒光原位雜交是在20132.熒光原位雜交

基本原理：如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的，二者經變性-退火-復性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素、地高辛，可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學反應，經熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。2.熒光原位雜交基本原理：142.熒光原位雜交實驗流程：

FISH樣本的制備→探針的制備→探針標記→雜交→（染色體顯帶）→熒光顯微鏡檢測→結果分析。

2.熒光原位雜交實驗流程：152.熒光原位雜交

優(yōu)點:

熒光試劑和探針經濟、安全；

探針穩(wěn)定，一次標記后可在兩年內使用；實驗周期短、能迅速得到結果、特異性好、定位準確；可定位長度在1kb的DNA序列，其靈敏度與放射性探針當；

多色FISH在同一個核中顯示不同顏色可同時檢測多種序列；

既可以在玻片上顯示中期染色體數量或結構的變化，也可以在懸液中顯示間期染色體DNA的結構。

缺點：

不能達到100%雜交，特別是在應用較短的cDNA探針時效率明下降。

2.熒光原位雜交優(yōu)點:16

染色體涂染技術的應用

染色體涂染技術主要應用于動物分子細胞遺傳學、人類疾病、性染色體以及染色體進化等研究。1995年以來，劍橋大學應用這項技術進行哺乳動物的染色體比對，他們運用了YAC等細胞的多種染色體作探針，以研究重組染色體的斷裂點。澳大利亞Latrobe大學以染色體涂染技術探討人的XY染色體的親緣關系。美國Ambady等人用顯微切割術和PCR擴增建立了豬第6號染色體DNA文庫，尋找微星體，用于豬基因圖的研究。國外實驗室主要研究不同種屬的動物(包括人)或植物染色體(尤其是性染色體)的比較與進化，研究過的動物有雞、狗、狐、猴、貓、猿、鼠、兔、牛、羊、山羊以及其它鳥類、有袋類和哺乳類等。染色體涂染技術的應用染色體涂染技術主要應用于動17謝謝謝謝31、只有永遠躺在泥坑里的人，才不會再掉進坑里?！诟駹?/p>

32、希望的燈一旦熄滅，生活剎那間變成了一片黑暗。——普列姆昌德

33、希望是人生的乳母?！撇卟?/p>

34、形成天才的決定因素應該是勤奮?！?/p>

35、學到很多東西的訣竅，就是一下子不要學很多?！蹇?1、只有永遠躺在泥坑里的人，才不會再掉進坑里196、紀律是自由的第一條件?！诟駹?、紀律是集體的面貌，集體的聲音，集體的動作，集體的表情，集體的信念?！R卡連柯8、我們現在必須完全保持黨的紀律，否則一切都會陷入污泥中。——馬克思9、學校沒有紀律便如磨坊沒有水?！涿兰~斯10、一個人應該：活潑而守紀律，天真而不幼稚，勇敢而魯莽，倔強而有原則，熱情而不沖動，樂觀而不盲目。——馬克思染色體涂染技術染色體涂染技術6、紀律是自由的第一條件?！诟駹?、紀律是集體的面貌，集體的聲音，集體的動作，集體的表情，集體的信念?！R卡連柯8、我們現在必須完全保持黨的紀律，否則一切都會陷入污泥中?！R克思9、學校沒有紀律便如磨坊沒有水。——夸美紐斯10、一個人應該：活潑而守紀律，天真而不幼稚，勇敢而魯莽，倔強而有原則，熱情而不沖動，樂觀而不盲目?！R克思染色體涂染技術染色體涂染技術

Chromosomepaintingtechniques染色體涂染技術染色體涂染技術即將整條染色體、某條染色體臂（長臂或短臂）或者染色體某個片斷的DNA制備成探針，然后用熒光原位雜交的方法，將探針雜交到中期分裂相染色體上，在熒光顯微鏡下觀察熒光素在染色體上標記的顏色，從而分析和研究染色體的重組、畸變以及同源基因等的一種新技術。6、紀律是自由的第一條件?！诟駹柸旧w涂染技術染色體涂染20染色體涂染技術課件染色體涂染技術課件22染色體涂染技術課件23染色體涂染技術課件241.染色體DNA探針的制備①流式細胞分類法（flowcytometry）

該法是用一種或多種熒光染料將懸浮液中的中期分裂相染色體染色。由于染色體大小、形態(tài)、組成和結構的不同，所染色的特征有其特異性，從而可以通過流式細胞術將特定的染色體收集起來。1.染色體DNA探針的制備①流式細胞分類法（fl251.染色體DNA探針的制備

①流式細胞分類法（flowcytometry）局限性：如果受試物的染色體形態(tài)單一、數目較多，如牛(2n=60)和狗(2n=78)的所有常染色體及綿羊(2n=54)和馬(2n=64)的大部分常染色體都是端位著絲點，因此，僅根據染色體的形態(tài)和大小很難將所有的染色體準確地區(qū)分開來。1.染色體DNA探針的制備①流式細胞分類法（flo261.染色體DNA探針的制備

②克隆基因庫或體細胞雜交株通過特定的克隆基因文庫或者特異性的體細胞雜交細胞系制備某條染色體整個或部分DNA探針。該法特異性強，準確性高，并且可以與功能遺傳學的研究結合起來，但對實驗室要求較高，取材來源和研究范圍有所限制。1.染色體DNA探針的制備②克隆基因庫或體細胞雜交27

1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PCR擴增

顯微切割(microdissection)技術是在顯微狀態(tài)或顯微鏡直視下直接或通過顯微操作系統(tǒng)對欲選取的材料進行切割分離并收集用于后續(xù)研究的技術。

染色體顯微切割分手工切割和激光切割法，倒置顯微鏡上裝配切割臂，安上硅化玻璃針，找到分散良好的分裂相來切割所需染色體片段。1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PC281.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PCR擴增

早在上世紀70年代，染色體顯微切割已應用于多線染色體的研究，是細胞生物學常用的實驗方法之一。當時由于無法直接擴增染色體DNA，所以必須在顯微鏡下反復切割若干拷貝的染色體，才能滿足實驗的要求這不僅費力耗時，而且要求實驗操作人員必須具備熟練的染色體分帶和鑒定經驗，才保證實驗的準確性。直到l989年Ludecke等將PCR擴增與染色體顯微切割結合起來，從而改進了這種實驗方法。對于同一條染色體，只要切割和收集5～10個拷貝，通過PCR擴增，即可滿足實驗要求。從而極大地提高了實驗技術的可行性和準確性。1.染色體DNA探針的制備③染色體顯微切割和PC291.染色體DNA探針的制備

③通過染色體顯微切割和PCR擴增制備特異性的染色體DNA探針。相對而言，該方法具有直接、準確、簡便和應用范圍廣等優(yōu)點。1.染色體DNA探針的制備③通過染色體顯微切割和PC30

2.熒光原位雜交

fluorescentinsituhybridazation,FISH

什么是原位雜交？原位雜交是基于DNA分子復制原理而發(fā)展起來的一種技術。用帶有標記（放射性同位素、熒光染料等）的DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細胞內待測核酸(RNA或DNA）片段進行雜交，然后用放射自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在及定位。2.熒光原位雜交

fluorescent312.熒光原位雜交熒光原位雜交是在20世紀80年代末在放射性原為雜交技術的基礎上發(fā)展起來的一種非放射性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法。探針首先與某種介導分子結合，雜交后再通過免疫細胞化學過程連接上熒光染料。2.熒光原位雜交熒光原位雜交是在20322.熒光原位雜交

基本原理：如果被檢測的染色體或DNA纖維切片上的靶DNA與所用的核酸探針是同源互補的，二者經變性-退火-復性，即可形成靶DNA與核酸探針的雜交體。將核酸探針的某一種核苷酸標記上報告分子如生物素、地高辛，可利用該報告分子與熒光素標記的特異親和素之間的免疫化學反應，經熒光檢測體系在鏡下對待測DNA進行定性、定量或相對定位分析。2.熒光原位雜交基本原理：332.熒光原位雜交實驗流程：

FISH樣本的制備→探針的制備→探針標記→雜交→（染色體顯帶）→熒光顯微鏡檢測→結果分析。

2.熒光原位雜交實驗流程：342.熒光原位雜交

優(yōu)點:

熒光試劑和探針經濟、安全；

探針穩(wěn)定，一次標記后可在兩年內使用；實驗周期短、能迅速得到結果、特異性好、定位準確；可定位長度在1kb的DNA序列，其靈敏度與放射性探針當；

多色FISH在同一個核中顯示不同顏色可同時檢測