阿托伐他汀對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎豚鼠模型發(fā)病的影響

阿托伐他汀對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎豚鼠模型發(fā)病的影響

【摘要】目的探討阿托伐他汀對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)的防治作用。方法皮下注射粗制堿性髓鞘蛋白(MBP)建立EAE模型，EAE模型分為高、低劑量治療組和對(duì)照組。治療組造模前7天開(kāi)始灌胃阿托伐他汀直至整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束，對(duì)照組不用阿托伐他汀。結(jié)果治療組的潛伏期比對(duì)照組縮短(P＜0.01或P＜0.05)，低劑量組的潛伏期比高劑量組潛伏期長(zhǎng)，兩者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異(P＜0.05)；治療組的進(jìn)展期明顯縮短(P＜0.01)；病情高峰期神經(jīng)功能缺失評(píng)分，高劑量治療組與對(duì)照組相比，明顯降低(P＜0.01)；EAE對(duì)照組的死亡率高達(dá)50%，EAE低劑量組的死亡率為20%，EAE高劑量組無(wú)死亡，各組間差異具有顯著性(P＜0.05)。結(jié)論阿托伐他汀具有延長(zhǎng)EAE動(dòng)物發(fā)病潛伏期，縮短病情進(jìn)展期，減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害作用，降低高峰期死亡率。【關(guān)鍵詞】EAE；HMG-CoA抑制劑Effectofatorvastatinonexperimentalallergicencephalomyelitisinguineapig【Abstract】ObjectiveToexploretheprophylaxisandtreatmenteffectsofatorvastatinonexperimentalallergicencephalomyelitis(EAE).MethodsTheexperimentalEAEmouldwasestablishedbysubcutaneousadministratingcoarsemyelinbasicprotein(CMBP)inGuineapig，andallthesubjectswerepidedintotwogroupsascontrolgroupandtreatmentgroup;Thetreatmentgroupmicewerepidedintolowdosegroupandhighdosegroupperfusedwithatorvastatintransgastriclysevendaysbeforethemould，andthecontrolgroupdidn’tuseatorvastatin.ResultsThedelitescenceofthetreatmentgroupwassignificantlyshorterthanthecontrolgroup(P＜0.001)，andthedelitescenceofthelowdosegroupwasshorterthanthehighdosegroup(P＜0.05).Theprogressionofthetreatmentgroupwassignificantlyshorterthanthecontrolgroup(P＜0.01).Comparingtothecontrolgroup，themaximaldiseasescorewassignificantlydeclineinthehighdosegroup(P＜0.01).ConclusionAtorvastatincouldpostponethedelitescenceoftheEAEmouldanimal，preventtheprogressionofthedisease，alleviatethedamageofthecentralnervoussystemandreducemortalit[歡迎您訪問(wèn)阿托伐他汀對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎豚鼠模型發(fā)病的影響]yrateatfastigium.【Keywords】EAE;HMG-CoAinhibitorEAE是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生的一種局限在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的遲發(fā)型超敏型自身免疫性疾?。郏保?，具有與人類多發(fā)性硬化、急性播散性腦脊髓炎相同的免疫及病理特征［２］，是人類中樞系統(tǒng)脫髓鞘病的動(dòng)物模型。他汀類藥物是3-羥甲基-戊二酰-輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，目前研究在發(fā)揮降脂同時(shí)發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。本實(shí)驗(yàn)探討他汀類藥物是否對(duì)EAE動(dòng)物具有保護(hù)作用，現(xiàn)報(bào)告如下。1材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用大白鼠5只，300～３５０g；豚鼠，共30只，雌雄各半，體重250～３５０g，由瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科提供，均為1級(jí)合格動(dòng)物，合格證號(hào)：川醫(yī)動(dòng)字第2401115。1.2藥品和試劑福氏完全佐劑(Freund’sadjuvantcomplete，含卡介苗10mg/ml)Sigma公司產(chǎn)品；阿托伐他汀鈣片(AtorvastatinCalciumTablets)，北京紅惠生物制藥股份有限公司生產(chǎn)。1.3方法將大白鼠處死后，迅速取出脊髓，用勻漿器制成50%的勻漿，與等量福氏完全佐劑(卡介苗10mg/ml)混合，用注射器抽打至油包水乳劑。用粗制堿性髓鞘蛋白(MBP)抗原注入豚鼠后足掌皮下，每側(cè)0.2ml造EAE模型。EAE模型分為高、低劑量治療組和對(duì)照組。EAE模型治療組20只：高劑量組10只，造模前1周開(kāi)始灌胃阿托伐他汀4mg/(kg·d)直至整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束；低劑量組10只，造模前1周開(kāi)始灌胃阿托伐他汀1mg/(kg·d)直至整個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)束。EAE模型對(duì)照組10只，不服阿托伐他汀。為保證等容積給藥，將阿托伐他汀鈣配成0.4mg/ml、0.1mg/ml兩種濃度的溶液，阿托伐他汀大、小劑量分別相當(dāng)于人用量的10、2.5倍劑量，高劑量組4mg/kg，用0.4mg/ml濃度的藥；低劑量組0.05mg/kg，用0.1mg/ml濃度的藥，給藥容積均為1ml/100g。0分：無(wú)明顯異常；1分：后肢無(wú)力；2分：后肢麻痹；3分：后肢麻痹伴前肢無(wú)力；4分：四肢癱瘓或死亡。EAE模型組及EAE模型治療組四肢癱瘓、死亡或連續(xù)3天癥狀評(píng)分無(wú)加重時(shí)作為EAE發(fā)病高峰，處死動(dòng)物；未發(fā)病動(dòng)物觀察2個(gè)月處死。假手術(shù)組與正常禰''>阿托伐他汀對(duì)實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎豚鼠模型發(fā)病的影響(2)}哉兆?周后處死動(dòng)物。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)量資料以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，進(jìn)行單因素方差分析，組間兩兩比較用Bonferroni法進(jìn)行檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用Fisher’sexacttest檢驗(yàn)。變量間相互關(guān)系采用直線相關(guān)分析。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理由SPSS11.5軟件完成。P＜0.05為差異有顯著性，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。2結(jié)果2.1臨床癥狀EAE模型組及EAE模型治療組所用的豚鼠均發(fā)病，潛伏期14～３０天不等?；疾‰嗍蟊憩F(xiàn)為體重下降，肢體無(wú)力，自傷后肢，重者四肢癱瘓、抽搐、死亡。取腦組織及脊髓作病理檢測(cè)，HE染色，光鏡下可見(jiàn)血管周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及脫髓鞘改變，證實(shí)EAE模型成功。2.2阿托伐他汀對(duì)EAE模型發(fā)病的影響見(jiàn)表1。表1阿托伐他汀對(duì)EAE模型發(fā)病的潛伏期、進(jìn)展期、高峰期癥狀評(píng)分影響(略)注：與對(duì)照組比較，t=3.71，P＜0.01；Δ與對(duì)照組比較，t=4.95，P＜0.05；＃與低劑量組比較，t=3.03，P＜0.05結(jié)果表明：治療組的潛伏期比EAE模型組短(P＜0.01或P＜0.05)，低劑量組的潛伏期比高劑量組潛伏期長(zhǎng)，兩者具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異(P＜0.05)，提示阿托伐他汀能延長(zhǎng)EAE動(dòng)物發(fā)病潛伏期，抑制EAE動(dòng)物模型發(fā)病能力大小與阿托伐他汀劑量有關(guān)；高低劑量組進(jìn)展期差異無(wú)顯著性，但與EAE模型相比，治療組的進(jìn)展期明顯縮短(P＜0.01)；病情高峰期神經(jīng)功能缺失評(píng)分，與EAE模型相比，高劑量治療組明顯降低(P＜0.01)，但低劑量組與EAE模型相比差異無(wú)顯著性。2.3阿托伐他汀對(duì)EAE豚鼠模型發(fā)病高峰期死亡率見(jiàn)表2。表2高、低劑量治療組和模型對(duì)照組發(fā)病高峰期死亡情況比較（略）注：Fisher’sexacttest，P＜0.05

由表2可以看出：EAE對(duì)照組的死亡率達(dá)50%，阿托伐他汀治療組的死亡率為20%，高劑量治療組的EAE無(wú)死亡，各組間死亡率的差異統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著性意義(P＜0.05)。提示阿托伐他汀能明顯降低發(fā)病動(dòng)物高峰期的死亡率。3討論EAE具有多發(fā)性硬化(MS)相同的病理和免疫特征。目前認(rèn)為MS發(fā)病是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)紊亂造成Ts細(xì)胞數(shù)量減少和功能缺陷，Th細(xì)胞功能相對(duì)亢進(jìn)，最終導(dǎo)致B細(xì)胞過(guò)度活化而產(chǎn)生以抗髓鞘堿性蛋白抗體為主的自身免疫性疾?。郏常?。Th亞群即Th1／Th2分布及功能異常與MS的免疫發(fā)病密切相關(guān)。Th1分泌的IFN-γ、TNF-α、IL-2等，促進(jìn)MS的發(fā)病，而Th2分泌IL4、IL-6、IL10等，抑制MS的發(fā)?。郏矗?。他汀類藥物包括阿托伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、洛伐他汀、美伐他汀等，都是3-羥甲基-戊二酰-輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑。目前資料證實(shí)，該類藥具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。NathN［５］等初步發(fā)現(xiàn)洛伐他汀調(diào)節(jié)Th1分化，降低血清IFN-γ、TNF-α水平，增強(qiáng)Th2細(xì)胞分泌活性，使血清IL-4、IL-5、IL-10增高

，可縮短被動(dòng)免疫誘發(fā)的SJL/J鼠EAE模型的病程并減輕EAE模型的病情嚴(yán)重程度。TimothyVollmer［６］等對(duì)30例復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化患者服用斯伐他汀6個(gè)月，頭顱MRI證實(shí)腦內(nèi)多發(fā)性硬化病灶數(shù)量減少44%，總病區(qū)大小減少41%，認(rèn)為與該藥抑制多發(fā)性(此資料轉(zhuǎn)貼于)硬化的炎性成分有關(guān)。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，阿托伐他汀延長(zhǎng)豚鼠EAE模型發(fā)病潛伏期，顯著減少了神經(jīng)系統(tǒng)損害的病程進(jìn)展期(P＜0.01)，降低了高峰期神經(jīng)功能缺失評(píng)分和死亡率，提示阿托伐他汀對(duì)EAE動(dòng)物模型發(fā)病有保護(hù)作用。同時(shí)高劑量組EAE發(fā)病潛伏期、最大神經(jīng)功能評(píng)分和發(fā)病高峰期死亡率均較低劑量組差異有顯著性，提示阿托伐他汀對(duì)EAE模型發(fā)病的保護(hù)作用呈劑量依賴關(guān)系?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】2RenderMP.Thepathophysiologyofacuteexperimentalallergicencephalomyelitisintherabbit.Brain，1984，107:699.3WaksmanBH.Currenttrendsinmultiplesclerosisresearch.ImmunolToday，1981，1:87-89.4BuntinxM，AmelootM，SteelsP，etal.Interferon-gamma-inducedcalciuminfluxinTlymphocytesofmultiplesclerosisandrheumatoidarthritispatients:acomplementarymechanismforTcellactivation.JNeuroimmunol，2002，124(1-2):70-82.5NathN，GiriS，PrasidR，etal.Potentialtargetsof3-hydroxy-3-methylgluarylcoenzyme