甲肝抗體IGM的檢測課件

黃艷甲型肝炎病毒IgM抗體的測定

(捕獲法)黃艷甲型肝炎病毒IgM抗體的測定

(捕獲法)酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA法）

將抗體(抗原)包被在固相表面后，按不同的步驟加入待測抗原(抗體)和酶標抗體(抗原)，充分反應后用洗滌的方法，使固相上形成的抗原抗體復合物與其他物質分離，洗去游離的酶標抗體(抗原)，最后加入底物，根據(jù)酶對底物催化的顯色反應程度，而對標本中的抗原(抗體)進行定性或定量。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA法）

2

ELISA類型夾心法間接法測抗體競爭法捕獲法ELISA類型夾心法捕獲法測IgM抗體

血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法捕獲法測IgM抗體血清中針對某些抗原的特異性IgM常4包被抗體：用抗人μ鏈抗體包被固相載體上,形成固相抗人μ鏈;加入病人的血清標本;加入特異性抗原試劑;，加入針對特異性抗原的酶標抗體，加底物顯色．包被抗體：用抗人μ鏈抗體包被固相載體上,形成固相抗人μ鏈;5免疫球蛋白的結構基本結構：四肽鏈結構由兩條相同的輕鏈（LightChain）和兩條相同的重鏈（Heavychain）通過鏈間二硫鍵連結形成。分子式為：H2L2四條肽鏈兩端游離的NH2和COOH方向一致分別命名為N端和C端免疫球蛋白的結構基本結構：四肽鏈結構由兩條相同的輕鏈（Lig6（一）輕鏈和重鏈輕鏈（L鏈）κ鏈λ鏈輕鏈決定型別κ型λ型正常人κ：λ≈2：1重鏈（H鏈）:根據(jù)其抗原性的差異，人類Ig的H鏈分為

鏈鏈鏈鏈鏈重鏈決定Ig類別

IgGIgAIgMIgDIgE（一）輕鏈和重鏈輕鏈（L鏈）κ鏈7捕獲法主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定。捕獲法8實驗原理用抗人μ鏈抗體包被酶標板，用以捕獲血清中IgM類抗體，然后用特異性HAVAg與IgM抗體結合，再加酶標抗HAV抗體，最后加底物顯色，顯色深淺與HAVIgM的含量成正相關。實驗原理用抗人μ鏈抗體包被酶標板，用以捕獲血清中IgM類抗體9操作步驟

1．將微孔條固定在支架上，按順序編號。2．分別將待測標本，陰、陽性對照100μl（2滴）加入相應的孔中，設空白對照孔。置37℃20分鐘。3．洗滌：甩去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。4．每孔加HA·Ag50μl，酶結合物50μl（空白對照除外），振蕩混勻，置37℃20分鐘。5．洗滌：重復上述36．顯色：每孔加顯色劑A液50μl，再加顯色劑B液50μl，振蕩混勻，置37℃15分鐘。7.每孔加終止液50μl操作步驟1．將微孔條固定在支架上，按順序編號。10Cutoffvalue(臨界值)Cutoffvalue(臨界值)：陰陽性判斷值，簡稱CO值。夾心法：若S/CO值>1，為陽性；

S/CO值<1，為陰性；競爭抑制法：若S/CO值<1，為陽性；

S/CO值>1，為陰性。Cutoffvalue(臨界值)Cutoffvalu11

要點：1.HAV的傳播途徑(糞—口)2.HAV的潛伏期(30天±2周)3.血清標志物出現(xiàn)的規(guī)律4.免疫學檢測指標—HAVAg

抗HAV總抗體抗HAV-IgM要點：12臨床意義血清中抗HAVIgM出現(xiàn)于感染的早期(發(fā)病后數(shù)日)抗體的效價很快升到峰值并持續(xù)較長時間(2-4周),經(jīng)1-2個月后抗體的效價和陽性率明顯不降,于3個月后消失.因此抗HAVIgM陽性,尤其是效價較高時,表明處于感染的早期,被公認為早期診斷甲肝的依據(jù),是區(qū)別是急性感染還是慢性感染的有力佐證。臨床意義血清中抗HAVIgM出現(xiàn)于感染的早期(發(fā)病后數(shù)日)抗13甲肝抗體IGM的檢測課件14甲肝抗體IGM的檢測課件15甲肝抗體IGM的檢測課件16甲肝抗體IGM的檢測課件17甲肝抗體IGM的檢測課件18甲肝抗體IGM的檢測課件19黃艷甲型肝炎病毒IgM抗體的測定

(捕獲法)黃艷甲型肝炎病毒IgM抗體的測定

(捕獲法)酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA法）

將抗體(抗原)包被在固相表面后，按不同的步驟加入待測抗原(抗體)和酶標抗體(抗原)，充分反應后用洗滌的方法，使固相上形成的抗原抗體復合物與其他物質分離，洗去游離的酶標抗體(抗原)，最后加入底物，根據(jù)酶對底物催化的顯色反應程度，而對標本中的抗原(抗體)進行定性或定量。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA法）

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ELISA類型夾心法間接法測抗體競爭法捕獲法ELISA類型夾心法捕獲法測IgM抗體

血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法捕獲法測IgM抗體血清中針對某些抗原的特異性IgM常23包被抗體：用抗人μ鏈抗體包被固相載體上,形成固相抗人μ鏈;加入病人的血清標本;加入特異性抗原試劑;，加入針對特異性抗原的酶標抗體，加底物顯色．包被抗體：用抗人μ鏈抗體包被固相載體上,形成固相抗人μ鏈;24免疫球蛋白的結構基本結構：四肽鏈結構由兩條相同的輕鏈（LightChain）和兩條相同的重鏈（Heavychain）通過鏈間二硫鍵連結形成。分子式為：H2L2四條肽鏈兩端游離的NH2和COOH方向一致分別命名為N端和C端免疫球蛋白的結構基本結構：四肽鏈結構由兩條相同的輕鏈（Lig25（一）輕鏈和重鏈輕鏈（L鏈）κ鏈λ鏈輕鏈決定型別κ型λ型正常人κ：λ≈2：1重鏈（H鏈）:根據(jù)其抗原性的差異，人類Ig的H鏈分為

鏈鏈鏈鏈鏈重鏈決定Ig類別

IgGIgAIgMIgDIgE（一）輕鏈和重鏈輕鏈（L鏈）κ鏈26捕獲法主要用于血清中某種抗體亞型成分（如IgM）的測定。捕獲法27實驗原理用抗人μ鏈抗體包被酶標板，用以捕獲血清中IgM類抗體，然后用特異性HAVAg與IgM抗體結合，再加酶標抗HAV抗體，最后加底物顯色，顯色深淺與HAVIgM的含量成正相關。實驗原理用抗人μ鏈抗體包被酶標板，用以捕獲血清中IgM類抗體28操作步驟

1．將微孔條固定在支架上，按順序編號。2．分別將待測標本，陰、陽性對照100μl（2滴）加入相應的孔中，設空白對照孔。置37℃20分鐘。3．洗滌：甩去孔內液體，用洗滌液注滿各孔，靜置5秒，共三次，每次洗后均需扣干。4．每孔加HA·Ag50μl，酶結合物50μl（空白對照除外），振蕩混勻，置37℃20分鐘。5．洗滌：重復上述36．顯色：每孔加顯色劑A液50μl，再加顯色劑B液50μl，振蕩混勻，置37℃15分鐘。7.每孔加終止液50μl操作步驟1．將微孔條固定在支架上，按順序編號。29Cutoffvalue(臨界值)Cutoffvalue(臨界值)：陰陽性判斷值，簡稱CO值。夾心法：若S/CO值>1，為陽性；

S/CO值<1，為陰性；競爭抑制法：若S/CO值<1，為陽性；

S/CO值>1，為陰性。Cutoffvalue(臨界值)Cutoffvalu30

要點：1.HAV的傳播途徑(糞—口)2.HAV的潛伏期(30天±2周)3.血清標志物出現(xiàn)的規(guī)律4.免疫學檢測指標—HAVAg

抗HAV總抗體抗HAV-IgM要點：31臨床意義血清中抗HAVIgM出現(xiàn)于感染的早期(發(fā)病后數(shù)日)抗體的效價很快升到峰值并持續(xù)較長時間(2-4周),經(jīng)1-2個月