微生物標本接種課件

微生物檢驗標本采集與接種微生物檢驗標本采集與接種1內(nèi)容血培養(yǎng)尿培養(yǎng)痰培養(yǎng)膿液腦脊液前列腺STD厭氧培養(yǎng)內(nèi)容血培養(yǎng)2血培養(yǎng)增菌培養(yǎng)商品血培養(yǎng)瓶成人瓶、兒童瓶、中和抗生素瓶無菌操作采集血標本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕混勻以防血液凝固。立即送檢，切勿冷藏。采血量成人采血量是10～20ml，兒童1～5ml。血液和肉湯之比為1:5～1:10。35℃培養(yǎng)5-7天血培養(yǎng)增菌培養(yǎng)3微生物標本接種課件4微生物標本接種課件5體積%陽性血培養(yǎng)結果vs.采集的套數(shù)%99%89%80%真陽性20ml/套MayoClinicStudy體積%99%89%80%真陽性20ml/套MayoCli6用于培養(yǎng)的血液體積體重

磅

千克體積(ml)/穿刺總量/2次穿刺1%全血體積%總血液體積<19<9122ml1%19-309-14366-10ml1-3%31-6015-2751010-20ml1-2%61-9028-41102020-30ml1-2%>90>422040>40ml1-2%用于培養(yǎng)的血液體積體重體積(ml)/總量7采集血培養(yǎng)時間的重要性9%+14%+9%+11%+發(fā)熱高峰前12-2.5小時發(fā)熱高峰前2.5-0.5小時發(fā)熱高峰期間發(fā)熱高峰后1-12小時166病人105病人199病人258病人Thomsonetal.1991.ASCP.MayoClinicStudy采集血培養(yǎng)時間的重要性9%+14%+9%+11%+發(fā)8立即獲得足夠血液并且開始抗生素治療從不同部位獲得2-3套血培養(yǎng)(40-60ml血液)最好在5分鐘內(nèi)采集#1#2立即獲得足夠血液并且開始抗生素治療從不同部位獲得2-3套血培9確定檢測陽性的培養(yǎng)時間陽性報警時間確定檢測陽性的培養(yǎng)時間陽性報警時間10隨著時間推移敗血癥病原菌的變遷%住院患者血培養(yǎng)陽性結果#1

pathogenFromUW,MadisonandG.WashingtonUniv.,St.Louis隨著時間推移敗血癥病原菌的變遷%住院患者血培養(yǎng)陽性結果#111血培養(yǎng)存在的主要問題如果皮膚定植的細菌沒有被殺死，這些細菌將通過針頭被吸入血培養(yǎng)瓶并在瓶中生長這些細菌(主要為凝固酶陰性葡萄球菌)引起導管相關性敗血癥(住院患者血培養(yǎng)第一位)醫(yī)生不能將真的凝固酶葡萄球菌感染和皮膚定植菌“污染”相區(qū)分，因此他們用萬古霉素治療患者血培養(yǎng)存在的主要問題如果皮膚定植的細菌沒有被殺死，這些細菌將12皮膚凝固酶陰性葡萄球菌定植于輸液管皮膚凝固酶陰性葡萄球菌定植于輸液管13皮膚不是無菌的;定植細菌“污染”血培養(yǎng)皮膚不是無菌的;14葡萄球菌在塑料CVC表面生長形成生物膜葡萄球菌在塑料CVC表面生長形成生物膜15污染細菌血培養(yǎng)污染定義為在幾次血培養(yǎng)中單個血培養(yǎng)下列細菌陽性:凝固酶陰性葡萄球菌棒狀桿菌微球菌丙酸桿菌

芽孢桿菌污染細菌血培養(yǎng)污染定義為在幾次血培養(yǎng)中單個血培養(yǎng)下列細菌陽性16血培養(yǎng)污染vs.皮膚消毒%污染StudiesfromBaylor,Nashville,&France血培養(yǎng)污染vs.皮膚消毒%污染Studiesfrom17血培養(yǎng)一旦提示陽性結果，涂片行革蘭染色，根據(jù)鏡檢結果決定轉種羊血平皿及巧克力平皿上，并分別放置普通培養(yǎng)箱及CO2燭缸內(nèi)35℃～37℃孵育培養(yǎng)需氧和兼性厭氧菌；轉種布氏血瓊脂，厭氧環(huán)境培養(yǎng)厭氧菌；轉種沙保羅培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌。將革蘭染色結果立即向臨床電話初級報告。待細菌鑒定及藥敏結果出來后再向臨床發(fā)出最終報告。血培養(yǎng)18血液培養(yǎng)【特別提醒】

厭氧菌從血液中培養(yǎng)出厭氧菌的比率相對比較少，不推薦每個病人常規(guī)增加一個厭氧血培養(yǎng)，但如果必要，選用其配套的厭氧培養(yǎng)基來培養(yǎng)厭氧菌。

營養(yǎng)苛刻的細菌（FastidiousBacteria）布魯氏菌屬可以在常規(guī)血液培養(yǎng)基中生長，并且盡管可以在三天內(nèi)分離到，但是推薦培養(yǎng)21天，且有必要進行末次接種。HACEK群細菌—嗜泡沫嗜血桿菌（Haemphilusaphrophilus）、放線共生放線桿菌（Actinobacillusactinomycemcomitans）、人心桿菌(Cardiobacteriumhominis)、侵襲?？暇?Eikenelluscorrodens)和金氏桿菌（Kingellakingae）與細菌性心內(nèi)膜炎有關，常規(guī)血培養(yǎng)基中可以分離，但培養(yǎng)14天和進行肉湯末次接種會更有效。

血液培養(yǎng)【特別提醒】19血培養(yǎng)常規(guī)血液培養(yǎng)基不能分離鉤端螺旋體。分枝桿菌（Mycobacteria）使用常規(guī)血培養(yǎng)基不能分離。導管頭培養(yǎng)導管頭是為了明確細菌來源。最常用的方法是半定量的方法，方法是用5cm長的導管末端部分在血液瓊脂平板上滾動4次。培養(yǎng)物出現(xiàn)15個以上的菌落，提示有潛在的導管相關性感染。血培養(yǎng)常規(guī)血液培養(yǎng)基不能分離鉤端螺旋體。20導管相關感染的診斷敏感性和特異性檢測管腔內(nèi)的&外周細菌不需要移走導管可靠性和可重復性易操作快速回報感染的微生物可以分離對患者安全關鍵點:患者必須有菌血癥導管相關感染的診斷敏感性和特異性關鍵點:患者必須有菌血癥21檢測導管相關感染移走導管MakiRoll(半定量)超聲波降解和稀釋(定量)通過管腔抽吸(定量)保留導管管腔刷定量培養(yǎng)(CVC&外周血)達到陽性的時間(CVC&外周血)檢測導管相關感染移走導管22哪部分用于培養(yǎng)哪部分用于培養(yǎng)23Maki滾動法Maki滾動法24導管尖陽性培養(yǎng)結果導管尖陽性培養(yǎng)結果25苛養(yǎng)菌不要放置常規(guī)血培養(yǎng)>5天由如下微生物引起的可疑的敗血癥或心內(nèi)膜炎:霉菌(組織胞漿菌,

鐮刀菌,等等秕糠馬拉癬菌軍團菌屬巴爾通體新型隱球菌Q-熱惠普爾病支原體屬其他病原菌

3分離管咨詢ID醫(yī)生血清Ag凝集+分離培養(yǎng)苛養(yǎng)菌由如下微生物引起的可疑的敗血癥或心內(nèi)膜炎:3分離26干預措施可以減少導管相關性感染手消毒

用洗必泰進行皮膚消毒

在穿刺過程中完全無菌操作

鎖骨下靜脈穿刺

移去不必要的中央靜脈插管血管內(nèi)導管相關性感染預防指南.MMWRRecomRep2002:51(RR10)1-29soap干預措施可以減少導管相關性感染手消毒血管內(nèi)導管相關性感染預27尿道感染每年850萬例尿路感染,90%為女性1/2.5個婦女在一生中會得UTI下行性感染：血流腎臟膀胱（金黃色葡萄球菌，酵母菌，結核分枝桿菌）上行性感染：尿道膀胱腎盂血流尿道感染每年850萬例尿路感染,90%為女性28AnatomyofUrinaryTract

尿路的解剖圖側面圖膀胱恥骨子宮頸尿道輸卵管卵巢子宮陰道直腸肛門AnatomyofUrinaryTract

尿路的解剖29綜合病癥尿道炎或急性尿路綜合征膀胱炎-膀胱的炎癥腎盂腎炎-腎臟的炎癥

Age年齡5102030//60有癥狀的無癥狀的綜合病癥尿道炎或急性尿路綜合征Age年齡530尿路感染病原菌尿路感染病原菌31大腸埃希菌與膀胱上皮細胞相互作用傘狀粘附膀胱上皮細胞大腸埃希菌與膀胱上皮細胞相互作用傘狀粘附膀胱上皮細胞32尿液運輸方法無需冷藏尿液運輸方法無需冷藏33有癥狀婦女的尿路感染診斷性試驗有癥狀婦女的尿路感染診斷性試驗34尿液革蘭染色-革蘭陰性桿菌尿液革蘭染色-革蘭陰性桿菌35傳統(tǒng)的尿培養(yǎng)使用校準過的接種環(huán)(0.001or0.01ml)垂直插入裝有尿液的無菌容器中

在瓊脂平板上分區(qū)劃線：血平皿，麥康凱平皿或CLED平皿大多數(shù)尿路病原菌能在血平皿上生長麥康凱平皿有鑒別功能，為革蘭陰性桿菌的選擇性培養(yǎng)基傳統(tǒng)的尿培養(yǎng)使用校準過的接種環(huán)(0.001or0.0136尿培養(yǎng)的劃線方式第一區(qū)=50,000cfu/ml第二區(qū)=75,000cfu/ml第三區(qū)=100,000cfu/ml沿中心線向下=50,000cfu/ml長向邊緣=100,000cfu/ml尿培養(yǎng)的劃線方式第一區(qū)=50,000cfu/ml沿中心37

尿培養(yǎng)的培養(yǎng)基5%血平皿（美國用羊血，歐洲用馬血）伊紅美蘭平皿（EMB）大腸埃希菌為金屬綠麥康凱平皿–LFvsNLF胱氨酸-乳糖-低電解質平皿（CLED）顯色平皿(BBL公司的CHROMagar，HardyBluEcoliBiplate)CUTI（Oxoid公司）;CPSID2（生物梅里埃公司）;UriSelect（Biorad公司）;Rambach;others

尿培養(yǎng)的培養(yǎng)基5%血平皿（美國用羊血，歐洲用馬血）38蛋白胨，酵母提取物，色原物科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（BBL）大腸埃希菌腸球菌無乳鏈球菌腐生葡萄球菌蛋白胨，酵母提取物，色原物科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（BBL）大腸埃希39同樣的接種物在科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（BBL）上生長大腸埃希菌，腸球菌和變形桿菌在血平皿上生長CHROMagar?Orientation(BBL)同樣的接種物在科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（BBL）上生長大腸埃希菌，腸40chromIDCPS-生物梅里埃公司的產(chǎn)品快速鑒定大腸埃希菌，變形桿菌和腸球菌可分離所有尿道病原菌更好的可操作性更好的鑒定能力更高的可靠性chromIDCPS-生物梅里埃公司的產(chǎn)品快速鑒定大腸埃41尿培養(yǎng)【操作步驟】1．培養(yǎng)皿放置至室溫，先充分搖勻尿液2．用1μl定量接種環(huán)或用微量移液器無菌吸取10ul尿液接種于羊血平皿和MAC上，然后用無菌接種環(huán)劃線涂布，置35℃，最好在5～10％co2環(huán)境下，孵育18～24小時3．次日觀察結果，根據(jù)診斷標準進行診斷，陽性結果做細菌鑒定和藥敏。尿培養(yǎng)【操作步驟】42尿培養(yǎng)【定量標準】用1μl接種環(huán)，結果×1000cfu/ml；用10μl接種環(huán)，結果×100cfu/ml。菌計≥10萬cfu/ml，繼續(xù)鑒定和藥敏。降低標準的情況：幼兒、兒童或男性的確定的尿路感染，其尿標本定量也可＜10萬cfu/ml；插導管的患者、最近用過抗生素者、大量喝水者、伴發(fā)膿尿和有癥狀者、有尿路阻塞或由于血源性傳播而患有腎盂腎炎者，其尿標本定量也可＜10萬cfu/ml；患有尿道綜合征的性活躍的年輕女性，其尿標本定量也可＜100cfu/ml。尿培養(yǎng)【定量標準】43評價尿培養(yǎng)的標準病人標本特征有意義的菌落形成單位/ml（非皮膚污染）無癥狀者清潔留取100,000有癥狀者，不固定的清潔留取10,0001-2種機會致病菌。若多于2種則認為尿液被污染有癥狀者，性活躍女性清潔留取100個純菌落腸桿菌科菌男性清潔留取1000個機會致病菌任何人內(nèi)置導尿管100,000任意數(shù)量機會致病菌任何人通過直接導管獲得100任意數(shù)量機會致病菌任何人通過外科手術從腎臟獲得任意數(shù)量（肉湯增菌，厭氧菌）任何人Percutaneousbladdertap經(jīng)皮膀胱吸取任意數(shù)量（肉湯增菌，厭氧菌）任何人Any任何標本任何數(shù)量金黃色葡萄球菌不同人有爭議任何數(shù)量的酵母菌評價尿培養(yǎng)的標準病人標本特征有意義的菌落形成單位/ml（非皮44尿培養(yǎng)-注意事項標本留取嚴格執(zhí)行無菌操作。不要將尿液標本接種于增菌肉湯培養(yǎng)基中。清潔中段尿標本不要進行離心處理。尿液標本原則上不做厭氧培養(yǎng)。尿液收集后應立即送檢，不能送檢者可置4℃～8℃冰箱儲藏，儲存時間≤24小時?；颊邞谟盟幥盎蛲Ｓ每股睾笾辽偃炝羧∧蛞?，尿液中勿加防腐劑。尿培養(yǎng)-注意事項45痰培養(yǎng)-操作步驟取適量痰液化劑放入痰標本盒內(nèi)混勻放置30分鐘，

用無菌環(huán)挑2～3環(huán)標本，分區(qū)劃線接種于羊血平皿或沙保培養(yǎng)基上、Mac置35℃孵育18～24小時,巧克力平板5％co235℃孵育18～24小時。觀察結果，根據(jù)細菌生長情況進行鑒定及藥敏。挑取膿液部分涂片，革蘭染色鏡檢。判斷標本是否合格。痰培養(yǎng)-操作步驟46痰培養(yǎng)-操作步驟痰標本涂片染色顯微鏡檢查的分類：判斷標準比較簡單的方法就是確定鱗狀上皮細胞數(shù)量：細胞數(shù)＞10/低倍視野，說明混有痰液。細胞數(shù)/低倍視野WBC＜10鱗狀上皮細胞＞25不合格WBC

10～25鱗狀上皮細胞＞25不合格WBC＞25鱗狀上皮細胞＞25不合格WBC＞25鱗狀上皮細胞10～25可接受WBC＞25鱗狀上皮細胞≤10合格WBC≤25鱗狀上皮細胞≤25可接受?痰培養(yǎng)-操作步驟痰標本涂片染色顯微鏡檢查的分類：判斷標準47用革蘭氏染色來評估呼吸道標本是否合格>10鱗狀上皮細胞/LPF——拒收！彈性纖維，中性粒細胞多，鱗狀上皮細胞少，有代表性的好標本用革蘭氏染色來評估呼吸道標本是否合格>10鱗狀上皮細胞/LP48形態(tài)學鑒別要訣——球菌革蘭陰性雙球菌——腎型豆子樣，平行縱軸排列=奈瑟菌屬革蘭陽性雙球菌——拉長，單個縱軸，末端呈點狀（柳葉刀狀）=鏈球菌（肺炎鏈球菌）形態(tài)學鑒別要訣——球菌革蘭陰性雙球菌——腎型豆子樣，平行縱軸49實際革蘭氏染色革蘭陰性雙球菌：在生殖道標本或腦脊液中多為奈瑟菌屬；在下呼吸道分泌物中提示為卡他莫拉菌革蘭陽性雙球菌提示肺炎鏈球菌實際革蘭氏染色革蘭陰性雙球菌：在生殖道標本或腦脊液中多為奈瑟50形態(tài)學鑒別要訣——球菌革蘭陽性球菌成對，成鏈——較小、拉長的、從不4聯(lián)排列=鏈球菌屬革蘭陽性球菌呈堆排列，通常很圓，細胞較大，不拉長，可成對，但鏈不超過4個細胞?？赡芤蛎撋^度呈革蘭陰性。但如果不是腎型話不可能為革蘭陰性菌。形態(tài)學鑒別要訣——球菌革蘭陽性球菌成對，成鏈——較小、拉長的51鏈狀的革蘭陽性球菌：提示鏈球菌短鏈，<6個細胞，提示腸球菌或B群鏈球菌；肺炎鏈球菌血培養(yǎng)中長鏈的革蘭陽性球菌（>6個細胞）提示化膿鏈球菌或草綠色鏈球菌革蘭氏陽性球菌鏈狀的革蘭陽性球菌：提示鏈球菌血培養(yǎng)中長鏈的革蘭陽性球菌（>52更多的革蘭氏染色形態(tài)學呈堆或四聯(lián)排列的革蘭陽性球菌提示葡萄球菌更多的革蘭氏染色形態(tài)學呈堆或四聯(lián)排列的革蘭陽性球菌提示葡萄球53革蘭陽性桿菌的形態(tài)學鑒別要訣革蘭氏陽性桿菌可以很規(guī)則，如果是需氧菌則非?？赡苁茄堪麠U菌屬，如果是厭氧則非?？赡苁撬缶鷮?。如果很小，可能是不呈鏈狀的李斯特菌屬，如果呈鏈狀則很可能是乳酸桿菌屬。革蘭陽性不規(guī)則的桿菌（多形態(tài)），一端比另一端粗。常相互吸附或呈籬笆樣排列=棒狀桿菌屬或丙酸桿菌屬革蘭陽性桿菌的形態(tài)學鑒別要訣革蘭氏陽性桿菌可以很規(guī)則，如果是54細胞內(nèi)細菌細胞內(nèi)細菌55革蘭陰性雙球菌革蘭陰性雙球菌56多形態(tài)提示混合厭氧菌感染多形態(tài)提示混合厭氧菌感染57外型奇特的酵母菌，不像米老鼠的耳朵或白色念珠菌橢圓形孢子。報告“真菌成分和酵母樣細胞”。不要遺忘革蘭陰性桿菌。外型奇特的酵母菌，不像米老鼠的耳朵或白色念珠菌橢圓形孢子。報58痰培養(yǎng)-特別提醒洋蔥伯克霍爾德菌是一種重要的呼吸道致病原，可引起囊性纖維化。常規(guī)培養(yǎng)基中生長良好。諾卡菌（Nocardiaspp）諾卡菌是一種重要的呼吸道致病菌。培養(yǎng)的標本應立即進行實驗室檢查，如果延遲時間不長，4℃保存也可以接受。標本革蘭染色檢查，可以發(fā)現(xiàn)小的革蘭陽性菌，外觀呈分枝狀、絲狀或球狀。沒有特異的培養(yǎng)諾卡菌的培養(yǎng)基，可用心浸液沙氏葡萄糖瓊脂、腦心浸液瓊脂、羊血瓊脂或胰蛋白大豆瓊脂。25-37℃孵育3周，37℃更好。鼻咽部—金黃色葡萄球菌確定金黃色葡萄球菌帶菌者，用聚酯頭拭子從前鼻孔取鼻咽分泌物，接種5％羊血，35℃孵育2d。痰培養(yǎng)-特別提醒59痰培養(yǎng)-特別提醒鼻咽部—腦膜炎奈瑟菌采集鼻咽拭子標本，接種血瓊脂、巧克力瓊脂或MTM培養(yǎng)基，5％CO2的潮濕環(huán)境，35℃孵育72h。喉—A群鏈球菌喉部標本最常用于診斷A群鏈球菌喉炎，標本接種血瓊脂5～10％CO2環(huán)境，35℃孵育48h。痰培養(yǎng)-特別提醒鼻咽部—腦膜炎奈瑟菌60腦脊液-操作步驟將腦脊液標本經(jīng)離心（≥1500g，15min）后，將上清液倒入消毒的試管，留下0.5ml沉淀和液體，充分混勻。無菌吸取標本20～30ul分別劃線接種于羊血平皿、巧克力平皿，分別置燭缸和普通培養(yǎng)箱內(nèi)35℃孵育24～48小時。應同時制備涂片，革蘭染色鏡檢。觀察結果，有細菌生長者進行細菌鑒定和藥敏。腦脊液-操作步驟61腦脊液-操作步驟也可將腦脊液標本注入增菌培養(yǎng)瓶內(nèi)先行增菌培養(yǎng)，具體操作參見血液培養(yǎng)。采集CSF是為了診斷腦膜炎，細菌性腦膜炎分為急性和慢性兩種。急性腦膜炎在感染后24h內(nèi)產(chǎn)生癥狀，通常由化膿性細菌引起，最可能的病原菌根據(jù)患者年齡和疾病是否由社區(qū)或醫(yī)院感染而有變化。包括：B群鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、大腸埃希菌、肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等。慢性腦膜炎（癥狀持續(xù)至少4周）的典型致病菌包括：結核分枝桿菌、梅毒螺旋體、布魯氏菌、問號鉤端螺旋體和博氏疏螺旋體。腦脊液離心涂片抗酸染色，應用3000～3600g30min。厭氧菌很少引起腦膜炎，因此不需要對腦脊液常規(guī)進行厭氧菌培養(yǎng)。厭氧菌常與腦膿腫形成、硬腦膜下積膿和硬腦膜外膿腫有關。腦脊液-操作步驟62膿液培養(yǎng)-標本要求臨床醫(yī)生根據(jù)需要無菌操作取材，比較理想的方法是用注射器抽取膿性物質。從膿腫底部或膿腫壁的取樣，效果最好。如果不能獲得抽取物，也可以用拭子從傷口深處采集滲出物，至少采集兩個拭子，一個用于涂片染色，一個用于培養(yǎng)。厭氧培養(yǎng)最好不用拭子。將采集的標本置于無菌試管內(nèi)，立即送檢。厭氧培養(yǎng)標本取材應迅速、準確，禁止接觸空氣，盛標本容器內(nèi)要排盡空氣膿液培養(yǎng)-標本要求63膿液培養(yǎng)【標本處理】標本劃線接種于羊血平皿，35℃孵育24～48小時。同時涂片革蘭染色。厭氧培養(yǎng)接種布氏血瓊脂，厭氧環(huán)境培養(yǎng)。觀察結果，有細菌生長者進行細菌鑒定和藥敏。膿液培養(yǎng)【標本處理】64前列腺培養(yǎng)【標本要求】

首先用無菌等滲鹽水的拭子洗凈尿道口。

由臨床醫(yī)生行前列腺按摩術留取標本于無菌試管內(nèi)，立即送檢?！緲吮咎幚怼?/p>

將標本劃線接種于羊血平皿，35℃孵育24～48小時。觀察結果，有細菌生長者進行細菌鑒定和藥敏?！咀⒁馐马棥苛羧吮咀⒁獗苊馕廴?。疑為性傳播疾病做相應的STD培養(yǎng)。前列腺培養(yǎng)【標本要求】65淋球菌培養(yǎng)【操作步驟】待檢物劃線接種于專用MTM平皿上，將接種好的平皿置燭虹中置35℃溫箱孵育48小時；取出平皿，挑取可疑菌落進行鑒定；

鑒定：涂片革蘭染色；氧化酶試驗；β－內(nèi)酰胺酶試驗；生長試驗；糖發(fā)酵試驗。淋球菌培養(yǎng)【操作步驟】66支原體培養(yǎng)從4~10℃冰箱中取出所需數(shù)量地培養(yǎng)基瓶，恢復液及鑒別、定量、藥敏板，使其在接種前接近室溫。旋下外蓋，取下丁基橡膠內(nèi)塞，然后擠滴加入恢復液，培養(yǎng)基迅速融解、表面至標簽上緣處（約1.8ml）應隨即、直接往培養(yǎng)基瓶接種標本（如果延遲接種，則標本置室溫不超過2小時；在4~10℃時不超過8小時）混勻后，從瓶內(nèi)分別取50微升（1大滴）加到鑒別、定量、藥敏板的每一小孔中然后，在每孔正中上方，準確、擠滴加入一滴石蠟油。將鑒別、定量、藥敏板置36℃孵育箱中培養(yǎng)12小時后，即可開始觀察結果;不見陽性者，則連續(xù)培養(yǎng)時間應延長至48小時結束。支原體培養(yǎng)67臨床細菌室厭氧菌培養(yǎng)基本程序厭氧培養(yǎng)基本設備厭氧標本采集和運送步驟厭氧菌的分離和鑒定步驟厭氧菌的報告厭氧菌的藥敏試驗厭氧菌的菌種保存臨床細菌室厭氧菌培養(yǎng)基本程序厭氧培養(yǎng)基本設備68厭氧培養(yǎng)基本設備輸送瓊脂Amies瓊脂(41998、41999)難辯梭菌瓊脂(43213)厭氧培養(yǎng)基厭氧培養(yǎng)裝置厭氧氣袋厭氧盒或厭氧罐厭氧培養(yǎng)箱厭氧菌鑒定方法厭氧培養(yǎng)基本設備輸送瓊脂Amies瓊脂(419969需要準備的厭氧菌培養(yǎng)基斯氏瓊脂+5%羊血：適用所有厭氧菌生長斯氏萬古霉素+5%羊血：適用革蘭陰性厭氧菌難辯梭菌選擇培養(yǎng)基(CCFA)：分離難辯梭菌改良厭氧血平皿需要準備的厭氧菌培養(yǎng)基70改良厭氧血平皿配制血瓊脂基礎(按1000ml量）半胱氨酸：0.4克氯化血紅素(5mg/ml):1ml1%維生素K1:0.1ml加熱溶解冷卻后調整pH7.4高壓滅菌后冷卻至50℃時加入5-10%的脫釬維羊血混合后傾注平皿。營養(yǎng)好可供大多數(shù)厭氧菌生長質量控制：產(chǎn)黑色素普雷沃菌形成典型菌落和色素產(chǎn)氣夾膜梭菌有雙圈溶血。改良厭氧血平皿配制血瓊脂基礎(按1000ml量）71厭氧標本的選擇、采集和運送可疑厭氧菌感染特征感染局部產(chǎn)生氣體分泌物有惡臭分泌物帶血或呈黑色粘膜周圍的感染如肛周、口腔、鼻竇、咽頰等細菌培養(yǎng)陰性，但有菌血癥表現(xiàn)長期使用氨基糖苷類抗生素，但無效者有基礎疾病免疫低下者厭氧標本的選擇、采集和運送可疑厭氧菌感染特征72需做厭氧血培養(yǎng)的高危人群腸膿毒癥、女性生殖道感染、褥瘡及呼吸道感染患者ICU患者或近期做過腹部外科手術的患者嚴重燒傷和外傷患者伴有嚴重心血管疾病、糖尿病、惡性腫瘤、移植和免疫抑制患者老年患者臨床高度懷疑有厭氧菌感染的患者

絕大多數(shù)住院患者需要做厭氧血培養(yǎng)需做厭氧血培養(yǎng)的高危人群腸膿毒癥、女性生殖道感染、褥瘡及呼吸73正確地收集標本不能做厭氧培養(yǎng)的標本：咽、鼻、尿道或直腸拭子?？瘸龅奶?，通過支氣管鏡取的分泌物排出或導出的尿及胃內(nèi)容物。糞便（除難辨梭菌）正確地收集標本不能做厭氧培養(yǎng)的標本：74可做厭氧培養(yǎng)的標本從未開放的膿腫抽取膿液尿：從恥骨聯(lián)合上方做膀胱穿刺吸出從腎造口管收集的氣管切開吸取的肺分泌物女性生殖器：后穹隆穿刺穿刺抽出的胸腔液、腹腔液、腦脊液竇道標本：可插入小導管用注射器吸出竇道損傷部位取材做活組織檢查可做厭氧培養(yǎng)的標本從未開放的膿腫抽取膿液75床邊采集標本的步驟除去表面陳舊的膿和分泌物,從深處采取首先接種在厭氧培養(yǎng)基,立即置厭氧容器內(nèi)同時撕開并放入產(chǎn)氣袋,放指示劑立即蓋好蓋或封好厭氧袋口剩余部分標本種需氧培養(yǎng)基剩余最后標本作兩張涂片到達實驗室后，35度孵箱培養(yǎng)床邊采集標本的步驟除去表面陳舊的膿和分泌物,從深處采取76無菌體液直接種入?yún)捬跹囵B(yǎng)瓶同時種普通血培養(yǎng)瓶無菌體液直接種入?yún)捬跹囵B(yǎng)瓶77厭氧菌分離的基本分離步驟第一次耐氧試驗:初始標本需氧和厭氧對照發(fā)現(xiàn)可疑菌落(需氧環(huán)境不生長菌落)第二次耐氧試驗:多個可疑菌落分別接種需氧和厭氧平皿,分別置35度作需氧和厭氧培養(yǎng).第三次耐氧試驗:取僅厭氧環(huán)境生長菌落進行厭氧和需氧培養(yǎng)如分離的菌落僅在厭氧環(huán)境生長,可確定為厭氧菌.厭氧菌分離的基本分離步驟第一次耐氧試驗:78微生物標本接種課件79重要的提示做耐氧試驗時，原始平板不要丟棄，繼續(xù)厭氧培養(yǎng)某些厭氧菌生長緩慢一旦厭氧試驗失?。ú僮髡`差等），有備份菌株重要的提示做耐氧試驗時，原始平板不要丟棄，繼續(xù)厭氧培養(yǎng)80厭氧菌的鑒定I級實驗室應達到的標準：根據(jù)耐氧試驗結果，革蘭染色，菌落特點提供厭氧菌初步推斷報告。II級實驗室應達到的標準：根據(jù)革蘭染色反應，鏡下形態(tài)，菌落形態(tài)，耐氧試驗用自制或國產(chǎn)傳統(tǒng)生化反應試劑定種III級實驗室應達到的標準：能采用國際公認標準化鑒定系統(tǒng)如API-20A、MicroID、Vitek-ANI氣--液相色譜儀厭氧菌的鑒定I級實驗室應達到的標準：81厭氧菌的藥敏試驗厭氧菌感染以經(jīng)驗用藥為主：厭氧菌對現(xiàn)已上市的藥物的敏感性有合理的預測性藥敏試驗報告時間太長（4～6天）厭氧菌藥敏試驗指征：嚴重感染（心內(nèi)膜炎、腦膿腫、骨髓炎治療時期長）觀察藥物敏感性變化經(jīng)驗用藥無效對新藥評價耐藥監(jiān)測厭氧菌的藥敏試驗厭氧菌感染以經(jīng)驗用藥為主：82目前可推薦的厭氧菌藥敏方法瓊脂稀釋法Etest法ATB-ANA試條目前可推薦的厭氧菌藥敏方法瓊脂稀釋法83報告方式無條件作生物特征鑒定的實驗室：三次耐氧試驗證明菌株只能在厭氧生長者可根據(jù)培養(yǎng)菌的染色形態(tài)報告有條件實驗室應將細菌鑒定報告到種報告方式無條件作生物特征鑒定的實驗室：84厭氧菌的保存冷凍真空干燥是最好的保存方法平皿傳代是較簡單且實用的方法將菌株接種布氏血瓊脂平板放入?yún)捬豕蓿ɑ虼┲蟹跸渲信囵B(yǎng)48小時放室溫陰涼處可保存兩個月厭氧菌的保存冷凍真空干燥是最好的保存方法85微生物檢驗標本采集與接種微生物檢驗標本采集與接種86內(nèi)容血培養(yǎng)尿培養(yǎng)痰培養(yǎng)膿液腦脊液前列腺STD厭氧培養(yǎng)內(nèi)容血培養(yǎng)87血培養(yǎng)增菌培養(yǎng)商品血培養(yǎng)瓶成人瓶、兒童瓶、中和抗生素瓶無菌操作采集血標本接種到培養(yǎng)瓶后，輕輕混勻以防血液凝固。立即送檢，切勿冷藏。采血量成人采血量是10～20ml，兒童1～5ml。血液和肉湯之比為1:5～1:10。35℃培養(yǎng)5-7天血培養(yǎng)增菌培養(yǎng)88微生物標本接種課件89微生物標本接種課件90體積%陽性血培養(yǎng)結果vs.采集的套數(shù)%99%89%80%真陽性20ml/套MayoClinicStudy體積%99%89%80%真陽性20ml/套MayoCli91用于培養(yǎng)的血液體積體重

磅

千克體積(ml)/穿刺總量/2次穿刺1%全血體積%總血液體積<19<9122ml1%19-309-14366-10ml1-3%31-6015-2751010-20ml1-2%61-9028-41102020-30ml1-2%>90>422040>40ml1-2%用于培養(yǎng)的血液體積體重體積(ml)/總量92采集血培養(yǎng)時間的重要性9%+14%+9%+11%+發(fā)熱高峰前12-2.5小時發(fā)熱高峰前2.5-0.5小時發(fā)熱高峰期間發(fā)熱高峰后1-12小時166病人105病人199病人258病人Thomsonetal.1991.ASCP.MayoClinicStudy采集血培養(yǎng)時間的重要性9%+14%+9%+11%+發(fā)93立即獲得足夠血液并且開始抗生素治療從不同部位獲得2-3套血培養(yǎng)(40-60ml血液)最好在5分鐘內(nèi)采集#1#2立即獲得足夠血液并且開始抗生素治療從不同部位獲得2-3套血培94確定檢測陽性的培養(yǎng)時間陽性報警時間確定檢測陽性的培養(yǎng)時間陽性報警時間95隨著時間推移敗血癥病原菌的變遷%住院患者血培養(yǎng)陽性結果#1

pathogenFromUW,MadisonandG.WashingtonUniv.,St.Louis隨著時間推移敗血癥病原菌的變遷%住院患者血培養(yǎng)陽性結果#196血培養(yǎng)存在的主要問題如果皮膚定植的細菌沒有被殺死，這些細菌將通過針頭被吸入血培養(yǎng)瓶并在瓶中生長這些細菌(主要為凝固酶陰性葡萄球菌)引起導管相關性敗血癥(住院患者血培養(yǎng)第一位)醫(yī)生不能將真的凝固酶葡萄球菌感染和皮膚定植菌“污染”相區(qū)分，因此他們用萬古霉素治療患者血培養(yǎng)存在的主要問題如果皮膚定植的細菌沒有被殺死，這些細菌將97皮膚凝固酶陰性葡萄球菌定植于輸液管皮膚凝固酶陰性葡萄球菌定植于輸液管98皮膚不是無菌的;定植細菌“污染”血培養(yǎng)皮膚不是無菌的;99葡萄球菌在塑料CVC表面生長形成生物膜葡萄球菌在塑料CVC表面生長形成生物膜100污染細菌血培養(yǎng)污染定義為在幾次血培養(yǎng)中單個血培養(yǎng)下列細菌陽性:凝固酶陰性葡萄球菌棒狀桿菌微球菌丙酸桿菌

芽孢桿菌污染細菌血培養(yǎng)污染定義為在幾次血培養(yǎng)中單個血培養(yǎng)下列細菌陽性101血培養(yǎng)污染vs.皮膚消毒%污染StudiesfromBaylor,Nashville,&France血培養(yǎng)污染vs.皮膚消毒%污染Studiesfrom102血培養(yǎng)一旦提示陽性結果，涂片行革蘭染色，根據(jù)鏡檢結果決定轉種羊血平皿及巧克力平皿上，并分別放置普通培養(yǎng)箱及CO2燭缸內(nèi)35℃～37℃孵育培養(yǎng)需氧和兼性厭氧菌；轉種布氏血瓊脂，厭氧環(huán)境培養(yǎng)厭氧菌；轉種沙保羅培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌。將革蘭染色結果立即向臨床電話初級報告。待細菌鑒定及藥敏結果出來后再向臨床發(fā)出最終報告。血培養(yǎng)103血液培養(yǎng)【特別提醒】

厭氧菌從血液中培養(yǎng)出厭氧菌的比率相對比較少，不推薦每個病人常規(guī)增加一個厭氧血培養(yǎng)，但如果必要，選用其配套的厭氧培養(yǎng)基來培養(yǎng)厭氧菌。

營養(yǎng)苛刻的細菌（FastidiousBacteria）布魯氏菌屬可以在常規(guī)血液培養(yǎng)基中生長，并且盡管可以在三天內(nèi)分離到，但是推薦培養(yǎng)21天，且有必要進行末次接種。HACEK群細菌—嗜泡沫嗜血桿菌（Haemphilusaphrophilus）、放線共生放線桿菌（Actinobacillusactinomycemcomitans）、人心桿菌(Cardiobacteriumhominis)、侵襲埃肯菌(Eikenelluscorrodens)和金氏桿菌（Kingellakingae）與細菌性心內(nèi)膜炎有關，常規(guī)血培養(yǎng)基中可以分離，但培養(yǎng)14天和進行肉湯末次接種會更有效。

血液培養(yǎng)【特別提醒】104血培養(yǎng)常規(guī)血液培養(yǎng)基不能分離鉤端螺旋體。分枝桿菌（Mycobacteria）使用常規(guī)血培養(yǎng)基不能分離。導管頭培養(yǎng)導管頭是為了明確細菌來源。最常用的方法是半定量的方法，方法是用5cm長的導管末端部分在血液瓊脂平板上滾動4次。培養(yǎng)物出現(xiàn)15個以上的菌落，提示有潛在的導管相關性感染。血培養(yǎng)常規(guī)血液培養(yǎng)基不能分離鉤端螺旋體。105導管相關感染的診斷敏感性和特異性檢測管腔內(nèi)的&外周細菌不需要移走導管可靠性和可重復性易操作快速回報感染的微生物可以分離對患者安全關鍵點:患者必須有菌血癥導管相關感染的診斷敏感性和特異性關鍵點:患者必須有菌血癥106檢測導管相關感染移走導管MakiRoll(半定量)超聲波降解和稀釋(定量)通過管腔抽吸(定量)保留導管管腔刷定量培養(yǎng)(CVC&外周血)達到陽性的時間(CVC&外周血)檢測導管相關感染移走導管107哪部分用于培養(yǎng)哪部分用于培養(yǎng)108Maki滾動法Maki滾動法109導管尖陽性培養(yǎng)結果導管尖陽性培養(yǎng)結果110苛養(yǎng)菌不要放置常規(guī)血培養(yǎng)>5天由如下微生物引起的可疑的敗血癥或心內(nèi)膜炎:霉菌(組織胞漿菌,

鐮刀菌,等等秕糠馬拉癬菌軍團菌屬巴爾通體新型隱球菌Q-熱惠普爾病支原體屬其他病原菌

3分離管咨詢ID醫(yī)生血清Ag凝集+分離培養(yǎng)苛養(yǎng)菌由如下微生物引起的可疑的敗血癥或心內(nèi)膜炎:3分離111干預措施可以減少導管相關性感染手消毒

用洗必泰進行皮膚消毒

在穿刺過程中完全無菌操作

鎖骨下靜脈穿刺

移去不必要的中央靜脈插管血管內(nèi)導管相關性感染預防指南.MMWRRecomRep2002:51(RR10)1-29soap干預措施可以減少導管相關性感染手消毒血管內(nèi)導管相關性感染預112尿道感染每年850萬例尿路感染,90%為女性1/2.5個婦女在一生中會得UTI下行性感染：血流腎臟膀胱（金黃色葡萄球菌，酵母菌，結核分枝桿菌）上行性感染：尿道膀胱腎盂血流尿道感染每年850萬例尿路感染,90%為女性113AnatomyofUrinaryTract

尿路的解剖圖側面圖膀胱恥骨子宮頸尿道輸卵管卵巢子宮陰道直腸肛門AnatomyofUrinaryTract

尿路的解剖114綜合病癥尿道炎或急性尿路綜合征膀胱炎-膀胱的炎癥腎盂腎炎-腎臟的炎癥

Age年齡5102030//60有癥狀的無癥狀的綜合病癥尿道炎或急性尿路綜合征Age年齡5115尿路感染病原菌尿路感染病原菌116大腸埃希菌與膀胱上皮細胞相互作用傘狀粘附膀胱上皮細胞大腸埃希菌與膀胱上皮細胞相互作用傘狀粘附膀胱上皮細胞117尿液運輸方法無需冷藏尿液運輸方法無需冷藏118有癥狀婦女的尿路感染診斷性試驗有癥狀婦女的尿路感染診斷性試驗119尿液革蘭染色-革蘭陰性桿菌尿液革蘭染色-革蘭陰性桿菌120傳統(tǒng)的尿培養(yǎng)使用校準過的接種環(huán)(0.001or0.01ml)垂直插入裝有尿液的無菌容器中

在瓊脂平板上分區(qū)劃線：血平皿，麥康凱平皿或CLED平皿大多數(shù)尿路病原菌能在血平皿上生長麥康凱平皿有鑒別功能，為革蘭陰性桿菌的選擇性培養(yǎng)基傳統(tǒng)的尿培養(yǎng)使用校準過的接種環(huán)(0.001or0.01121尿培養(yǎng)的劃線方式第一區(qū)=50,000cfu/ml第二區(qū)=75,000cfu/ml第三區(qū)=100,000cfu/ml沿中心線向下=50,000cfu/ml長向邊緣=100,000cfu/ml尿培養(yǎng)的劃線方式第一區(qū)=50,000cfu/ml沿中心122

尿培養(yǎng)的培養(yǎng)基5%血平皿（美國用羊血，歐洲用馬血）伊紅美蘭平皿（EMB）大腸埃希菌為金屬綠麥康凱平皿–LFvsNLF胱氨酸-乳糖-低電解質平皿（CLED）顯色平皿(BBL公司的CHROMagar，HardyBluEcoliBiplate)CUTI（Oxoid公司）;CPSID2（生物梅里埃公司）;UriSelect（Biorad公司）;Rambach;others

尿培養(yǎng)的培養(yǎng)基5%血平皿（美國用羊血，歐洲用馬血）123蛋白胨，酵母提取物，色原物科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（BBL）大腸埃希菌腸球菌無乳鏈球菌腐生葡萄球菌蛋白胨，酵母提取物，色原物科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（BBL）大腸埃希124同樣的接種物在科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（BBL）上生長大腸埃希菌，腸球菌和變形桿菌在血平皿上生長CHROMagar?Orientation(BBL)同樣的接種物在科瑪嘉顯色培養(yǎng)基（BBL）上生長大腸埃希菌，腸125chromIDCPS-生物梅里埃公司的產(chǎn)品快速鑒定大腸埃希菌，變形桿菌和腸球菌可分離所有尿道病原菌更好的可操作性更好的鑒定能力更高的可靠性chromIDCPS-生物梅里埃公司的產(chǎn)品快速鑒定大腸埃126尿培養(yǎng)【操作步驟】1．培養(yǎng)皿放置至室溫，先充分搖勻尿液2．用1μl定量接種環(huán)或用微量移液器無菌吸取10ul尿液接種于羊血平皿和MAC上，然后用無菌接種環(huán)劃線涂布，置35℃，最好在5～10％co2環(huán)境下，孵育18～24小時3．次日觀察結果，根據(jù)診斷標準進行診斷，陽性結果做細菌鑒定和藥敏。尿培養(yǎng)【操作步驟】127尿培養(yǎng)【定量標準】用1μl接種環(huán)，結果×1000cfu/ml；用10μl接種環(huán)，結果×100cfu/ml。菌計≥10萬cfu/ml，繼續(xù)鑒定和藥敏。降低標準的情況：幼兒、兒童或男性的確定的尿路感染，其尿標本定量也可＜10萬cfu/ml；插導管的患者、最近用過抗生素者、大量喝水者、伴發(fā)膿尿和有癥狀者、有尿路阻塞或由于血源性傳播而患有腎盂腎炎者，其尿標本定量也可＜10萬cfu/ml；患有尿道綜合征的性活躍的年輕女性，其尿標本定量也可＜100cfu/ml。尿培養(yǎng)【定量標準】128評價尿培養(yǎng)的標準病人標本特征有意義的菌落形成單位/ml（非皮膚污染）無癥狀者清潔留取100,000有癥狀者，不固定的清潔留取10,0001-2種機會致病菌。若多于2種則認為尿液被污染有癥狀者，性活躍女性清潔留取100個純菌落腸桿菌科菌男性清潔留取1000個機會致病菌任何人內(nèi)置導尿管100,000任意數(shù)量機會致病菌任何人通過直接導管獲得100任意數(shù)量機會致病菌任何人通過外科手術從腎臟獲得任意數(shù)量（肉湯增菌，厭氧菌）任何人Percutaneousbladdertap經(jīng)皮膀胱吸取任意數(shù)量（肉湯增菌，厭氧菌）任何人Any任何標本任何數(shù)量金黃色葡萄球菌不同人有爭議任何數(shù)量的酵母菌評價尿培養(yǎng)的標準病人標本特征有意義的菌落形成單位/ml（非皮129尿培養(yǎng)-注意事項標本留取嚴格執(zhí)行無菌操作。不要將尿液標本接種于增菌肉湯培養(yǎng)基中。清潔中段尿標本不要進行離心處理。尿液標本原則上不做厭氧培養(yǎng)。尿液收集后應立即送檢，不能送檢者可置4℃～8℃冰箱儲藏，儲存時間≤24小時。患者應在用藥前或停用抗生素后至少三天留取尿液，尿液中勿加防腐劑。尿培養(yǎng)-注意事項130痰培養(yǎng)-操作步驟取適量痰液化劑放入痰標本盒內(nèi)混勻放置30分鐘，

用無菌環(huán)挑2～3環(huán)標本，分區(qū)劃線接種于羊血平皿或沙保培養(yǎng)基上、Mac置35℃孵育18～24小時,巧克力平板5％co235℃孵育18～24小時。觀察結果，根據(jù)細菌生長情況進行鑒定及藥敏。挑取膿液部分涂片，革蘭染色鏡檢。判斷標本是否合格。痰培養(yǎng)-操作步驟131痰培養(yǎng)-操作步驟痰標本涂片染色顯微鏡檢查的分類：判斷標準比較簡單的方法就是確定鱗狀上皮細胞數(shù)量：細胞數(shù)＞10/低倍視野，說明混有痰液。細胞數(shù)/低倍視野WBC＜10鱗狀上皮細胞＞25不合格WBC

10～25鱗狀上皮細胞＞25不合格WBC＞25鱗狀上皮細胞＞25不合格WBC＞25鱗狀上皮細胞10～25可接受WBC＞25鱗狀上皮細胞≤10合格WBC≤25鱗狀上皮細胞≤25可接受?痰培養(yǎng)-操作步驟痰標本涂片染色顯微鏡檢查的分類：判斷標準132用革蘭氏染色來評估呼吸道標本是否合格>10鱗狀上皮細胞/LPF——拒收！彈性纖維，中性粒細胞多，鱗狀上皮細胞少，有代表性的好標本用革蘭氏染色來評估呼吸道標本是否合格>10鱗狀上皮細胞/LP133形態(tài)學鑒別要訣——球菌革蘭陰性雙球菌——腎型豆子樣，平行縱軸排列=奈瑟菌屬革蘭陽性雙球菌——拉長，單個縱軸，末端呈點狀（柳葉刀狀）=鏈球菌（肺炎鏈球菌）形態(tài)學鑒別要訣——球菌革蘭陰性雙球菌——腎型豆子樣，平行縱軸134實際革蘭氏染色革蘭陰性雙球菌：在生殖道標本或腦脊液中多為奈瑟菌屬；在下呼吸道分泌物中提示為卡他莫拉菌革蘭陽性雙球菌提示肺炎鏈球菌實際革蘭氏染色革蘭陰性雙球菌：在生殖道標本或腦脊液中多為奈瑟135形態(tài)學鑒別要訣——球菌革蘭陽性球菌成對，成鏈——較小、拉長的、從不4聯(lián)排列=鏈球菌屬革蘭陽性球菌呈堆排列，通常很圓，細胞較大，不拉長，可成對，但鏈不超過4個細胞?？赡芤蛎撋^度呈革蘭陰性。但如果不是腎型話不可能為革蘭陰性菌。形態(tài)學鑒別要訣——球菌革蘭陽性球菌成對，成鏈——較小、拉長的136鏈狀的革蘭陽性球菌：提示鏈球菌短鏈，<6個細胞，提示腸球菌或B群鏈球菌；肺炎鏈球菌血培養(yǎng)中長鏈的革蘭陽性球菌（>6個細胞）提示化膿鏈球菌或草綠色鏈球菌革蘭氏陽性球菌鏈狀的革蘭陽性球菌：提示鏈球菌血培養(yǎng)中長鏈的革蘭陽性球菌（>137更多的革蘭氏染色形態(tài)學呈堆或四聯(lián)排列的革蘭陽性球菌提示葡萄球菌更多的革蘭氏染色形態(tài)學呈堆或四聯(lián)排列的革蘭陽性球菌提示葡萄球138革蘭陽性桿菌的形態(tài)學鑒別要訣革蘭氏陽性桿菌可以很規(guī)則，如果是需氧菌則非?？赡苁茄堪麠U菌屬，如果是厭氧則非常可能是梭菌屬。如果很小，可能是不呈鏈狀的李斯特菌屬，如果呈鏈狀則很可能是乳酸桿菌屬。革蘭陽性不規(guī)則的桿菌（多形態(tài)），一端比另一端粗。常相互吸附或呈籬笆樣排列=棒狀桿菌屬或丙酸桿菌屬革蘭陽性桿菌的形態(tài)學鑒別要訣革蘭氏陽性桿菌可以很規(guī)則，如果是139細胞內(nèi)細菌細胞內(nèi)細菌140革蘭陰性雙球菌革蘭陰性雙球菌141多形態(tài)提示混合厭氧菌感染多形態(tài)提示混合厭氧菌感染142外型奇特的酵母菌，不像米老鼠的耳朵或白色念珠菌橢圓形孢子。報告“真菌成分和酵母樣細胞”。不要遺忘革蘭陰性桿菌。外型奇特的酵母菌，不像米老鼠的耳朵或白色念珠菌橢圓形孢子。報143痰培養(yǎng)-特別提醒洋蔥伯克霍爾德菌是一種重要的呼吸道致病原，可引起囊性纖維化。常規(guī)培養(yǎng)基中生長良好。諾卡菌（Nocardiaspp）諾卡菌是一種重要的呼吸道致病菌。培養(yǎng)的標本應立即進行實驗室檢查，如果延遲時間不長，4℃保存也可以接受。標本革蘭染色檢查，可以發(fā)現(xiàn)小的革蘭陽性菌，外觀呈分枝狀、絲狀或球狀。沒有特異的培養(yǎng)諾卡菌的培養(yǎng)基，可用心浸液沙氏葡萄糖瓊脂、腦心浸液瓊脂、羊血瓊脂或胰蛋白大豆瓊脂。25-37℃孵育3周，37℃更好。鼻咽部—金黃色葡萄球菌確定金黃色葡萄球菌帶菌者，用聚酯頭拭子從前鼻孔取鼻咽分泌物，接種5％羊血，35℃孵育2d。痰培養(yǎng)-特別提醒144痰培養(yǎng)-特別提醒鼻咽部—腦膜炎奈瑟菌采集鼻咽拭子標本，接種血瓊脂、巧克力瓊脂或MTM培養(yǎng)基，5％CO2的潮濕環(huán)境，35℃孵育72h。喉—A群鏈球菌喉部標本最常用于診斷A群鏈球菌喉炎，標本接種血瓊脂5～10％CO2環(huán)境，35℃孵育48h。痰培養(yǎng)-特別提醒鼻咽部—腦膜炎奈瑟菌145腦脊液-操作步驟將腦脊液標本經(jīng)離心（≥1500g，15min）后，將上清液倒入消毒的試管，留下0.5ml沉淀和液體，充分混勻。無菌吸取標本20～30ul分別劃線接種于羊血平皿、巧克力平皿，分別置燭缸和普通培養(yǎng)箱內(nèi)35℃孵育24～48小時。應同時制備涂片，革蘭染色鏡檢。觀察結果，有細菌生長者進行細菌鑒定和藥敏。腦脊液-操作步驟146腦脊液-操作步驟也可將腦脊液標本注入增菌培養(yǎng)瓶內(nèi)先行增菌培養(yǎng)，具體操作參見血液培養(yǎng)。采集CSF是為了診斷腦膜炎，細菌性腦膜炎分為急性和慢性兩種。急性腦膜炎在感染后24h內(nèi)產(chǎn)生癥狀，通常由化膿性細菌引起，最可能的病原菌根據(jù)患者年齡和疾病是否由社區(qū)或醫(yī)院感染而有變化。包括：B群鏈球菌、腦膜炎奈瑟菌、大腸埃希菌、肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌等。慢性腦膜炎（癥狀持續(xù)至少4周）的典型致病菌包括：結核分枝桿菌、梅毒螺旋體、布魯氏菌、問號鉤端螺旋體和博氏疏螺旋體。腦脊液離心涂片抗酸染色，應用3000～3600g30min。厭氧菌很少引起腦膜炎，因此不需要對腦脊液常規(guī)進行厭氧菌培養(yǎng)。厭氧菌常與腦膿腫形成、硬腦膜下積膿和硬腦膜外膿腫有關。腦脊液-操作步驟147膿液培養(yǎng)-標本要求臨床醫(yī)生根據(jù)需要無菌操作取材，比較理想的方法是用注射器抽取膿性物質。從膿腫底部或膿腫壁的取樣，效果最好。如果不能獲得抽取物，也可以用拭子從傷口深處采集滲出物，至少采集兩個拭子，一個用于涂片染色，一個用于培養(yǎng)。厭氧培養(yǎng)最好不用拭子。將采集的標本置于無菌試管內(nèi)，立即送檢。厭氧培養(yǎng)標本取材應迅速、準確，禁止接觸空氣，盛標本容器內(nèi)要排盡空氣膿液培養(yǎng)-標本要求148膿液培養(yǎng)【標本處理】標本劃線接種于羊血平皿，35℃孵育24～48小時。同時涂片革蘭染色。厭氧培養(yǎng)接種布氏血瓊脂，厭氧環(huán)境培養(yǎng)。觀察結果，有細菌生長者進行細菌鑒定和藥敏。膿液培養(yǎng)【標本處理】149前列腺培養(yǎng)【標本要求】

首先用無菌等滲鹽水的拭子洗凈尿道口。

由臨床醫(yī)生行前列腺按摩術留取標本于無菌試管內(nèi)，立即送檢?！緲吮咎幚怼?/p>

將標本劃線接種于羊血平皿，35℃孵育24～48小時。觀察結果，有細菌生長者進行細菌鑒定和藥敏?！咀⒁馐马棥苛羧吮咀⒁獗苊馕廴?。疑為性傳播疾病做相應的STD培養(yǎng)。前列腺培養(yǎng)【標本要求】150淋球菌培養(yǎng)【操作步驟】待檢物劃線接種于專用MTM平皿上，將接種好的平皿置燭虹中置35℃溫箱孵育48小時；取出平皿，挑取可疑菌落進行鑒定；

鑒定：涂片革蘭染色；氧化酶試驗；β－內(nèi)酰胺酶試驗；生長試驗；糖發(fā)酵試驗。淋球菌培養(yǎng)【操作步驟】151支原體培養(yǎng)從4~10℃冰箱中取出所需數(shù)量地培養(yǎng)基瓶，恢復液及鑒別、定量、藥敏板，使其在接種前接近室溫。旋下外蓋，取下丁基橡膠內(nèi)塞，然后擠滴加入恢復液，培養(yǎng)基迅速融解、表面至標簽上緣處（約1.8ml）應隨即、直接往培養(yǎng)基瓶接種標本（如果延遲接種，則標本置室溫不超過2小時；在4~10℃時不超過8小時）混勻后，從瓶內(nèi)分別取50微升（1大滴）加到鑒別、定量、藥敏板的每一小孔中然后，在每孔正中上方，準確、擠滴加入一滴石蠟油。將鑒別、定量、藥敏板置36℃孵育箱中培養(yǎng)12小時后，即可開始觀察結果;不見陽性者，則連續(xù)培養(yǎng)時間應延長至48小時結束。支原體培養(yǎng)152臨床細菌室厭氧菌培養(yǎng)基本程序厭氧培養(yǎng)基本設備厭氧標本采集和運送步驟厭氧菌的分離和鑒定步驟厭氧菌的報告厭氧菌的藥敏試驗厭氧菌的菌種保存臨床細菌室厭氧菌培養(yǎng)基本程序厭氧培養(yǎng)基本設備153