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基因工程的基本操作程序1精選2021版課件思考:轉基因抗蟲棉的大致培育過程?
基因工程的基本操作程序一、目的基因的獲取二、基因表達載體的構建三、將目的基因導入受體細胞四、目的基因的檢測與鑒定2精選2021版課件一、目的基因的獲取主要是編碼蛋白質(zhì)的結構基因現(xiàn)代獲取方法:1、從基因文庫中獲取目的基因2、利用PCR技術擴增目的基因3、化學方法人工合成初始目的基因的來源從生物中直接獲取人工合成3精選2021版課件外顯子內(nèi)含子與RNA聚合酶結合位點編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)與RNA聚合酶結合位點編碼區(qū)原核生物基因真核生物基因4精選2021版課件1、從基因文庫中獲取目的基因將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷,導入到受體菌的群體中,各個受體菌分別含有這種生物的不同基因,稱為基因文庫?;蛭膸?/p>
基因組文庫部分基因文庫(CDNA文庫)5精選2021版課件某生物體內(nèi)全部DNA
許多DNA片段受體菌群體1、從基因文庫中獲取目的基因限制酶與運載體連接導入基因組文庫某種生物某個時期的mRNAcDNA反轉錄受體菌群體與運載體連接導入部分基因文庫(cDNA文庫)6精選2021版課件2、利用PCR技術擴增目的基因聚合酶鏈式反應,在生物體外復制特定DNA片段的核酸合成技術??梢垣@得大量的目的基因。7精選2021版課件循環(huán)變性退火延伸8精選2021版課件二.基因表達載體的構建-----------核心9精選2021版課件基因表達載體的構建過程質(zhì)粒DNA分子限制酶處理兩個切口獲得目的基因DNA連接酶重組DNA分子(重組質(zhì)粒)同一種一個切口兩個黏性末端10精選2021版課件復制原點+啟動子+目的基因+終止子+標志基因基因表達載體的組成11精選2021版課件三、將目的基因導入受體細胞轉化常用的受體細胞:有大腸桿菌、枯草桿菌、土壤農(nóng)桿菌、酵母菌和動植物細胞等。將目的基因導入受體細胞的原理借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。12精選2021版課件三、將目的基因導入受體細胞1.將目的基因導入植物細胞----農(nóng)桿菌轉化法轉化農(nóng)桿菌轉化法基因槍法花粉管通道法13精選2021版課件三、將目的基因導入受體細胞1.將目的基因導入植物細胞轉化農(nóng)桿菌轉化法基因槍法花粉管通道法2.將目的基因導入動物細胞顯微注射技術提純基因表達載體體外顯微注射入受精卵受精卵移植14精選2021版課件三、將目的基因導入受體細胞1.將目的基因導入植物細胞轉化農(nóng)桿菌轉化法基因槍法花粉管通道法2.將目的基因導入動物細胞顯微注射技術3.將目的基因導入微生物細胞Ca2+處理15精選2021版課件四、目的基因的檢測與鑒定檢測—鑒定——①檢測轉基因生物染色體的DNA上是否插入了目的基因②檢測目的基因是否轉錄出了mRNA③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等DNA分子雜交分子雜交(注意與上不同之處)抗原—抗體雜交16精選2021版課件基因工程的基本操作程序目的基因的獲取基因表達載體的構建將目的基因導入受體細胞目的基因的檢測與鑒定1、從基因文庫中獲取目的基因2、利用PCR技術擴增目的基因3、化學方法人工合成復制原點+目的基因+啟動子+終止子+標記基因農(nóng)桿菌轉化法、基因槍法、花粉管通道法、顯微注射法、Ca2+處理法DNA分子雜交技術、分子雜交技術、抗原—抗體雜交技術分子檢測外的個體水平鑒定17精選2021版課件鞏固練習:1.人們常選用的細菌質(zhì)粒分子往往帶有一個抗生素抗性基因,該抗性基因的主要作用是()A.提高受體細胞在自然環(huán)境中的耐藥性B.有利于對目的基因是否導入進行檢測C.增加質(zhì)粒分子的分子量D.便于與外源基因連接2.在遺傳工程技術中,限制性內(nèi)切酶主要用于()A.目的基因的提取和導入B.目的基因的提取和檢測C.目的基因與載體的結合和導入D.目的基因的提取與載體結合BD18精選2021版課件3.在遺傳工程技術中,下列何種目的基因一般以直接分離的方法獲得()A.人的胰島素基因B.蠶的蠶絲蛋白基因C.芽孢桿菌的抗蟲基因D.菜豆儲藏蛋白基因4.1976年,美國的科學家首次將人的生長抑制素釋放因子的基因轉移到大腸桿菌,并獲得了表達,此文中的表達是指該基因在大腸桿菌()A.能進行DNA復制B.能傳遞給細菌后代C.能合成生長抑制素釋放因子D.能合成人的生長素CC19精選2021版課件5.基因工程是在DNA分子水平上進行設計施工的,在基因操作的基本步驟中,不進行減基互補配
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