藥物動(dòng)力學(xué)-第3章-生物利用度與生物等效性課件

第三章生物利用度與生物等效性

第一節(jié)生物利用度一、生物利用度(Bioavailability)的定義廣義定義：生物利用度包括藥物在用藥部位被吸收進(jìn)入血液循環(huán)中的速率和程度。狹義定義：一般生物利用度指的是吸收程度，用F表示。

一個(gè)藥物的吸收程度雖然為100%，但如果吸收速率太慢，在血液中也難以達(dá)到有效血藥濃度，那么必然要改變劑型或用藥方式。假設(shè)一種藥物吸收速率太大，在短時(shí)就達(dá)到高峰濃度，甚至發(fā)生中毒，而有效血藥濃度維持較短，同樣必須改變用藥方式，或改變藥物劑型。反映一個(gè)藥物的吸收速率參數(shù)有Ka、Cp、tp。反映一個(gè)藥物的吸收程度的參數(shù)為F。第三章生物利用度與生物等效性

一、生物利用度(Bioava1狹義的生物利用度（吸收程度）的藥動(dòng)學(xué)定義有以下兩種（一）絕對(duì)生物利用度定義：血管外途徑給藥的待測制劑的AUC和該藥物靜注后的AUC兩者之比值。

（4.1）因?yàn)橐造o注藥物后的AUC代表100%的進(jìn)入血液中的藥物量，AUC與體內(nèi)藥量成正比關(guān)系，由于血管外途徑給藥，藥物在給藥部位有部分殘留沒有吸收進(jìn)入血液。因此，血管外途徑給藥的AUC恒≤AUCi.v.（靜脈給藥后藥時(shí)曲線下面積）。狹義的生物利用度（吸收程度）的藥動(dòng)學(xué)定義有以下兩種因2（二）相對(duì)生物利用度定義：指兩個(gè)或兩個(gè)以上處方配成相同制劑的藥物相互間AUC之比值，以及兩者吸收速率參數(shù)Ka，Cp，tp之比。研究相對(duì)生物利用度可作為部分代替臨床藥效學(xué)的研究，確定有效成分相同含量也相同的兩個(gè)或多個(gè)藥物處方是否在治療上等效。

這樣做可行的前提假設(shè)是，對(duì)于兩個(gè)處方，若它們的有效成分被體循環(huán)利用的速度與程度差別不大時(shí)，則它們的治療效果也不會(huì)有差異，相對(duì)生物利用度的數(shù)學(xué)定義：（4.2）其中AUCt為被檢制劑的藥時(shí)曲線下面積；AUCs為標(biāo)準(zhǔn)制劑藥時(shí)曲線下面積。

（二）相對(duì)生物利用度這樣做可行的前提假設(shè)是，對(duì)于兩個(gè)處3血藥濃度時(shí)間CpCptptp相對(duì)生物利用度研究的問題是制劑的“等效”問題，即供試處方與標(biāo)準(zhǔn)品是否等效。例：同一藥物二種不同制劑，雖然它們AUC相等，但它們的藥效顯然是不一致的。圖4-1兩種制劑相對(duì)生物利用度的比較從圖4-1左邊圖可知，制劑A的最高血藥濃度Cp太高，超過了最小中毒濃度（MTC），會(huì)導(dǎo)致機(jī)體中毒；從圖4-1右邊圖可知，制劑B的最高血藥濃度Cp低于有效血藥濃度（MEC），無治療效果。部分藥物的有效血藥濃度見表4-1。部分藥物的中毒血藥濃度與致死血藥濃度見表4-2。血藥濃度時(shí)間CpCptptp相對(duì)生物利用度研究的問題是制劑的4表4-1藥物治療有效血藥濃度藥物治療濃度（μg/ml）度冷?。―olantin）0.6-0.75乙氯戍炔醇（Ethchlorcynol）4-6去甲替林（Nortriptyline）0.015-0.035嗎啡（Morphine）0.01-0.1炔乙蟻胺（Ethinamate）5-10乙醚（Ethylether）900-1000噻吩甲吡胺（Methapriline）2-4甲乙哌啶酮（Methyprylone）10呋喃旦啶（Furadantin）1-2表4-1藥物治療有效血藥濃度藥物治療濃度（μ5表4-2部分藥物的中毒血藥濃度與致死血藥濃度藥物中毒濃度（μg/ml）致死濃度（μg/ml）苯海拉明10—導(dǎo)眠能10-8030-100丙咪嗪0.72鋰鹽13.513.9-34.7哌替啶530眠爾通100200美散痛24噻吩甲吡胺30-5050表4-2部分藥物的中毒血藥濃度與致死血藥濃度藥物中6四、生物利用度計(jì)算的校正

藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中，其試驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn)出有明顯的種屬差異與個(gè)體差異性。且一個(gè)動(dòng)物在接受兩種不同處理時(shí)，必然存在著時(shí)間上的差異，這與動(dòng)物機(jī)體生理生化的變化密切相關(guān)，包括代謝酶的誘導(dǎo)與抑制。

用單劑量給藥法來測定藥物的生物利用度是目前最常用的方法，其基本公式為

（4.34）

（4.35）其中Fs為絕對(duì)生物利用度，F(xiàn)r為相對(duì)生物利用度，和分別表示非血管途徑給藥和靜注注射給藥后從0-∞的藥時(shí)曲線面積。

四、生物利用度計(jì)算的校正用單劑量給藥法來測定藥物的生物利7目前較常用的是半衰期（t1/2）校正法，kwan-Till校正法和劑量校正法。（一）劑量校正法用基本公式求算生物利用度時(shí)，一個(gè)最基本的前提是要求兩種處理的劑量一致。而有時(shí)特別是在測定絕對(duì)生物利用度時(shí)，由于某些藥物在進(jìn)行非靜脈給藥時(shí)，由于吸收很低，在藥物分析時(shí)不靈敏或不方便，往往提高劑量，而靜注較大的劑量時(shí)，可能引起動(dòng)物機(jī)體發(fā)生中毒等一些不良反應(yīng)，造成靜注與非靜注給藥劑量不一致。此時(shí)，必須作劑量校正。

（4.36）其中Dv和Dnv分別表示靜注給藥劑量與非靜注給藥劑量。目前較常用的是半衰期（t1/2）校正法，kwan-Till校8（二）半衰期校正法Dost面積律可用下面公式表示：AUC=FD/CLb（4.37）根據(jù)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)總體清除率的計(jì)算公式可知

（4.38）

（4.39）因此，只有當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品或靜注給藥的總體消除率（CLb）s與供試品（或血管外途徑給藥）的總體消除率（CLb）t相等及標(biāo)準(zhǔn)品的劑量和供試品的劑量相等時(shí)，才存在通常所習(xí)用的生物利用度基本公式。和（二）半衰期校正法因此，只有當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品或靜注給藥的總體消除率（9在藥物動(dòng)力學(xué)生物利用度的測定時(shí)，其靜注劑量和非血管給藥途徑劑量，或者受試制劑與標(biāo)準(zhǔn)制劑的劑量均可人為控制令其相等。但通常不可能保證兩種處理后，其藥物在體內(nèi)的消除完全相等。即（CLb）t和（CLb）s可能因環(huán)境變化或時(shí)間變化而發(fā)生較大的改變。此時(shí)：

（4.40）

其中k和V分別表示藥時(shí)曲線尾端直線相斜率相關(guān)的最慢的消除速率常數(shù)和表觀分布容積。若為多室模型時(shí)，k在雙室和三室模型中表示β，V為分布達(dá)到平衡時(shí)的表觀分布容積，即Vd，由于同一種藥物在機(jī)體內(nèi)的分布相對(duì)比較一致，制劑的改變對(duì)其在體內(nèi)特別是分布達(dá)到平衡的分布影響不大。

因此，生物利用度可用下列公式表達(dá)。

（4.41）式中t1/2表示消除半衰期。

在藥物動(dòng)力學(xué)生物利用度的測定時(shí)，其靜注劑量和非血管給藥途徑劑10第二節(jié)獸藥生物等效性一、基本概念近年來，獸藥生物等效性（Veterinarydrugbioequivalence）的評(píng)價(jià)已越來越引起全世界特別是歐美等國的獸藥管理和監(jiān)測部門的關(guān)注。在美國藥品管理法規(guī)中說明，兩種藥物產(chǎn)品或制劑的生物利用度（Bioavailability）相等時(shí)，即這兩種藥物制劑的生物等效性相同。

歐共體有關(guān)獸醫(yī)法規(guī)中將獸藥生物等效性定義為：在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，兩種獸藥制劑中的活性成份的生物利用度均值之差經(jīng)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)差異不顯著。歐共體有關(guān)醫(yī)藥法律中將藥品生物等效性進(jìn)行了更具體的定義，即藥物的等效性是指一種藥物的兩種不同制劑，使用等克分子劑量后的生物利用度（包括吸收速率和吸收程度）相等。

第二節(jié)獸藥生物等效性歐共體有關(guān)獸醫(yī)法規(guī)中將獸藥生物11

從藥劑學(xué)上講，兩者是藥劑等效劑（PharmaceuticalEquivalents），兩者又是藥劑替換劑（PharmaceuticalAlternatives）。藥劑等效劑的定義為同一劑型中含有等量的同一活性組分的產(chǎn)品，并不要求有相同的非活性成分，它應(yīng)符合該劑型的一般要求或其他質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如強(qiáng)度，純度，均勻性，崩解時(shí)間或溶解速率。藥劑替換劑是指含有相同的治療活性藥物分子或前體的不同劑型或制劑。

藥劑等效劑的定義為同一劑型中含有等量的同一活性組分的產(chǎn)品，并不要求有相同的非活性成分，它應(yīng)符合該劑型的一般要求或其他質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如強(qiáng)度，純度，均勻性，崩解時(shí)間或溶解速率。藥劑替換劑是指含有相同的治療活性藥物分子或前體的不同劑型或制劑。從藥劑學(xué)上講，兩者是藥劑等效劑（Pharmaceut12對(duì)藥物的生物等效性進(jìn)行定義都是依據(jù)一個(gè)基本假設(shè)，如果藥物的吸收速率和吸收程度相同，則藥物在血漿中的濃度與時(shí)間的曲線也相同，則可以推論，生物利用度相同某種藥物的兩種不同制劑所產(chǎn)生的治療作用或者是毒副作用的也必然相同。因此，生物等效性可以定義為：一種藥物的兩種不同的制劑（產(chǎn)品）在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，無論是單劑量還是多劑量給藥，在使用等克分子藥物劑量時(shí)，其吸收速率和吸收程度相等。對(duì)藥物的生物等效性進(jìn)行定義都是依據(jù)一個(gè)基本假設(shè)，如果13在實(shí)際工作中要求進(jìn)行生物等效性研究的情況有如下幾種：治療指數(shù)較窄的藥物產(chǎn)品，即半數(shù)致死量與半數(shù)有效量的比值小于2，或者血液中最小中毒濃度與最小有效濃度之比小于2；根據(jù)藥物的理化特性，對(duì)某些藥物的不同劑型要求測定其生物等效性，其中包括在水中溶解度很?。?lt;5mg/ml）的藥物；應(yīng)用法定方法測定藥物的溶解速率，在30分鐘內(nèi)溶解小于50%的藥物；有效組份的多晶型及溶劑化物藥物；藥物產(chǎn)品中的賦形劑較多，與主要有效成份間的比例大于5的藥物；存在特殊吸收部位或者吸收部位被利用的藥物少于50%的藥物；在吸收時(shí)，藥物在腸壁及肝臟中迅速發(fā)生生物轉(zhuǎn)化，或者腸道中不穩(wěn)定，需要專門制成包衣或制成一定制劑或劑型的藥物。在實(shí)際工作中要求進(jìn)行生物等效性研究的情況有如下幾種：14二、確定藥物的生物等效性的試驗(yàn)方法通常比較同一藥物的兩種不同制劑的生物等效性包括四種試驗(yàn)類型：①體外溶解試驗(yàn)；②確定原藥或其活性代謝物血藥濃度與時(shí)間函數(shù)關(guān)系的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)；③確定原藥或其活性代謝產(chǎn)物的作用強(qiáng)度與時(shí)間函數(shù)關(guān)系的藥效動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)；④臨床治療結(jié)果試驗(yàn)（Clinialend-points）。二、確定藥物的生物等效性的試驗(yàn)方法15（一）溶解試驗(yàn)假設(shè)藥物溶解是一個(gè)限速過程，藥物的吸收又非劑量依賴型，那么固體劑型特別是片劑的溶解時(shí)間就是影響藥物在胃腸道內(nèi)吸收的主要因素。此時(shí)如果兩種劑型的溶解時(shí)間有顯著性差異，則表明它們不具有生物等效性。

測定藥劑溶解速率的方法有Levy’s燒杯法、籃架裝置Pernarowski法及膜濾法。由美國藥典（USP）提出的轉(zhuǎn)籃法對(duì)有關(guān)藥物規(guī)定了測定的溫度、溶解的介質(zhì)（如蒸餾水、人工胃液、人工腸液）、籃子的轉(zhuǎn)速（60-150rpm）、終止時(shí)藥物溶解的百分率，這些條件是根據(jù)藥物的內(nèi)在性質(zhì)及溶解特性來確定的。凡是參照USP質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品也必須根據(jù)要求進(jìn)行溶解試驗(yàn)，藥物必須在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)溶解。如潑尼松龍片在100rpm時(shí)，10分鐘內(nèi)應(yīng)溶解60%。

（一）溶解試驗(yàn)16（二）藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)血藥濃度在評(píng)價(jià)藥品生物等效性中起著核心作用。因?yàn)橥凰幬锏膬煞N不同制劑，給動(dòng)物機(jī)體用藥后，表現(xiàn)有相同的血藥濃度——時(shí)間曲線，則兩者所產(chǎn)生的藥效學(xué)、毒理學(xué)和臨床效果將是相同的。在理論上和實(shí)踐上，現(xiàn)今都是依賴于血漿中原藥的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)對(duì)藥物的生物等效性進(jìn)行比較和評(píng)價(jià)的。當(dāng)存在對(duì)主要無活性代謝產(chǎn)物的分析測定方法而沒有對(duì)母藥的測定方法時(shí)，血漿中藥物的代謝物濃度也可用于評(píng)價(jià)藥品的生物等效性，這種方法只得到歐共體的許可，在美國不被使用。當(dāng)母藥是作為活性前體物質(zhì)而在體內(nèi)又能極快地較變成活性代謝物時(shí)，可通過測定血漿中的代謝物來評(píng)價(jià)藥品的生物等效性，這一方法在歐洲和美國都得到許可。獸藥的生物等效性多采用血藥藥物動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)行評(píng)價(jià)，極少采用尿藥藥物動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)行比較分析。（二）藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)當(dāng)存在對(duì)主要無活性17（三）藥效動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)生物等效性可通過比較被吸收進(jìn)入到體內(nèi)的藥物與其所產(chǎn)生的藥理效應(yīng)的量效反應(yīng)進(jìn)行確定。但至目前為止，還沒有提出通過量效反應(yīng)的藥效動(dòng)力學(xué)參數(shù)表征生物等效性的具體方法。兩種制劑某一個(gè)效應(yīng)的一致性并不能保證其他效應(yīng)也呈等量平行反應(yīng)，在生物等效性研究中，怎樣選擇適當(dāng)?shù)男?yīng)指標(biāo)是十分困難的。某些藥物作用的最大效應(yīng)可能在極低的血藥濃度下就表現(xiàn)出來，這樣兩種在吸收具有明顯差異的制劑可能表現(xiàn)出相等的效應(yīng)強(qiáng)度。（三）藥效動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)18（四）臨床治療試驗(yàn)從理論上講，通過比較藥物的臨床治療效果來評(píng)價(jià)藥物的生物等效性，即臨床治療效果相等的藥物其生物等效性相同是可行的。值得說明的是，臨床治療是確定藥物制劑生物等效性試驗(yàn)中最不適當(dāng)?shù)姆椒?。因?yàn)榕R床治療試驗(yàn)所產(chǎn)生的試驗(yàn)誤差較多，如動(dòng)物個(gè)體發(fā)病的嚴(yán)重程度，病程，動(dòng)物的年齡，性別等都可能對(duì)一個(gè)藥物的臨床治療效果產(chǎn)生極大的影響，由于試驗(yàn)結(jié)果所受的隨機(jī)誤差因素較多，作出一個(gè)正確的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)?zāi)Ｐ褪掷щy。因此獸藥生物等效性一般不用臨床治療試驗(yàn)評(píng)價(jià)。（四）臨床治療試驗(yàn)19三、生物等效性參數(shù)評(píng)價(jià)獸藥生物等效性常通過研究其藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行評(píng)定。用來評(píng)價(jià)生物等效性的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)主要是生物利用度（包括藥物吸收的程度和吸收速率）。反應(yīng)藥物吸收的速度參數(shù)有到達(dá)峰值血藥濃度的時(shí)間（tp）和峰值血藥濃度（Cp）。反應(yīng)藥物吸收的程度的參數(shù)是吸收分?jǐn)?shù)（F），可通過比較血藥濃度—時(shí)間曲線下的面積（AUC）計(jì)算出來。

1994年Midha等提出了以從給藥到最后一次采血時(shí)的部分藥時(shí)曲線下面積來估測藥物吸收的速率和程度，這一方法是基于藥物的吸收的差異性主要表現(xiàn)在藥物的吸收相、在消除相藥物的濃度—時(shí)間變化過程是一致的這一基礎(chǔ)上提出來的。由于藥物在6個(gè)吸收半衰期后吸收基本結(jié)束（相當(dāng)于2倍tp）。因此只要比較用藥后2個(gè)tp時(shí)間前的藥時(shí)曲線下面積就可以評(píng)價(jià)藥物的生物等效性。三、生物等效性參數(shù)評(píng)價(jià)1994年Midha等提出了以20如果藥物在體內(nèi)屬于線性一級(jí)動(dòng)力學(xué)速率過程，則生物等效性既可以通過研究單劑量藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)，又可以通過研究多劑量藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。多劑量給藥血藥濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)時(shí)，在給藥間隔時(shí)間（O-τ）內(nèi)血藥時(shí)間曲線下面積（）和單劑量給藥后的藥時(shí)曲線下面積（）相等：如果藥物在體內(nèi)屬于線性一級(jí)動(dòng)力學(xué)速率過程，則生物等效21四、生物等效性試驗(yàn)設(shè)計(jì)動(dòng)物：評(píng)價(jià)獸藥生物等效性最常用的方法是藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)法，而且通常是通過研究藥物在健康動(dòng)物體內(nèi)的血藥濃度與時(shí)間變化的函數(shù)關(guān)系來評(píng)價(jià)獸藥生物等效性。因此要求試驗(yàn)動(dòng)物是正常健康的，同時(shí)應(yīng)盡可能使動(dòng)物的年齡，體重，性別等因素保持一致。在平行設(shè)計(jì)試驗(yàn)中，保證動(dòng)物的生理生化指標(biāo)的一致性尤為重要。樣本含量的確定：在設(shè)計(jì)試驗(yàn)樣本含量（動(dòng)物數(shù)）時(shí)，必須考慮如下幾種指標(biāo)：①生物等效性的范圍，即確定兩種制劑生物等效性的尺度；②生物等效性平均置信區(qū)間的置信水平（α）；③犯第二類錯(cuò)誤的大小（β），即本來是生物等效性相同而判定為不同（有顯著性差異）的概率；④用來評(píng)價(jià)生物等效性的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方差（σ2）。四、生物等效性試驗(yàn)設(shè)計(jì)樣本含量的確定：在設(shè)計(jì)試驗(yàn)樣本22標(biāo)準(zhǔn)制劑：在進(jìn)行供試制劑的生物等效性評(píng)價(jià)時(shí)，供比較用的標(biāo)準(zhǔn)制劑必須是法定藥物，其鑒定方法，質(zhì)量、含量與純度等各方面都必須符合藥典所規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。給藥劑量：供試制劑和標(biāo)準(zhǔn)制劑的使用劑量應(yīng)相同。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)制劑有幾個(gè)不同的法定劑量供選擇時(shí)，則應(yīng)選擇最高劑量，如果使用最高劑量但不能獲得可測的血藥濃度數(shù)據(jù)時(shí)，才可選擇次高劑量。采樣時(shí)間：在生物等效性評(píng)價(jià)的交叉試驗(yàn)中，除了采集給藥前的空白備查樣作為分析對(duì)照之外，一般應(yīng)在給藥后不同時(shí)刻點(diǎn)共采集10個(gè)血樣，而且在峰值血藥濃度Cp后采樣至少延續(xù)到3個(gè)血漿消除半衰期。標(biāo)準(zhǔn)制劑：在進(jìn)行供試制劑的生物等效性評(píng)價(jià)時(shí)，供比較用的標(biāo)23

在多劑量給藥評(píng)價(jià)生物等效性試驗(yàn)中，在每一個(gè)給藥間隔時(shí)間（τ）內(nèi)至少需要采集4個(gè)血樣。并且還要在Cp和Cmin時(shí)各采一次血樣。無論是交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)還是平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，都必須進(jìn)行預(yù)試以確定最適采樣時(shí)間和次數(shù)。在多劑量給藥評(píng)價(jià)生物等效性試驗(yàn)中，在每一個(gè)24交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)：在確定一種藥物的兩種制劑的生物等效性時(shí)，最常用的試驗(yàn)設(shè)計(jì)是單一兩期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)（Asingletwo-periodcross–overdesign），即每個(gè)試驗(yàn)動(dòng)物在兩個(gè)不同的時(shí)間內(nèi)隨機(jī)接受標(biāo)準(zhǔn)制劑和供試制劑的兩次不同的處理，為了防止第一次用藥（處理）后藥物在體內(nèi)的殘留對(duì)第二次用藥（處理的）后血藥濃度的影響，應(yīng)用在兩次用藥處理之間有一個(gè)間隔時(shí)間（Washoutinterval）。

其間隔時(shí)間必須通過預(yù)試確定。藥物動(dòng)力學(xué)原理告訴我們，第一次用藥后體內(nèi)的藥量99.9%的清除時(shí)間為10個(gè)半衰期。交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)：25

對(duì)于那些消除半衰期極長的藥物，兩次用藥前后的間隔時(shí)間可能很長，這樣，試驗(yàn)動(dòng)物特別是年青處于生長發(fā)育期的動(dòng)物在兩次用藥期間，其生理生化方面可能發(fā)生較大的變化，這樣就會(huì)改變交叉設(shè)計(jì)中前后兩次用藥的藥物動(dòng)力學(xué)特征。某些對(duì)體內(nèi)藥酶有誘導(dǎo)或激活作用的藥物在第二次用藥時(shí)，其藥物動(dòng)力學(xué)特征也可能發(fā)生明顯的變化。為了避免上述因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生誤差，可采用平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，即把試驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為兩組，一組接受標(biāo)準(zhǔn)制劑處理，一組接受供試制劑處理。為了得到可靠的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)論，平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)所用的樣本比交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)要大一些。對(duì)于那些消除半衰期極長的藥物，兩次用藥前26五、生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析（一）假設(shè)檢驗(yàn)（Schuirman,1987）原假設(shè)為兩種制劑的生物等效性不相等即無效假設(shè)：Ho：μT-μS≤Q1

μT-μS≥Q2兩種制劑的生物等效性相等為備檢假設(shè)：HA：Q1<μT-μS＜Q2其中μT和μS分別代供試制劑和標(biāo)準(zhǔn)制劑的生物等效性參數(shù)，如AUC，Cp,tp,Cp/tp、MRT等的總體均值。Q1和Q2為標(biāo)準(zhǔn)制劑生物等效性參數(shù)區(qū)間寬度指標(biāo)，定義為-Q1=Q2=0.2μS。檢驗(yàn)的顯著水平α=0.05。

五、生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析兩種制劑的生物等效性相等為備27其單側(cè)t檢驗(yàn)判別標(biāo)準(zhǔn)為：

（4.48）則表明供試制劑的生物等效性參數(shù)μS差異沒有顯著性（P>0.05）。其中n為試驗(yàn)動(dòng)物總數(shù)，為供試制劑和標(biāo)準(zhǔn)制劑有關(guān)生物利用度參數(shù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后均值之差，df為自由度，S為誤差方的平方根。1990年Steinijan和Hauschke，1992年P(guān)idgen研究表明，在評(píng)價(jià)藥物制劑生物等效性時(shí)，對(duì)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC，Cp等進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后會(huì)使參數(shù)趨近正態(tài)分布，保持其方差的穩(wěn)定性和保證其統(tǒng)計(jì)模型的可加性。由于上述假設(shè)檢驗(yàn)條件0.2μS=-Q1=Q2中的標(biāo)準(zhǔn)制劑生物等效性參數(shù)（總體均值）μS難以確定，-Q1=Q2為未知參數(shù)，因此假設(shè)檢驗(yàn)在生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析中尚未得到真正的應(yīng)用。其單側(cè)t檢驗(yàn)判別標(biāo)準(zhǔn)為：則表明供試制劑的生物等效性28（二）生物等效性置信區(qū)間判別法1981年Westlake證明了，如果通過上述假設(shè)檢驗(yàn)表明供試制劑與標(biāo)準(zhǔn)制劑的生物等效性沒有顯著性差異，則供試制劑的生物等效性表征參數(shù)的均值一定分布在標(biāo)準(zhǔn)制劑生物等效性表征參數(shù)平均置信區(qū)間范圍內(nèi)（α=0.1）。1974年Metzler早就表明由于生物等效性試驗(yàn)所受的隨時(shí)誤差因素較多，其結(jié)果不宜采用假設(shè)檢驗(yàn)進(jìn)行判別。

1982年Gibaldi和Perrier研究了用平均置信區(qū)間來判定生物等效性的方法。即供試制劑的生物等效性表征參數(shù)F值、AUC或Cp在信度為0.05的平均置信區(qū)間落在標(biāo)準(zhǔn)制劑生物等效性表征參數(shù)F值、Cp或AUC的±20%的范圍內(nèi)，則表明供試制劑和標(biāo)準(zhǔn)制劑的生物等效性沒有明顯差異（P>0.05）。

（二）生物等效性置信區(qū)間判別法1982年Gibald291987年Schuirmann繼續(xù)指出在上述判別方法中，以達(dá)到峰濃度的時(shí)間tp來進(jìn)行判定沒有實(shí)用價(jià)值，并且證明了表征生物等效性的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC，Cp在進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理時(shí)應(yīng)該進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換以AUCt/AUCs的比值進(jìn)行判別時(shí)（對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后），其置信概率為95%的置信區(qū)間應(yīng)在0.80-1.25范圍之內(nèi)，才認(rèn)為兩種制劑是生物等效的。

Schuirmann還強(qiáng)調(diào)對(duì)于安全范圍（Marginofsafety）較窄的藥物，相對(duì)生物利用度AUCt/AUCs的95%置信概率的置信區(qū)間應(yīng)在0.9-1.10（0.90-1.11對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后）之間，則可判斷兩種制劑具有相同的生物等效性。1987年Schuirmann繼續(xù)指出在上述判別方法30（三）生物等效性試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析舉例：

某藥物的法定片劑（標(biāo)準(zhǔn)片劑）與供試片制以50mg/kg的劑量給動(dòng)物口服后（交叉試驗(yàn)），測得藥時(shí)曲線下面積AUCs（標(biāo)準(zhǔn)制劑）、AUCt1（供試制劑1）AUCt2（供試試劑2）以及峰值血藥濃度Cps（標(biāo)準(zhǔn)制劑）、Cpt1（供試制劑1）、Cpt2（供試制劑2）的數(shù)據(jù)如下：（三）生物等效性試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析舉例：31

AUCt1(μg·ml-1·h)225.9235.4243.2205.1224.8235.4236.7232.2AUCt2(μg·ml-1·h)206.8220.4215.7190.3205.6208.3204.2220.0AUCS(μg·ml-1·h)243.9256.1256.2215.2243.1263.2275.7254.2Cpt1(μg·ml-1)5.76.85.06.26.87.18.06.5Cpt2(μg·ml-1)4.85.25.46.06.27.28.16.8Cpts(μg·ml-1)6.27.25.46.67.37.58.46.9

AUCt1(μg·ml-1·h)225.9235.424332試對(duì)供試制劑1和供試制劑2的生物等效性進(jìn)行評(píng)價(jià)。從結(jié)果表中可以計(jì)算出供試制劑1的絕對(duì)生物利用度的均值，標(biāo)準(zhǔn)差SF=0.03，t0.05（df=7）=2.365，則絕對(duì)生物利用度置信概率為95%的置信區(qū)間為0.89-0.95，其上限和下限均在0.80-1.20范圍之內(nèi)。試對(duì)供試制劑1和供試制劑2的生物等效性進(jìn)行評(píng)價(jià)。33同理從結(jié)果中可以計(jì)算出供試制劑1的峰時(shí)血藥濃度的均值，95%的置信區(qū)間為

6.52(5.70-7.34)，標(biāo)準(zhǔn)制劑的峰值血藥濃度均值，

為5.55-8.33，95%置信區(qū)間（5.70-7.34）上下限都落在范圍之內(nèi)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明供試制劑1與標(biāo)準(zhǔn)制劑具有相同的生物等效性（P>0.05）。同理從結(jié)果中可以計(jì)算出供試制劑1的峰時(shí)血藥濃度的均值34從結(jié)果表中可以計(jì)算出供試制劑2的絕對(duì)生物利用度的均值，95%的置信區(qū)間為0.77-0.88，下限超出了0.80-1.20范圍，說明供試制劑2的生物等效性與標(biāo)準(zhǔn)制劑的生物等效性不相等（P<0.05），不能代替標(biāo)準(zhǔn)制劑用于臨床。從結(jié)果表中可以計(jì)算出供試制劑2的絕對(duì)生物利用度的均值35（三）雙向單側(cè)t檢驗(yàn)判別法Schuirman在1987年提出了生物等效性假設(shè)檢驗(yàn)――t檢驗(yàn)

式中的標(biāo)準(zhǔn)制劑生物等效性參數(shù)（總體均值）難以確定，-Q1=Q2為未知參數(shù)，因此假設(shè)檢驗(yàn)在生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析中在當(dāng)時(shí)尚未得到真正的應(yīng)用。雙向單側(cè)t檢驗(yàn)中采用樣本方差估計(jì)總體方差的方法確定試驗(yàn)誤差，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原則，供試藥數(shù)值應(yīng)大于參比藥的80％，經(jīng)單側(cè)t檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;同時(shí)要求供試藥數(shù)值小于參比藥的120％，經(jīng)單側(cè)t檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。即在兩個(gè)方向的單側(cè)t檢驗(yàn)都能以95％的置信概率確認(rèn)沒有超出范圍，才能確定生物等效，故稱為雙向單側(cè)t檢驗(yàn)。

孫衛(wèi)民、孫瑞元提出的檢驗(yàn)t統(tǒng)計(jì)量公式如下：（6.49）

T是供試藥均數(shù)，RL及RU是參比藥均數(shù)（R）的下限和上限（即R乘0.8或1.2），N是受試動(dòng)物數(shù)，f是自由度，V是各組參比藥與受試藥之差求得的方差的均數(shù)。（三）雙向單側(cè)t檢驗(yàn)判別法孫衛(wèi)民、孫瑞元提出的檢驗(yàn)t統(tǒng)36計(jì)算舉例見表6-6。表6-6生物等效度雙向單側(cè)t檢驗(yàn)計(jì)算

組別參比藥r供試藥td＝r－t

第一組14131（TOR）810-21312113121第二組13121（ROT）131211417－3

981參比藥r均數(shù)R＝12.125，供試藥t均數(shù)T＝12；第一組d的總和d1＝1，方差v1＝2.25；第二組d的總和d2＝0，方差v2＝4；v＝（v1＋v2）/2＝3.125。受試動(dòng)物數(shù)N＝8，自由度f＝6，單側(cè)t0.05＝1.943。結(jié)論：等效性檢驗(yàn)不合格（不能以95％的置信概率說明供試藥不低于參比藥的80％。計(jì)算舉例見表6-6。

組別參比藥r供試37生物等效度檢驗(yàn)的對(duì)數(shù)值雙向單側(cè)t檢驗(yàn)判別法：

1998年常桂青等提出了生物等效性檢驗(yàn)的對(duì)數(shù)值直接計(jì)算法，公式如下：

低向單側(cè)T值TL=(0.09691+D′)/Sef＝N－2(6.50)高向單側(cè)T值TH＝（0.09691-D′）/Sef＝N－2(6.51)

(6.52)

相對(duì)生物利用度F＝antilog（D′），D′是log（t/r）的平均值，V′是兩組log（t/r）方差之和，N是受試動(dòng)物數(shù)，f為自由度。舉例計(jì)算見表6-7。生物等效度檢驗(yàn)的對(duì)數(shù)值雙向單側(cè)t檢驗(yàn)判別法：38表6－7生物等效性檢驗(yàn)對(duì)數(shù)值計(jì)算組別供試藥t參比藥rd＝log（t/r）

第一組910－0.0458(TOR)860.12491012－0.0792860.1249第二組1012－0.0792(ROT)970.1092970.10921114-0.1047

第一組d的方差v1′＝s12＝0.01190d的總和d1′＝0.1248第二組d的方差v2′＝s22＝0.01360d的總和d2′＝0.0345v′=v1′+v2′=0.02550N=8D′=(d1′+d2′)/N=0.01990Se＝0.03992TL=(0.09691+0.0199)/0.03992=2.9261,單側(cè)t0.05＝1.943,P＜0.05TH＝（0.09691-0.01990）/0.03992=1.929,單側(cè)t0.05＝1.943,P＞0.05相對(duì)生物利用度F＝104.69%,但高側(cè)等效性不合格（P＞0.05）。表6－7生物等效性檢驗(yàn)對(duì)數(shù)值計(jì)算第一組d的方差v1′＝s39生物等效性雙向單側(cè)t檢驗(yàn)要求采用交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)，受試動(dòng)物數(shù)為偶數(shù)，隨機(jī)分為兩組，兩組例數(shù)相等。第一組為ROT組，受試動(dòng)物先服參比藥（R），算出藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)如AUC、Cp等值，根據(jù)藥物在動(dòng)物體內(nèi)的消除快慢，停藥一定時(shí)間，稱為清洗期（O），然后再服供試藥（T），同樣算出參數(shù)AUC、Cp等值。第二組為TOR組，即按T-O-R順序用藥，求出相關(guān)參數(shù)。生物等效性雙向配對(duì)t檢驗(yàn)判別法（操繼躍，2006）在生物等效性交叉配對(duì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)中，共有n個(gè)試驗(yàn)單元，組成n個(gè)自身配對(duì)的對(duì)子，每個(gè)對(duì)子的兩個(gè)觀測值的比值，平均值為，標(biāo)準(zhǔn)差為S，理論上生物完全等效時(shí)但專業(yè)界定該比值在某一個(gè)范圍內(nèi)，對(duì)于反映生物利用度程度的AUCt/AUCs一般定為0.8~1.25之間，對(duì)于反映生物利用度速度的Cpt/Cps的比值一般定為0.7~1.43之間。則有生物等效性雙向單側(cè)t檢驗(yàn)要求采用交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)40

（6.53）或

（6.54）

（6.55）或

（6.56）根據(jù)（6.55）式滿足：

(6.57)和

(6.58)或

(6.59)（6.53）（6.54）41表6－8供試藥與參比藥生物等效性數(shù)據(jù)供試藥數(shù)據(jù)

10799 99 14 5參比藥數(shù)據(jù)

1261111 111112 6Bi 0.831.170.820.82 0.820.821.17 0.83

P>0.05，接受原假設(shè)，供試藥與參比藥不等效。本法檢驗(yàn)結(jié)果與雙向單側(cè)t檢驗(yàn)結(jié)果一致。

當(dāng)t1或t2>t0.05df(n-1)，落在否定域，p<0.05，否定原假設(shè)，接受配設(shè)假設(shè)，表示兩藥生物等效，當(dāng)t1或t2<t0.05df(n-1)時(shí)，p>0.05，接受原假設(shè)，否定備設(shè)假設(shè)，表示兩藥生物不等效。同理，根據(jù)（6.56）式，同樣可確定t統(tǒng)計(jì)量的判斷標(biāo)準(zhǔn)和統(tǒng)計(jì)推斷。當(dāng)?shù)谋戎?lt;1時(shí)，用t1式構(gòu)造統(tǒng)計(jì)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)推斷。的比值>1時(shí)，用t2式構(gòu)造統(tǒng)計(jì)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)推斷。舉例見表6-8。表6－8供試藥與參比藥生物等效性數(shù)據(jù)供試藥數(shù)據(jù)42第三章生物利用度與生物等效性

第一節(jié)生物利用度一、生物利用度(Bioavailability)的定義廣義定義：生物利用度包括藥物在用藥部位被吸收進(jìn)入血液循環(huán)中的速率和程度。狹義定義：一般生物利用度指的是吸收程度，用F表示。

一個(gè)藥物的吸收程度雖然為100%，但如果吸收速率太慢，在血液中也難以達(dá)到有效血藥濃度，那么必然要改變劑型或用藥方式。假設(shè)一種藥物吸收速率太大，在短時(shí)就達(dá)到高峰濃度，甚至發(fā)生中毒，而有效血藥濃度維持較短，同樣必須改變用藥方式，或改變藥物劑型。反映一個(gè)藥物的吸收速率參數(shù)有Ka、Cp、tp。反映一個(gè)藥物的吸收程度的參數(shù)為F。第三章生物利用度與生物等效性

一、生物利用度(Bioava43狹義的生物利用度（吸收程度）的藥動(dòng)學(xué)定義有以下兩種（一）絕對(duì)生物利用度定義：血管外途徑給藥的待測制劑的AUC和該藥物靜注后的AUC兩者之比值。

（4.1）因?yàn)橐造o注藥物后的AUC代表100%的進(jìn)入血液中的藥物量，AUC與體內(nèi)藥量成正比關(guān)系，由于血管外途徑給藥，藥物在給藥部位有部分殘留沒有吸收進(jìn)入血液。因此，血管外途徑給藥的AUC恒≤AUCi.v.（靜脈給藥后藥時(shí)曲線下面積）。狹義的生物利用度（吸收程度）的藥動(dòng)學(xué)定義有以下兩種因44（二）相對(duì)生物利用度定義：指兩個(gè)或兩個(gè)以上處方配成相同制劑的藥物相互間AUC之比值，以及兩者吸收速率參數(shù)Ka，Cp，tp之比。研究相對(duì)生物利用度可作為部分代替臨床藥效學(xué)的研究，確定有效成分相同含量也相同的兩個(gè)或多個(gè)藥物處方是否在治療上等效。

這樣做可行的前提假設(shè)是，對(duì)于兩個(gè)處方，若它們的有效成分被體循環(huán)利用的速度與程度差別不大時(shí)，則它們的治療效果也不會(huì)有差異，相對(duì)生物利用度的數(shù)學(xué)定義：（4.2）其中AUCt為被檢制劑的藥時(shí)曲線下面積；AUCs為標(biāo)準(zhǔn)制劑藥時(shí)曲線下面積。

（二）相對(duì)生物利用度這樣做可行的前提假設(shè)是，對(duì)于兩個(gè)處45血藥濃度時(shí)間CpCptptp相對(duì)生物利用度研究的問題是制劑的“等效”問題，即供試處方與標(biāo)準(zhǔn)品是否等效。例：同一藥物二種不同制劑，雖然它們AUC相等，但它們的藥效顯然是不一致的。圖4-1兩種制劑相對(duì)生物利用度的比較從圖4-1左邊圖可知，制劑A的最高血藥濃度Cp太高，超過了最小中毒濃度（MTC），會(huì)導(dǎo)致機(jī)體中毒；從圖4-1右邊圖可知，制劑B的最高血藥濃度Cp低于有效血藥濃度（MEC），無治療效果。部分藥物的有效血藥濃度見表4-1。部分藥物的中毒血藥濃度與致死血藥濃度見表4-2。血藥濃度時(shí)間CpCptptp相對(duì)生物利用度研究的問題是制劑的46表4-1藥物治療有效血藥濃度藥物治療濃度（μg/ml）度冷?。―olantin）0.6-0.75乙氯戍炔醇（Ethchlorcynol）4-6去甲替林（Nortriptyline）0.015-0.035嗎啡（Morphine）0.01-0.1炔乙蟻胺（Ethinamate）5-10乙醚（Ethylether）900-1000噻吩甲吡胺（Methapriline）2-4甲乙哌啶酮（Methyprylone）10呋喃旦啶（Furadantin）1-2表4-1藥物治療有效血藥濃度藥物治療濃度（μ47表4-2部分藥物的中毒血藥濃度與致死血藥濃度藥物中毒濃度（μg/ml）致死濃度（μg/ml）苯海拉明10—導(dǎo)眠能10-8030-100丙咪嗪0.72鋰鹽13.513.9-34.7哌替啶530眠爾通100200美散痛24噻吩甲吡胺30-5050表4-2部分藥物的中毒血藥濃度與致死血藥濃度藥物中48四、生物利用度計(jì)算的校正

藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)中，其試驗(yàn)結(jié)果表現(xiàn)出有明顯的種屬差異與個(gè)體差異性。且一個(gè)動(dòng)物在接受兩種不同處理時(shí)，必然存在著時(shí)間上的差異，這與動(dòng)物機(jī)體生理生化的變化密切相關(guān)，包括代謝酶的誘導(dǎo)與抑制。

用單劑量給藥法來測定藥物的生物利用度是目前最常用的方法，其基本公式為

（4.34）

（4.35）其中Fs為絕對(duì)生物利用度，F(xiàn)r為相對(duì)生物利用度，和分別表示非血管途徑給藥和靜注注射給藥后從0-∞的藥時(shí)曲線面積。

四、生物利用度計(jì)算的校正用單劑量給藥法來測定藥物的生物利49目前較常用的是半衰期（t1/2）校正法，kwan-Till校正法和劑量校正法。（一）劑量校正法用基本公式求算生物利用度時(shí)，一個(gè)最基本的前提是要求兩種處理的劑量一致。而有時(shí)特別是在測定絕對(duì)生物利用度時(shí)，由于某些藥物在進(jìn)行非靜脈給藥時(shí)，由于吸收很低，在藥物分析時(shí)不靈敏或不方便，往往提高劑量，而靜注較大的劑量時(shí)，可能引起動(dòng)物機(jī)體發(fā)生中毒等一些不良反應(yīng)，造成靜注與非靜注給藥劑量不一致。此時(shí)，必須作劑量校正。

（4.36）其中Dv和Dnv分別表示靜注給藥劑量與非靜注給藥劑量。目前較常用的是半衰期（t1/2）校正法，kwan-Till校50（二）半衰期校正法Dost面積律可用下面公式表示：AUC=FD/CLb（4.37）根據(jù)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)總體清除率的計(jì)算公式可知

（4.38）

（4.39）因此，只有當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品或靜注給藥的總體消除率（CLb）s與供試品（或血管外途徑給藥）的總體消除率（CLb）t相等及標(biāo)準(zhǔn)品的劑量和供試品的劑量相等時(shí)，才存在通常所習(xí)用的生物利用度基本公式。和（二）半衰期校正法因此，只有當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品或靜注給藥的總體消除率（51在藥物動(dòng)力學(xué)生物利用度的測定時(shí)，其靜注劑量和非血管給藥途徑劑量，或者受試制劑與標(biāo)準(zhǔn)制劑的劑量均可人為控制令其相等。但通常不可能保證兩種處理后，其藥物在體內(nèi)的消除完全相等。即（CLb）t和（CLb）s可能因環(huán)境變化或時(shí)間變化而發(fā)生較大的改變。此時(shí)：

（4.40）

其中k和V分別表示藥時(shí)曲線尾端直線相斜率相關(guān)的最慢的消除速率常數(shù)和表觀分布容積。若為多室模型時(shí)，k在雙室和三室模型中表示β，V為分布達(dá)到平衡時(shí)的表觀分布容積，即Vd，由于同一種藥物在機(jī)體內(nèi)的分布相對(duì)比較一致，制劑的改變對(duì)其在體內(nèi)特別是分布達(dá)到平衡的分布影響不大。

因此，生物利用度可用下列公式表達(dá)。

（4.41）式中t1/2表示消除半衰期。

在藥物動(dòng)力學(xué)生物利用度的測定時(shí)，其靜注劑量和非血管給藥途徑劑52第二節(jié)獸藥生物等效性一、基本概念近年來，獸藥生物等效性（Veterinarydrugbioequivalence）的評(píng)價(jià)已越來越引起全世界特別是歐美等國的獸藥管理和監(jiān)測部門的關(guān)注。在美國藥品管理法規(guī)中說明，兩種藥物產(chǎn)品或制劑的生物利用度（Bioavailability）相等時(shí)，即這兩種藥物制劑的生物等效性相同。

歐共體有關(guān)獸醫(yī)法規(guī)中將獸藥生物等效性定義為：在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，兩種獸藥制劑中的活性成份的生物利用度均值之差經(jīng)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)差異不顯著。歐共體有關(guān)醫(yī)藥法律中將藥品生物等效性進(jìn)行了更具體的定義，即藥物的等效性是指一種藥物的兩種不同制劑，使用等克分子劑量后的生物利用度（包括吸收速率和吸收程度）相等。

第二節(jié)獸藥生物等效性歐共體有關(guān)獸醫(yī)法規(guī)中將獸藥生物53

從藥劑學(xué)上講，兩者是藥劑等效劑（PharmaceuticalEquivalents），兩者又是藥劑替換劑（PharmaceuticalAlternatives）。藥劑等效劑的定義為同一劑型中含有等量的同一活性組分的產(chǎn)品，并不要求有相同的非活性成分，它應(yīng)符合該劑型的一般要求或其他質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如強(qiáng)度，純度，均勻性，崩解時(shí)間或溶解速率。藥劑替換劑是指含有相同的治療活性藥物分子或前體的不同劑型或制劑。

藥劑等效劑的定義為同一劑型中含有等量的同一活性組分的產(chǎn)品，并不要求有相同的非活性成分，它應(yīng)符合該劑型的一般要求或其他質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如強(qiáng)度，純度，均勻性，崩解時(shí)間或溶解速率。藥劑替換劑是指含有相同的治療活性藥物分子或前體的不同劑型或制劑。從藥劑學(xué)上講，兩者是藥劑等效劑（Pharmaceut54對(duì)藥物的生物等效性進(jìn)行定義都是依據(jù)一個(gè)基本假設(shè)，如果藥物的吸收速率和吸收程度相同，則藥物在血漿中的濃度與時(shí)間的曲線也相同，則可以推論，生物利用度相同某種藥物的兩種不同制劑所產(chǎn)生的治療作用或者是毒副作用的也必然相同。因此，生物等效性可以定義為：一種藥物的兩種不同的制劑（產(chǎn)品）在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，無論是單劑量還是多劑量給藥，在使用等克分子藥物劑量時(shí)，其吸收速率和吸收程度相等。對(duì)藥物的生物等效性進(jìn)行定義都是依據(jù)一個(gè)基本假設(shè)，如果55在實(shí)際工作中要求進(jìn)行生物等效性研究的情況有如下幾種：治療指數(shù)較窄的藥物產(chǎn)品，即半數(shù)致死量與半數(shù)有效量的比值小于2，或者血液中最小中毒濃度與最小有效濃度之比小于2；根據(jù)藥物的理化特性，對(duì)某些藥物的不同劑型要求測定其生物等效性，其中包括在水中溶解度很?。?lt;5mg/ml）的藥物；應(yīng)用法定方法測定藥物的溶解速率，在30分鐘內(nèi)溶解小于50%的藥物；有效組份的多晶型及溶劑化物藥物；藥物產(chǎn)品中的賦形劑較多，與主要有效成份間的比例大于5的藥物；存在特殊吸收部位或者吸收部位被利用的藥物少于50%的藥物；在吸收時(shí)，藥物在腸壁及肝臟中迅速發(fā)生生物轉(zhuǎn)化，或者腸道中不穩(wěn)定，需要專門制成包衣或制成一定制劑或劑型的藥物。在實(shí)際工作中要求進(jìn)行生物等效性研究的情況有如下幾種：56二、確定藥物的生物等效性的試驗(yàn)方法通常比較同一藥物的兩種不同制劑的生物等效性包括四種試驗(yàn)類型：①體外溶解試驗(yàn)；②確定原藥或其活性代謝物血藥濃度與時(shí)間函數(shù)關(guān)系的藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)；③確定原藥或其活性代謝產(chǎn)物的作用強(qiáng)度與時(shí)間函數(shù)關(guān)系的藥效動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)；④臨床治療結(jié)果試驗(yàn)（Clinialend-points）。二、確定藥物的生物等效性的試驗(yàn)方法57（一）溶解試驗(yàn)假設(shè)藥物溶解是一個(gè)限速過程，藥物的吸收又非劑量依賴型，那么固體劑型特別是片劑的溶解時(shí)間就是影響藥物在胃腸道內(nèi)吸收的主要因素。此時(shí)如果兩種劑型的溶解時(shí)間有顯著性差異，則表明它們不具有生物等效性。

測定藥劑溶解速率的方法有Levy’s燒杯法、籃架裝置Pernarowski法及膜濾法。由美國藥典（USP）提出的轉(zhuǎn)籃法對(duì)有關(guān)藥物規(guī)定了測定的溫度、溶解的介質(zhì)（如蒸餾水、人工胃液、人工腸液）、籃子的轉(zhuǎn)速（60-150rpm）、終止時(shí)藥物溶解的百分率，這些條件是根據(jù)藥物的內(nèi)在性質(zhì)及溶解特性來確定的。凡是參照USP質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品也必須根據(jù)要求進(jìn)行溶解試驗(yàn)，藥物必須在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)溶解。如潑尼松龍片在100rpm時(shí)，10分鐘內(nèi)應(yīng)溶解60%。

（一）溶解試驗(yàn)58（二）藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)血藥濃度在評(píng)價(jià)藥品生物等效性中起著核心作用。因?yàn)橥凰幬锏膬煞N不同制劑，給動(dòng)物機(jī)體用藥后，表現(xiàn)有相同的血藥濃度——時(shí)間曲線，則兩者所產(chǎn)生的藥效學(xué)、毒理學(xué)和臨床效果將是相同的。在理論上和實(shí)踐上，現(xiàn)今都是依賴于血漿中原藥的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)對(duì)藥物的生物等效性進(jìn)行比較和評(píng)價(jià)的。當(dāng)存在對(duì)主要無活性代謝產(chǎn)物的分析測定方法而沒有對(duì)母藥的測定方法時(shí)，血漿中藥物的代謝物濃度也可用于評(píng)價(jià)藥品的生物等效性，這種方法只得到歐共體的許可，在美國不被使用。當(dāng)母藥是作為活性前體物質(zhì)而在體內(nèi)又能極快地較變成活性代謝物時(shí)，可通過測定血漿中的代謝物來評(píng)價(jià)藥品的生物等效性，這一方法在歐洲和美國都得到許可。獸藥的生物等效性多采用血藥藥物動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)行評(píng)價(jià)，極少采用尿藥藥物動(dòng)力學(xué)研究進(jìn)行比較分析。（二）藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)當(dāng)存在對(duì)主要無活性59（三）藥效動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)生物等效性可通過比較被吸收進(jìn)入到體內(nèi)的藥物與其所產(chǎn)生的藥理效應(yīng)的量效反應(yīng)進(jìn)行確定。但至目前為止，還沒有提出通過量效反應(yīng)的藥效動(dòng)力學(xué)參數(shù)表征生物等效性的具體方法。兩種制劑某一個(gè)效應(yīng)的一致性并不能保證其他效應(yīng)也呈等量平行反應(yīng)，在生物等效性研究中，怎樣選擇適當(dāng)?shù)男?yīng)指標(biāo)是十分困難的。某些藥物作用的最大效應(yīng)可能在極低的血藥濃度下就表現(xiàn)出來，這樣兩種在吸收具有明顯差異的制劑可能表現(xiàn)出相等的效應(yīng)強(qiáng)度。（三）藥效動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)60（四）臨床治療試驗(yàn)從理論上講，通過比較藥物的臨床治療效果來評(píng)價(jià)藥物的生物等效性，即臨床治療效果相等的藥物其生物等效性相同是可行的。值得說明的是，臨床治療是確定藥物制劑生物等效性試驗(yàn)中最不適當(dāng)?shù)姆椒?。因?yàn)榕R床治療試驗(yàn)所產(chǎn)生的試驗(yàn)誤差較多，如動(dòng)物個(gè)體發(fā)病的嚴(yán)重程度，病程，動(dòng)物的年齡，性別等都可能對(duì)一個(gè)藥物的臨床治療效果產(chǎn)生極大的影響，由于試驗(yàn)結(jié)果所受的隨機(jī)誤差因素較多，作出一個(gè)正確的統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)?zāi)Ｐ褪掷щy。因此獸藥生物等效性一般不用臨床治療試驗(yàn)評(píng)價(jià)。（四）臨床治療試驗(yàn)61三、生物等效性參數(shù)評(píng)價(jià)獸藥生物等效性常通過研究其藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行評(píng)定。用來評(píng)價(jià)生物等效性的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)主要是生物利用度（包括藥物吸收的程度和吸收速率）。反應(yīng)藥物吸收的速度參數(shù)有到達(dá)峰值血藥濃度的時(shí)間（tp）和峰值血藥濃度（Cp）。反應(yīng)藥物吸收的程度的參數(shù)是吸收分?jǐn)?shù)（F），可通過比較血藥濃度—時(shí)間曲線下的面積（AUC）計(jì)算出來。

1994年Midha等提出了以從給藥到最后一次采血時(shí)的部分藥時(shí)曲線下面積來估測藥物吸收的速率和程度，這一方法是基于藥物的吸收的差異性主要表現(xiàn)在藥物的吸收相、在消除相藥物的濃度—時(shí)間變化過程是一致的這一基礎(chǔ)上提出來的。由于藥物在6個(gè)吸收半衰期后吸收基本結(jié)束（相當(dāng)于2倍tp）。因此只要比較用藥后2個(gè)tp時(shí)間前的藥時(shí)曲線下面積就可以評(píng)價(jià)藥物的生物等效性。三、生物等效性參數(shù)評(píng)價(jià)1994年Midha等提出了以62如果藥物在體內(nèi)屬于線性一級(jí)動(dòng)力學(xué)速率過程，則生物等效性既可以通過研究單劑量藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)，又可以通過研究多劑量藥物動(dòng)力學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。多劑量給藥血藥濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)時(shí)，在給藥間隔時(shí)間（O-τ）內(nèi)血藥時(shí)間曲線下面積（）和單劑量給藥后的藥時(shí)曲線下面積（）相等：如果藥物在體內(nèi)屬于線性一級(jí)動(dòng)力學(xué)速率過程，則生物等效63四、生物等效性試驗(yàn)設(shè)計(jì)動(dòng)物：評(píng)價(jià)獸藥生物等效性最常用的方法是藥物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)法，而且通常是通過研究藥物在健康動(dòng)物體內(nèi)的血藥濃度與時(shí)間變化的函數(shù)關(guān)系來評(píng)價(jià)獸藥生物等效性。因此要求試驗(yàn)動(dòng)物是正常健康的，同時(shí)應(yīng)盡可能使動(dòng)物的年齡，體重，性別等因素保持一致。在平行設(shè)計(jì)試驗(yàn)中，保證動(dòng)物的生理生化指標(biāo)的一致性尤為重要。樣本含量的確定：在設(shè)計(jì)試驗(yàn)樣本含量（動(dòng)物數(shù)）時(shí)，必須考慮如下幾種指標(biāo)：①生物等效性的范圍，即確定兩種制劑生物等效性的尺度；②生物等效性平均置信區(qū)間的置信水平（α）；③犯第二類錯(cuò)誤的大?。é拢?，即本來是生物等效性相同而判定為不同（有顯著性差異）的概率；④用來評(píng)價(jià)生物等效性的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)的方差（σ2）。四、生物等效性試驗(yàn)設(shè)計(jì)樣本含量的確定：在設(shè)計(jì)試驗(yàn)樣本64標(biāo)準(zhǔn)制劑：在進(jìn)行供試制劑的生物等效性評(píng)價(jià)時(shí)，供比較用的標(biāo)準(zhǔn)制劑必須是法定藥物，其鑒定方法，質(zhì)量、含量與純度等各方面都必須符合藥典所規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。給藥劑量：供試制劑和標(biāo)準(zhǔn)制劑的使用劑量應(yīng)相同。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)制劑有幾個(gè)不同的法定劑量供選擇時(shí)，則應(yīng)選擇最高劑量，如果使用最高劑量但不能獲得可測的血藥濃度數(shù)據(jù)時(shí)，才可選擇次高劑量。采樣時(shí)間：在生物等效性評(píng)價(jià)的交叉試驗(yàn)中，除了采集給藥前的空白備查樣作為分析對(duì)照之外，一般應(yīng)在給藥后不同時(shí)刻點(diǎn)共采集10個(gè)血樣，而且在峰值血藥濃度Cp后采樣至少延續(xù)到3個(gè)血漿消除半衰期。標(biāo)準(zhǔn)制劑：在進(jìn)行供試制劑的生物等效性評(píng)價(jià)時(shí)，供比較用的標(biāo)65

在多劑量給藥評(píng)價(jià)生物等效性試驗(yàn)中，在每一個(gè)給藥間隔時(shí)間（τ）內(nèi)至少需要采集4個(gè)血樣。并且還要在Cp和Cmin時(shí)各采一次血樣。無論是交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)還是平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，都必須進(jìn)行預(yù)試以確定最適采樣時(shí)間和次數(shù)。在多劑量給藥評(píng)價(jià)生物等效性試驗(yàn)中，在每一個(gè)66交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)：在確定一種藥物的兩種制劑的生物等效性時(shí)，最常用的試驗(yàn)設(shè)計(jì)是單一兩期交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)（Asingletwo-periodcross–overdesign），即每個(gè)試驗(yàn)動(dòng)物在兩個(gè)不同的時(shí)間內(nèi)隨機(jī)接受標(biāo)準(zhǔn)制劑和供試制劑的兩次不同的處理，為了防止第一次用藥（處理）后藥物在體內(nèi)的殘留對(duì)第二次用藥（處理的）后血藥濃度的影響，應(yīng)用在兩次用藥處理之間有一個(gè)間隔時(shí)間（Washoutinterval）。

其間隔時(shí)間必須通過預(yù)試確定。藥物動(dòng)力學(xué)原理告訴我們，第一次用藥后體內(nèi)的藥量99.9%的清除時(shí)間為10個(gè)半衰期。交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)：67

對(duì)于那些消除半衰期極長的藥物，兩次用藥前后的間隔時(shí)間可能很長，這樣，試驗(yàn)動(dòng)物特別是年青處于生長發(fā)育期的動(dòng)物在兩次用藥期間，其生理生化方面可能發(fā)生較大的變化，這樣就會(huì)改變交叉設(shè)計(jì)中前后兩次用藥的藥物動(dòng)力學(xué)特征。某些對(duì)體內(nèi)藥酶有誘導(dǎo)或激活作用的藥物在第二次用藥時(shí)，其藥物動(dòng)力學(xué)特征也可能發(fā)生明顯的變化。為了避免上述因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生誤差，可采用平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，即把試驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為兩組，一組接受標(biāo)準(zhǔn)制劑處理，一組接受供試制劑處理。為了得到可靠的統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)論，平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)所用的樣本比交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)要大一些。對(duì)于那些消除半衰期極長的藥物，兩次用藥前68五、生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析（一）假設(shè)檢驗(yàn)（Schuirman,1987）原假設(shè)為兩種制劑的生物等效性不相等即無效假設(shè)：Ho：μT-μS≤Q1

μT-μS≥Q2兩種制劑的生物等效性相等為備檢假設(shè)：HA：Q1<μT-μS＜Q2其中μT和μS分別代供試制劑和標(biāo)準(zhǔn)制劑的生物等效性參數(shù)，如AUC，Cp,tp,Cp/tp、MRT等的總體均值。Q1和Q2為標(biāo)準(zhǔn)制劑生物等效性參數(shù)區(qū)間寬度指標(biāo)，定義為-Q1=Q2=0.2μS。檢驗(yàn)的顯著水平α=0.05。

五、生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析兩種制劑的生物等效性相等為備69其單側(cè)t檢驗(yàn)判別標(biāo)準(zhǔn)為：

（4.48）則表明供試制劑的生物等效性參數(shù)μS差異沒有顯著性（P>0.05）。其中n為試驗(yàn)動(dòng)物總數(shù)，為供試制劑和標(biāo)準(zhǔn)制劑有關(guān)生物利用度參數(shù)經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后均值之差，df為自由度，S為誤差方的平方根。1990年Steinijan和Hauschke，1992年P(guān)idgen研究表明，在評(píng)價(jià)藥物制劑生物等效性時(shí)，對(duì)藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC，Cp等進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后會(huì)使參數(shù)趨近正態(tài)分布，保持其方差的穩(wěn)定性和保證其統(tǒng)計(jì)模型的可加性。由于上述假設(shè)檢驗(yàn)條件0.2μS=-Q1=Q2中的標(biāo)準(zhǔn)制劑生物等效性參數(shù)（總體均值）μS難以確定，-Q1=Q2為未知參數(shù)，因此假設(shè)檢驗(yàn)在生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析中尚未得到真正的應(yīng)用。其單側(cè)t檢驗(yàn)判別標(biāo)準(zhǔn)為：則表明供試制劑的生物等效性70（二）生物等效性置信區(qū)間判別法1981年Westlake證明了，如果通過上述假設(shè)檢驗(yàn)表明供試制劑與標(biāo)準(zhǔn)制劑的生物等效性沒有顯著性差異，則供試制劑的生物等效性表征參數(shù)的均值一定分布在標(biāo)準(zhǔn)制劑生物等效性表征參數(shù)平均置信區(qū)間范圍內(nèi)（α=0.1）。1974年Metzler早就表明由于生物等效性試驗(yàn)所受的隨時(shí)誤差因素較多，其結(jié)果不宜采用假設(shè)檢驗(yàn)進(jìn)行判別。

1982年Gibaldi和Perrier研究了用平均置信區(qū)間來判定生物等效性的方法。即供試制劑的生物等效性表征參數(shù)F值、AUC或Cp在信度為0.05的平均置信區(qū)間落在標(biāo)準(zhǔn)制劑生物等效性表征參數(shù)F值、Cp或AUC的±20%的范圍內(nèi)，則表明供試制劑和標(biāo)準(zhǔn)制劑的生物等效性沒有明顯差異（P>0.05）。

（二）生物等效性置信區(qū)間判別法1982年Gibald711987年Schuirmann繼續(xù)指出在上述判別方法中，以達(dá)到峰濃度的時(shí)間tp來進(jìn)行判定沒有實(shí)用價(jià)值，并且證明了表征生物等效性的藥物動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC，Cp在進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理時(shí)應(yīng)該進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換以AUCt/AUCs的比值進(jìn)行判別時(shí)（對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后），其置信概率為95%的置信區(qū)間應(yīng)在0.80-1.25范圍之內(nèi)，才認(rèn)為兩種制劑是生物等效的。

Schuirmann還強(qiáng)調(diào)對(duì)于安全范圍（Marginofsafety）較窄的藥物，相對(duì)生物利用度AUCt/AUCs的95%置信概率的置信區(qū)間應(yīng)在0.9-1.10（0.90-1.11對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后）之間，則可判斷兩種制劑具有相同的生物等效性。1987年Schuirmann繼續(xù)指出在上述判別方法72（三）生物等效性試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析舉例：

某藥物的法定片劑（標(biāo)準(zhǔn)片劑）與供試片制以50mg/kg的劑量給動(dòng)物口服后（交叉試驗(yàn)），測得藥時(shí)曲線下面積AUCs（標(biāo)準(zhǔn)制劑）、AUCt1（供試制劑1）AUCt2（供試試劑2）以及峰值血藥濃度Cps（標(biāo)準(zhǔn)制劑）、Cpt1（供試制劑1）、Cpt2（供試制劑2）的數(shù)據(jù)如下：（三）生物等效性試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析舉例：73

AUCt1(μg·ml-1·h)225.9235.4243.2205.1224.8235.4236.7232.2AUCt2(μg·ml-1·h)206.8220.4215.7190.3205.6208.3204.2220.0AUCS(μg·ml-1·h)243.9256.1256.2215.2243.1263.2275.7254.2Cpt1(μg·ml-1)5.76.85.06.26.87.18.06.5Cpt2(μg·ml-1)4.85.25.46.06.27.28.16.8Cpts(μg·ml-1)6.27.25.46.67.37.58.46.9

AUCt1(μg·ml-1·h)225.9235.424374試對(duì)供試制劑1和供試制劑2的生物等效性進(jìn)行評(píng)價(jià)。從結(jié)果表中可以計(jì)算出供試制劑1的絕對(duì)生物利用度的均值，標(biāo)準(zhǔn)差SF=0.03，t0.05（df=7）=2.365，則絕對(duì)生物利用度置信概率為95%的置信區(qū)間為0.89-0.95，其上限和下限均在0.80-1.20范圍之內(nèi)。試對(duì)供試制劑1和供試制劑2的生物等效性進(jìn)行評(píng)價(jià)。75同理從結(jié)果中可以計(jì)算出供試制劑1的峰時(shí)血藥濃度的均值，95%的置信區(qū)間為

6.52(5.70-7.34)，標(biāo)準(zhǔn)制劑的峰值血藥濃度均值，

為5.55-8.33，95%置信區(qū)間（5.70-7.34）上下限都落在范圍之內(nèi)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明供試制劑1與標(biāo)準(zhǔn)制劑具有相同的生物等效性（P>0.05）。同理從結(jié)果中可以計(jì)算出供試制劑1的峰時(shí)血藥濃度的均值76從結(jié)果表中可以計(jì)算出供試制劑2的絕對(duì)生物利用度的均值，95%的置信區(qū)間為0.77-0.88，下限超出了0.80-1.20范圍，說明供試制劑2的生物等效性與標(biāo)準(zhǔn)制劑的生物等效性不相等（P<0.05），不能代替標(biāo)準(zhǔn)制劑用于臨床。從結(jié)果表中可以計(jì)算出供試制劑2的絕對(duì)生物利用度的均值77（三）雙向單側(cè)t檢驗(yàn)判別法Schuirman在1987年提出了生物等效性假設(shè)檢驗(yàn)――t檢驗(yàn)

式中的標(biāo)準(zhǔn)制劑生物等效性參數(shù)（總體均值）難以確定，-Q1=Q2為未知參數(shù)，因此假設(shè)檢驗(yàn)在生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析中在當(dāng)時(shí)尚未得到真正的應(yīng)用。雙向單側(cè)t檢驗(yàn)中采用樣本方差估計(jì)總體方差的方法確定試驗(yàn)誤差，根據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)原則，供試藥數(shù)值應(yīng)大于參比藥的80％，經(jīng)單側(cè)t檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;同時(shí)要求供試藥數(shù)值小于參比藥的120％，經(jīng)單側(cè)t檢驗(yàn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。即在兩個(gè)方向的單側(cè)t檢驗(yàn)都能以95％的置信概率確認(rèn)沒有超出范圍，才能確定生物等效，故稱為雙向單側(cè)t檢驗(yàn)。

孫衛(wèi)民、孫瑞元提出的檢驗(yàn)t統(tǒng)計(jì)量公式如下：（6.49）

T是供試藥均數(shù)，RL及RU是參比藥均數(shù)（R）的下限和上限（即R乘0.8或1.2），N是受試動(dòng)物數(shù)，f是自由度，V是各組參比藥與受試藥之差求得的方差的均數(shù)。（三）雙向單側(cè)t檢驗(yàn)判別法孫衛(wèi)民、孫瑞元提出的檢驗(yàn)t統(tǒng)78計(jì)算舉例見表6-6。表6-6生物等效度雙向單側(cè)t檢驗(yàn)計(jì)算

組別參比藥r供試藥td＝r－t

第一組14131（TOR）810-21312113121第二組13