化妝品中金黃色葡萄球菌檢測(cè)課件

金黃色葡萄球菌檢測(cè)第六組化妝品中金黃色葡萄球菌檢測(cè)組別：第六組成員：錢(qián)龍朱凱許祥博林志豪簡(jiǎn)介金黃色葡萄球菌(Staphyloccocusaureus)是人類(lèi)的一種重要病原菌，隸屬于葡萄球菌屬（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的別稱(chēng)，是革蘭氏陽(yáng)性菌的代表，可引起許多嚴(yán)重感染。而對(duì)于金黃色葡萄球菌在速凍食品中的存在量，衛(wèi)生部于2011年11月24日公布食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《速凍面米制品》，允許金葡菌限量存在。引發(fā)病癥金黃色葡萄球菌腸炎是金黃色葡萄球菌引起的，多因原發(fā)疾病長(zhǎng)期用抗生素引起腸道菌群失調(diào)所致，抗生素敏感菌株受到抑制，耐藥的金黃色葡萄球菌株趁機(jī)繁殖。金黃色葡萄球菌為侵襲性細(xì)菌，能產(chǎn)生毒素，對(duì)腸道破壞性大，所以金黃色葡萄球菌腸炎起病急，中毒癥狀嚴(yán)重，主要表現(xiàn)為嘔吐、發(fā)熱、腹瀉。嘔吐常在發(fā)熱前出現(xiàn)，發(fā)熱很高。輕癥大便次數(shù)稍多，為黃綠色糊狀便；重癥大便次數(shù)頻數(shù)，每日可達(dá)數(shù)十次，大便呈暗綠色水樣便，外觀像海水，所以叫海水樣便。粘液多，有腥臭味，有時(shí)可排出片狀偽膜，將偽膜放入生理水，脫落的腸粘膜即漂在水面上，對(duì)診斷幫助很大。體液損失多，患兒脫水、電解質(zhì)紊亂和酸中毒嚴(yán)重，可發(fā)生休克。挑選大便粘液部分涂片，在顯微鏡下檢查可見(jiàn)大量膿細(xì)胞，如經(jīng)革蘭氏染色，顯微鏡檢查可見(jiàn)成堆的大量革蘭氏陽(yáng)性球菌。大便培養(yǎng)金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)，即可明確診斷。1.方法提要

根據(jù)本菌特有的形態(tài)及培養(yǎng)物質(zhì)性，應(yīng)用BairdParker平板進(jìn)行分離，該平板中的氯化鋰可抑制革蘭氏陰性細(xì)菌生長(zhǎng)，丙酮酸鈉可刺激金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)，以提高檢出率，并利用分解甘露醇和血漿凝固酶等特征，以茲鑒別。2.7.5％的氯化鈉肉湯成分：蛋白胨10g牛肉膏3g氯化鈉75g蒸餾水1000ml制法：將上述成分加熱溶解，調(diào)pH為7.4，分裝，121℃(151b)15min高壓滅菌。3.血瓊脂培養(yǎng)基成分：營(yíng)養(yǎng)瓊脂100ml脫纖維羊血(或兔血)10ml制法：將營(yíng)養(yǎng)瓊脂加熱溶化，待冷至50℃左右以無(wú)菌手續(xù)加入脫纖維羊血，搖勻，制成平板，置冰箱內(nèi)備用。5.兔血漿制備

取3.8％檸檬酸鈉溶液〔121℃(151b)30min滅菌〕1份加兔全血4份，混勻靜置，2000～3000r/min離心3～5min。血球下沉，取上面血漿。7.操作步驟7.1增菌：取1：10稀釋的樣品10ml接種到90mlSCDLP液體培養(yǎng)基中(如無(wú)此培養(yǎng)基也可用7.5％氯化鈉肉湯)，置37℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24h。注：如無(wú)此培養(yǎng)基也可用7.5％氯化鈉肉湯，檢驗(yàn)含防腐劑的化妝品時(shí)，可在1000ml此培養(yǎng)基中加1g卵磷脂、7g吐溫80。7.3染色鏡檢

挑取分純菌落，涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌，排列成葡萄狀，無(wú)芽胞，無(wú)夾膜，致病性葡萄球菌，菌體較小，直徑約為0.5～1μm。7.4甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)

取述分純菌落接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基中，置37℃培養(yǎng)24h，金黃色葡萄球菌應(yīng)能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸。7.5血漿凝固酶試驗(yàn)7.5.1玻片法取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴滅菌生理鹽水，另一端滴加一滴血漿，用接種環(huán)挑取待檢菌落，分別在生理鹽水及血漿中充分研磨混合。血漿與菌苔混懸液在5min內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊時(shí)，而鹽水滴仍呈均勻混濁無(wú)凝固現(xiàn)象者為陽(yáng)性，如兩者均無(wú)凝固現(xiàn)象則為陰性。凡玻片試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)或鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象，再進(jìn)行試管凝固酶試驗(yàn)。7.5.2試管法吸取1：4新鮮血漿0.5ml，放入滅菌小試管中，再加入待檢菌24h肉湯培養(yǎng)物0.5ml。混勻，放37℃溫箱或水浴中，每半小時(shí)觀察一次，24h之內(nèi)如呈現(xiàn)凝塊即為陽(yáng)性。同時(shí)以已知血漿凝固酶陽(yáng)性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物及肉湯培養(yǎng)基各0.5ml1：4血漿混勻，做為對(duì)照。8.檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告