溶出度測定的研究(謝元超)

藥物溶出度測定的研究謝元超溶出度的概念溶出度與崩解時限、生物利用度的關(guān)系溶出介質(zhì)溶出度測定方法溶出度測定法的應(yīng)用及進(jìn)展主要內(nèi)容1溶出度的概念溶出度（Dissolutionrate）也稱溶出速率，是指在規(guī)定的介質(zhì)和條件下，藥物從片劑、膠囊劑、顆粒劑等固體制劑中溶出的速度和程度，是用來評價藥物制劑質(zhì)量的內(nèi)在指標(biāo)，也是制劑質(zhì)量控制的重要手段。測定固體制劑溶出度的過程稱為溶出度試驗，它是一種模擬口服固體制劑在胃腸道中的崩解和溶出的體外試驗方法。藥物溶出度檢查可以在一定程度上反映主藥的晶型、粒度、處方組成、輔料品種和性質(zhì)、生產(chǎn)工藝等的差異，也是評價制劑活性成分生物利用度和制劑均勻度的一種有效標(biāo)準(zhǔn)，能有效區(qū)分同一種藥物生物利用度的差異，因此是藥品質(zhì)量控制的必檢項目之一。2溶出度與崩解時限、生物利用度的關(guān)系溶出度與崩解時限的關(guān)系溶出度與生物利用度的關(guān)系1）溶出度與崩解時限的關(guān)系藥物要發(fā)揮作用必須到達(dá)作用部位，藥物能否到達(dá)作用部位以及到達(dá)的速度和程度，又受到許多因素的影響。以片劑為例，服藥后藥物必須先經(jīng)過崩解、分散，然后才能溶解進(jìn)而被吸收產(chǎn)生療效。因此，各國藥典對一些片劑均進(jìn)行崩解時限檢查，它對藥物療效起到了一定的保證作用。但是許多實驗證明崩解時限檢查不能說明體內(nèi)的有效性，它只能控制藥物溶出的最初階段，無法控制藥物繼續(xù)分散和溶解的過程，因此提出溶出度與藥物在體內(nèi)吸收情況關(guān)系更加密切。中國藥典2005版規(guī)定，凡規(guī)定檢查溶出度的制劑，不再進(jìn)行崩解時限檢查。溶出度替代了過去的崩解時限檢查，從而提高了藥品質(zhì)量控制方法的科學(xué)性，保證了藥品的臨床療效。生物利用度是指藥物被吸收進(jìn)入血液循環(huán)的速度與程度，是衡量制劑療效差異的重要指標(biāo)。但生物利用度試驗工作量極大，費用高，對每個樣品進(jìn)行篩選評定，檢驗和控制產(chǎn)品質(zhì)量只能借助于體外實驗方法來完成。溶出速度在一定程度上能反映藥物的吸收情況，可作為固體制劑的內(nèi)在質(zhì)量指標(biāo)；溶出度雖非必然與體內(nèi)生物利用度相關(guān)，但多數(shù)情況下是相關(guān)的，是替代動物實驗的體外實驗方法。2）溶出度與生物利用度的關(guān)系3溶出介質(zhì)溶出度測定是固體制劑在模擬體內(nèi)胃腸道環(huán)境進(jìn)行的，因此溶出介質(zhì)應(yīng)盡可能模擬胃腸道環(huán)境。對于不同的藥物要根據(jù)其性質(zhì)、檢測方法和檢測結(jié)果選擇合適的介質(zhì)。一般應(yīng)以水、0.001～0.1molL鹽酸、磷酸鹽緩沖液作介質(zhì)，pH應(yīng)在1～6.8之間，最高不應(yīng)超過pH8.0。對于一些難溶性藥物可以在介質(zhì)中加入少量表面活性劑作助溶劑，一般情況不推薦使用有機溶劑，介質(zhì)中加入有機溶劑時應(yīng)考察溶出度與生物利用度的關(guān)系。介質(zhì)體積，第一法、第二法介質(zhì)體積應(yīng)大于500ml，不超過1000ml，常用900ml；第三法的介質(zhì)應(yīng)大于150ml，不超過250ml。4溶出度測定方法溶出度測定方法有紫外分光光度法、高效液相色譜法、熒光分光光度法和原子吸收分光光度法等，其中紫外分光光度法是測定藥物溶出度的最常用方法，由于其操作簡便、快捷，也是首選方法。藥物制劑溶出度測定常采用對照品法、吸收系數(shù)法和自身對照法。藥物溶出度對照品法或吸收系數(shù)法藥物溶出度自身對照法4.1藥物溶出度對照品法或吸收系數(shù)法中國藥典絕大多數(shù)品種采用此兩種方法測定溶出度，采用這兩種方法計算制劑的溶出度，其溶出量為絕對值，與藥物的含量和制劑的處方工藝即制劑的溶出特性等有關(guān)，含量與溶出量有一定的正相關(guān)。溶出度測定中采用對照品法或吸收系數(shù)法，會出現(xiàn)因輔料干擾而使測定結(jié)果偏高的現(xiàn)象，有的超過標(biāo)示量110%，甚至更高。另一種情況是若溶出度測定方法與含量測定方法不同時，對照品含量的標(biāo)定方法也不相同，對于同一對照品要用兩種方法標(biāo)定，這勢必大大增加了對照品的標(biāo)定工作，且不同方法標(biāo)定的對照品之間存在的差異影響測定結(jié)果。第三，對于含量不合格產(chǎn)品來說，對照品對照法測溶出度往往受含量的影響，也不合格。藥典中很多品種的含量測定需要對照品或標(biāo)準(zhǔn)品的，可在含量測定用對照品上同時標(biāo)出溶出度測定方法標(biāo)定的結(jié)果，即含量測定與溶出度測定用同一種對照品，就不會造成誤用，且方便使用。對于含量測定不需要對照品的樣品，建議采用吸收系數(shù)法或含量校正的自身對照法。4.2藥物溶出度自身對照法自身對照法是目前中國藥典中抗生素特有的方法，它解決了多組分抗生素如乙酰螺旋霉素、紅霉素、吉他霉素、慶大霉素等僅有微生物效價標(biāo)準(zhǔn)品，無化學(xué)對照品，不能進(jìn)行溶出度檢查的難點。藥物溶出度自身對照法的特點藥物溶出度自身對照法存在的問題藥物溶出度自身對照法的特點

1）自身對照法與藥品含量無關(guān)，這與對照品法或吸收系數(shù)法等不同，此法針對性強，有利于發(fā)現(xiàn)溶出度不合格的原因，可排除主藥含量低的因素，直接從生產(chǎn)工藝、處方組成、包裝材料、貯存條件等因素中尋找不合格的原因，有利于生產(chǎn)工藝的改進(jìn)。典型的例子是含量為標(biāo)示量50%的某藥按對照品法或吸收系數(shù)法測定溶出度不符合規(guī)定，按自身對照法很可能符合規(guī)定。許多人認(rèn)為此點極不合理，是自身對照法不能成立的關(guān)鍵。根據(jù)溶出度的定義是藥物從固體制劑中溶出的速度和程度，與主藥的晶型、粒度、處方、輔料、工藝有關(guān)，并不是考核主藥的含量。如上例只要主藥全部溶出(含量為標(biāo)示量的50%)，溶出度即為100%符合規(guī)定，并且符合溶出度檢查的目的；反之如含量為標(biāo)示量50%的某藥按原法測得溶出度為50%即溶出度不符合規(guī)定，這結(jié)果反而不合理，因溶出是沒有問題只是主藥的量少，所以自身對照法更能真實地反映出藥物的溶出情況。另一方面，此法可基本避免制劑輔料對測定的影響，且可不使用對照品或標(biāo)準(zhǔn)品。第三，多組分抗生素如果使用標(biāo)準(zhǔn)品測定其溶出度，則因標(biāo)準(zhǔn)品的組分與不同廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品或不同批號產(chǎn)品的原料藥所含組分比例不同，而使測定結(jié)果出現(xiàn)差異，因而不能正確反映該產(chǎn)品的溶出情況。例如：對含量為94%～97%的6批頭孢氨芐膠囊采用對照品法和自身對照法測定溶出度，結(jié)果見下表：批號對照品法（%）自身對照法（%）197962102101399984104104596956104103從上表結(jié)果可看出若制劑含量在合格范圍內(nèi)時，以上兩種方法測定樣品溶出度，結(jié)果基本一致。由此可以得出，自身對照法不但可節(jié)約對照品的用量，而且能更客觀地、真實地反映出藥物從制劑中的溶出情況，在制劑的溶出度測定中應(yīng)被廣泛地應(yīng)用。2）采用自身對照法減弱了藥品測定項目間的關(guān)聯(lián)性。但并不是要求所有檢查項目都應(yīng)有項目間的關(guān)聯(lián)性，有關(guān)聯(lián)性最好，無關(guān)聯(lián)性同樣成立。如無菌與含量測定并不存在項目間關(guān)聯(lián)性。1）當(dāng)藥品所用輔料有吸附作用而影響藥品的釋放，即固體制劑雖然崩解但不溶出或溶出不完全時，自身對照法不能反映藥品的質(zhì)量，可采用解吸附手段制備自身對照液或采用對照品法等其它方法。藥物溶出度自身對照法存在的問題2）自身對照法較對照品法操作繁瑣，片劑還需研細(xì)，混勻，自身對照溶液需批批制備，當(dāng)主藥含量很低時，大量的輔料會影響溶出量的測定，且自身對照法的方法學(xué)驗證較復(fù)雜。對照物為20個樣品的平均含量，有一定的變數(shù)而非恒定值，重現(xiàn)性相對較差。3）抗生素藥品的含量測定很多采用微生物效價測定法，但專屬性差些。凡是對測試菌有抑菌作用的藥品均能產(chǎn)生抑菌圈，這就為摻假者提供了可乘之機。如果溶出度測定采用對照品比較法，則多少可以彌補這個漏洞，但采用自身對照法則不再有此作用。4)采用其他廉價品替代同類價貴的抗生素藥品，無法區(qū)別，這其實不屬于溶出度檢測范圍，而屬于鑒別項下。5溶出度測定法的應(yīng)用及進(jìn)展開展生物利用度的工作，溶出度工作的范圍日趨廣泛，除在片劑應(yīng)用外，其他劑型也廣泛應(yīng)用，甚至超出制劑的范圍在原料藥、新藥的尋找及其改變也開始使用。過去認(rèn)為只有難溶性藥物才有溶出度問題，但近年研究證明，易溶性藥物也會因制劑配方和工藝不同致藥物溶出度有很大差異，從而影響藥物生物利用度和療效。溶出度的檢測方法一般采用自溶出儀取樣后用紫外分光光度法測定藥物釋放量，另外也可采用其他方法等。近年來采用HPLC法的也有增加。最新版《中國藥典》（2005年版）主要采用UV法及HPLC法測定藥物溶出度。對某些抗生素制劑將對照品法改為自身對照法，解決了多組分抗生素制劑測定結(jié)果不準(zhǔn)確的問題。另外，大部分中藥成分復(fù)雜、不明確或不完全明確，已知成分與藥效關(guān)系不一定成正比關(guān)系；雖然已有很多中藥開展了含量測定控制，但其含量測定的對象往往是其中某一成分或某幾個成分，有的被測成分是有效成分，有的還僅僅是指標(biāo)成分，而且其測定成分與藥效關(guān)系不很明確；正因為中藥成分的復(fù)雜性與不明確性使得中藥制劑多數(shù)無明確的標(biāo)示量，溶出度測定的對象與參比指標(biāo)難以確定，因而應(yīng)首選UV法，可選擇自身對照法。兩個例子化藥：復(fù)方磺胺甲噁唑片是臨床上應(yīng)用非常普及的種抗菌藥，針對其為多組分制劑我們采用自身對照法測定了其溶出度，并與美國藥典方法進(jìn)行了對比。1材料與方法1．1儀器：ZRS-4智能溶出度試驗儀；TU1901紫外可見分光光度計。1．2藥品：復(fù)方磺胺甲噁唑片（批號980310山東新華制藥股份有限公司，批號980202青島制藥股份有限公司）；磺胺甲噁唑?qū)φ掌罚ㄅ?025-9503）；甲氧芐啶對照品（批號0031-9202）。1．3方法：采用漿法，轉(zhuǎn)速為每分鐘75轉(zhuǎn)，鹽酸溶液（9→1000）900ml為介質(zhì)，水浴溫度37±0.5℃；每個容器投1片，60分鐘時取溶液適量，過濾，加上述鹽酸液稀釋成約含磺胺甲噁唑20μg/ml的溶液（或溶液吸收度值在0.3~0.7之間濃度的溶液）做為供試液。另取樣品10片稱重研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于磺胺甲噁唑50mg），置100ml量瓶中，加乙醇適量，振搖15min使磺胺甲噁唑與甲氧芐啶溶解，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，加上述鹽酸溶液稀釋成約含磺胺甲噁唑20μg/ml（或與上述供試液濃度相當(dāng)?shù)模┤芤鹤鰹閷φ杖芤?。取上述兩種溶液在266nm處分別測定吸收度，按平均片重計算每片的溶出量，限度為平均片重的70%。2結(jié)果與討論2.1測定波長：取復(fù)方磺胺甲噁唑片細(xì)粉適量加適量乙醇溶解，用上述鹽酸液稀釋成約含磺胺甲唑20μg/ml的溶液，同時配制含同樣乙醇濃度的溶液，從400nm-190nm進(jìn)行掃描，結(jié)果在266nm處有最大吸收且助溶乙醇無干擾。2.2線性關(guān)系：取研細(xì)的復(fù)方磺胺甲噁唑片（批號980202）細(xì)粉適量，制備成10.0，20.0，30.0，40.0，50.0，60.0μg/ml的溶液,，在266nm處測吸收度，對測得數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：C=0.79606+55.8957A，r=0.9996。2.3回收率試驗：精密稱取同批（980202）復(fù)方磺胺甲噁唑片細(xì)粉適量，配制5份20μg/ml的溶液在266nm處測吸收度A，按上述回歸方程計算。測定6份，平均回收率99.6%，RSD=0.1%。2.4供試品溶出度測定結(jié)果見下表：批號方法溶出度平均值980310美國藥典磺胺甲噁唑100100102101949499甲氧芐啶1011001151079599103制定方法95949696959595980202美國藥典磺胺甲噁唑102102101989799100甲氧芐啶10410310499100102102制定方法9910099949596973討論中國藥典規(guī)定“溶出度系指藥物從片劑或膠囊劑等固體制劑在規(guī)定溶劑中溶出的速度和程度”，2005年版中國藥典部分品種溶出度采用自身對照法。在上述公式中，標(biāo)示量上下約去后，即溶出量按平均片重計算，這個思路用于復(fù)方片劑溶出度的測定能充分體現(xiàn)在溶出度測定中的優(yōu)勢。它不需用對照品對各組分進(jìn)行含量測定，只要其片粉充分溶解后濃度與吸收度值之間存在穩(wěn)定的線性關(guān)系，即片粉重與吸收度值成正比，溶出的片粉重相當(dāng)平均片重的多少，就可以計算其溶出度。美國藥典測復(fù)方磺胺甲噁唑片的溶出度采用高效液相法，分離磺胺甲噁唑和甲氧芐啶，用對照品分別測其含量，按標(biāo)示量計算其溶出度，而我們制定方法不用對照品不需分離兩成分直接用紫外法測定，簡便快速，其結(jié)果也能正確反映其溶出的程度。表中美國藥典方法比我們制定的方法高幾個百分點，是由于廠家的投料與標(biāo)示量之間的差別造成的。中藥：三黃片溶出度考察三黃片是由大黃300g，黃芩浸膏21g，鹽酸小檗堿5g3味藥經(jīng)加工提取制成的糖衣片。有清熱解毒、瀉火通便的作用。用于三焦熱盛，目赤腫痛，口鼻生瘡，咽喉腫痛等。方中大黃和黃芩為主藥，目前我國生產(chǎn)三黃片的廠家很多，但臨床反應(yīng)不同廠家片劑的療效存在差異，通過對5個廠家的三黃片做體外溶出度試驗，以此來評定和控制藥品質(zhì)量。1儀器與試藥ZRS-8智能溶出試驗儀（天津大學(xué)無線電廠）；UV-2501PC紫外分光光度計（島津儀器有限公司）；三黃片均為抽驗檢品；試劑均為分析純。2方法及結(jié)果2.1檢測波長的選擇將三黃片溶于0.1mol/LHCL中，配成一定濃度的溶液，過濾。以0.1mol/LHCL為空白，掃描三黃片HCL溶液的UV吸收光譜，各個不同廠家的三黃片溶液的掃描圖譜基本一致，結(jié)果見下圖。由于274nm處的吸收峰與其主要成份大黃和黃芩（按相同條件掃描）的特征吸收峰基本相符，故選定此處為檢測波長。2.2線性關(guān)系將各廠家的一粒三黃片溶于500ml0.1mol/LHCl中，過濾，將此時的濾液指定為相當(dāng)于溶出度的100%，并用0.1mol/LHCl稀釋成90%，80%，60%，40%，20%，10%的濃度系列，以0.1mol/LHCl為空白，分別在274nm處測定吸收度。以相對標(biāo)示量（%）為橫座標(biāo)X，以吸收度為縱座標(biāo)Y，得回歸方程Y=0.01677+1.7944X，結(jié)果表明在此條件下有良好的線性關(guān)系r=0.9999。2.3回收率試驗按線性關(guān)系項下方法采用加樣回收，6個濃度的回收率分別為97.8%（RSD=1.86），98.1%（RSD=1.54），99.1%（RSD=1.15），98.4%（RSD=1.41），98.0%（RSD=1.78），97.5%（RSD=1.94），n=5。2.4穩(wěn)定性試驗在溶出度測定試驗完成后，以90min溶出液的吸收度為起點，每隔1h測定1次，其吸收度RSD=0.86%（n=5）。2.5溶出度測定轉(zhuǎn)籃法。取樣品6片，分別稱取重量W樣，以0.1mol/LHCl500ml為溶出介質(zhì)，溫度為（37±0.1）℃，轉(zhuǎn)速為120r/min，分別在10、20、40、60、80、90min，定時定點取樣，過濾，精密量取5ml至10ml容量瓶中，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度。另取同一廠家批號片劑10片，精密稱定研細(xì)，精密稱取適量W對（相當(dāng)于平均片重）至1000ml容量瓶中，加0.1mol/LHCl溶解，超聲處理30min并稀釋至刻度，濾過，上述兩種溶液分別以溶出介質(zhì)為空白于2