臨床血液學檢驗-1-7-造血檢驗基本方法2細胞化學染色檢驗課件

第一章造血與血細胞檢驗

第七節(jié)骨髓檢查

二、細胞化學染色1普通染色免疫細胞化學染色細胞形態(tài)學檢驗技術細胞化學染色2【細胞化學染色概述】細胞化學染色的概念細胞形態(tài)學化學（化學反應）酶類、脂類、糖類、鐵、蛋白、核酸等細胞化學染色3固定物理法

化學法

干燥固定

火焰固定

蒸汽固定

液體固定

5偶氮偶聯法

雪夫反應

聯苯胺法

普魯士藍反應

金屬沉淀法

顯色

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復染的目的在于使各種細胞能顯示出來以便于觀察。選擇復染液的顏色應與有色沉淀的顏色有明顯的對比度，即能使細胞結構顯示又能清楚地看出細胞化學染色結果復染

7（一）用于貧血的細胞化學染色（鐵染色）『用于貧血的常規(guī)細胞化學染色』外周血網織紅細胞計數（Ret/Retic/RC）

骨髓鐵染色84Fe3+＋3K4［Fe(CN)6］Fe4［Fe(CN)6］3＋12K+亞鐵氰化鉀亞鐵氰化鐵（普魯士藍色）酸性【骨髓鐵染色】染色原理及方法貯存鐵鐵蛋白含鐵血黃素10正常血細胞的染色結果細胞外鐵：位于骨髓小粒內或巨噬細胞胞質內（即幼紅細胞外）細胞內鐵：位于幼紅細胞胞質內的鐵鐵粒幼紅細胞：胞質中出現藍色鐵顆粒的幼紅細胞。計數100個中幼紅和晚幼紅細胞中鐵粒幼紅細胞的百分比即為細胞內鐵陽性率鐵粒紅細胞：胞質中出現藍色鐵顆粒的紅細胞環(huán)形鐵粒幼紅細胞：幼紅細胞胞質中藍色顆粒6顆以上，圍繞核周1/2以上者病理情況12細胞外鐵（＋＋＋＋）細胞外鐵（＋＋＋）細胞外鐵（＋＋）細胞外鐵（＋＋＋）細胞外鐵（＋＋＋）細胞外鐵（＋）細胞外鐵（－）14鐵粒幼細胞鐵粒幼細胞幼紅細胞環(huán)形鐵粒幼細胞、鐵粒紅細胞15參考值骨髓細胞外鐵：（+）~（++），約2/3人為（++），1/3人為（+）骨髓細胞內鐵：鐵粒幼紅細胞的陽性率為19%~44%，以I型為主，少數為II型16臨床應用：用于貧血的診斷及鑒別診斷貧血細胞外鐵細胞內鐵缺鐵性貧血陰性明顯減低或為0鐵粒幼細胞性貧血明顯增多增高環(huán)形鐵粒幼細胞（≥15％）骨髓增生異常綜合征（MDS）RA-RS常增高增高環(huán)形鐵粒幼細胞≥15％RCMD-RS非缺鐵性貧血溶貧、巨幼貧、再障等正?；蛟龈哒；蛟龈吒腥?、肝硬化、慢性腎炎、尿毒癥等增高減低17細胞內鐵細胞外鐵細胞外鐵細胞內鐵細胞內鐵細胞外鐵細胞內鐵細胞外鐵細胞內鐵隱性缺鐵缺鐵性貧血早期缺鐵缺鐵性貧血鐵轉運或利用異常繼發(fā)性貧血鐵負荷鐵粒幼細胞貧血巨幼細胞貧血再障MDS紅白血病圖貧血時鐵染色常見的四種情形18（二）中性粒細胞堿性磷酸酶染色（NAP染色）

染色原理及方法：Kaplow偶氮偶聯法α-磷酸萘酚鈉＋H2Oα-萘酚＋磷酸鈉＋堅牢藍RR不溶性棕黑色沉淀pH9.6堿性磷酸酶成熟中性粒細胞胞質中20固定液30s，水洗待干作用液5～15min，水洗，待干1％藏紅花3min，水洗，待干新鮮血片標本片12作用液需要新鮮配制：α-磷酸萘酚鈉溶液1.5ml，在37℃預熱5min＋堅牢藍RR1.5mg3342123NAP（＋＋＋）NAP（＋＋＋＋）NAP（＋＋）NAP（＋＋）NAP（＋）NAP（＋）NAP（－）嗜酸性粒細胞（－）24圖NAP染色（慢粒血片）26圖NAP染色（類白血片）27（三）急性白血病形態(tài)學分型的細胞化學染色『急性白血病細胞分型的常規(guī)細胞化學染色』過氧化物酶（POX）染色/蘇丹黑B（SBB）染色特異性酯酶（NAS-DCE）染色非特異性酯酶（α-NAE/α-NBE/NAS-DAE/ANAE等）染色過碘酸-雪夫（PAS）染色酸性磷酸酶（ACP）染色28過氧化物酶（POX）染色（1）染色方法及原理復方聯苯胺法二氨基聯苯胺法四甲基聯苯胺法改良Pereira法（碘化鉀法）30過氧化氫四甲基聯苯胺亞硝基鐵氰化鈉藍色顆粒棕色顆粒圖POX染色原理（四甲基聯苯胺法）水聯苯胺藍過氧化物酶試劑試劑31（2）正常血細胞的染色反應染色成功的標志：成熟中性粒細胞為陽性反應各系細胞染色反應粒系：除早期原粒外，其余為陽性單核系：除早期原單外，其余為弱陽性淋巴系：陰性漿細胞系、紅系、巨核系：均呈陰性32333435【蘇丹黑B染色（SBB染色）】（1）染色方法及原理（2）正常血細胞的染色反應（3）臨床應用同POX染色。POX更特異，SBB更敏感36特異性酯酶染色（氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色，CE染色）（1）原理及方法圖氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色法原理氯乙酸AS-D萘酚重氮鹽（堅牢紫醬GBC）紅色沉淀特異性酯酶（氯乙酸AS-D萘酚酯酶）AS-D萘酚試劑試劑37（2）正常血細胞的染色反應染色成功的標志：成熟中性粒細胞為陽性反應各系細胞的染色反應粒系：早期原粒為陰性，其余為陽性單核系：陰性淋巴系：陰性漿細胞系、紅系、巨核系：均為陰性3839非特異性酯酶染色（1）染色方法及原理：需同時進行NaF抑制試驗最特異根據酯酶特異性高低特異性酯酶(氯乙酸AS-D萘酚酯酶)非特異性酯酶

pH值不同

酸性酯酶(酸性α-醋酸萘酚酯酶)堿性酯酶(α-丁酸萘酚酯酶)中性酯酶

α-醋酸萘酚酯酶醋酸AS-D萘酚酯酶

40（2）各系血細胞的染色反應粒系：多為陰性，少數可呈陽性，陽性反應不能被NaF抑制（α-NBE染色特異性較高，粒系為陰性）單核系：早期原單為陰性，其余為陽性，陽性反應可被NaF抑制淋巴系：多為陰性，少數可呈弱陽性，陽性反應不能被NaF抑制其他細胞

414243【酯酶雙染色】染色原理及方法：在同一張涂片上進行特異性酯酶染色和非特異酯酶染色

CE染色與α-NAE染色CE染色與α-NBE染色各系血細胞的染色反應臨床應用：對AML-M4的診斷具有意義44過碘酸-雪夫反應（PAS染色，又稱糖原染色）（1）染色方法及原理細胞內含有乙二醇基的糖類在過碘酸氧化作用下產生雙醛基，后者與雪夫（Schiff）染料作用，使無色品紅變?yōu)樽霞t色物質沉積，定位于含有多糖成分的部位45（2）正常血細胞的染色反應染色成功的標志：成熟中性粒細胞為陽性反應各系血細胞的染色反應粒系：早期原粒陰性，其余為陽性，呈彌散狀陽性單核系：早期原單陰性，其余為陽性，呈細顆粒狀陽性淋巴系：多數為陰性，少數為陽性，呈粗顆粒狀陽性或塊狀陽性紅系：陰性巨核系：陽性其他細胞4647酸性磷酸酶（ACP）染色（1）染色方法及原理，同時做抗酒石酸酸性磷酸酶染色正常血細胞的染色結果：粒系、單核系、淋巴系、漿細胞系、巨核系、紅系等均呈陽性，抗酒石酸酸性磷酸酶染色均呈陰性臨床應用：主要用于毛細胞白血?。℉CL）的診斷及鑒別診斷，毛細胞為陽性或強陽性，不被酒石酸抑制48本組細胞化學染色的臨床應用鑒別原粒、原單及原淋細胞鑒別急性白血病的類型急性白血病分類細胞化學染色鑒別急性白血病類型示例49細胞類型原粒原單原淋POX陰性或陽性（常為陽性）陰性或弱陽性（常為弱陽性）陰性NAS-DCE陰性或陽性（常為陽性）陰性陰性α-NAEα-NBENAS-DAEANAE陰性或陽性（NaF不抑制）陽性（NaF完全抑制）陰性或陽性（NaF不抑制）PAS陰性或陽性（彌散狀陽性）陰性或陽性（細顆粒陽性）陰性或陽性（粗顆粒陽性）ACP陽性（酒石酸抑制）陽性（酒石酸抑制）陽性（酒石酸抑制）50白血病慢性白血病急性白血病慢性淋巴細胞白血病慢性粒細胞白血病急性淋巴細胞白血病急性髓細胞白血病M0（微分化）M7（巨核細胞）M3（早幼粒細胞）M2（粒細胞部分成熟型）M6（紅、白細胞）M5（單核細胞）M4（粒、單核細胞）M1（粒細胞未成熟型）原淋原粒原粒+原單原單骨髓中白血病性原始細胞20%早幼粒細胞化學染色51ALL原淋M1原粒M4原粒+原單M5原單細胞化學染色52【細胞化學染色鑒別急性白血病的類型】POX染色：最重要、首選的常規(guī)細胞化學染色，是鑒別急性淋巴細胞白血病和急粒髓細胞白血病的重要指標原始細胞陽性率≥3%為AML的M1～M5原始細胞陽性率＜3%為ALL等

CE染色：能較特異地識別粒系細胞，用于輔助鑒別急性白血病的類型（M1、M2、M3、M4）非特異性酯酶染色及NaF抑制試驗：能較特異地識別單核系細胞，用于輔助鑒別急性白血病的類型（M4、M5）PAS染色：可以鑒別淋巴細胞與粒、單核細胞，用于輔助鑒別急性白血病的細胞類型。本法還用于鑒別幼紅細胞增生的性質5354原始細胞：原淋55原始細胞：原單+原粒56『作業(yè)』鑒別鐵染色結果的相關概念貯存鐵鐵蛋白含鐵血黃素細胞外鐵細胞內鐵鐵粒幼細胞環(huán)形鐵粒幼細胞鐵粒紅細胞57『作業(yè)』骨髓鐵染色的參考值？貧血時鐵染色常見以下四種結果，分別說明機體內鐵處于哪種狀態(tài)外鐵減少，內鐵正常外鐵減少或消失，內鐵減少外鐵增高，內鐵減少外鐵增高，內鐵增高58『作業(yè)』POX染色、CE染色、非特異性酯酶染色及NaF抑制試驗、PAS染色這四種染色，粒系、單核系、淋巴系各階段細胞的結果是怎樣的？以列表的方式說明59『復習』怎樣用POX染色、CE染色、非特異性酯酶染色及NaF