ZICHILIC色譜柱快速檢測嬰幼兒奶粉中雙氰胺

ZIC?-HILIC色譜柱快速檢測嬰幼兒奶粉中雙氰胺默克密理博應用實驗室 2013-01-291前言(二氰二氨2013年1(二氰二氨Dicyanodiamide，DCD)，已經下令禁售含有 DCD的奶制品。中國的進口奶粉八成來自新西蘭，全球 60%以上的奶源產自新西蘭。新西蘭奶農通常會在牧草上噴灑雙氰胺，防止肥料中的副產品硝酸鹽流入河流和湖泊。NHNH21雙氰胺分子結構目前，還沒有相應的食品含量標準和檢測標準。默克密理博致力于分析方法的開發(fā)，為客戶提供簡便、快速的解決方案。雙氰胺極性較強，易溶于水，中性及酸性條件下易電離，適合使用默克密理博的兩性離子型親水作用 (ZIC?-HILIC)色譜柱分離。同時，雙氰胺在 218nm下有強紫外吸收，可以采用 ZIC?-HILIC色譜柱在 HPLC-UV條件進行快速分析，亦可在 LC-MS/MS進行痕量檢測。儀器及試劑儀器設備色譜柱： ZIC?-HILIC,PEEKHPLCColumn250x4.6mm,5μm,200（貨?號:1.50458.0001）HPLC：Agilent1260HPLC（DAD檢測器）單道移液器 Transferpette?S，Digitaladjustable500-5000ul（貨號： 704782BR）微孔濾膜 :0.45um,PTFE（貨號： SLFHX13NL）純水系統(tǒng) :Milli-Q3（Millipore）PP離心管： 50mL,帶蓋，含底座（貨號 :114822BR）試劑色譜乙腈 :LichroSolv?AcetonitrileGradientGrade（貨號 :1.00030.4008）乙酸銨： AmmoniumacetateforanalysisEMSURE?ACS,Reag.PhEur（貨號:1.01116.1000）甲酸：Formicacid98-100%foranalysisEMSURE?ACS,Reag.PhEur（貨號:1.00264.1000）2%甲酸溶液：取 20ml甲酸，加入 1000ml超純水中乙腈 -甲酸溶液：取 700ml乙腈（ 2.2.1）,與300ml甲酸溶液（ 2.2.4）混合實驗方法樣品處理方法1:取嬰幼兒配方奶粉 2g于50mLPP管（ 2.1.6）中，加 18mL2%的甲酸水溶液（2.2.4），加蓋密閉。搖振 60秒，再超聲 30分鐘，取出，再搖振 60秒，放入離心機中離心（ 4000轉）， 20分鐘。取出，吸取上清液 50ul，于10mlPP管中，加入950ul乙腈，加蓋密閉，振搖 60秒，吸取溶液，過濾，即得供試液。方法 2：取嬰幼兒配方奶粉 2g于50mLPP管中，加 20mL乙腈 -甲酸水溶液（ 2.2.4），加蓋密閉。搖振 60秒，再超聲 30分鐘，取出，再搖振 60秒，靜置，吸取上層溶液，過濾，即得供試液。加標樣品同法配制。測試條件色譜條件流動相（v/v）:A-醋酸銨溶液（ 10mM）,B-乙腈比例*：A:B=12：88流速:1mL/min進樣量：20ul*必要時設置如下方法對色譜柱進行再生和平衡：時間， min%%流速 ml/min012881等度1012881等度10.530702再生1530702再生15.112882平衡202882平衡測試結果按照方法 1處理，結果如下：對照品測試結果min789.43025201510503.3.2無檢出的奶粉空白DAD1A,Sig=218,4Ref=off(G:120862...020130129-32013-01-3014-52-571mAU50403.3.2無檢出的奶粉空白DAD1A,Sig=218,4Ref=off(G:120862...020130129-32013-01-3014-52-571mAU50403020102086-PE0X-150248-0130-88B-02.01234567圖1對照品圖譜 （DCD濃度1.25ug/ml）4.98min,理論塔板數 13086,拖尾因子 1.1.3配方奶粉空白3.3.3奶粉加標DAD1A,Sig=218,4DAD1A,Sig=218,4Ref=off(G:120862..32013-01-3014-52-5712086-PE2-150248-0130-88B-0.D)min01.8535.6mAU12010078.3395.3203.51.3367.256.208060402004奶粉加標（測試液中加入的標樣濃度 :5ug/ml）DAD1A,Sig=218,4Ref=off(G:120862..32013-01-3014-52-5712086-PE1-150248-0130-88B-0.D)mAU5040302010minmAU5040302010min5奶粉加標（測試液中加入的標樣濃度： 0.05ug/ml）3.3.3某知名品牌奶粉2086-PE0X-150248-0130-88B-0.D6802015-5680.4678.362.3521.55256某進口奶源的知名品牌奶粉圖譜4結論采用ZIC?-HILIC色譜柱，可用于雙氰胺的快速檢測。處理方法簡單，色譜峰型良好，方法RSD<2%),檢測濃度在 0.5-10ug/ml之間現行關系良好 (R=0.999),加樣回收95.6-101.5%之間。按照方法 1的處理， LOD為1.3ug/g奶粉，按照方法二處理 ,LOD可0.07ug/g 。該色譜柱還能用于三聚氰胺、雙氰胺、三聚氰酸、 二甲雙胍、尿素等的同時檢測，如：另外，LC-MS/MS采用如下色譜條件：色譜柱： ZIC?-HILIC(5μm,200?)PEEK150x2.1mm流動相： A:95:5ACN:0.1%formicacid/10mMammoniumformateinH2OB:50:50ACN:0.1%formicacid/10mMammoniumformateinH2O梯度方法Time(min)SolutionA(%)SolutionB(%)Flowrate(mL/min)Elution0.0-5.010000.400isocratic5.0-12.8100250750.400gradient12.8-15.825750.400isocratic15.8-16.010000.400equilibration16.0-24.910000.600equilibratio