流式細(xì)胞術(shù)免疫標(biāo)記簡介課件

流式細(xì)胞術(shù)免疫標(biāo)記應(yīng)用簡介2009-12-03流式細(xì)胞術(shù)系列講座之——免疫標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)免疫標(biāo)記應(yīng)用簡介2009-12-03流式細(xì)胞術(shù)系列1上次流式細(xì)胞術(shù)講座內(nèi)容（概述）流式細(xì)胞術(shù)的一般介紹流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢測和科研中的應(yīng)用上次流式細(xì)胞術(shù)講座內(nèi)容（概述）流式細(xì)胞術(shù)的一般介紹2流式細(xì)胞儀可檢測的細(xì)胞參數(shù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞顆粒性程度細(xì)胞表面面積核漿比例DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量細(xì)胞功能細(xì)胞表面蛋白抗原細(xì)胞胞漿內(nèi)蛋白性抗原細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子細(xì)胞增殖細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度流式細(xì)胞儀可檢測的細(xì)胞參數(shù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞功能3免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabellingtechnique）:是指用熒光素、放射性同位素、酶、發(fā)光劑或電子致密物質(zhì)等作為示蹤劑，標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。流式細(xì)胞術(shù)檢測蛋白質(zhì)分子：免疫熒光標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabelling4

FACSCalibur流式細(xì)胞儀能夠檢測的熒光（Fluorescence）信號FL1（第一熒光）-FITC(異硫氰酸熒光素）FL2（第二熒光）-PE（藻紅蛋白）FL3（第三熒光）-PerCP,PeCy5等PL4（第四熒光）-APC（藻青蛋白）雙色直接染色FACSCalibur流式細(xì)胞儀能夠檢測的熒光（Fluor5流式細(xì)胞術(shù)免疫熒光標(biāo)記的應(yīng)用檢測細(xì)胞表面蛋白抗原檢測細(xì)胞胞漿內(nèi)蛋白性抗原檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子優(yōu)勢：在同一細(xì)胞上同時檢測多種標(biāo)志流式細(xì)胞術(shù)免疫熒光標(biāo)記的應(yīng)用檢測細(xì)胞表面蛋白抗原6血液系統(tǒng)各型細(xì)胞免疫標(biāo)志血液系統(tǒng)各型細(xì)胞免疫標(biāo)志7CD34+抗原在早期造血祖細(xì)胞內(nèi)呈高水平表達(dá)，隨著細(xì)胞成熟其表達(dá)呈進(jìn)化性下降，繼而消失。CD38抗原是造血干細(xì)胞向多系定向分化的標(biāo)志之一，并隨一定的分化過程表達(dá)上調(diào)最近發(fā)現(xiàn)CD90（Thy-1）是比CD34更早的干、祖細(xì)胞標(biāo)志結(jié)合多種分化抗原的表達(dá)可以作為造血細(xì)胞不同發(fā)育階段的標(biāo)志。如CD34+、CD33+細(xì)胞群為多能干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；CD34+、CD19+多為多能干細(xì)胞向B系定向的祖細(xì)胞。CD34+、TdT+、CD10+、CD7+則被認(rèn)為是向T系定向的祖細(xì)胞。造祖/干細(xì)胞CD34+抗原在早期造血祖細(xì)胞內(nèi)呈高水平表達(dá)，隨著細(xì)胞成熟其8

T細(xì)胞及其亞群T祖細(xì)胞（pro-T）的表型為CD34+、TdT+、CD10+、CD7+未成熟T細(xì)胞標(biāo)志CD3、CD4和CD8。在T細(xì)胞發(fā)育過程中，CD7是最早出現(xiàn)的T細(xì)胞標(biāo)志，且貫穿表達(dá)在整個T細(xì)胞分化發(fā)育過程中。胸腺細(xì)胞要分化發(fā)育為有功能的成熟T細(xì)胞，細(xì)胞表面標(biāo)志需經(jīng)歷一定的變化過程。T細(xì)胞標(biāo)志

T細(xì)胞及其亞群T細(xì)胞標(biāo)志9進(jìn)入外周淋巴器官和血液，執(zhí)行免疫功能CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR-（即CD4、CD8雙陰性）CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+（即CD4、CD8雙陽性）CD7+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8-、TCR+CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8+、TCR+進(jìn)入外周淋巴器官和血液，執(zhí)行免疫功能CD7+、CD2-、CD10CD3+、CD4+、CD8-：T輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞（Th/Ti），占T細(xì)胞總數(shù)的60%~70%；CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/殺傷細(xì)胞（Ts/Tc），20%~30%；CD3+CD4+CD8+：1%~3%；CD3+CD4-CD8-：1%~10%。前三種表型細(xì)胞的TCR主要為TCRαβ，而CD4-CD8-T細(xì)胞主要表達(dá)TCRγδ，他們都執(zhí)行細(xì)胞免疫功能。正常外周血中通常存在的T細(xì)胞亞群正常外周血中通常存在的T細(xì)胞亞群11CD2是綿羊紅細(xì)胞受體和淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-2（LFA-2），表達(dá)于人95%T細(xì)胞、50%～70％胸腺細(xì)胞和大顆粒淋巴細(xì)胞（LGL／NK）的表面。CD3是T細(xì)胞表面抗原，表達(dá)于成熟胸腺細(xì)胞、靜息和激活的的外周血T細(xì)胞，是鑒定T細(xì)胞的重要標(biāo)志，其胞漿和膜CD3是早期和普通型T細(xì)胞白血病的主要分型標(biāo)記。CD2是綿羊紅細(xì)胞受體和淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-2（LFA12CD5、CD7是T細(xì)胞白血病較特異的標(biāo)記，也是髓系白血病時最常見的伴隨標(biāo)記。CD45則是白細(xì)胞的共同標(biāo)記抗體CD25和CD28主要分布于活化T淋巴細(xì)胞表面，為活化T淋巴細(xì)胞標(biāo)志。胸腺細(xì)胞、靜止T細(xì)胞、靜止B細(xì)胞以及NK細(xì)胞表面無表達(dá)。CD5、CD7是T細(xì)胞白血病較特異的標(biāo)記，也是髓系白血病13末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）和II類人類白細(xì)胞抗原（HLA-DR）的陽性表達(dá)對早期T細(xì)胞白血病的診斷有重要價值。80％～90％和95％以上的NK細(xì)胞表達(dá)CD16和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定義NK細(xì)胞。末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）和II類人類白細(xì)胞抗原（HLA14B細(xì)胞標(biāo)記B細(xì)胞B細(xì)胞的分化主要分為B祖細(xì)胞、前B細(xì)胞、未成熟B細(xì)胞、成熟B細(xì)胞、活化B細(xì)胞和漿細(xì)胞6個階段。（1）B祖細(xì)胞（pro-B）：此期最早表達(dá)的B細(xì)胞特異性抗原是CD19，同時表達(dá)CD34、細(xì)胞核TdT、HLA-DR、CD40、CyCD22。（2）前B細(xì)胞（pre-B）：CD34和TdT消失，出現(xiàn)CyCD79、CD10、CD20、CD9、CDw78、CD74，cμ+（胞漿IgM重鏈）。B細(xì)胞標(biāo)記B細(xì)胞B細(xì)胞的分化主要分為B祖細(xì)胞、前15

（3）未成熟（早期）B細(xì)胞（immatureBcell）：CD9、CD10消失，出現(xiàn)SIgM、CD22。CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79表達(dá)增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、CDw76相繼出現(xiàn)。（4）成熟B細(xì)胞（matureBcell）：SIgM和IgD同時表達(dá)，并出現(xiàn)CR、FcR和絲裂原受體，上述B細(xì)胞抗原繼續(xù)存在。

（3）未成熟（早期）B細(xì)胞（immatureBcel16

（5）活化B細(xì)胞（activatedBcell）：成熟B細(xì)胞被抗原或絲裂原刺激后，成為活化B細(xì)胞，繼之增生和分化。在此過程伴隨表達(dá)B細(xì)胞激活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相關(guān)抗原如CD25、CD26、CD30、CD69、CD70、CD71、CD38等。膜結(jié)合型Ig逐漸減少，分泌型Ig逐漸增加。（6）漿細(xì)胞（plasmacell）：激活B細(xì)胞進(jìn)一步分化成為產(chǎn)生抗體的漿細(xì)胞，這時獲得PC-1、PCA-1和CD138漿細(xì)胞特異抗原，CD85表達(dá)增加，CD38抗原再出現(xiàn)。而SIg和上述B抗原消失。CD79仍可存在于胞質(zhì)中。（5）活化B細(xì)胞（activatedBcell）：成17B細(xì)胞上的CD抗原分為：①B細(xì)胞限制性（特異性）抗原：CD19、CD20、CD21、CD22、CD77和CD79，

它們的表達(dá)只限于B細(xì)胞上，在鑒別細(xì)胞系上是十分重要的標(biāo)志。②B細(xì)胞相關(guān)性抗原：CD5、CD9、CD10、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CDw78、CD81、CD82、CD83、CD84、CD85、CD86、CD124和CD139。B細(xì)胞表面的受體SIg，是B細(xì)胞特異性識別抗原的受體，也是B細(xì)胞重要的特征標(biāo)志。B細(xì)胞上的CD抗原分為：18CD19、CD20、CD21、CD22和CD24都是B細(xì)胞白血病和淋巴瘤最常用的標(biāo)記抗體。對中國人而言，CD19是特異性和敏感性最高的。CD19是一種早期的、譜系特異的泛B細(xì)胞表面抗原，從最早期B細(xì)胞前體細(xì)胞階段即表達(dá)，持續(xù)存在直至B細(xì)胞終末階段外周血T細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板表面不表達(dá)CD19。CD19、CD20、CD21、CD22和CD24都是B細(xì)胞白19髓系細(xì)胞標(biāo)記包括CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33、CD36、CD45、CD68、CD41、CD42、CD61、CD63和CD117等。這些免疫標(biāo)記種類繁雜，缺乏特異性和敏感性（與淋巴細(xì)胞標(biāo)記抗體相比）。髓系細(xì)胞標(biāo)記包括CD11b、CD13、CD14、CD15、C203.髓系標(biāo)記從髓系祖細(xì)胞→終末分化的成熟細(xì)胞（粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板和紅細(xì)胞）間各階段細(xì)胞特征性標(biāo)志還不十分清楚。根據(jù)粒細(xì)胞和單核細(xì)胞上的髓系抗原表達(dá)試將其大致分為七種類型:（1）粒細(xì)胞和單核細(xì)胞上都有較強(qiáng)表達(dá)的抗原有：CD13、CDw17、CD32、CD87、CD88、CD89、CDw92、CD93、CD156、CD157、CD163。其中CD13在原粒細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)比膜上早，在AML診斷上十分重要。（2）以粒細(xì)胞為主，但也存在于單核細(xì)胞的抗原有：CD15和CD65。CD65是特異性髓系抗原，強(qiáng)表達(dá)在成熟粒細(xì)胞，弱表達(dá)在單核細(xì)胞上。

（3）基本表達(dá)在粒細(xì)胞上的抗原有：CD16b和CD66。

3.髓系標(biāo)記從髓系祖細(xì)胞→終末分化的成熟細(xì)胞（粒細(xì)胞、單21（4）以單核細(xì)胞為主，但也表達(dá)在粒細(xì)胞的抗原有：CD14和CD33。CD14主要強(qiáng)表達(dá)在單核-巨噬細(xì)胞，弱表達(dá)在粒細(xì)胞上。CD33抗原分布只限于造血系統(tǒng)內(nèi)，表達(dá)在髓系祖細(xì)胞CFU-GEMM、CFU-GM、CFU-G、CFU-M以及相應(yīng)的白血病細(xì)胞上。（5）基本只表達(dá)在單核細(xì)胞上的抗原有：CD16、CD64、CD68、CD91、CDw136和CD65。CD68是目前發(fā)現(xiàn)可靠的檢測造血系統(tǒng)內(nèi)單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的特異標(biāo)志。

（4）以單核細(xì)胞為主，但也表達(dá)在粒細(xì)胞的抗原有：CD14和C22（6）造血干、祖細(xì)胞抗原有：CD34和CD90。CD34除表達(dá)在早期造血干、祖細(xì)胞外，還表達(dá)在約40%的AML和60%的ALL上（7）其他髓系相關(guān)抗原：這些抗原主要存在于其他系細(xì)胞上，但在某些髓系細(xì)胞上也有表達(dá)，如：CD4、CD7、CD9、CD10、CD11b、CD11c、CD31、CD36、CD38等。

（6）造血干、祖細(xì)胞抗原有：CD34和CD90。CD34除23

巨核細(xì)胞系

在巨核細(xì)胞系發(fā)育過程中依次出現(xiàn)PPO、CD41a（Ⅱb/Ⅲa）、CD41b（Ⅱb）和CD61（Ⅲa）、CD42（Ⅰb）。還可表達(dá)CD36（強(qiáng)）。正常情況下血小板處于靜止?fàn)顟B(tài)。目前研制出的抗血小板單抗如CD9、CDw17、CD31、CD36、CD41a、CD41b、CD42a、CD42b、CD61，主要都針對靜止的血小板。當(dāng)血小板被激活時，血小板中顆粒內(nèi)容物釋放，整合到活化的血小板質(zhì)膜內(nèi)，成為一些激活抗原，如CD62（P-選擇素）、CD63及CD107a和CD107b。

紅細(xì)胞系

血型糖蛋白A、H。

巨核細(xì)胞系24流式細(xì)胞術(shù)免疫熒光標(biāo)記抗體的選擇有特異性標(biāo)志：選擇一種即可，如CD3標(biāo)記總T細(xì)胞；沒有明顯的特異性標(biāo)志：可以采用不同抗體組合，標(biāo)記某種細(xì)胞。如Treg細(xì)胞公認(rèn)的標(biāo)志為CD4+CD25+FoxP3+.表面分子標(biāo)記可以與胞內(nèi)分子標(biāo)記相結(jié)合；免疫熒光標(biāo)記也可以與其它的標(biāo)記方法相結(jié)合：如與CFSE進(jìn)行不同細(xì)胞亞群增殖分析。

流式細(xì)胞術(shù)免疫熒光標(biāo)記抗體的選擇有特異性標(biāo)志：選擇一種即可，25流式細(xì)胞術(shù)免疫標(biāo)記簡介課件26流式細(xì)胞術(shù)表面分子免疫標(biāo)記操作舉例淋巴細(xì)胞亞群檢測操作程序

一、實(shí)驗(yàn)原理：人的淋巴細(xì)胞根據(jù)其生物功能和細(xì)胞表面抗原的表達(dá)可分為三大類：T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞和NK自然殺傷細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞表達(dá)CD3；B淋巴細(xì)胞表達(dá)CD19；NK自然殺傷細(xì)胞表達(dá)CD56或CD16，并且不表達(dá)CD3。利用各種單克隆抗體與淋巴細(xì)胞表面抗原結(jié)合，再配多色熒光染料，即可以把淋巴細(xì)胞區(qū)分為各種亞型。進(jìn)面得到各亞群的比例。流式細(xì)胞術(shù)表面分子免疫標(biāo)記操作舉例淋巴細(xì)胞亞群檢測操作程序27二、主要試劑：MultiTESTIMKKit(美國BDBiosciences公司；CAT:340503)，其中包括：1、CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC2、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC3、FACSLysingSolution三、實(shí)驗(yàn)操作：1、標(biāo)本采集：使用EDTA-K2抗凝真空采血管，抽取靜脈血2ml。2、染色和固定細(xì)胞：標(biāo)本管編號A，取兩只流式專用管A1、A2。A1管加入CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PreCP/CD19-APC20uL；A2管加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PreCP/CD4-APC20Ul。A1、A2管中分別再加入全血100Ul，混均。置室溫，避光孵育15min。加入FACSLysing溶血液2.0ml，置室溫，避光孵育10min。300g離心5min，棄上清液。PBS洗滌細(xì)胞兩次，300g離心5min，棄上清液。1%多聚甲醛0.5mL。3、上機(jī)檢測；分析結(jié)果；打印實(shí)驗(yàn)報(bào)告。二、主要試劑：28流式細(xì)胞術(shù)胞內(nèi)分子免疫標(biāo)記操作流程流式細(xì)胞術(shù)胞內(nèi)分子免疫標(biāo)記操作流程29流式細(xì)胞術(shù)胞內(nèi)分子免疫標(biāo)記操作舉例B淋巴細(xì)胞胞內(nèi)ZAP-70分子檢測操作程序

流式細(xì)胞術(shù)胞內(nèi)分子免疫標(biāo)記操作舉例B淋巴細(xì)胞胞內(nèi)ZAP-7030主要試劑：主要試劑：31【臨床意義】【臨床意義】32流式細(xì)胞術(shù)免疫標(biāo)記應(yīng)用簡介2009-12-03流式細(xì)胞術(shù)系列講座之——免疫標(biāo)記流式細(xì)胞術(shù)免疫標(biāo)記應(yīng)用簡介2009-12-03流式細(xì)胞術(shù)系列33上次流式細(xì)胞術(shù)講座內(nèi)容（概述）流式細(xì)胞術(shù)的一般介紹流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢測和科研中的應(yīng)用上次流式細(xì)胞術(shù)講座內(nèi)容（概述）流式細(xì)胞術(shù)的一般介紹34流式細(xì)胞儀可檢測的細(xì)胞參數(shù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞大小細(xì)胞顆粒性程度細(xì)胞表面面積核漿比例DNA含量與細(xì)胞周期RNA含量細(xì)胞功能細(xì)胞表面蛋白抗原細(xì)胞胞漿內(nèi)蛋白性抗原細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子細(xì)胞增殖細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度流式細(xì)胞儀可檢測的細(xì)胞參數(shù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞功能35免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabellingtechnique）:是指用熒光素、放射性同位素、酶、發(fā)光劑或電子致密物質(zhì)等作為示蹤劑，標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。流式細(xì)胞術(shù)檢測蛋白質(zhì)分子：免疫熒光標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabelling36

FACSCalibur流式細(xì)胞儀能夠檢測的熒光（Fluorescence）信號FL1（第一熒光）-FITC(異硫氰酸熒光素）FL2（第二熒光）-PE（藻紅蛋白）FL3（第三熒光）-PerCP,PeCy5等PL4（第四熒光）-APC（藻青蛋白）雙色直接染色FACSCalibur流式細(xì)胞儀能夠檢測的熒光（Fluor37流式細(xì)胞術(shù)免疫熒光標(biāo)記的應(yīng)用檢測細(xì)胞表面蛋白抗原檢測細(xì)胞胞漿內(nèi)蛋白性抗原檢測細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子優(yōu)勢：在同一細(xì)胞上同時檢測多種標(biāo)志流式細(xì)胞術(shù)免疫熒光標(biāo)記的應(yīng)用檢測細(xì)胞表面蛋白抗原38血液系統(tǒng)各型細(xì)胞免疫標(biāo)志血液系統(tǒng)各型細(xì)胞免疫標(biāo)志39CD34+抗原在早期造血祖細(xì)胞內(nèi)呈高水平表達(dá)，隨著細(xì)胞成熟其表達(dá)呈進(jìn)化性下降，繼而消失。CD38抗原是造血干細(xì)胞向多系定向分化的標(biāo)志之一，并隨一定的分化過程表達(dá)上調(diào)最近發(fā)現(xiàn)CD90（Thy-1）是比CD34更早的干、祖細(xì)胞標(biāo)志結(jié)合多種分化抗原的表達(dá)可以作為造血細(xì)胞不同發(fā)育階段的標(biāo)志。如CD34+、CD33+細(xì)胞群為多能干細(xì)胞向髓系定向的標(biāo)志；CD34+、CD19+多為多能干細(xì)胞向B系定向的祖細(xì)胞。CD34+、TdT+、CD10+、CD7+則被認(rèn)為是向T系定向的祖細(xì)胞。造祖/干細(xì)胞CD34+抗原在早期造血祖細(xì)胞內(nèi)呈高水平表達(dá)，隨著細(xì)胞成熟其40

T細(xì)胞及其亞群T祖細(xì)胞（pro-T）的表型為CD34+、TdT+、CD10+、CD7+未成熟T細(xì)胞標(biāo)志CD3、CD4和CD8。在T細(xì)胞發(fā)育過程中，CD7是最早出現(xiàn)的T細(xì)胞標(biāo)志，且貫穿表達(dá)在整個T細(xì)胞分化發(fā)育過程中。胸腺細(xì)胞要分化發(fā)育為有功能的成熟T細(xì)胞，細(xì)胞表面標(biāo)志需經(jīng)歷一定的變化過程。T細(xì)胞標(biāo)志

T細(xì)胞及其亞群T細(xì)胞標(biāo)志41進(jìn)入外周淋巴器官和血液，執(zhí)行免疫功能CD7+、CD2-、CD3-、CD4-、CD8-、TCR-CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8-、TCR-（即CD4、CD8雙陰性）CD7+、CD1+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8+、TCR+（即CD4、CD8雙陽性）CD7+、CD2+、CD3+、CD4+、CD8-、TCR+CD7+、CD2+、CD3+、CD4-、CD8+、TCR+進(jìn)入外周淋巴器官和血液，執(zhí)行免疫功能CD7+、CD2-、CD42CD3+、CD4+、CD8-：T輔助/誘導(dǎo)細(xì)胞（Th/Ti），占T細(xì)胞總數(shù)的60%~70%；CD3+、CD4-、CD8+：T抑制/殺傷細(xì)胞（Ts/Tc），20%~30%；CD3+CD4+CD8+：1%~3%；CD3+CD4-CD8-：1%~10%。前三種表型細(xì)胞的TCR主要為TCRαβ，而CD4-CD8-T細(xì)胞主要表達(dá)TCRγδ，他們都執(zhí)行細(xì)胞免疫功能。正常外周血中通常存在的T細(xì)胞亞群正常外周血中通常存在的T細(xì)胞亞群43CD2是綿羊紅細(xì)胞受體和淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-2（LFA-2），表達(dá)于人95%T細(xì)胞、50%～70％胸腺細(xì)胞和大顆粒淋巴細(xì)胞（LGL／NK）的表面。CD3是T細(xì)胞表面抗原，表達(dá)于成熟胸腺細(xì)胞、靜息和激活的的外周血T細(xì)胞，是鑒定T細(xì)胞的重要標(biāo)志，其胞漿和膜CD3是早期和普通型T細(xì)胞白血病的主要分型標(biāo)記。CD2是綿羊紅細(xì)胞受體和淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-2（LFA44CD5、CD7是T細(xì)胞白血病較特異的標(biāo)記，也是髓系白血病時最常見的伴隨標(biāo)記。CD45則是白細(xì)胞的共同標(biāo)記抗體CD25和CD28主要分布于活化T淋巴細(xì)胞表面，為活化T淋巴細(xì)胞標(biāo)志。胸腺細(xì)胞、靜止T細(xì)胞、靜止B細(xì)胞以及NK細(xì)胞表面無表達(dá)。CD5、CD7是T細(xì)胞白血病較特異的標(biāo)記，也是髓系白血病45末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）和II類人類白細(xì)胞抗原（HLA-DR）的陽性表達(dá)對早期T細(xì)胞白血病的診斷有重要價值。80％～90％和95％以上的NK細(xì)胞表達(dá)CD16和CD56。用CD3-CD16+CD56+可定義NK細(xì)胞。末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（TdT）和II類人類白細(xì)胞抗原（HLA46B細(xì)胞標(biāo)記B細(xì)胞B細(xì)胞的分化主要分為B祖細(xì)胞、前B細(xì)胞、未成熟B細(xì)胞、成熟B細(xì)胞、活化B細(xì)胞和漿細(xì)胞6個階段。（1）B祖細(xì)胞（pro-B）：此期最早表達(dá)的B細(xì)胞特異性抗原是CD19，同時表達(dá)CD34、細(xì)胞核TdT、HLA-DR、CD40、CyCD22。（2）前B細(xì)胞（pre-B）：CD34和TdT消失，出現(xiàn)CyCD79、CD10、CD20、CD9、CDw78、CD74，cμ+（胞漿IgM重鏈）。B細(xì)胞標(biāo)記B細(xì)胞B細(xì)胞的分化主要分為B祖細(xì)胞、前47

（3）未成熟（早期）B細(xì)胞（immatureBcell）：CD9、CD10消失，出現(xiàn)SIgM、CD22。CD20、CD24、CD40、CD72、CD74、CDw78、CD79表達(dá)增加。其他新的B抗原CD37、CD2、CDw75、CDw76相繼出現(xiàn)。（4）成熟B細(xì)胞（matureBcell）：SIgM和IgD同時表達(dá)，并出現(xiàn)CR、FcR和絲裂原受體，上述B細(xì)胞抗原繼續(xù)存在。

（3）未成熟（早期）B細(xì)胞（immatureBcel48

（5）活化B細(xì)胞（activatedBcell）：成熟B細(xì)胞被抗原或絲裂原刺激后，成為活化B細(xì)胞，繼之增生和分化。在此過程伴隨表達(dá)B細(xì)胞激活抗原CD23、CD77、CD80、CD86和其他激活相關(guān)抗原如CD25、CD26、CD30、CD69、CD70、CD71、CD38等。膜結(jié)合型Ig逐漸減少，分泌型Ig逐漸增加。（6）漿細(xì)胞（plasmacell）：激活B細(xì)胞進(jìn)一步分化成為產(chǎn)生抗體的漿細(xì)胞，這時獲得PC-1、PCA-1和CD138漿細(xì)胞特異抗原，CD85表達(dá)增加，CD38抗原再出現(xiàn)。而SIg和上述B抗原消失。CD79仍可存在于胞質(zhì)中。（5）活化B細(xì)胞（activatedBcell）：成49B細(xì)胞上的CD抗原分為：①B細(xì)胞限制性（特異性）抗原：CD19、CD20、CD21、CD22、CD77和CD79，

它們的表達(dá)只限于B細(xì)胞上，在鑒別細(xì)胞系上是十分重要的標(biāo)志。②B細(xì)胞相關(guān)性抗原：CD5、CD9、CD10、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CDw78、CD81、CD82、CD83、CD84、CD85、CD86、CD124和CD139。B細(xì)胞表面的受體SIg，是B細(xì)胞特異性識別抗原的受體，也是B細(xì)胞重要的特征標(biāo)志。B細(xì)胞上的CD抗原分為：50CD19、CD20、CD21、CD22和CD24都是B細(xì)胞白血病和淋巴瘤最常用的標(biāo)記抗體。對中國人而言，CD19是特異性和敏感性最高的。CD19是一種早期的、譜系特異的泛B細(xì)胞表面抗原，從最早期B細(xì)胞前體細(xì)胞階段即表達(dá)，持續(xù)存在直至B細(xì)胞終末階段外周血T細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板表面不表達(dá)CD19。CD19、CD20、CD21、CD22和CD24都是B細(xì)胞白51髓系細(xì)胞標(biāo)記包括CD11b、CD13、CD14、CD15、CD33、CD36、CD45、CD68、CD41、CD42、CD61、CD63和CD117等。這些免疫標(biāo)記種類繁雜，缺乏特異性和敏感性（與淋巴細(xì)胞標(biāo)記抗體相比）。髓系細(xì)胞標(biāo)記包括CD11b、CD13、CD14、CD15、C523.髓系標(biāo)記從髓系祖細(xì)胞→終末分化的成熟細(xì)胞（粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、血小板和紅細(xì)胞）間各階段細(xì)胞特征性標(biāo)志還不十分清楚。根據(jù)粒細(xì)胞和單核細(xì)胞上的髓系抗原表達(dá)試將其大致分為七種類型:（1）粒細(xì)胞和單核細(xì)胞上都有較強(qiáng)表達(dá)的抗原有：CD13、CDw17、CD32、CD87、CD88、CD89、CDw92、CD93、CD156、CD157、CD163。其中CD13在原粒細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)比膜上早，在AML診斷上十分重要。（2）以粒細(xì)胞為主，但也存在于單核細(xì)胞的抗原有：CD15和CD65。CD65是特異性髓系抗原，強(qiáng)表達(dá)在成熟粒細(xì)胞，弱表達(dá)在單核細(xì)胞上。

（3）基本表達(dá)在粒細(xì)胞上的抗原有：CD16b和CD66。

3.髓系標(biāo)記從髓系祖細(xì)胞→終末分化的成熟細(xì)胞（粒細(xì)胞、單53（4）以單核細(xì)胞為主，但也表達(dá)在粒細(xì)胞的抗原有：CD14和CD33。CD14主要強(qiáng)表達(dá)在單核-巨噬細(xì)胞，弱表達(dá)在粒細(xì)胞上。CD33抗原分布只限于造血系統(tǒng)內(nèi)，表達(dá)在髓系祖細(xì)胞CFU-GEMM、CFU-GM、CFU-G、CFU-M以及相應(yīng)的白血病細(xì)胞上。（5）基本只表達(dá)在單核細(xì)胞上的抗原有：CD16、CD64、CD68、CD91、CDw136和CD65。CD68是目前發(fā)現(xiàn)可靠的檢測造血系統(tǒng)內(nèi)單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的特異標(biāo)志。

（4）以單核細(xì)胞為主，但也表達(dá)在粒細(xì)胞的抗原有：CD14和C54（6）造血干、祖細(xì)胞抗原有：CD34和CD90。CD34除表達(dá)在早期造血干、祖細(xì)胞外，還表達(dá)在約40%的AML和60%的ALL上（7）其他髓系相關(guān)抗原：這些抗原主要存在于其他系細(xì)胞上，但在某些髓系細(xì)胞上也有表達(dá)，如：CD4、CD7、CD9、CD10、CD11b、CD11c、CD31、CD36、CD38等。

（6）造血干、祖細(xì)胞抗原有：CD34和CD90。CD34除55

巨核細(xì)胞系

在巨核細(xì)胞系發(fā)育過程中依次出現(xiàn)PPO、CD41a（Ⅱb/Ⅲa）、CD41b（Ⅱb）和CD61（Ⅲa）、CD42（Ⅰb）。還可表達(dá)CD36（強(qiáng)）。正常情況下血小板處于靜止?fàn)顟B(tài)。目前研制出的抗血小板單抗如CD9、CDw17、CD31、CD36、CD41a、CD41b、CD42a、CD42b、CD61，主要都針對靜止的血小板。當(dāng)血小板被激活時，血小板中顆粒內(nèi)容物釋放，整合到活化的血小板質(zhì)膜內(nèi)，成為一些激活抗原，如CD62（P-選擇素）、CD63及CD107a和