維生素E的檢測方法

維生素E的檢測方法維牛素E絡(luò)構(gòu)中具冇游禽的酚梵基?町以被強氧化劑筑化井昭色*通過比色法即可測定維生索E含黒常用的筑化劑有FeCh.CuCh⑦其還原產(chǎn)物Fe2\Cf可均不同的顯色劑反應(yīng)生成絡(luò)合物井通過比色測定比色袪操柞簡單，分析成本低，設(shè)備要求不高，但捷反應(yīng)靈敏度低，給果精確度較是.紫外光譜法刪利用堆生索E結(jié)構(gòu)中的苯環(huán)以披共牠雙謹體系在紫外朮譜中”有吸收峰的特點，可以使用紫外光譜法測定維牛素E含星。侶是紫外法測定容易受到雜質(zhì)干擾，對待測樣品純度要求較為，因此在實際應(yīng)用中限制較大。H前在維牛素E標準品含雖標定中經(jīng)常應(yīng)用此方法。熒光法2")熒光法同樣利用維生素E結(jié)構(gòu)中的苯環(huán)以及共轆雙鍵體系以及該體系中的離域兀電子可以被激發(fā)的特點。樣品經(jīng)過提取、皂化、純化等前處理后使用適當?shù)募ぐl(fā)波長檢測波長即可較申確的測定樣品中維生素E含戢.與比色法以及紫外法相比，熒光法靈敏度高，特異性強，受雜質(zhì)干擾也較小，檢測結(jié)果也更加精確。因此在現(xiàn)代色譜技術(shù)未大屋應(yīng)用前一直是維牛?素E檢測使用的主要方法。電化學法"均VE結(jié)構(gòu)中的酚疑基可以在碳和笛金電極上被不可逆氧化，利用其氧化過程產(chǎn)生的氧化還原電勢即可以測定VE含雖。使用電化學法測定VE含星反應(yīng)的靈敏度都很高，分析濃度范囤寬，檢出限低，樣品分析時間也較高效液相色譜法快速。氣相色譜法(GC)z在液相色譜技術(shù)發(fā)展之前氣相色譜法一直是測定VE含量的主要方法。氣相色譜法將樣品中的生育酚轉(zhuǎn)化為醋酸酯或者三甲棊硅烷化衍生物，然麻測定英中的衍生物含堀。氣相色譜法粘確度，靈敏度髙，適用性也較廣，但是仍然無法有效的測定維生素E的各種異構(gòu)體。液相色譜法(HPLC)g液相色譜法是口前應(yīng)用放廣泛的測定VE的方法。具有靈敏度高，分離效果顯爭，重現(xiàn)性好等優(yōu)點。依據(jù)待測樣品不同，可以選擇不同的檢測器，色譜柱，流動相以達到不同的分離效果以及靈敏度要求。VE檢測中常用的檢測器旳紫外檢測器(UV),熒光檢測器(FL),電化學檢測器(ECD)等。HPLC法有正相(NP)和反相(RP)兩類，均可應(yīng)用于VE檢測，各有特點。正相法主喪應(yīng)用于在VE界構(gòu)體分離測定方面，反相法則由于其色譜柱穩(wěn)定保陽時間短，匝現(xiàn)性好聞被廣泛應(yīng)用。1?4嬰幼兒乳粉中維生素E檢測方法研究50■⑷維生素E檢測方法很多，包括紫外分光光度法，液相色譜法，氣相色譜法等等1羽。目前較為常用的乳制品中維生素E檢測方法為液相色譜法，其中由于提取方法以及流動相選擇不同乂分為止相色譜反相色譜兩種。國內(nèi)以及國際檢測標準中主要采用的是反相色譜的方法。1.4.1反相高效液相色譜利用反相色譜檢測嬰幼兒乳粉中維生索E含量的方法對儀器要求較低，并且可以同時檢測乳粉中務(wù)種維生索含量的優(yōu)點，但是同時也有前處理II雜，檢測粘確度不高的缺點。其主耍測試原理為：乳粉中維生素E主耍以a?生育酚以及ct-生帀酚酣酸酯的形式存在，皂化過程使a?生育酚醋酸酯轉(zhuǎn)化為a?生冇酚。使用石油趙將a?生育酚從庭化液中萃取出Z応將溶解丁?甲醇。利用C.gtt,甲醇流動相，UV檢測器即可檢測其中a?生育酚總量駒o此方法可以同時檢測嬰幼兒乳粉中維生索A、D、E二種維生索而被廣泛用于乳粉屮a■生育酚含債的「I常檢測。但是在實驗過程中維生索EE要以a?生育酚形式存在，而a?生詢酚對光，熱，氧氣均比較敏感，因此在實驗過程中具有…定的損失，同時所得到的實臉結(jié)果不能克觀的反應(yīng)乳粉屮生育酚異構(gòu)體及其脂類含雖紐成。囚此僅僅適用丁日常檢測而不適用于科研空試驗。正相高效液相色譜國外科研型試驗中多采用止相高效液相色譜的方法提取維生素E,提取檢測方法多樣，各白有其不同優(yōu)點。N.Rodrigo,A.Alegria等使用：氧化硅柱(150mmx3.9mm,5pm),正己烷：乙酸乙耶-98:2為流動相，熒光檢測器可同時檢測纓幼兒乳粉屮a■生仃酚醋酸酯,a?生育酚，丫?生介酚，&生育酚。樣絡(luò)不經(jīng)過皂化，溶解后經(jīng)舗仿：甲醇=2:1提収，離心，収有機層吹干，溶解于正己烷。經(jīng)熒光檢測器在激發(fā)波長295nm檢測波長330nm下檢測。此方法可以簡單快速的分析嬰幼兒乳粉中的幾種具冇較強生育酚活性的界構(gòu)體含呈，冋時具有較高的檢測精度【切。JorgeL.Chavcz-Scrvin,AnaI.Castcllote等利用：極管陣列檢測器全波長掃推的特性，使用二氧化硅柱(50mmx2.1mm,3|im),正己烷：乙酸乙38-100:0.5為流動相，二極管陣列檢測器可同時檢測嬰幼兒乳粉中a?生冇酚醋酸ffi(284nm),a-生育酚(296nm),丫?生育酚(296nm),&生育酚(296nm),視黃醇酪酸酯(326run),視黃醇棕稠酸ffi(326nm)o樣品經(jīng)過乙醇提取后使用止己烷萃取，將萃取液吹干后使用止己烷溶解，經(jīng)二極管陣列檢測器檢測。此方法各種待測物星終回收率均能在95%-105%之間，前處理方法簡瞅的同時具有一定的檢測精度2叫以上兩種正相色譜方法山于其使用的檢測器不同而有各種不同的優(yōu)勢，熒光檢測器檢測結(jié)果爪確件較高同時對設(shè)備要求較低，而二極管陣列檢測器可以方便快速的同吋檢測生療酚，視頁醇及其多和異構(gòu)體以及酣類。1.5嬰幼兒乳粉中維生素E穩(wěn)定性由于生育酚的游離酚式羥基易產(chǎn)生化學反應(yīng)生成釀”罠生育酚在乳粉生產(chǎn)儲療過程中極易氧化變性，特別是是在冇氧，金屬離子和紫外線照射條件下極易被氧化而喪失其抗氧化功能。而生育酚醋酸酣相對生育酚來講則貝冇較好的穩(wěn)定性，在氣氣，紫外線條件下均能保證較低的解離程度冋)。在嬰幼兒乳粉中，由于生產(chǎn)工藝，儲藏條件不同生育酚以及生育酚酣酸弗乂冇其不同的穩(wěn)定性農(nóng)現(xiàn)。一殷來說，生育酚醐酸酯基本保持穩(wěn)定，而生育酚及其異構(gòu)休則有不同程度的損失。儲藏溫度EstherMiquela,AmparoAlegria等人研究農(nóng)明添加a?生育酚酯酸酣的樣品在22-C,37'C下密封儲存17個月后a?生冇酚醋酸酯總毎均基本保持不變。而添加生存酚的樣品在22C37C卜密封儲藏17個月后生育酚總量損火分別為53.8%,60.7%⑶、人將牛奶樣品分別儲存在4*C,-20*C.-80-C之下，其中4匸儲存96小時后牛奶中a?生育酚損失率為25%,而在?20?C,?8(TC下儲存12個丿J以后牛奶中生育酚含就未發(fā)生明顯變化⑹儲存時間由丁乳粉生產(chǎn)配方不同,不同乳粉在其貨架期（18個月）內(nèi)穩(wěn)定性表現(xiàn)不同，JorgeL.Chavez-Servin,AnaI.Castellote等測定25*C卜嬰兒乳粉經(jīng)過18個月保存后乳粉中牛育酚當量損失率在20%左右，而即使在打開包裝后25C下嬰兒乳粉經(jīng)過兩個月保存生育酚當疑損失率也僅僅在10%左右*叭1.5.3金屬離子嬰幼兒乳粉中添加的鐵抹能夠促進生育酚氧化，而添加鐵鹽種類不同對維生索E穩(wěn)定性影響不同，Chivcz?Servfn,AnaI.Castellote等人研究表明添加乳酸鹽的樣品丫槨酚穩(wěn)定性比添加硫酸鹽的樣品史好。添加不同鐵鹽的樣品中生育酚醋酸酯含圮均能保持穩(wěn)定（列來源以及存在形式嬰幼兒乳粉屮維生素E來源主耍有三個：牛奶，植物油以及生產(chǎn)過程小添加的營養(yǎng)強化劑，不冋種類的槓物油中生育酚并構(gòu)體含呆比例不同【旳，而營養(yǎng)強化劑屮則以牛育酚酷酸酯形式存在，一般來講，經(jīng)過12?17個月儲誡后，嬰幼兒乳粉中維生索E總簾:均能保證在較滿意的程度，但繪由于貝有最強生冇酚活性的a?竺育酚損失鼠較人，根據(jù)乳粉配方