分子腫瘤學基礎(chǔ)課件

分子腫瘤學基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累分子腫瘤學基礎(chǔ)分子腫瘤學基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累優(yōu)秀精品課件文檔資料毒理學教研室徐德祥分子腫瘤學基礎(chǔ)一、問題的提出和國內(nèi)外研究現(xiàn)狀信息技術(shù)教育是一項面向未來的現(xiàn)代化教育，它對于提高學生適應信息社會的能力，全面推進素質(zhì)教育具有十分重要的意義。信息技術(shù)課具有發(fā)展性、趣味性、綜合性、可操作性等特點，在網(wǎng)絡化的教學環(huán)境中，信息技術(shù)教學能夠滿足學生發(fā)展的需求。但是，我國的信息技術(shù)課程深受基礎(chǔ)學科中傳統(tǒng)班級授課制的影響，重視基礎(chǔ)知識和基本技術(shù)技能的學習和掌握，但使用傳統(tǒng)教學方式進行信息技術(shù)教學卻難以適應不同層次的學生的發(fā)展。校本課程是以學校為主體，自主開發(fā)和發(fā)展的一門課程，是建立在學校和學生的差異性基礎(chǔ)上的，它以適應不同學校的實際情況，滿足不同學生的個性發(fā)展需要為目的，照顧了學生的個別差異，滿足學生多樣化的需要。目前，國外非常重視信息技術(shù)教育，其信息技術(shù)的教學理念跟我們有較大的差異。如美國教師的信息技術(shù)課堂不是單純地強調(diào)學生獲取知識，而是注重培養(yǎng)學生獲取與整理信息的能力及自主學習的能力，突出學生在教學過程中的主體地位，尤其注重培養(yǎng)學生的信息素養(yǎng)而非技術(shù)素養(yǎng)。因此，我們提出了進行初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與實施研究的課題。二、研究的意義和研究價值進行初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與實施研究，其研究的意義主要表現(xiàn)在：1.體現(xiàn)“以人為本”的現(xiàn)代教育理念，凸顯學校教育“促進學生發(fā)展”的特征。2.體現(xiàn)學生的主體性特征，凸顯信息技術(shù)教育對學生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)。開展初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與實施的研究，有利于信息技術(shù)課程三維目標的實現(xiàn)；有利于培養(yǎng)學生自主學習、探究學習、合作學習的方法；有利于學生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)；有利于促進學生的全面發(fā)展。對于初中信息技術(shù)教學具有廣泛的實踐價值和推廣價值。三、研究的主要觀點和創(chuàng)新之處開展初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與實施的研究，把信息技術(shù)教學與學校的校園文化、班級文化，學生心理教育問題、德育問題、科技創(chuàng)新問題，以及受社會關(guān)注的熱點問題等進行整合，把信息技術(shù)作為學生學習的工具，形成網(wǎng)絡化的信息技術(shù)校本課程，實現(xiàn)教材多媒體化、資源網(wǎng)絡化、教學個性化、學習自主化的創(chuàng)新，在信息技術(shù)教學中堅持以人為本的教學策略，注重學生的發(fā)展，注重學生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)。四、研究目標、研究內(nèi)容和研究思路1.研究目標。在信息技術(shù)教學中，以促進學生發(fā)展為中心構(gòu)建初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程，將學生的發(fā)展和信息素養(yǎng)的培養(yǎng)作為信息技術(shù)教學的核心目標。2.研究內(nèi)容。以學生的全面發(fā)展為主線構(gòu)建網(wǎng)絡化信息技術(shù)校本課程。（1）注重學生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)，把校園文化、班級文化、社會實際生活與信息技術(shù)整合，構(gòu)建網(wǎng)絡化信息技術(shù)校本課程。（2）以學生發(fā)展為主線，以培養(yǎng)學生的信息素養(yǎng)為核心，構(gòu)建能夠體現(xiàn)“自主、合作、探究”這一新課程理念的特色資源專題網(wǎng)站，以構(gòu)成網(wǎng)絡化信息技術(shù)校本課程。3.研究思路。根據(jù)學生的發(fā)展特點，確定初中信息技術(shù)校本課程的三維目標，根據(jù)學生的發(fā)展特點的進行教學，使學生在信息技術(shù)教育教學中的情感得到提升，態(tài)度得到轉(zhuǎn)變，從而影響價值觀的形成。培養(yǎng)學生自主學習的方法和獲取信息、整理信息的能力，促進學生的全面發(fā)展。4.研究方法：行動研究法五、初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與應用的實踐近年來，我們組織信息技術(shù)教師根據(jù)初中信息技術(shù)教材特點，開放了適合初中學生心理發(fā)展特點的網(wǎng)絡化課程資源。利用這些課程，一些年輕教師在省市的信息技術(shù)優(yōu)質(zhì)課評比中，獲得一、二等獎。比較有影響力的研究成果有：對這些課程資源分析比較，發(fā)現(xiàn)有以下幾個特點：1.網(wǎng)絡化。各個課程資源均是以主題學習網(wǎng)站或網(wǎng)頁的形式出現(xiàn)，學生通過瀏覽網(wǎng)頁就可實現(xiàn)訪問課程資源。2.興趣化。各個課程資源中集成了各種能夠激發(fā)學生學習興趣的內(nèi)容，如游戲、歌曲、視頻、動畫等，比較容易幫助教師創(chuàng)設(shè)教學情境，激發(fā)學生學習興趣。3.課程化。各個課程資源有較強的針對性，針對信息技術(shù)教材中的某一課或者某一個單元知識點開發(fā)課程資源。通過學習網(wǎng)絡資源，學生能夠掌握課程標準所要求的知識點。4.易操作。根據(jù)主題學習網(wǎng)站的視頻教程或自主學習課程，學生比較容易實現(xiàn)自主學習、網(wǎng)絡學習、共享學習。5.交互性。利用課程資源網(wǎng)站中的聊天室、留言板，實現(xiàn)了人機、師生、生生的交互性。六、反思與展望在使用信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本資源的過程中，我們也發(fā)現(xiàn)了一些不足，比較集中的是開發(fā)比較成熟的網(wǎng)絡化校本資源需要比較長的時間，開發(fā)出成熟的作品需要比較長的周期，因此，需要多位信息技術(shù)教師通力合作，及早準備，實現(xiàn)信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本資源的模塊化，縮短開發(fā)時間。希望在不久的將來能夠開發(fā)出整個初中信息技術(shù)全部課程的網(wǎng)絡化校本資源，實現(xiàn)初中信息技術(shù)網(wǎng)絡教學，能夠讓學生實現(xiàn)網(wǎng)絡環(huán)境下的自主學習，發(fā)展個性，張揚個性。注：本文是河北省教育科學研究“十二五”規(guī)劃2012年度專項課題《初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與實施研究》的研究成果【責編張景賢】音樂欣賞是音樂教學的重要組成部分，學生對音樂欣賞課的學習效果如何，取決于其對音樂作品思想內(nèi)容、音樂形象的感悟和理解。由于農(nóng)村學校的學生對音樂的感受能力比較差，因此，每次上欣賞課學生的注意力總是不集中。我深知初中學生正處于心理發(fā)展轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵時期，對外界的感受非常敏感，不能一味地批評和指責，相反，要利用好音樂欣賞課讓音樂的美感來感染學生、陶冶學生，從而使學生逐步形成健康的音樂審美能力。為了實現(xiàn)這一目標，在教學中，我主要在以下幾個方面進行嘗試，也取得了一些效果，愿與大家一起分享。一重視直觀教學，激發(fā)學生學習音樂的興趣記得一位著名的音樂教育家曾經(jīng)說過這樣的話：“（教師要）激發(fā)學生對音樂的興趣，是把音樂的魅力傳遞給他們的必要條件?！边@句話已經(jīng)被許多音樂教育者奉為至理名言。還有著名的科學家愛因斯坦曾說過：“興趣是最好的老師。”從這些名家的觀點中我們不難總結(jié)出如下結(jié)論：教師要努力激發(fā)學生對音樂的學習興趣，并培養(yǎng)學生的音樂修養(yǎng)，這對于健全學生的審美能力、提高學生的整體素質(zhì)都有著特殊的意義。因此，在上音樂課時，我先播放一些學生們感興趣的流行歌曲，然后再讓他們談一談這些歌曲好在哪里，學生們爭先恐后地說出了自己的觀點，談的都非常好，這時我會告訴學生：“你們對音樂很有欣賞能力”，學生們很開心，他們不知不覺地喜歡上欣賞課了。在我們的音樂欣賞課中，學生對音樂的認識主要靠靈敏的聽覺以及適當?shù)南胂?。其實，我們還要知道，視覺對音樂來說也是一種很好的欣賞形式。在教學過程中，我們教師不妨可以考慮采取一些比較直觀的教學方法，或許能發(fā)揮學生多種感官的通覺作用呢！比如在教授一首民族樂曲《趕圩歸來阿哩哩》時，考慮到這個曲子強烈和獨特的民族特色，我結(jié)合該曲的作者情況，向大家進行講解來輔助音樂欣賞教學：曲作者黃有異，是廣西歌舞團的，為了編創(chuàng)這首曲子，黃有異曾經(jīng)親自到彝族村寨生活了數(shù)年，在體驗生活中，他根據(jù)彝族曲調(diào)的特色，創(chuàng)作出了這首節(jié)奏優(yōu)美歡快的、民族色彩濃烈的曲子。我的講述，讓學生認識到這是一首表達彝族人民幸福生活的曲子，其中趕圩這一特定的場景，又體現(xiàn)了美麗的彝族姑娘在趕圩過程中的快樂以及生活的富足。學生通過了解激發(fā)了興趣，所以在欣賞音樂時就更加用心了。我教學生們演唱經(jīng)典歌曲《保衛(wèi)黃河》時，為了引導同學們展開豐富的想象，我找到了關(guān)于黃河保衛(wèi)戰(zhàn)的彩色掛圖，在課上展示給大家，引起了大家的興趣。多媒體教學的興起，使課堂更加生動精彩、形象逼真。學生通過多種感官的感受和體驗，對于理解、評價音樂有了比較深刻的認識。二師生互動，視、聽并舉在音樂欣賞教學中，教師與學生都要同時進入“傾聽”音樂的狀態(tài)，這樣做便于把學生的注意力都吸引到課堂上來，從而從聽覺上培養(yǎng)學生對音樂的感知能力，同時也能提高學生的記憶力。教師等學生“傾聽”完音樂后，再介紹作品的體裁、時代背景以及作者的生平，應用多媒體、圖片，從視覺到聽覺，讓學生熟知。在這個過程中，教師在初聽實施之前，應該先提出幾個需要注意的問題來提示學生：在這個過程中你聽到了什么？在你眼前仿佛出現(xiàn)了什么？它是什么風格的歌曲，所表達的是一種什么樣的情緒？帶著問題進行欣賞，學生的欣賞能力會得到提升。在欣賞馬頭琴獨奏曲《萬馬奔騰》的教學活動中，利用多媒體播放馬頭琴演奏方式，感受馬頭琴的音色，幫助學生理解作品，感受萬馬奔騰的賽馬情景，更加深了學生對音樂作品的深度理解。三在師生的情感互動中，讓學生體驗音樂師生在情感互動中進行合作教學，這是新課程改革以來教師較為常見的一種教學手段。相比傳統(tǒng)的教學方式，它更強調(diào)集體學習能力的提升。這個合作的過程，是教師與學生以及學生與學生之間的互相作用，共同體驗美、表現(xiàn)美、創(chuàng)造美的完整過程，也是提高學生對音樂的審美能力的過程。在音樂教學中，教師如何做才能讓學生獲得真正的審美體驗呢？筆者通過實踐，認為教師應該在課堂上留出一定的自由活動空間給學生，并在這個基礎(chǔ)上為他們提供活動的條件。教師與學生融洽的交流與豐富的互動，能夠調(diào)動學生主動參與到音樂教學過程中的熱情，使學生通過自己的親身體驗來學習音樂文化，并在這個過程中嘗試進行創(chuàng)造。為了讓學生充分發(fā)揮自己主觀能動性，自覺地進行思考，把自己對生活的理解和認識融進作品中，教師一定要注意鼓勵學生進行模糊思維、自由想象，引導他們打開想象的空間，提高他們的欣賞能力，使他們獲得審美享受。四在欣賞體驗中成為學生中的一員，成為他們的“合作伙伴”如在《紅色娘子軍》一課的教學中有一個環(huán)節(jié)，我經(jīng)過考慮之后，決定讓學生自由組合成小隊，并列隊行進創(chuàng)編與展示。在這個過程中，我則走到學生中間去，參與其中編排有困難的一個小隊，與大家共同交流，完成創(chuàng)作。在這里，讓學生自由組合成小隊進行創(chuàng)編、展示，旨在張揚學生的個性，發(fā)展學生的想象力，增強學生音樂表演的自信心，培養(yǎng)學生良好的合作意識，讓每個學生享受表現(xiàn)音樂和創(chuàng)編音樂所帶來的成功感和愉悅感。總之，新課程理念下的音樂課堂，是師生互動的課堂，師生共營的課堂。讓學生在音樂課堂中得到快樂，產(chǎn)生學習音樂的興趣，培養(yǎng)能力、陶冶性情，從而促進學生審美能力的提高。分子腫瘤學基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累分子腫瘤學基礎(chǔ)分子腫1優(yōu)秀精品課件文檔資料優(yōu)秀精品課件文檔資料2分子腫瘤學基礎(chǔ)課件3分子腫瘤學基礎(chǔ)課件4分子腫瘤學基礎(chǔ)課件5分子腫瘤學基礎(chǔ)課件6腫瘤的多因素多階段多基因參與的過程多因素多階段：二階段學說多階段學說多基因參與：癌基因、抑癌基因細胞凋亡相關(guān)基因、腫瘤易感基因腫瘤的多因素多階段多基因參與的過程多因素7腫瘤的發(fā)病與體細胞突變有關(guān)癌基因：維持細胞正常生理功能所必須的基因細胞增殖、分化、信號轉(zhuǎn)到體細胞突變學說：腫瘤的發(fā)生與癌基因突變有關(guān)點突變、DNA擴增染色體重排、甲基化腫瘤的發(fā)病與體細胞突變有關(guān)癌基因：維持細胞正常生理功能所必須8抑癌基因：純合缺失或失活而引起惡性轉(zhuǎn)化的基因二次突變學說（Rb基因，視網(wǎng)膜母細胞瘤）

遺傳性視網(wǎng)膜母細胞瘤患者（Rb等位基因突變或缺失）：一次突變引起發(fā)病非遺傳性視網(wǎng)膜母細胞瘤：二次突變突變引起發(fā)病抑癌基因：純合缺失或失活而引起惡性轉(zhuǎn)化的基因9腫瘤易感性和易感基因腫瘤易感性：環(huán)境與遺傳腫瘤易感基因：癌基因和抑癌基因的突變

DNA修復缺陷代謝酶基因：化學致癌腫瘤易感性和易感基因腫瘤易感性：環(huán)境與遺傳10三、腫瘤的分子診斷及其研究進展1、分子診斷在腫瘤研究中的意義和應用

腫瘤的分子診斷涉及到各種惡性腫瘤及癌前病變，主要集中在各種癌基因、抑癌基因及相關(guān)基因的檢測，分別在蛋白質(zhì)、RNA、DNA水平進行判斷，為腫瘤的基礎(chǔ)研究、腫瘤防治和個體化或預見性治療提供更詳盡的證據(jù)。（1）腫瘤易感基因的檢測（2）腫瘤的分類

對Bcr區(qū)基因重排檢測：可診斷慢粒并與急粒鑒別。神經(jīng)母細胞瘤——N-Myc明顯擴增和過表達；神經(jīng)上皮瘤——c-Myc擴增和過表達。三、腫瘤的分子診斷及其研究進展1、分子診斷在腫瘤研究中的意11

（3）腫瘤的早期診斷

（4）腫瘤的預后判斷：從分子水平上判斷腫瘤的良、惡性及預后，有較高的準確性。腫瘤相關(guān)基因的突變、擴增及過表達等常與預后密切相關(guān)。

（5）腫瘤的個體化和預見性治療:腫瘤的發(fā)生是多基因、多步驟、多階段的過程，在發(fā)生、發(fā)展的不同時期，可能涉及不同的基因和不同的變化形式，而基因的變化和基因間的信號傳遞與腫瘤臨床治療的敏感性密切相關(guān)。提供腫瘤基因變化，對治療有指導意義。

（6）腫瘤的預后監(jiān)測（3）腫瘤的早期診斷122、腫瘤基因過表達及其檢測

（1）基因過表達的形式

癌基因激活和抑癌基因失活，是腫瘤發(fā)生過程中的關(guān)鍵因素。癌基因產(chǎn)物過表達是癌基因激活的重要表現(xiàn)形式之一。癌基因一般為單拷貝基因，在腫瘤細胞內(nèi)的一些癌基因在DNA復制過程中擴增，常導致基因產(chǎn)物過表達，表現(xiàn)為mRNA和蛋白質(zhì)量增加。有些抑癌基因突變后可起到癌基因的作用（如p53基因），產(chǎn)生突變型蛋白。2、腫瘤基因過表達及其檢測（1）基因過表達的形式13

（2）基因過表達的檢測

①表達產(chǎn)物的檢測：幾乎所有被克隆的癌基因、抑癌基因都有相應抗體，其中大多數(shù)已商品化。

免疫組化（immunohistochemistry）

酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）免疫沉淀法：檢測并定量分析蛋白質(zhì)混合物中的靶抗原敏感（可檢出100pg的放射性標記蛋白）。與SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳并用，可用于分析外源基因在原核和真核宿主細胞中的表達。（2）基因過表達的檢測14蛋白印跡法（Westernblot）：70年代末80年代初，在蛋白質(zhì)凝膠電泳（分辨率高）和固相免疫測定（特異敏感）的基礎(chǔ)上發(fā)展的，結(jié)合了二者優(yōu)點，無需同位素標記，具有從混雜抗原中檢出特定抗原，或從多克隆抗體中檢出單克隆抗體的優(yōu)勢，還可對轉(zhuǎn)移到固相膜上的蛋白進行連續(xù)分析，有蛋白質(zhì)反應均一性、固相膜保存時間長等優(yōu)點。敏感性為1～5ng。細胞裂解—→SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳→蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移→封閉→加一抗→加二抗→顯色照像。流式細胞儀（flowcytometry）測試法：用熒光標記抗體與含有特異抗原的細胞結(jié)合，用流式細胞儀對含不同熒光信號的細胞分類測試，可檢測細胞表面受體、標志物或特異性蛋白及細胞的分類分析。蛋白印跡法（Westernblot）：70年代末80年代初15②基因擴增的檢測：腫瘤基因擴增可產(chǎn)生過量的表達蛋白，也可表現(xiàn)為基因拷貝數(shù)增加和轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA增加。經(jīng)典檢測方法為核酸分子雜交，包括原位雜交（insituhydridization，ISH）、熒光原位雜交（FISH）、DNA雜交（Southernblot）、RNA雜交（Northernblot）、原位PCR、逆轉(zhuǎn)錄PCR（reversetranscriptionPCR，RT-PCR）。FISH

將熒光素標記克隆的DNA片段與染色體或細胞間期染色質(zhì)雜交，以測定特定的DNA片段是否有缺失或擴增。

原位PCR：結(jié)合了PCR與ISH技術(shù)優(yōu)點，在組織切片或細胞涂片上原位對特定DNA或RNA進行擴增，再用特異性探針作原位雜交檢測，以達到對靶核苷酸進行定性、定位、定量分析。

逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）

用來擴增從RNA分子中得到的一段特異序列。RNA首先被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。用位于一段特異序列或一個基因兩側(cè)的引物生成以cDNA為模板的PCR產(chǎn)物，得到陽性產(chǎn)物說明存在特異性的RNA序列。為擴增從mRNA逆轉(zhuǎn)錄的cDNA，引物中應含一段目的基因的內(nèi)含子區(qū)，以使從帶有基因組DNA的PCR產(chǎn)物中區(qū)分出cDNA的PCR產(chǎn)物。經(jīng)典方法包括RT和PCR兩步。

②基因擴增的檢測：腫瘤基因擴增可產(chǎn)生過量的表達蛋白，也可表現(xiàn)16（3）腫瘤基因差異表達的檢測

控制生物性狀的基本結(jié)構(gòu)和功能單位是基因，不同細胞或同一細胞的不同時間與空間基因表達的差異決定著生命活動的多樣性，如發(fā)育、分化、繁殖、細胞周期調(diào)控、衰老、死亡等。實際上，細胞的各種生理過程或病理改變本質(zhì)上都是由基因表達的改變所決定的。因此獲取差異表達的基因?qū)⒂兄诹私庹Ｉ碜兓筒±砀淖兊姆肿訖C制，為基因診斷、基因治療和發(fā)現(xiàn)新的藥物靶分子提供新的視野。

（3）腫瘤基因差異表達的檢測17①DD-PCR（differentialdisplayPCR）又稱差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR（DDRT-PCR）

簡要流程

對照組處理組↓……反轉(zhuǎn)錄……↓mRNA或總RNAmRNA或總RNA↓……PCR……….↓cDNAcDNA↓↓

擴增產(chǎn)物擴增產(chǎn)物

↘電泳分離↙

↓比較回收差異顯示帶↓PCR

克隆、雜交、測序↓與Genbank數(shù)據(jù)庫中的已知序列進行同源性匹配確定相關(guān)基因①DD-PCR（differentialdisplay18②RSDD（交互式差減差異RNA顯示，reciprocalsubtractiondifferentialRNAdisplay）：DD-PCR中采用差減過的RNA或cDNA樣品。1998年Kang等，分析了腺病毒轉(zhuǎn)化的大鼠胚胎細胞株E11和獲得侵襲性致癌表型的E11-NMT細胞株間的差異表達基因。

E11cDNA文庫E11-NMTcDNA文庫↓↓交互式差減E11減E11-NMT差減cDNA文庫E11-NMT減E11差減cDNA文庫↓體內(nèi)切割↓以錨定引物和5’隨機引物PCR擴增↓顯示

5%測序膠顯示并分離差異條帶↓再擴增，反向Northern分析↓

Northernblot分析表達分析↓克隆并測序，Northernblot確證②RSDD（交互式差減差異RNA顯示，reciprocal19（4）基因突變的檢測

①PCR-SSCP法（PCR-singlestrandconformationalpolymorphism，聚合酶鏈反應－單鏈構(gòu)象多態(tài)分析）：單鏈DNA在中性條件下會形成二級結(jié)構(gòu)，即使有一個堿基不同，也會形成不同的二級結(jié)構(gòu)而出現(xiàn)不同的遷移率。靶DNA或RNA經(jīng)PCR擴增后，產(chǎn)物變性處理，單鏈產(chǎn)物經(jīng)中性聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE），靶DNA或RNA中含有單個堿基置換、數(shù)個堿基插入或缺失等改變時，因遷移率變化就出現(xiàn)泳動變位，從而檢測出含有基因突變的DNA或RNA片段。

②雜合雙鏈分析法（Heteroduplexanalysis，HA）：由突變型和野生型DNA形成的異源雜合雙鏈在其錯配處會形成突起，在非變性膠中電泳時，會產(chǎn)生與相應的同源雙鏈DNA不同的遷移率。

③突變體富集PCR法（mutant-enrichedPCR）：利用癌基因或抑癌基因某個編碼子部位存在的已知限制性內(nèi)切酶位點，用連續(xù)2次巢式PCR對包括酶切位點的DNA片段進行擴增，在2次PCR之間用相應的內(nèi)切酶消化擴增產(chǎn)物，野生型因酶切不能進入第2次PCR，而突變型則能完整進入第2次PCR并得到產(chǎn)物的富集。（4）基因突變的檢測20④變性梯度凝膠電泳法（denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE）：雙鏈DNA在沿變性劑（甲醛或尿素）電場方向遞增的凝膠中進行到與DNA變性溫度（Tm）一致的位置時，DNA發(fā)生部分解鏈，遷移率下降。正常DNA分子與突變DNA分子間即使只有一個堿基對的差異，也會在不同位置解鏈，導致遷移率不同而被分離。兩個同源雙鏈DNA分子間有一個堿基對不同時，Tm值就相差1℃或更高，有一個堿基錯配的異源雙鏈DNA分子與同源雙鏈DNA分子比較，其Tm值可相差6℃以上。⑤DNA芯片技術(shù)（DNAchip）：建立在雜交測序基本理論上的DNA分析技術(shù)。利用固定在芯片上的幾萬至幾十萬條探針與樣品雜交，在一步實驗中獲取大量信息?？捎糜诨蚨ㄎ?、DNA測序、突變分析、表達分析、基因多態(tài)性分析、物理圖譜和遺傳圖譜的構(gòu)建等。使用了光控固相化學合成、集成電路計算機、激光共聚焦掃描、熒光標記探針等多項先進技術(shù)，實驗全部自動化，操作極簡便，可節(jié)約大量時間和實驗成本。將許多已知序列的寡核苷酸DNA排列在一塊集成電路板上，彼此間重疊1個堿基，并覆蓋全部檢測基因。將熒光標記的正常和突變DNA分別與兩塊DNA芯片雜交，因至少存在1個堿基差異，將得到不同的雜交圖譜，用共聚焦顯微鏡分別檢測其熒光信號，即可確定是否存在突變。蛋白質(zhì)芯片、組織和細胞芯片④變性梯度凝膠電泳法（denaturinggradient21⑥

連接酶鏈反應（ligasechainreaction，LCR）：雙鏈DNA經(jīng)加熱變性后，用2對互補寡核苷酸引物與模板復性。若引物序列與目標序列完全配對，那么2對引物將與各自的目標片段雜交，并在連接酶作用下發(fā)生連接。連接產(chǎn)物作為下一次循環(huán)的模板。若點突變出現(xiàn)在目標片段上，將不能進行連接反應，不會出現(xiàn)連接產(chǎn)物。⑦

等位基因特異性擴增法（allele-specificamplification，ASA）：設(shè)計2個等位基因特異的5’端引物（一個對野生型特異，一個對突變型特異特異）。對于純合型突變，分別加入兩種引物及3’端引物進行兩個平行PCR，只有與突變DNA完全互補的引物才能延伸得到PCR產(chǎn)物；對于雜合性突變需定量分析。若錯配位于引物3’端，則PCR不能延伸，稱為ARMS（amplificationrefractorymutationsystem）；若錯配位于引物之間而影響引物退火，稱COP或CCA（competiiveoligonucleotidepriming，colorcomplementationassay）。⑥連接酶鏈反應（ligasechainreaction22⑧染色體分析：腫瘤細胞的染色體畸變是一非常普遍的現(xiàn)象，可分為原發(fā)和繼發(fā)2類：原發(fā)性染色體畸變與引起腫瘤的直接原因有關(guān)。腫瘤細胞中可發(fā)現(xiàn)各種形式的染色體畸變，如缺失、重復、易位、重排、斷裂、核內(nèi)再復制等。繼發(fā)性染色體畸變主要是腫瘤細胞核型的改變。

FISH：利用幾種不同顏色的熒光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交，可同時檢測間期與中期細胞的若干個特異性核酸序列。從而能檢測多個基因，分辨復雜的染色體易位和微小缺失，區(qū)分間期細胞多倍體與超二倍體等。

主要原理：基本反應包括在溶液中經(jīng)化學修飾的單鏈探針DNA序列與固定于載玻片上經(jīng)變性的單鏈互補DNA序列間形成異質(zhì)雙鏈，再用與熒光素（FITC）結(jié)合的閱讀分子定位化學修飾的探針。在總的DNA背景上出現(xiàn)有清晰界限的熒光斑點或成簇的熒光斑點。

PRINS技術(shù)（寡核苷酸引物原位DNA合成，oligonucleotideprimedinsituDNAsynthesis）：用非標記的寡核苷酸引物與染色體上靶序列特異性地雜交，在DNA聚合酶作用下引物延伸時，摻入標記的核苷酸，可直接或間接檢查標記位點。⑧染色體分析：腫瘤細胞的染色體畸變是一非常普遍的現(xiàn)象，23

比較基因組雜交（comparativegenomichydridization，CGH）：直接檢測兩個全基因遺傳物質(zhì)不平衡（缺失或擴增）的新方法。

原理：用不同的非同位素標記物，分別標記被檢基因組DNA（常為腫瘤DNA）和正常人基因組DNA，兩者以1∶1混合后制備探針，共同與正常人中期染色體標本進行染色體原位抑制（CISS）雜交，對不同的熒光物質(zhì)分別進行檢測，以每條染色體長軸個位點的被測DNA與正常DNA熒光強度比，反映兩組DNA不同序列的相對拷貝數(shù)，并能同時在染色體上定位。（通常腫瘤DNA用FITC標記為綠色，正?；蚪MDNA用TRITC標記為紅色）。⑨DNA序列分析

比較基因組雜交（comparativeg24（5）限制性酶切片段長度多態(tài)性分析

RFLP：（restrictionfragmentlengthpolymorphism）當個體的DNA用限制性內(nèi)切酶切割時，所得到的與正常相比，長度有改變的基因片段。多態(tài)性：在不同個體DNA結(jié)構(gòu)上有許多地方有差異，尤其是不編碼蛋白質(zhì)的區(qū)域和無重要調(diào)整功能的區(qū)域表現(xiàn)得尤為突出。在一個基因座上，存在兩個或以上等位基因，由這些等位基因所決定的兩種或以上的表達或基因型，其中任一種在人群中的頻率不低于1%，稱為多態(tài)性。

直接法：通過限定的內(nèi)切酶酶切基因組DNA后，與特異性探針雜交后分析；間接法：選用原基因外兩翼核酸序列上的多態(tài)性探針，用間接連鎖法分析。

（5）限制性酶切片段長度多態(tài)性分析25（6）端粒酶與腫瘤的關(guān)系及檢測

端粒（telomere）：位于細胞染色體末端的由2～20kb串聯(lián)的短片段重復序列（TTAGGG）n及一些結(jié)合蛋白組成的特殊結(jié)構(gòu)。在染色體定位、復制、保護和控制細胞生長壽命等方面具有重要作用，并與細胞凋亡、細胞轉(zhuǎn)化和永生化密切相關(guān)。人的端粒長達15kb，隨著細胞分裂逐漸縮短，每次丟失約50～200個核苷酸。縮短到一定程度，即不能維持染色體穩(wěn)定時，細胞進入凋亡。與正常細胞相反，腫瘤細胞的端粒長度不隨細胞分裂而變化，提示端粒的穩(wěn)定性對腫瘤細胞進行無限增殖是必須的。

端粒酶（telomerase）：由RNA和蛋白質(zhì)組成的一種核糖核蛋白復合物（RNP），含有端粒重復序列的模板，可以自身RNA組分為模板復制合成端粒序列。端粒酶的表達能使細胞永生化。

體內(nèi)表達端粒酶的細胞群：絕大多數(shù)腫瘤細胞、生殖細胞、快速增殖的淋巴造血系統(tǒng)細胞、皮膚基底層細胞、增生期子宮內(nèi)膜細胞、某些肝細胞、增生的肝組織與氣管上皮。

（6）端粒酶與腫瘤的關(guān)系及檢測26

端粒酶與腫瘤的研究現(xiàn)狀：Counter等于1994年首先發(fā)現(xiàn)人卵巢癌細胞中有端粒酶表達。近幾年的研究表明，人類腫瘤中85%左右的腫瘤細胞存在端粒酶活性的表達。目前有關(guān)端粒酶活性表達的研究已覆蓋了人類大部分的實體瘤。端粒酶給病理學鑒別病變的良惡性提供了一個很好的標志物：如乳腺癌與乳腺良性病變，大腸癌與癌旁組織，前列腺癌與良性前列腺增生等。在肝細胞肝癌等腫瘤中，端粒酶活性與腫瘤轉(zhuǎn)移、預后及病人存活期密切相關(guān)。這些研究結(jié)果提示：端粒酶檢測可作為極有價值的臨床診斷、藥效評價、預后判斷參數(shù)。但直接將端粒酶用于臨床診斷還有大量工作。設(shè)想用抑制端粒酶活性的方法來達到抑制惡性腫瘤生長，從而未腫瘤的基因治療開辟新途徑，也因細胞可能通過其它維持端粒長度的機制而受到嚴重挑戰(zhàn)。

TRAP法(telomericrepeatamplificationprotocol端粒重復序列擴增法)

TRAP法的改良

接近閃爍分析法

端粒酶與腫瘤的研究現(xiàn)狀：Counter等于1994年首先2736、自己的鞋子，自己知道緊在哪里?！靼嘌?/p>

37、我們唯一不會改正的缺點是軟弱?！_什?？?/p>

38、我這個人走得很慢，但是我從不后退?！獊啿薄ち挚?/p>

39、勿問成功的秘訣為何，且盡全力做你應該做的事吧?！廊A納

40、學而不思則罔，思而不學則殆。——孔子xiexie!謝謝！36、自己的鞋子，自己知道緊在哪里?！靼嘌纗iexie!28分子腫瘤學基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累分子腫瘤學基礎(chǔ)分子腫瘤學基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累優(yōu)秀精品課件文檔資料毒理學教研室徐德祥分子腫瘤學基礎(chǔ)一、問題的提出和國內(nèi)外研究現(xiàn)狀信息技術(shù)教育是一項面向未來的現(xiàn)代化教育，它對于提高學生適應信息社會的能力，全面推進素質(zhì)教育具有十分重要的意義。信息技術(shù)課具有發(fā)展性、趣味性、綜合性、可操作性等特點，在網(wǎng)絡化的教學環(huán)境中，信息技術(shù)教學能夠滿足學生發(fā)展的需求。但是，我國的信息技術(shù)課程深受基礎(chǔ)學科中傳統(tǒng)班級授課制的影響，重視基礎(chǔ)知識和基本技術(shù)技能的學習和掌握，但使用傳統(tǒng)教學方式進行信息技術(shù)教學卻難以適應不同層次的學生的發(fā)展。校本課程是以學校為主體，自主開發(fā)和發(fā)展的一門課程，是建立在學校和學生的差異性基礎(chǔ)上的，它以適應不同學校的實際情況，滿足不同學生的個性發(fā)展需要為目的，照顧了學生的個別差異，滿足學生多樣化的需要。目前，國外非常重視信息技術(shù)教育，其信息技術(shù)的教學理念跟我們有較大的差異。如美國教師的信息技術(shù)課堂不是單純地強調(diào)學生獲取知識，而是注重培養(yǎng)學生獲取與整理信息的能力及自主學習的能力，突出學生在教學過程中的主體地位，尤其注重培養(yǎng)學生的信息素養(yǎng)而非技術(shù)素養(yǎng)。因此，我們提出了進行初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與實施研究的課題。二、研究的意義和研究價值進行初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與實施研究，其研究的意義主要表現(xiàn)在：1.體現(xiàn)“以人為本”的現(xiàn)代教育理念，凸顯學校教育“促進學生發(fā)展”的特征。2.體現(xiàn)學生的主體性特征，凸顯信息技術(shù)教育對學生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)。開展初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與實施的研究，有利于信息技術(shù)課程三維目標的實現(xiàn)；有利于培養(yǎng)學生自主學習、探究學習、合作學習的方法；有利于學生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)；有利于促進學生的全面發(fā)展。對于初中信息技術(shù)教學具有廣泛的實踐價值和推廣價值。三、研究的主要觀點和創(chuàng)新之處開展初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與實施的研究，把信息技術(shù)教學與學校的校園文化、班級文化，學生心理教育問題、德育問題、科技創(chuàng)新問題，以及受社會關(guān)注的熱點問題等進行整合，把信息技術(shù)作為學生學習的工具，形成網(wǎng)絡化的信息技術(shù)校本課程，實現(xiàn)教材多媒體化、資源網(wǎng)絡化、教學個性化、學習自主化的創(chuàng)新，在信息技術(shù)教學中堅持以人為本的教學策略，注重學生的發(fā)展，注重學生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)。四、研究目標、研究內(nèi)容和研究思路1.研究目標。在信息技術(shù)教學中，以促進學生發(fā)展為中心構(gòu)建初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程，將學生的發(fā)展和信息素養(yǎng)的培養(yǎng)作為信息技術(shù)教學的核心目標。2.研究內(nèi)容。以學生的全面發(fā)展為主線構(gòu)建網(wǎng)絡化信息技術(shù)校本課程。（1）注重學生信息素養(yǎng)的培養(yǎng)，把校園文化、班級文化、社會實際生活與信息技術(shù)整合，構(gòu)建網(wǎng)絡化信息技術(shù)校本課程。（2）以學生發(fā)展為主線，以培養(yǎng)學生的信息素養(yǎng)為核心，構(gòu)建能夠體現(xiàn)“自主、合作、探究”這一新課程理念的特色資源專題網(wǎng)站，以構(gòu)成網(wǎng)絡化信息技術(shù)校本課程。3.研究思路。根據(jù)學生的發(fā)展特點，確定初中信息技術(shù)校本課程的三維目標，根據(jù)學生的發(fā)展特點的進行教學，使學生在信息技術(shù)教育教學中的情感得到提升，態(tài)度得到轉(zhuǎn)變，從而影響價值觀的形成。培養(yǎng)學生自主學習的方法和獲取信息、整理信息的能力，促進學生的全面發(fā)展。4.研究方法：行動研究法五、初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與應用的實踐近年來，我們組織信息技術(shù)教師根據(jù)初中信息技術(shù)教材特點，開放了適合初中學生心理發(fā)展特點的網(wǎng)絡化課程資源。利用這些課程，一些年輕教師在省市的信息技術(shù)優(yōu)質(zhì)課評比中，獲得一、二等獎。比較有影響力的研究成果有：對這些課程資源分析比較，發(fā)現(xiàn)有以下幾個特點：1.網(wǎng)絡化。各個課程資源均是以主題學習網(wǎng)站或網(wǎng)頁的形式出現(xiàn)，學生通過瀏覽網(wǎng)頁就可實現(xiàn)訪問課程資源。2.興趣化。各個課程資源中集成了各種能夠激發(fā)學生學習興趣的內(nèi)容，如游戲、歌曲、視頻、動畫等，比較容易幫助教師創(chuàng)設(shè)教學情境，激發(fā)學生學習興趣。3.課程化。各個課程資源有較強的針對性，針對信息技術(shù)教材中的某一課或者某一個單元知識點開發(fā)課程資源。通過學習網(wǎng)絡資源，學生能夠掌握課程標準所要求的知識點。4.易操作。根據(jù)主題學習網(wǎng)站的視頻教程或自主學習課程，學生比較容易實現(xiàn)自主學習、網(wǎng)絡學習、共享學習。5.交互性。利用課程資源網(wǎng)站中的聊天室、留言板，實現(xiàn)了人機、師生、生生的交互性。六、反思與展望在使用信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本資源的過程中，我們也發(fā)現(xiàn)了一些不足，比較集中的是開發(fā)比較成熟的網(wǎng)絡化校本資源需要比較長的時間，開發(fā)出成熟的作品需要比較長的周期，因此，需要多位信息技術(shù)教師通力合作，及早準備，實現(xiàn)信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本資源的模塊化，縮短開發(fā)時間。希望在不久的將來能夠開發(fā)出整個初中信息技術(shù)全部課程的網(wǎng)絡化校本資源，實現(xiàn)初中信息技術(shù)網(wǎng)絡教學，能夠讓學生實現(xiàn)網(wǎng)絡環(huán)境下的自主學習，發(fā)展個性，張揚個性。注：本文是河北省教育科學研究“十二五”規(guī)劃2012年度專項課題《初中信息技術(shù)網(wǎng)絡化校本課程開發(fā)與實施研究》的研究成果【責編張景賢】音樂欣賞是音樂教學的重要組成部分，學生對音樂欣賞課的學習效果如何，取決于其對音樂作品思想內(nèi)容、音樂形象的感悟和理解。由于農(nóng)村學校的學生對音樂的感受能力比較差，因此，每次上欣賞課學生的注意力總是不集中。我深知初中學生正處于心理發(fā)展轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵時期，對外界的感受非常敏感，不能一味地批評和指責，相反，要利用好音樂欣賞課讓音樂的美感來感染學生、陶冶學生，從而使學生逐步形成健康的音樂審美能力。為了實現(xiàn)這一目標，在教學中，我主要在以下幾個方面進行嘗試，也取得了一些效果，愿與大家一起分享。一重視直觀教學，激發(fā)學生學習音樂的興趣記得一位著名的音樂教育家曾經(jīng)說過這樣的話：“（教師要）激發(fā)學生對音樂的興趣，是把音樂的魅力傳遞給他們的必要條件?！边@句話已經(jīng)被許多音樂教育者奉為至理名言。還有著名的科學家愛因斯坦曾說過：“興趣是最好的老師。”從這些名家的觀點中我們不難總結(jié)出如下結(jié)論：教師要努力激發(fā)學生對音樂的學習興趣，并培養(yǎng)學生的音樂修養(yǎng)，這對于健全學生的審美能力、提高學生的整體素質(zhì)都有著特殊的意義。因此，在上音樂課時，我先播放一些學生們感興趣的流行歌曲，然后再讓他們談一談這些歌曲好在哪里，學生們爭先恐后地說出了自己的觀點，談的都非常好，這時我會告訴學生：“你們對音樂很有欣賞能力”，學生們很開心，他們不知不覺地喜歡上欣賞課了。在我們的音樂欣賞課中，學生對音樂的認識主要靠靈敏的聽覺以及適當?shù)南胂?。其實，我們還要知道，視覺對音樂來說也是一種很好的欣賞形式。在教學過程中，我們教師不妨可以考慮采取一些比較直觀的教學方法，或許能發(fā)揮學生多種感官的通覺作用呢！比如在教授一首民族樂曲《趕圩歸來阿哩哩》時，考慮到這個曲子強烈和獨特的民族特色，我結(jié)合該曲的作者情況，向大家進行講解來輔助音樂欣賞教學：曲作者黃有異，是廣西歌舞團的，為了編創(chuàng)這首曲子，黃有異曾經(jīng)親自到彝族村寨生活了數(shù)年，在體驗生活中，他根據(jù)彝族曲調(diào)的特色，創(chuàng)作出了這首節(jié)奏優(yōu)美歡快的、民族色彩濃烈的曲子。我的講述，讓學生認識到這是一首表達彝族人民幸福生活的曲子，其中趕圩這一特定的場景，又體現(xiàn)了美麗的彝族姑娘在趕圩過程中的快樂以及生活的富足。學生通過了解激發(fā)了興趣，所以在欣賞音樂時就更加用心了。我教學生們演唱經(jīng)典歌曲《保衛(wèi)黃河》時，為了引導同學們展開豐富的想象，我找到了關(guān)于黃河保衛(wèi)戰(zhàn)的彩色掛圖，在課上展示給大家，引起了大家的興趣。多媒體教學的興起，使課堂更加生動精彩、形象逼真。學生通過多種感官的感受和體驗，對于理解、評價音樂有了比較深刻的認識。二師生互動，視、聽并舉在音樂欣賞教學中，教師與學生都要同時進入“傾聽”音樂的狀態(tài)，這樣做便于把學生的注意力都吸引到課堂上來，從而從聽覺上培養(yǎng)學生對音樂的感知能力，同時也能提高學生的記憶力。教師等學生“傾聽”完音樂后，再介紹作品的體裁、時代背景以及作者的生平，應用多媒體、圖片，從視覺到聽覺，讓學生熟知。在這個過程中，教師在初聽實施之前，應該先提出幾個需要注意的問題來提示學生：在這個過程中你聽到了什么？在你眼前仿佛出現(xiàn)了什么？它是什么風格的歌曲，所表達的是一種什么樣的情緒？帶著問題進行欣賞，學生的欣賞能力會得到提升。在欣賞馬頭琴獨奏曲《萬馬奔騰》的教學活動中，利用多媒體播放馬頭琴演奏方式，感受馬頭琴的音色，幫助學生理解作品，感受萬馬奔騰的賽馬情景，更加深了學生對音樂作品的深度理解。三在師生的情感互動中，讓學生體驗音樂師生在情感互動中進行合作教學，這是新課程改革以來教師較為常見的一種教學手段。相比傳統(tǒng)的教學方式，它更強調(diào)集體學習能力的提升。這個合作的過程，是教師與學生以及學生與學生之間的互相作用，共同體驗美、表現(xiàn)美、創(chuàng)造美的完整過程，也是提高學生對音樂的審美能力的過程。在音樂教學中，教師如何做才能讓學生獲得真正的審美體驗呢？筆者通過實踐，認為教師應該在課堂上留出一定的自由活動空間給學生，并在這個基礎(chǔ)上為他們提供活動的條件。教師與學生融洽的交流與豐富的互動，能夠調(diào)動學生主動參與到音樂教學過程中的熱情，使學生通過自己的親身體驗來學習音樂文化，并在這個過程中嘗試進行創(chuàng)造。為了讓學生充分發(fā)揮自己主觀能動性，自覺地進行思考，把自己對生活的理解和認識融進作品中，教師一定要注意鼓勵學生進行模糊思維、自由想象，引導他們打開想象的空間，提高他們的欣賞能力，使他們獲得審美享受。四在欣賞體驗中成為學生中的一員，成為他們的“合作伙伴”如在《紅色娘子軍》一課的教學中有一個環(huán)節(jié)，我經(jīng)過考慮之后，決定讓學生自由組合成小隊，并列隊行進創(chuàng)編與展示。在這個過程中，我則走到學生中間去，參與其中編排有困難的一個小隊，與大家共同交流，完成創(chuàng)作。在這里，讓學生自由組合成小隊進行創(chuàng)編、展示，旨在張揚學生的個性，發(fā)展學生的想象力，增強學生音樂表演的自信心，培養(yǎng)學生良好的合作意識，讓每個學生享受表現(xiàn)音樂和創(chuàng)編音樂所帶來的成功感和愉悅感?？傊抡n程理念下的音樂課堂，是師生互動的課堂，師生共營的課堂。讓學生在音樂課堂中得到快樂，產(chǎn)生學習音樂的興趣，培養(yǎng)能力、陶冶性情，從而促進學生審美能力的提高。分子腫瘤學基礎(chǔ)聰明出于勤奮，天才在于積累分子腫瘤學基礎(chǔ)分子腫29優(yōu)秀精品課件文檔資料優(yōu)秀精品課件文檔資料30分子腫瘤學基礎(chǔ)課件31分子腫瘤學基礎(chǔ)課件32分子腫瘤學基礎(chǔ)課件33分子腫瘤學基礎(chǔ)課件34腫瘤的多因素多階段多基因參與的過程多因素多階段：二階段學說多階段學說多基因參與：癌基因、抑癌基因細胞凋亡相關(guān)基因、腫瘤易感基因腫瘤的多因素多階段多基因參與的過程多因素35腫瘤的發(fā)病與體細胞突變有關(guān)癌基因：維持細胞正常生理功能所必須的基因細胞增殖、分化、信號轉(zhuǎn)到體細胞突變學說：腫瘤的發(fā)生與癌基因突變有關(guān)點突變、DNA擴增染色體重排、甲基化腫瘤的發(fā)病與體細胞突變有關(guān)癌基因：維持細胞正常生理功能所必須36抑癌基因：純合缺失或失活而引起惡性轉(zhuǎn)化的基因二次突變學說（Rb基因，視網(wǎng)膜母細胞瘤）

遺傳性視網(wǎng)膜母細胞瘤患者（Rb等位基因突變或缺失）：一次突變引起發(fā)病非遺傳性視網(wǎng)膜母細胞瘤：二次突變突變引起發(fā)病抑癌基因：純合缺失或失活而引起惡性轉(zhuǎn)化的基因37腫瘤易感性和易感基因腫瘤易感性：環(huán)境與遺傳腫瘤易感基因：癌基因和抑癌基因的突變

DNA修復缺陷代謝酶基因：化學致癌腫瘤易感性和易感基因腫瘤易感性：環(huán)境與遺傳38三、腫瘤的分子診斷及其研究進展1、分子診斷在腫瘤研究中的意義和應用

腫瘤的分子診斷涉及到各種惡性腫瘤及癌前病變，主要集中在各種癌基因、抑癌基因及相關(guān)基因的檢測，分別在蛋白質(zhì)、RNA、DNA水平進行判斷，為腫瘤的基礎(chǔ)研究、腫瘤防治和個體化或預見性治療提供更詳盡的證據(jù)。（1）腫瘤易感基因的檢測（2）腫瘤的分類

對Bcr區(qū)基因重排檢測：可診斷慢粒并與急粒鑒別。神經(jīng)母細胞瘤——N-Myc明顯擴增和過表達；神經(jīng)上皮瘤——c-Myc擴增和過表達。三、腫瘤的分子診斷及其研究進展1、分子診斷在腫瘤研究中的意39

（3）腫瘤的早期診斷

（4）腫瘤的預后判斷：從分子水平上判斷腫瘤的良、惡性及預后，有較高的準確性。腫瘤相關(guān)基因的突變、擴增及過表達等常與預后密切相關(guān)。

（5）腫瘤的個體化和預見性治療:腫瘤的發(fā)生是多基因、多步驟、多階段的過程，在發(fā)生、發(fā)展的不同時期，可能涉及不同的基因和不同的變化形式，而基因的變化和基因間的信號傳遞與腫瘤臨床治療的敏感性密切相關(guān)。提供腫瘤基因變化，對治療有指導意義。

（6）腫瘤的預后監(jiān)測（3）腫瘤的早期診斷402、腫瘤基因過表達及其檢測

（1）基因過表達的形式

癌基因激活和抑癌基因失活，是腫瘤發(fā)生過程中的關(guān)鍵因素。癌基因產(chǎn)物過表達是癌基因激活的重要表現(xiàn)形式之一。癌基因一般為單拷貝基因，在腫瘤細胞內(nèi)的一些癌基因在DNA復制過程中擴增，常導致基因產(chǎn)物過表達，表現(xiàn)為mRNA和蛋白質(zhì)量增加。有些抑癌基因突變后可起到癌基因的作用（如p53基因），產(chǎn)生突變型蛋白。2、腫瘤基因過表達及其檢測（1）基因過表達的形式41

（2）基因過表達的檢測

①表達產(chǎn)物的檢測：幾乎所有被克隆的癌基因、抑癌基因都有相應抗體，其中大多數(shù)已商品化。

免疫組化（immunohistochemistry）

酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）免疫沉淀法：檢測并定量分析蛋白質(zhì)混合物中的靶抗原敏感（可檢出100pg的放射性標記蛋白）。與SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳并用，可用于分析外源基因在原核和真核宿主細胞中的表達。（2）基因過表達的檢測42蛋白印跡法（Westernblot）：70年代末80年代初，在蛋白質(zhì)凝膠電泳（分辨率高）和固相免疫測定（特異敏感）的基礎(chǔ)上發(fā)展的，結(jié)合了二者優(yōu)點，無需同位素標記，具有從混雜抗原中檢出特定抗原，或從多克隆抗體中檢出單克隆抗體的優(yōu)勢，還可對轉(zhuǎn)移到固相膜上的蛋白進行連續(xù)分析，有蛋白質(zhì)反應均一性、固相膜保存時間長等優(yōu)點。敏感性為1～5ng。細胞裂解—→SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳→蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)移→封閉→加一抗→加二抗→顯色照像。流式細胞儀（flowcytometry）測試法：用熒光標記抗體與含有特異抗原的細胞結(jié)合，用流式細胞儀對含不同熒光信號的細胞分類測試，可檢測細胞表面受體、標志物或特異性蛋白及細胞的分類分析。蛋白印跡法（Westernblot）：70年代末80年代初43②基因擴增的檢測：腫瘤基因擴增可產(chǎn)生過量的表達蛋白，也可表現(xiàn)為基因拷貝數(shù)增加和轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA增加。經(jīng)典檢測方法為核酸分子雜交，包括原位雜交（insituhydridization，ISH）、熒光原位雜交（FISH）、DNA雜交（Southernblot）、RNA雜交（Northernblot）、原位PCR、逆轉(zhuǎn)錄PCR（reversetranscriptionPCR，RT-PCR）。FISH

將熒光素標記克隆的DNA片段與染色體或細胞間期染色質(zhì)雜交，以測定特定的DNA片段是否有缺失或擴增。

原位PCR：結(jié)合了PCR與ISH技術(shù)優(yōu)點，在組織切片或細胞涂片上原位對特定DNA或RNA進行擴增，再用特異性探針作原位雜交檢測，以達到對靶核苷酸進行定性、定位、定量分析。

逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）

用來擴增從RNA分子中得到的一段特異序列。RNA首先被逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。用位于一段特異序列或一個基因兩側(cè)的引物生成以cDNA為模板的PCR產(chǎn)物，得到陽性產(chǎn)物說明存在特異性的RNA序列。為擴增從mRNA逆轉(zhuǎn)錄的cDNA，引物中應含一段目的基因的內(nèi)含子區(qū)，以使從帶有基因組DNA的PCR產(chǎn)物中區(qū)分出cDNA的PCR產(chǎn)物。經(jīng)典方法包括RT和PCR兩步。

②基因擴增的檢測：腫瘤基因擴增可產(chǎn)生過量的表達蛋白，也可表現(xiàn)44（3）腫瘤基因差異表達的檢測

控制生物性狀的基本結(jié)構(gòu)和功能單位是基因，不同細胞或同一細胞的不同時間與空間基因表達的差異決定著生命活動的多樣性，如發(fā)育、分化、繁殖、細胞周期調(diào)控、衰老、死亡等。實際上，細胞的各種生理過程或病理改變本質(zhì)上都是由基因表達的改變所決定的。因此獲取差異表達的基因?qū)⒂兄诹私庹Ｉ碜兓筒±砀淖兊姆肿訖C制，為基因診斷、基因治療和發(fā)現(xiàn)新的藥物靶分子提供新的視野。

（3）腫瘤基因差異表達的檢測45①DD-PCR（differentialdisplayPCR）又稱差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR（DDRT-PCR）

簡要流程

對照組處理組↓……反轉(zhuǎn)錄……↓mRNA或總RNAmRNA或總RNA↓……PCR……….↓cDNAcDNA↓↓

擴增產(chǎn)物擴增產(chǎn)物

↘電泳分離↙

↓比較回收差異顯示帶↓PCR

克隆、雜交、測序↓與Genbank數(shù)據(jù)庫中的已知序列進行同源性匹配確定相關(guān)基因①DD-PCR（differentialdisplay46②RSDD（交互式差減差異RNA顯示，reciprocalsubtractiondifferentialRNAdisplay）：DD-PCR中采用差減過的RNA或cDNA樣品。1998年Kang等，分析了腺病毒轉(zhuǎn)化的大鼠胚胎細胞株E11和獲得侵襲性致癌表型的E11-NMT細胞株間的差異表達基因。

E11cDNA文庫E11-NMTcDNA文庫↓↓交互式差減E11減E11-NMT差減cDNA文庫E11-NMT減E11差減cDNA文庫↓體內(nèi)切割↓以錨定引物和5’隨機引物PCR擴增↓顯示

5%測序膠顯示并分離差異條帶↓再擴增，反向Northern分析↓

Northernblot分析表達分析↓克隆并測序，Northernblot確證②RSDD（交互式差減差異RNA顯示，reciprocal47（4）基因突變的檢測

①PCR-SSCP法（PCR-singlestrandconformationalpolymorphism，聚合酶鏈反應－單鏈構(gòu)象多態(tài)分析）：單鏈DNA在中性條件下會形成二級結(jié)構(gòu)，即使有一個堿基不同，也會形成不同的二級結(jié)構(gòu)而出現(xiàn)不同的遷移率。靶DNA或RNA經(jīng)PCR擴增后，產(chǎn)物變性處理，單鏈產(chǎn)物經(jīng)中性聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE），靶DNA或RNA中含有單個堿基置換、數(shù)個堿基插入或缺失等改變時，因遷移率變化就出現(xiàn)泳動變位，從而檢測出含有基因突變的DNA或RNA片段。

②雜合雙鏈分析法（Heteroduplexanalysis，HA）：由突變型和野生型DNA形成的異源雜合雙鏈在其錯配處會形成突起，在非變性膠中電泳時，會產(chǎn)生與相應的同源雙鏈DNA不同的遷移率。

③突變體富集PCR法（mutant-enrichedPCR）：利用癌基因或抑癌基因某個編碼子部位存在的已知限制性內(nèi)切酶位點，用連續(xù)2次巢式PCR對包括酶切位點的DNA片段進行擴增，在2次PCR之間用相應的內(nèi)切酶消化擴增產(chǎn)物，野生型因酶切不能進入第2次PCR，而突變型則能完整進入第2次PCR并得到產(chǎn)物的富集。（4）基因突變的檢測48④變性梯度凝膠電泳法（denaturinggradientgelelectrophoresis，DGGE）：雙鏈DNA在沿變性劑（甲醛或尿素）電場方向遞增的凝膠中進行到與DNA變性溫度（Tm）一致的位置時，DNA發(fā)生部分解鏈，遷移率下降。正常DNA分子與突變DNA分子間即使只有一個堿基對的差異，也會在不同位置解鏈，導致遷移率不同而被分離。兩個同源雙鏈DNA分子間有一個堿基對不同時，Tm值就相差1℃或更高，有一個堿基錯配的異源雙鏈DNA分子與同源雙鏈DNA分子比較，其Tm值可相差6℃以上。⑤DNA芯片技術(shù)（DNAchip）：建立在雜交測序基本理論上的DNA分析技術(shù)。利用固定在芯片上的幾萬至幾十萬條探針與樣品雜交，在一步實驗中獲取大量信息。可用于基因定位、DNA測序、突變分析、表達分析、基因多態(tài)性分析、物理圖譜和遺傳圖譜的構(gòu)建等。使用了光控固相化學合成、集成電路計算機、激光共聚焦掃描、熒光標記探針等多項先進技術(shù)，實驗全部自動化，操作極簡便，可節(jié)約大量時間和實驗成本。將許多已知序列的寡核苷酸DNA排列在一塊集成電路板上，彼此間重疊1個堿基，并覆蓋全部檢測基因。將熒光標記的正常和突變DNA分別與兩塊DNA芯片雜交，因至少存在1個堿基差異，將得到不同的雜交圖譜，用共聚焦顯微鏡分別檢測其熒光信號，即可確定是否存在突變。蛋白質(zhì)芯片、組織和細胞芯片④變性梯度凝膠電泳法（denaturinggradient49⑥

連接酶鏈反應（ligasechainreaction，LCR）：雙鏈DNA經(jīng)加熱變性后，用2對互補寡核苷酸引物與模板復性。若引物序列與目標序列完全配對，那么2對引物將與各自的目標片段雜交，并在連接酶作用下發(fā)生連接。連接產(chǎn)物作為下一次循環(huán)的模板。若點突變出現(xiàn)在目標片段上，將不能進行連接反應，不會出現(xiàn)連接產(chǎn)物。⑦

等位基因特異性擴增法（allele-specificamplification，ASA）：設(shè)計2個等位基因特異的5’端引物（一個對野生型特異，一個對突變型特異特異）。對于純合型突變，分別加入兩種引物及3’端引物進行兩個平行PCR，只有與突變DNA完全互補