快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)及聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在梅毒診斷中的應(yīng)用

快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)及聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)在梅毒診斷中的應(yīng)用【摘

要】目的：梅毒早期診斷中，兩種梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法的在臨床診斷中應(yīng)用價(jià)值及評(píng)價(jià)。方法：對(duì)我院2012年01月01日至2013年12月31日兩年來，8813位門診體檢、住院輸血及手術(shù)前病人的血清用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行TP-Ab檢測(cè)，TP-Ab為陽性的的標(biāo)本再用快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(RPR)進(jìn)行檢測(cè)；247位梅毒高危人群應(yīng)醫(yī)生要求同時(shí)檢測(cè)RPR及TP-ELISA。結(jié)果:共計(jì)9060位患者中，TP-ELISA（+）RPR（+）的患者89人，其中84位為梅毒確診患者，5位患者為梅毒潛伏感染；TP-ELISA（+）RPR（-）的患者202人，其中26位為梅毒治愈患者，9位患者為梅毒感染早期，167位患者原因不明；TP-ELISA（-）RPR（+）的患者3人，都是RPR的生物學(xué)假陽性。結(jié)論：ELISA方法應(yīng)用于梅毒的初篩，RPR試驗(yàn)用于梅毒治療期間的療效觀察，聯(lián)合兩種方法對(duì)梅毒進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)對(duì)梅毒的診斷和臨床用藥指導(dǎo)非常有幫助?！娟P(guān)鍵詞】

梅毒螺旋體；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)；快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)；梅毒診斷梅毒是一種由梅毒蒼白螺旋體（TP）引起的性傳播疾病，也是一種血傳播疾病，孕婦可通過胎盤或哺乳傳給胎兒，部分患者可通過接觸梅毒患者及其生活用品而感染，近年來，梅毒感染人群有明顯的上升的趨勢(shì)。梅毒感人體后，如果不經(jīng)過及時(shí)系統(tǒng)的治療，發(fā)展為二、三期梅毒，可引起全身多個(gè)器官和組織的損傷。梅毒血清學(xué)實(shí)驗(yàn)是梅毒診斷的主要依據(jù)，其包括特異性抗梅毒螺旋抗體和非特異性抗類脂質(zhì)抗體的測(cè)定，本實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)特異性抗梅毒螺旋抗體，快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)測(cè)非特異性抗類脂質(zhì)抗體，現(xiàn)將本院2012年1月至2013年12月，這兩年來，9060例患者的梅毒血清學(xué)結(jié)果進(jìn)行調(diào)查分析，結(jié)果報(bào)道如下。1資料與方法1.1對(duì)象2012年01月01日至2013年12月31日兩年來，8813位門診體檢、住院輸血及手術(shù)前病人和247位梅毒高危人群。1.2試劑和儀器RPR試劑購自上海科華公司,TP-ELISA試劑購自廈門英科新創(chuàng)公司,均為“國藥準(zhǔn)字號(hào)”試劑。用深圳凱特KWP-100自動(dòng)酶標(biāo)洗板機(jī)洗板,用芬蘭雷勃MK3型酶標(biāo)儀讀取OD值。兩種方法均嚴(yán)格按說明書操作。

1.3方法8813例患者用TP-ELISA法進(jìn)行梅毒篩查,陽性標(biāo)本再用RPR試驗(yàn)(陽性血清作倍比稀釋)進(jìn)行檢測(cè)；247位梅毒高危人群應(yīng)醫(yī)生要求同時(shí)用RPR及TP-ELISA法進(jìn)行檢測(cè)。2結(jié)果8813例各年齡段患者標(biāo)本中,TP-ELISA共檢出陽性163例,檢出率1.8%。163例TP-ELISA陽性標(biāo)本中,檢出RPR陽性48例,檢出率29.4%，其余115例RPR為陰性，結(jié)果見表1。表1：8813位門診體檢、住院輸血及手術(shù)前病人結(jié)果檢測(cè)方法TP-ELISARPR檢測(cè)人數(shù)8813163陽性人數(shù)16348陽性率1.8%29.4%247例同時(shí)應(yīng)用RPR及TP-ELISA法進(jìn)行檢測(cè)的患者標(biāo)本中，RPR（+）TP-ELISA（+）41例、RPR（-）TP-ELISA（+）87例、RPR（+）TP-ELISA（-）3例， 其余116例兩項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果都是陰性，結(jié)果見表2。表2：247例同時(shí)檢測(cè)TP-ELISA及RPR結(jié)果陽性類型RPR（+）TP-ELISA（+）RPR（-）TP-ELISA（+）RPR（+）TP-ELISA（-）RPR（-）TP-ELISA（-）陽性人數(shù)41873116陽性率16.5%35.3%1.2%47%4討論梅毒螺旋體感染人體后，臨床上可分為一期梅毒、二期梅毒、三期梅毒、潛伏梅毒等。一期梅毒主要表現(xiàn)為形成硬下疳，產(chǎn)生的特異性抗梅毒螺旋抗體主要是IgM型，感染早期，梅毒反應(yīng)素常為陰性；二期梅毒全身皮膚黏膜出現(xiàn)梅毒疹，全身淋巴結(jié)腫大，其產(chǎn)生的特異性抗梅毒螺旋抗體主要是IgM和IgG型，梅毒反應(yīng)素幾乎都是陽性；三期梅毒，即晚期梅毒，常侵犯心臟、神經(jīng)、眼、耳等，可形成樹膠腫，其產(chǎn)生的特異性抗梅毒螺旋抗體主要是IgG型，梅毒反應(yīng)素可能轉(zhuǎn)陰〔1〕；潛伏梅毒，指患者基本上沒有感覺和臨床表現(xiàn)，僅梅毒血清學(xué)反應(yīng)陽性者。機(jī)體感染梅毒螺旋體后可產(chǎn)生特異性抗梅毒螺旋抗體和非特異性抗類脂質(zhì)抗體，梅毒特異性抗體產(chǎn)生最早，在感染梅毒螺體后約兩周左右即可產(chǎn)生，而非特異性抗體出現(xiàn)較特異性抗體遲2-3周〔2〕，故對(duì)特異性抗梅毒螺旋體抗體的檢測(cè)更適合于梅毒的早期初篩。實(shí)驗(yàn)室中，檢查梅毒非特異性抗類脂質(zhì)抗體的血清學(xué)試驗(yàn)，主要有RPR、TRUST和USR等，本實(shí)驗(yàn)室一直采用RPR試驗(yàn)。由于梅毒感染最初4周內(nèi)，機(jī)體產(chǎn)生的反應(yīng)素，達(dá)不到RPR的檢測(cè)限，故RPR檢測(cè)梅毒早期易漏檢〔3〕。RPR血清學(xué)試驗(yàn)可做滴度稀釋試驗(yàn)而定量，且稀釋度隨著治療的進(jìn)行而下降直到轉(zhuǎn)陰，若梅毒復(fù)發(fā)或再感染則RPR又可出現(xiàn)陽性［4］，所以RPR常用于治療的效果判定，也是梅毒復(fù)發(fā)和再感染的重要指標(biāo)。檢測(cè)特異性抗梅毒螺旋抗體的試驗(yàn)主要有TP-ELISA、TPHA和TPPA等，這些三種試驗(yàn)的特異性和靈敏度相近［5］，由于TPHA和TPPA實(shí)驗(yàn)成本昂貴，本實(shí)驗(yàn)室采用TP-ELISA檢測(cè)特異性抗梅毒螺旋抗體。TP-ELISA測(cè)定的特異性抗梅毒螺旋抗體的特異性和靈敏度都很高，可作為初篩試驗(yàn)，但患者感染梅毒后，即便經(jīng)過正規(guī)抗梅毒治療，仍可檢出其特異性抗體，甚至可終生陽性［6］，故它不能判定治療效果。本實(shí)驗(yàn)室常選用RPR和TP-ELISA這兩種不同檢測(cè)方法來診斷梅毒，RPR檢測(cè)梅毒非特異性抗體，用于療效觀察，TP-ELISA檢測(cè)梅毒特異性抗體，用于初篩試驗(yàn)。RPR檢測(cè)的是血清中的反應(yīng)素，可作為梅毒治療療效的較好指標(biāo)，但受許多因素的影響，可產(chǎn)生非特異性反應(yīng)。如生理狀態(tài)下懷孕［7］、某些急性病毒性感染和自身免疫性疾病等患者其反應(yīng)素可出現(xiàn)生物學(xué)假陽性［8］。表2中3例的結(jié)果是RPR（+）、TP-ELISA（-）的患者，兩位患者有自身免疫性性疾病，另一位患有病毒性肝炎，都是RPR的生物學(xué)假陽性。TP-ELISA是利用基因工程技術(shù)獲得梅毒螺旋體特異性抗原，再將此抗原包被在微孔反應(yīng)板上，并利用酶的放大作用檢測(cè)血清中的梅毒螺旋體特異性IgG和IgM混合抗體，特異性和靈敏度都較高，是診斷梅毒螺旋體感染較理想的一種檢測(cè)方法。此外，ELISA還具有方法簡單、可大批量檢測(cè)及檢測(cè)數(shù)據(jù)可長期保存等優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)是梅毒血清學(xué)診斷試驗(yàn)的首選方法。但其檢測(cè)的是梅毒IgM和IgG的混合抗體，在梅毒治愈后相當(dāng)長的時(shí)間內(nèi)IgG抗體仍然可能是陽性，甚至終身陽性，因此，TP-ELISA陽性只能說明患者可能處于梅毒感染期或曾經(jīng)感染過梅毒，不能判斷梅毒疾病活動(dòng)與否［9］。此外，由于受患者某些生理及病理學(xué)的影響及方法學(xué)的原因，TP-ELISA可能檢測(cè)到的交叉抗體，產(chǎn)生一定的假陽性，這在高齡人群尤為突出［10］。對(duì)表1中115例和表2中87例TP-ELISA陽性而RPR陰性的患者,有26位經(jīng)調(diào)查是梅毒治愈患者；9位患者3周后，RPR出現(xiàn)陽性，則應(yīng)考慮是梅毒的早期感染，RPR濃度尚未達(dá)到檢測(cè)閾值：對(duì)于另外的167位臨床上無梅毒癥狀和體征,梅毒感染史不清的患者，根據(jù)臨床癥狀和病史排除了三期梅毒可能,則認(rèn)為可能是治療其他疾病的過程中，抗生素的應(yīng)用同時(shí)治愈了梅毒，梅毒螺旋體特異性抗體的持續(xù)存在，或者是交叉抗體引起的假陽性。對(duì)于表1中48例和表2中41例TP-ELISA和RPR同時(shí)陽性的患者，84例患者臨床癥狀與梅毒相符，最后診斷為梅毒；對(duì)于另外5例無明顯臨床癥狀的患者，則認(rèn)為可能是潛伏梅毒，此89位患者都經(jīng)過梅毒的正規(guī)治療，TP-ELISA持續(xù)陽性，吸光度無明顯變化，而RPR的滴度都隨著治療的進(jìn)行而下降直至轉(zhuǎn)陰。

總之，臨床應(yīng)該同時(shí)檢測(cè)非特異性抗類脂質(zhì)抗體和特異性抗梅毒螺旋體抗體來診斷梅毒。對(duì)于單獨(dú)TP-ELISA抗體陽性患者，建議患者2-3周后復(fù)查RPR，RPR轉(zhuǎn)陽，則考慮是梅毒早期感染；RPR還是陰性，并且排除了三期梅毒的情況下，則不需進(jìn)行梅毒治療。單獨(dú)RPR抗體陽性患者，則考慮是生物學(xué)假陽性。對(duì)于雙抗體同時(shí)陽性的患者，則可考慮是梅毒感染，需進(jìn)行梅毒的正規(guī)治療，并定期復(fù)查RPR的滴度，以觀察治療的效果。參考文獻(xiàn)［1］楊旭懷．兩種方法檢查梅毒抗體臨床分析［J］．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2013，10(1)：96-97．［2］唐滿玲，顧敏，將最明，周娟．幾種梅毒血清學(xué)檢測(cè)方法的評(píng)價(jià)及臨床應(yīng)用［J］．國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012,5（9）：1105-1107．［3］薛曉光，陳丹玲．RPR、TRUST、TPHA、TPPA的試驗(yàn)對(duì)比分析［J］．海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2000,6（2）：47．[4]BrowDL,FrankJE.diagnosisandmanagementofsyphilis[J].AmFamPhysician,2003,6(8):283-290.［5］袁濤.\o"RPR和TP-ELISA、TPHA三種試驗(yàn)方法檢測(cè)梅毒抗體的比較"RPR和TP-ELISA、TPHA三種試驗(yàn)方法檢測(cè)梅毒抗體的比較［J］．實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2008,26（6）：645．［6］李鳳中，黃永建，陳波．三種血清方法檢測(cè)梅毒的比較分析［Ｊ］．檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2012,9（4）：442-443．［7］薛黎，曹文艷，曹玲，等．評(píng)價(jià)3種梅毒檢測(cè)方法在臨床診斷中的應(yīng)用［J］．新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，20