血液血管干細(xì)胞

PAGEPAGE10造血和血管共同的祖細(xì)胞血液血管干細(xì)胞自從1998年第一次從內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離到人的胚胎干細(xì)胞，基于早期的小鼠胚胎干細(xì)胞可以分化為幾乎所有三個(gè)胚層的細(xì)胞的研究，胚胎干細(xì)胞的全能性使人們很快認(rèn)識(shí)到胚胎干細(xì)胞在再生醫(yī)學(xué)中的潛在應(yīng)用價(jià)值。人們相信干細(xì)胞的研究將帶來(lái)臨床治療各種疾病的革命，如心血管疾病、神經(jīng)退行性疾病，糖尿病及癌癥等。但是，由于存在倫理上的問(wèn)題，人們開(kāi)始將方向轉(zhuǎn)為從成體尋找并研究干細(xì)胞。目前對(duì)成體干細(xì)胞的研究和應(yīng)用取得了可喜的成果，組織器官的成體干細(xì)胞不僅對(duì)其所在的組織器官有重建和修復(fù)功能，而且還能分化為其他組織器官的細(xì)胞，我們實(shí)驗(yàn)室在成體干細(xì)胞可塑性方面也做了許多有意義的工作。因此，對(duì)成體干細(xì)胞的深入研究必將對(duì)再生醫(yī)學(xué)提供了巨大的應(yīng)用價(jià)值。干細(xì)胞的概念干細(xì)胞被認(rèn)為是具有自我更新、多向分化潛能和增殖特性的細(xì)胞。從受精卵開(kāi)始進(jìn)行了兩次分裂后的細(xì)胞具有全能性（totipotent），可以形成胚胎和胎盤(pán)的滋養(yǎng)層細(xì)胞。隨后，逐漸發(fā)育成的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)，可以分化為幾乎來(lái)自三個(gè)胚層的所有細(xì)胞，被認(rèn)為是多系分化潛能的干細(xì)胞（pluripotentstemcells）,但不能形成胚胎，因?yàn)槠洳荒苄纬商ケP(pán)和支持組織。而胚胎干細(xì)胞即被認(rèn)為具有多系分化潛能的干細(xì)胞。大部分組織器官的干細(xì)胞是多能干細(xì)胞（multipotentialstemcells），其可以分化為本組織固有的細(xì)胞系。大部分組織器官的干細(xì)胞是多能干細(xì)胞（multipotentialstemcells），其可以分化為本組織固有的細(xì)胞系。如小腸干細(xì)胞可以分化為小腸所有四種細(xì)胞。而神經(jīng)干細(xì)胞可以分化為三種神經(jīng)細(xì)胞被定義為tripotentialstemcells。有雙向分化潛能的干細(xì)胞稱(chēng)為bipotentialstemcells,如血液血管干細(xì)胞（hemangioblast）。細(xì)胞只產(chǎn)生一種特異的細(xì)胞的干細(xì)胞被稱(chēng)為unipotentialstemcells,如表皮干細(xì)胞和肝臟干細(xì)胞，分別只產(chǎn)生角化的鱗狀上皮細(xì)胞和肝細(xì)胞，雖然對(duì)此存在爭(zhēng)議，有人稱(chēng)這種特性的細(xì)胞為定向的祖細(xì)胞(committedprogenitors)，但此類(lèi)細(xì)胞的確具有較大的克隆潛能，也仍被認(rèn)為是干細(xì)胞(1)。以下主要介紹胚胎和成體內(nèi)的雙向分化潛能的干細(xì)胞————血液血管干細(xì)胞。胚胎發(fā)育過(guò)程中的血液血管干細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞是胚胎發(fā)育中最早出現(xiàn)的細(xì)胞，內(nèi)皮和造血細(xì)胞都起源于中胚層。在一百多年前，人們就假內(nèi)皮細(xì)胞和造血細(xì)胞可能起源于共同的祖細(xì)胞?，F(xiàn)在，已經(jīng)普遍接受把造血和內(nèi)皮細(xì)胞起源于共同的祖細(xì)胞定義為血液血管干細(xì)胞（Hemangioblast）。這主要由于在胚胎內(nèi)外不同位點(diǎn)造血細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的發(fā)育密切相關(guān)。在胚胎發(fā)育過(guò)程中，中胚層細(xì)胞遷移到卵黃囊并形成細(xì)胞聚集，即血液血管干細(xì)胞簇，繼而內(nèi)皮細(xì)胞和造血細(xì)胞同時(shí)產(chǎn)生，從而導(dǎo)致血島（bloodisland）的發(fā)育，內(nèi)皮細(xì)胞在外，而造血細(xì)胞在內(nèi)，在每個(gè)血島相互融合形成第一個(gè)胚胎外的血管網(wǎng)(2,3)。卵黃囊內(nèi)發(fā)育的造血細(xì)胞是大的有核的原始的紅系祖細(xì)胞。在形成原始紅系祖細(xì)胞后的1天，也檢測(cè)到具有多系潛能的造血祖細(xì)胞的特征，提示卵黃囊的血島有造血干細(xì)胞(HSC)特征。但是在胎肝造血形成之前，沒(méi)有明確的造血細(xì)胞分化發(fā)生(4,5)。卵黃囊起源的HSC是不成熟的HSC,當(dāng)將卵黃囊的細(xì)胞注射到放射線照射的成體受者，不能顯示成體重建造血的能力(6)。而約9天的卵黃囊含有的造血細(xì)胞卻能使放射線照射的新生受者重建造血。說(shuō)明在其他部位還存在造血干細(xì)胞起源（7）。目前的研究表明在胚胎內(nèi)，HSC起源的最早位點(diǎn)在P-Sp/AGM區(qū)（para-aortic-splanchnopleure/aorta-gonad-mesonephros主動(dòng)脈旁臟壁層/主動(dòng)脈性腺中腎區(qū)）。E8天的胚胎P-Sp區(qū)最早形成的組織是成對(duì)的背主動(dòng)脈(8)，E9天融合為一條背主動(dòng)脈并通過(guò)卵黃動(dòng)脈與卵黃囊的血管網(wǎng)連接，臍動(dòng)脈將背主動(dòng)脈和胎盤(pán)連接（9）。而當(dāng)分離的E8.5-9天的胚胎P-Sp/AGM移植到免疫缺陷SCID鼠可以檢測(cè)到IgM和B細(xì)胞，體外培養(yǎng)P-Sp/AGM區(qū)可以產(chǎn)生粒系和淋巴系細(xì)胞。最后，P-Pp/AGM區(qū)含有CFU-S(spleencolonyformationcells)，來(lái)自E10的胚胎AGM區(qū)含有長(zhǎng)期重建的HSC(10)。進(jìn)一步研究表明在AGM區(qū)的主動(dòng)脈檢測(cè)到成體長(zhǎng)期重建的造血干細(xì)胞(11)。來(lái)自雞、小鼠和人胚胎背主動(dòng)脈的腹側(cè)壁都檢測(cè)到造血細(xì)胞簇（12）。而胚胎發(fā)育的后期，一些主要?jiǎng)用}像卵黃動(dòng)脈、臍動(dòng)脈都與造血細(xì)胞的產(chǎn)生有關(guān)，HSC被認(rèn)為是從這些血管的內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生出來(lái)的。Jaffredo(13)研究顯示在雞胚背主動(dòng)脈CD45+VEGFR-2(Flk1-或KDR)的造血細(xì)胞似乎從VEGFR-2+(Flk1+)的內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)育而來(lái)，同樣Nishikawa(14)研究證明來(lái)自小鼠胚胎9.5天的卵黃囊的VE-cadherin+/CD45-/Ter119-（內(nèi)皮細(xì)胞表型）的細(xì)胞，可以產(chǎn)生包括淋巴細(xì)胞在內(nèi)的造血細(xì)胞，說(shuō)明在胚胎內(nèi)，血管和造血細(xì)胞的發(fā)育是密切相關(guān)的，內(nèi)皮和造血細(xì)胞起源于共同的祖細(xì)胞血液血管干細(xì)胞。以上研究表明，胚胎外的卵黃囊和胚胎內(nèi)P-Sp/AGM區(qū)都是造血細(xì)胞的最早的起源位點(diǎn)，并且與血管細(xì)胞密切相關(guān)，說(shuō)明在胚胎發(fā)育的過(guò)程中這兩個(gè)位點(diǎn)是血液血管干細(xì)胞存留部位。支持血液血管干細(xì)胞存在的證據(jù)也包括造血和內(nèi)皮細(xì)胞系表達(dá)相同的基因。例如，表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞的VEGF(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)受體，即酪氨酸激酶受體flk1,tie-1,tie-2也表達(dá)在早期的造血祖細(xì)胞（15）。轉(zhuǎn)錄因子scl(stemcellleukemiagene)也同時(shí)表達(dá)在造血和內(nèi)皮細(xì)胞(16)。CD34被用來(lái)鑒定造血祖細(xì)胞的表型，也表達(dá)在內(nèi)皮細(xì)胞上（17）。另外，AGM區(qū)高表達(dá)糖基化蛋白PCLP-1(podocalyxin-likeprotein1)的細(xì)胞可以生成造血和內(nèi)皮細(xì)胞(18)。而斑馬魚(yú)cloche基因突變后不能產(chǎn)生內(nèi)皮和造血細(xì)胞。以上研究提示存在內(nèi)皮和造血的共同組細(xì)胞(19)。盡管在胚胎發(fā)育過(guò)程中存在血液血管干細(xì)胞，但是分離、鑒定和研究胚胎來(lái)源的血液血管干細(xì)胞還存在諸多困難：胚胎發(fā)育在這階段是非?？斓模@得血液血管干細(xì)胞存在位點(diǎn)的組織非常困難，并且能夠得到的細(xì)胞也非常少。然而，最近體外胚胎干細(xì)胞的研究進(jìn)展，為血液血管干細(xì)胞的研究提供了體外模型。EC在體外可以分化產(chǎn)生為立體的、分化的細(xì)胞團(tuán)稱(chēng)為是胚胎小體EBs(embryoidbodies),EBs在體外可以分化為多種細(xì)胞系包括神經(jīng)、肌肉、內(nèi)皮和造血細(xì)胞。在EBs發(fā)育的內(nèi)皮和造血細(xì)胞的過(guò)程模仿了卵黃囊的血島發(fā)育過(guò)程。來(lái)自EC的EBs體外分化為BL-CFC（blastcolony-formingcell）,BL-CFC接種在半固體培養(yǎng)基如甲基纖維素并在VEGF的作用下形成blastcolonies，基因鑒定這些blastcolonies的細(xì)胞表達(dá)CD34,scl和flk1。進(jìn)一步將blastcolonies細(xì)胞重新接種在內(nèi)皮和造血細(xì)胞的培養(yǎng)環(huán)境中，可以形成原始的內(nèi)皮和造血祖細(xì)胞，非常重要的是，來(lái)自blastcolonies的內(nèi)皮和造血祖細(xì)胞是克隆源性的。以上研究表明BL-CFCs代表血液血管干細(xì)胞(20)。影響血液血管干細(xì)胞發(fā)育的關(guān)鍵分子Flk1在血管和造血發(fā)育過(guò)程中，VEGF受體Flk1起到非產(chǎn)常重要的作用。而在胚胎發(fā)育過(guò)程中Flk1是血液血管干細(xì)胞發(fā)育所必需的。Flk1是側(cè)板中胚層和卵黃囊最早分化的內(nèi)皮細(xì)胞和造血細(xì)胞的標(biāo)記，在功能上Flk1是血液血管干細(xì)胞產(chǎn)生所必需的(21,3,22)。Flk1基因缺陷小鼠，由于卵黃囊不能形成血島，造成缺乏成熟的內(nèi)皮細(xì)胞和造血細(xì)胞而使8.5-9.5dpc(dayspost-coitum)胚胎死于子宮(3)。嵌合研究表明flk1-/-的ES細(xì)胞體內(nèi)不能參與形成血管，也不參與原始的和成熟的造血發(fā)育(23)。前面介紹VEGF使BL-CFC形成blastcolonies細(xì)胞子代flk1基因表達(dá)，進(jìn)一步從EBs細(xì)胞群體中分離的Flk1+的細(xì)胞重新接種，在VEGF作用下形成blastcolonies,而Flk1-的細(xì)胞卻不能形成，說(shuō)明血液血管干細(xì)胞表達(dá)Flk1。此結(jié)果與從雞中胚層分離到的Flk1+細(xì)胞分化為內(nèi)皮和造血細(xì)胞相一致（22）。盡管flk1缺陷小鼠和flk1-/-與野生型的嵌和小鼠證明在卵黃囊的血島和胚胎的發(fā)育中，F(xiàn)lk1是內(nèi)皮細(xì)胞和造血細(xì)胞發(fā)育所必需的。但是VEGF和Flk1相互作用似乎并不是內(nèi)皮和造血細(xì)胞發(fā)育所必需。VEGF+/-和flk1-/-小鼠仍殘留有造血和內(nèi)皮的活性（24,25）。在體外，flk1-/-缺陷的BL-CFCs在形成blastcolonies時(shí)對(duì)VEGF沒(méi)有反應(yīng)，集落的數(shù)目和大小都明顯降低，殘留的集落仍有分化為內(nèi)皮細(xì)胞和造血細(xì)胞的潛能（26）。因而VEGF/Flk1相互作用可能不是血液血管干細(xì)胞發(fā)育唯一需求的。但VEGF和bFGF在胚胎發(fā)育過(guò)程中是調(diào)節(jié)血液血管干細(xì)胞發(fā)育的重要因子，VEGF可能在調(diào)節(jié)血液血管干細(xì)胞想造血和內(nèi)皮細(xì)胞分化其重要作用，而bFGF調(diào)節(jié)血液血管干細(xì)胞的增殖。(23,20,26)2．SCL許多研究表明SCL也是血液血管干細(xì)胞發(fā)育的關(guān)鍵。SCL是堿性螺旋-環(huán)-螺旋轉(zhuǎn)錄因子。scl-/-小鼠在E10.5天就因造血缺陷而死亡（27,16）。進(jìn)一步研究表明SCL也是內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)育所必需的，scl-/-ES不能在卵黃囊內(nèi)發(fā)育為血管網(wǎng)(28)。斑馬魚(yú)的后側(cè)中胚層表達(dá)SCL，并可以產(chǎn)生造血和內(nèi)皮細(xì)胞（29），當(dāng)其clooche基因突變時(shí)，影響造血和內(nèi)皮細(xì)胞分化，并引起SCL表達(dá)明顯下降（30）。共同表達(dá)Flk1與SCL的細(xì)胞，能夠產(chǎn)生SCL+/Flk1-的造血細(xì)胞和SCL-/Flk1+的內(nèi)皮細(xì)胞，提示共同表達(dá)Flk1和SCL的細(xì)胞是血液血管干細(xì)胞（29）。當(dāng)斑馬魚(yú)的胚胎SCL表達(dá)過(guò)量時(shí)，SCL+/Flk1+細(xì)胞增多，結(jié)果也造成內(nèi)皮和造血細(xì)胞增多（29）。SCL缺陷的ES不能形成blastcolonies（31），scl-/-的EBs體外有造血缺陷，然而Flk1+的細(xì)胞仍能發(fā)育（32），與野生型的EBs相比scl-/-的EBs含有較高比例的Flk1+的細(xì)胞，其隨后又表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)記(23)。以上結(jié)果可以這樣解釋?zhuān)?dāng)造血分化通路阻斷后，血液血管干細(xì)胞主要轉(zhuǎn)向內(nèi)皮細(xì)胞分化。綜上所述，F(xiàn)lk1和SCL在血液血管干細(xì)胞的發(fā)育中起關(guān)鍵作用，F(xiàn)lk1+/SCL+的細(xì)胞可能就是血液血管干細(xì)胞。成體血液血管干細(xì)胞研究許多研究表明成體循環(huán)中存在內(nèi)皮細(xì)胞的祖細(xì)胞，并能摻入到血管的內(nèi)皮中（33,34）。Lin（35）證明循環(huán)中的內(nèi)皮祖細(xì)胞來(lái)自骨髓，并具有造血細(xì)胞的潛能。Peichev(36)研究表明，造血來(lái)源的CD34+細(xì)胞，不僅表達(dá)AC133和Flk1，還表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異的表型VE-cadherin，CD31和E-selectin，在VEGF,FGF-2和collagen的環(huán)境誘導(dǎo)下，增殖并分化為AC133-Flk1+的成熟內(nèi)皮細(xì)胞。另外，高度純化的骨髓造血干細(xì)胞亞群SP(sidepopulation，因?yàn)榇思?xì)胞亞群因?yàn)椴粨饺霟晒馊玖?，定位在流式?xì)胞圖的邊群而被命名)，此細(xì)胞不僅可以使致死量照射的受者重建造血，而且可以摻入到缺血心肌的血管中分化為內(nèi)皮細(xì)胞(37,38)。以上的研究提示成體內(nèi)有可能存在內(nèi)皮和造血細(xì)胞的共同祖細(xì)胞血液血管干細(xì)胞。但一直沒(méi)有成體血液血管干細(xì)胞的報(bào)道，直到最近在NatureMedicine和Blood發(fā)表的兩篇文章，分別在體內(nèi)和體外研究鑒定了成體內(nèi)存在具有血液血管干細(xì)胞特征的細(xì)胞。Grant等將轉(zhuǎn)染綠熒光蛋白GFP基因的小鼠的造血干細(xì)胞（Sca-1+Lin-）移植到放射線照射的受者鼠，可以使受者重建造血，從受者鼠富集的造血干細(xì)胞再一次移植到致死量照射的宿主并誘導(dǎo)成視網(wǎng)膜缺血模型，3個(gè)月仍可重建造血，證明了此造血干細(xì)胞增殖和自我更新的能力。另外，4個(gè)月后，缺血后重新形成的受損毛細(xì)血管有綠熒光細(xì)胞。因此，可以使造血重建的造血干細(xì)胞也能重新形成功能性的血管，提示Sca-1+Lin-造血干細(xì)胞具有血液血管干細(xì)胞的特性。為了確定是否單個(gè)造血干細(xì)胞克隆也能參與造血和內(nèi)皮的形成，作者將分離到的單個(gè)gfp+Sca-1+c-kit+Lin-的造血干細(xì)胞移植到同樣的致死量照射的受者鼠，20只受者只有3只重建造血，并且所有的三只小鼠的造血干細(xì)胞都能分化為內(nèi)皮細(xì)胞并參與新的血管形成（39）。另一篇發(fā)表在2002年11月的Blood雜志PelosiE從臍帶血和骨髓分離到的CD34+KDR+的細(xì)胞可以產(chǎn)生大量的含有造血和內(nèi)皮細(xì)胞（Hem-End）的集落。而CD34+KDR-的細(xì)胞卻不能形成。進(jìn)一步將分離到的細(xì)胞極限稀釋后，仍能產(chǎn)生這種混合的集落，說(shuō)明產(chǎn)生的混合集落是克隆源性的，提示此CD34+KDR+細(xì)胞具有雙潛能的血液血管干細(xì)胞的特性。如果將單個(gè)CD34+KDR+細(xì)胞接種在造血環(huán)境中，可以產(chǎn)生4個(gè)細(xì)胞，分別將這4個(gè)細(xì)胞接種在產(chǎn)生Hem-End半固體環(huán)境里，可以產(chǎn)生血液血管干細(xì)胞集落，若接種在造血的半固體培養(yǎng)基里，只產(chǎn)生小的造血集落。提示血液血管干細(xì)胞在不同的環(huán)境中有不同的分化能力（40）。而我們實(shí)驗(yàn)室也在2002年初從胎兒骨髓分離到Flk1+CD31-CD34-的細(xì)胞，將來(lái)自單個(gè)集落的Flk1+CD31-CD34-的細(xì)胞接種在含有VEGF和bFGF的基底膜膠中不僅可以形成血管結(jié)構(gòu)，同時(shí)還產(chǎn)生造血細(xì)胞樣的CD34+的圓形細(xì)胞。若將Flk1+CD31-CD34-接種在含造血因子的半固體培養(yǎng)基中，能夠產(chǎn)生原始紅系細(xì)胞。在血管結(jié)構(gòu)還未形成時(shí)加入抗血管形成劑蘇拉明，不能形成血管，若在血管結(jié)構(gòu)剛剛形成時(shí)，加入蘇拉明，血管結(jié)構(gòu)消失，而圓形細(xì)胞還在原來(lái)的血管周?chē)?，此結(jié)果提示圓形CD34+細(xì)胞和血管內(nèi)皮來(lái)自同一細(xì)胞，說(shuō)明Flk1+CD31-CD34-具有血液血管干細(xì)胞的特征(41)。成體干細(xì)胞可塑性及其機(jī)制最近許多研究證實(shí)在成體組織內(nèi)存在多能干細(xì)胞，不僅可以跨系分化，還可以跨胚層分化。這即是干細(xì)胞的可塑性。對(duì)可塑性的機(jī)制目前還沒(méi)共識(shí)。主要有以下假說(shuō)：干細(xì)胞的分化潛能被認(rèn)為是成熟細(xì)胞的去分化(deferentiation)，從而具有了干細(xì)胞的多向分化潛能。后來(lái)對(duì)干細(xì)胞可塑性的認(rèn)識(shí)，有可能是干細(xì)胞之間存在橫向分化（transdifferentiation），即干細(xì)胞之間的轉(zhuǎn)化。例如，造血干細(xì)胞具有的多系分化潛能，是由于造血干細(xì)胞轉(zhuǎn)化為其他干細(xì)胞如神經(jīng)干細(xì)胞，后者進(jìn)一步分化為神經(jīng)元或膠質(zhì)細(xì)胞。最近，Nature發(fā)表的兩篇文章，在體外培養(yǎng)體系，胚胎干細(xì)胞可以與成體干細(xì)胞造血干細(xì)胞和神經(jīng)干細(xì)胞（42,43）融合，融合的骨髓細(xì)胞繼承了胚胎干細(xì)胞的表型特征。而融合的神經(jīng)干細(xì)胞不但繼承了胚胎干細(xì)胞的表型，當(dāng)將其注射到胚泡還顯示了其多系分化潛能，并有致瘤性。認(rèn)為干細(xì)胞的可塑性可能與細(xì)胞融合有關(guān)，但是，此融合現(xiàn)象的發(fā)生頻率是非常低的，前者只有2-11個(gè)/106骨髓細(xì)胞，而后者為1個(gè)/106。融合現(xiàn)象是否也可能發(fā)生在成體干細(xì)胞與體細(xì)胞的融合，目前還未有報(bào)道。我們實(shí)驗(yàn)室很早提出成體內(nèi)存在的具有多系分化潛能的干細(xì)胞，可能是胚胎發(fā)育過(guò)程中胚胎細(xì)胞殘留在機(jī)體不同的組織器官中，并在壁龕的作用下保持靜息狀態(tài)，一旦其所存留的組織受到損傷需要修復(fù)，在特定的微環(huán)境下被激活并分化為所需的細(xì)胞。正是基于這一觀點(diǎn)，加之我們分離到的干細(xì)胞具有多系甚至跨胚層的分化，我們才認(rèn)為體內(nèi)有可能有胚胎發(fā)育存留的血液血管干細(xì)胞。Jiang(44)從成體小鼠骨髓分離到的間充質(zhì)干細(xì)胞除了能分化為三個(gè)胚層的細(xì)胞外，還表達(dá)胚胎干細(xì)胞的標(biāo)記Oct-4,說(shuō)明此類(lèi)細(xì)胞具有胚胎細(xì)胞的特征，同時(shí)也證實(shí)了我們的觀點(diǎn)是正確的，但是干細(xì)胞可塑性的機(jī)制仍有待于進(jìn)一步研究?？傊瑑?nèi)皮和造血發(fā)育是密切相關(guān)的。不僅在胚胎發(fā)育中，存在內(nèi)皮和造血細(xì)胞的共同祖細(xì)胞即血液血管干細(xì)胞，目前的研究也證實(shí)成體內(nèi)存在具有血液血管干細(xì)胞特征或功能的雙潛能干細(xì)胞。這使人們進(jìn)一步改變了對(duì)干細(xì)胞的認(rèn)識(shí)：一直被認(rèn)為只有胚胎發(fā)育才有的瞬間存在的血液血管干細(xì)胞，也存留在成體內(nèi)。更重要的是分離獲得成體內(nèi)的血液血管干細(xì)胞，對(duì)治療先天或后天的血管性疾病和血液系統(tǒng)的疾病提供了新的策略，同時(shí)也為研究血液血管干細(xì)胞分化機(jī)制提供了體內(nèi)外模型。參考文獻(xiàn)：1.AlisonMR,PoulsomR,ForbesS,WrightNA.Anintroductiontostemcells.JPathol.2002197(4):419-23.Review.2.PalisJ,McgrathKE,KingsleyPD.Initiationofhematopoiesisandvasculogenesisinmurineyolksacexplants.Blood1995;86:156-163.3.ShalabyF,RossantJ,Yamaguchi,TP,GertsensteinM,WuXF,BreitmanML,SchuhAC.Failureofblood-islandformationandvasculargenesisinFlk1-deficientmice.Nature.1995;376:62-664.PalisJ,RobertsonS,KennedyM,WallC,KellerG.Developmentoferythroidandmyeloidprogenitorsintheyolksacandembryoproperofthemouse.Development.1999126(22):5073-84.5.PalisJ,ChanRJ,KoniskiA,PatelR,StarrM,YoderMC.Spatialandtemporalemergenceofhighproliferativepotentialhematopoieticprecursorsduringmurineembryogenesis.ProcNatlAcadSciUSA.2001，10;98(8):4528-33.6.MullerAM,MedvinskyA,StrouboulisJ,GrosveldF,DzierzakE.Developmentofhematopoieticstemcellactivityinthemouseembryo.Immunity.1994,1(4):291-301.7.YoderMC,HiattK,MukherjeeP.Invivorepopulatinghematopoieticstemcellsarepresentinthemurineyolksacatday9.0postcoitus.ProcNatlAcadSciUSA.199724;94(13):6776-80.8.KaufmanM.TheAtlasofMouseDevelopment.(1992).AcademicPress,London,UK9.Garcia-PorreroJA,GodinIE,Dieterlen-LievreF.Potentialintraembryonichemogenicsitesatpre-liverstagesinthemouse.AnatEmbryol(Berl).1995,192(5):425-35.10.CumanoA,FerrazJC,KlaineM,DiSantoJP,GodinI.Intraembryonic,butnotyolksachematopoieticprecursors,isolatedbeforecirculation,providelong-termmultilineagereconstitution.Immunity.2001,15(3):477-85.11.deBruijnMF,SpeckNA,PeetersMC,DzierzakE.Definitivehematopoieticstemcellsfirstdevelopwithinthemajorarterialregionsofthemouseembryo.

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