宿主抗結(jié)核黏膜免疫的研究進(jìn)展,免疫學(xué)論文

宿主抗結(jié)核黏膜免疫的研究進(jìn)展,免疫學(xué)論文結(jié)核病〔Tuberculosis,TB〕是由結(jié)核分枝桿菌〔Mycobacteriatuberculosis,Mtb〕感染引起的慢性傳染性疾病。結(jié)核病在全球范圍內(nèi)仍有著較高的發(fā)病率和死亡率。據(jù)WHO報(bào)道，全世界約有三分之一的人群被感染，每年約有800萬(wàn)新病例發(fā)生，至少有200萬(wàn)人死于結(jié)核病[1].結(jié)核病的治療，包括多藥物聯(lián)合治療，至少需要持續(xù)6個(gè)月，易對(duì)肝臟造成損害，并伴有其他副作用[2].多耐藥菌株〔MDR〕，尤其是廣泛耐藥菌株〔XDR〕的出現(xiàn)，給結(jié)核病的治療帶來(lái)日益嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)[3].卡介苗〔BacilleCalmette-Guerin,BCG〕是當(dāng)前用于預(yù)防結(jié)核病的唯一疫苗，自發(fā)現(xiàn)以來(lái)接種達(dá)40億劑[1],但并不能有效控制結(jié)核病的傳播。當(dāng)前研究結(jié)果表示清楚，卡介苗免疫保衛(wèi)力只能維持10~15年[4].因而卡介苗對(duì)新生兒有較好的免疫保衛(wèi)效果，能降低兒童重癥結(jié)核病的發(fā)病率，但對(duì)成人肺結(jié)核的保衛(wèi)效果并不明顯[3].基于卡介苗在成人中保衛(wèi)效力下降的現(xiàn)在狀況，結(jié)核病新型疫苗的研制和免疫策略的優(yōu)化顯得格外重要。通過(guò)抗結(jié)核黏膜免疫應(yīng)答機(jī)理的深切進(jìn)入研究，加強(qiáng)機(jī)體對(duì)Mtb的黏膜局部和全身免疫應(yīng)答的認(rèn)識(shí)，有望使黏膜免疫疫苗成為結(jié)核疫苗研發(fā)的新策略。本綜述將圍繞當(dāng)前宿主抗結(jié)核黏膜免疫的研究進(jìn)展，重點(diǎn)介紹黏膜免疫在結(jié)核疫苗研發(fā)中的作用和研究進(jìn)展。1黏膜免疫應(yīng)答與抗結(jié)核感染黏膜免疫系統(tǒng)〔mucosalimmunesystem,MIS〕是指由黏膜相關(guān)淋巴組織所組成的免疫系統(tǒng)。人體的黏膜面積達(dá)400平方米，黏膜免疫系統(tǒng)擁有人體80%的免疫細(xì)胞[5],是抵御病原微生物的第一道防線。研究發(fā)現(xiàn)黏膜免疫能夠同時(shí)激發(fā)黏膜局部和全身免疫應(yīng)答[6].Woof等[7]發(fā)如今黏膜組織的免疫反響可能會(huì)導(dǎo)致其他的黏膜外表產(chǎn)生IgA抗體。這與在局部黏膜部位活化的B細(xì)胞還能夠進(jìn)入血液循環(huán)，遷移至遠(yuǎn)處黏膜組織，并定位于該黏膜部位有關(guān)[8].Mtb主要通過(guò)呼吸道傳播，由于呼吸道中存在大量的黏膜相關(guān)淋巴組織，黏膜局部免疫誘導(dǎo)的抗結(jié)核保衛(wèi)性免疫效應(yīng)相對(duì)于其它部位更為快速和有效[9].Mtb進(jìn)入呼吸道后，廣泛分布于呼吸道黏膜中的樹(shù)突狀細(xì)胞〔dendriticcell,DC〕作為最主要的抗原提呈細(xì)胞〔APC〕，在攝取、遞呈抗原后能夠激活T細(xì)胞，并輔助B細(xì)胞產(chǎn)生IgA[10].同時(shí)在Mtb感染中，樹(shù)突狀細(xì)胞可以以發(fā)揮吞噬細(xì)菌、激活T細(xì)胞、分泌IFN-的作用[11].Vordermeier等[12]發(fā)現(xiàn)，黏膜局部B細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗Mtb的體液免疫應(yīng)答。B細(xì)胞通過(guò)外表多種外表分子〔如BCR、CD40等〕接受Mtb抗原刺激后，發(fā)生活化和分化為IgA產(chǎn)生細(xì)胞。IgA是黏膜免疫應(yīng)答的重要特征性效應(yīng)分子，其水平的高低是反響?zhàn)つっ庖吣芊駨?qiáng)大的有效指標(biāo)之一[13].Dullaers等[14]研究表示清楚，黏膜局部IgA的產(chǎn)生細(xì)胞來(lái)源于生發(fā)中心，并在濾泡輔助T細(xì)胞〔Tfollicularhelpercell,Tfh〕的輔助下產(chǎn)生，生發(fā)中心中的Tfh通過(guò)分泌TGF-1和IL-21促進(jìn)IgA抗體產(chǎn)生細(xì)胞的分化，并通過(guò)上調(diào)CCR10促進(jìn)IgA漿母細(xì)胞歸巢到黏膜局部，分泌具有免疫保衛(wèi)作用的sIgA.T淋巴細(xì)胞被以為是黏膜免疫中最主要的免疫效應(yīng)細(xì)胞，占黏膜部位淋巴細(xì)胞總數(shù)的80%[13].機(jī)體感染Mtb后，黏膜中CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生的IFN-能夠激活巨噬細(xì)胞，這是控制和消除Mtb的關(guān)鍵[15]CD8+T細(xì)胞能夠介入被感染細(xì)胞的溶解與凋亡，也能殺傷細(xì)胞內(nèi)的結(jié)核桿菌[16].樹(shù)突狀細(xì)胞和被激活的巨噬細(xì)胞釋放的IL-12、IL-18等能夠進(jìn)一步誘導(dǎo)自然殺傷細(xì)胞和各種T細(xì)胞的活化，協(xié)同殺死細(xì)菌[17].研究發(fā)現(xiàn)，黏膜相關(guān)恒定T細(xì)胞〔mucosal-asso-ciatedinvariantTcell,MAIT〕在宿主抗結(jié)核經(jīng)過(guò)中可能也發(fā)揮著重要的生理作用。固然還沒(méi)有來(lái)自于結(jié)核病患者黏膜局部的數(shù)據(jù)，但是Jiang等[18]研究發(fā)現(xiàn)，活動(dòng)性肺結(jié)核患者的MAIT細(xì)胞在活動(dòng)性結(jié)核病患者外周的數(shù)量明顯低于正常人群，并且其細(xì)胞外表程序性死亡-1〔programmeddeath-1,PD-1〕的表示出明顯上調(diào)，表示清楚活動(dòng)期患者體內(nèi)MAIT的數(shù)量不僅下降，同時(shí)可能功能也受損。2黏膜免疫與結(jié)核疫苗接種疫苗是預(yù)防疾病的主要手段之一。疫苗能在使用后產(chǎn)生保衛(wèi)性免疫，待病原體感染時(shí)通過(guò)免疫記憶細(xì)胞的增殖快速免疫應(yīng)答，產(chǎn)生效應(yīng)細(xì)胞和效應(yīng)分子。但當(dāng)前正在研發(fā)的大多數(shù)候選疫苗，絕大部分屬于全身給藥，它們能夠誘導(dǎo)很強(qiáng)的全身性免疫應(yīng)答而忽略了黏膜局部免疫應(yīng)答的保衛(wèi)作用。在抵御經(jīng)過(guò)呼吸道傳播病原菌中，誘導(dǎo)局部及全身黏膜免疫應(yīng)答，可通過(guò)黏膜進(jìn)行接種，使疫苗發(fā)揮前哨的保衛(wèi)作用。Mtb在感染經(jīng)過(guò)中首先經(jīng)過(guò)黏膜播散，所以通過(guò)黏膜局部疫苗的使用，在黏膜局部產(chǎn)生有效的抗結(jié)核保衛(wèi)作用對(duì)于肺結(jié)核的防治也至關(guān)重要[19].通過(guò)黏膜免疫加強(qiáng)免疫保衛(wèi)作用的研究已有報(bào)道。如Shim等[20]研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)黏膜途徑接種流感疫苗，尤其是通過(guò)滴鼻途徑在黏膜和血清中能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的IgA和IgG抗體水平。在結(jié)核疫苗研究中，Pepponi等[21]在小鼠呼吸道黏膜內(nèi)注射Ag85B-Acr-RICs疫苗時(shí)，其特異性抗體和T細(xì)胞應(yīng)答水平，包括抗原特異性T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-的水平顯著提高。Doherty等[22]在小鼠和豬體內(nèi)通過(guò)胃黏膜接種ESAT-6-Ag85B-MPLSE疫苗后，在脾臟內(nèi)IFN-的產(chǎn)生水平明顯增高，而且體內(nèi)結(jié)核菌落的數(shù)量顯著減少。當(dāng)前，研究比擬深切進(jìn)入的各類結(jié)核疫苗有減毒活疫苗、重組卡介苗疫苗、亞單位疫苗、DNA疫苗等。這些疫苗的研發(fā)經(jīng)過(guò)中首先考慮的是皮下或是肌肉免疫途徑，忽視了黏膜免疫在免疫應(yīng)答中的積極作用。選擇高效的免疫途徑、良好的佐劑和遞送系統(tǒng)是黏膜疫苗有效激發(fā)誘導(dǎo)黏膜局部和全身免疫應(yīng)答的不可或缺的因素。2.1黏膜免疫途徑黏膜免疫途徑，主要包括口服〔胃腸道〕途徑和鼻腔免疫〔上呼吸道〕途徑。鼻腔作為呼吸道的重要環(huán)節(jié)，生理環(huán)境溫和，抗原誘導(dǎo)免疫反響的閾值較低，能夠避免胃腸道的酸性環(huán)境及酶的作用對(duì)疫苗成分的毀壞，故鼻腔免疫所需要疫苗的量較?。煌瑫r(shí)鼻黏膜上覆蓋有大量的樹(shù)突狀細(xì)胞，具有攝取抗原的先天優(yōu)勢(shì)。而且人體鼻咽相關(guān)淋巴組織〔NALT〕具有抗原保存隱窩，而腸相關(guān)淋巴組織〔GALT〕不具備這樣的構(gòu)造，所以鼻腔免疫途徑的免疫有效性優(yōu)于口服途徑[23].已有研究發(fā)現(xiàn)，通過(guò)使用腺病毒基因載體攜帶結(jié)核分枝桿菌蛋白Ag85A進(jìn)行鼻腔內(nèi)免疫強(qiáng)化，能夠提高Ag85A抗原特異性T細(xì)胞在肺部及呼吸道內(nèi)的記憶功能，協(xié)同加強(qiáng)卡介苗免疫接種對(duì)肺結(jié)核的保衛(wèi)作用[24].通過(guò)鼻內(nèi)途徑，運(yùn)送含有結(jié)核分枝桿菌抗原蛋白FbpA和HtpXdDNA的非致病菌能夠誘導(dǎo)抗原特異性T細(xì)胞應(yīng)答，并防止結(jié)核分枝桿菌的入侵[25].除此以外，Ag85B-ESAT-6蛋白通過(guò)鼻內(nèi)接種疫苗途徑，能夠降低結(jié)核分枝桿菌在肺內(nèi)的感染幾率[26].編碼HSP65的DNA疫苗通過(guò)鼻免疫途徑能夠?qū)Y(jié)核分枝桿菌產(chǎn)生保衛(wèi)性免疫反響[27].Chen等[28]研究發(fā)現(xiàn)，與皮下注射疫苗相比，在通過(guò)鼻黏膜途徑接種疫苗抵御Mtb的時(shí)候，BALB/c小鼠的脾臟中產(chǎn)生更多的IFN-，并且肺部T細(xì)胞能夠更迅速地活化、增殖。Hoft等[29]在由卡介苗誘導(dǎo)的小鼠的鼻黏膜內(nèi)接種Ad35后，機(jī)體誘導(dǎo)出的CD4+T細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞的濃度高于皮下接種。Lyadova等[30]通過(guò)鼻黏膜途徑給小鼠接種卡介苗5周后，發(fā)現(xiàn)肺部總T淋巴細(xì)胞數(shù)和CD4+T細(xì)胞數(shù)都顯著增加，同時(shí)T淋巴細(xì)胞在抗原誘導(dǎo)下產(chǎn)生IL-5、IL-12、IFN-的數(shù)量顯著增加。上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表示清楚結(jié)核疫苗鼻內(nèi)免疫接種后不僅能夠誘導(dǎo)黏膜局部的特異性免疫應(yīng)答，同時(shí)還能夠誘導(dǎo)肺部的特異性免疫應(yīng)答，有效去除肺部病原菌。鼻內(nèi)免疫途徑對(duì)黏膜局部和全身抗結(jié)核免疫應(yīng)答都能夠產(chǎn)生加強(qiáng)作用，在肺結(jié)核的防控的積極意義顯而易見(jiàn)，有望成為預(yù)防Mtb感染的有效策略。2.2黏膜免疫用佐劑佐劑本身不具備抗原性，但是能夠非特異性地加強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的特異性免疫應(yīng)答或改變免疫應(yīng)答的格局，誘導(dǎo)愈加有效的體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答[31].同時(shí)，佐劑的使用還能夠解決黏膜免疫途徑易誘發(fā)免疫耐受、免疫應(yīng)答減弱、持續(xù)時(shí)間縮短等問(wèn)題[24].Dietrich等[32]研究發(fā)現(xiàn)，與無(wú)佐劑接種卡介苗相比，使用雙十八烷基二甲基溴化銨〔DDA〕作為卡介苗的免疫佐劑時(shí)可出現(xiàn)更明顯的T細(xì)胞免疫應(yīng)答，增加抗結(jié)核效應(yīng)。當(dāng)前，已經(jīng)有有效改善免疫應(yīng)答的佐劑相繼被用于黏膜免疫疫苗的研制，包括有細(xì)菌毒素、CpG基序、免疫刺激復(fù)合物等。細(xì)菌毒素中最主要的是霍亂毒素〔choleratoxin,CT〕和大腸桿菌不耐熱腸毒素〔heatlabileenterotoxin,LT〕，能提高抗原呈遞細(xì)胞〔APC〕呈遞抗原的能力[33].霍亂毒素可誘導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞分泌IL-1，還可通過(guò)上調(diào)IL-10,下調(diào)IL-12,選擇性地影響細(xì)胞外表分子的表示出，加強(qiáng)T細(xì)胞的調(diào)節(jié)活性[34].不耐熱腸毒素最大的優(yōu)點(diǎn)是毒性較霍亂毒素低，可誘導(dǎo)產(chǎn)生IgGl、IgG2a、IgG2b、IgG3和黏膜sIgA,同時(shí)誘導(dǎo)Thl型和Th2型應(yīng)答[33].但是霍亂毒素和不耐熱腸毒素具有的生物毒性阻礙了在人體中的應(yīng)用，限制了其作為黏膜佐劑的廣泛使用。近年來(lái)CpG〔Cytosine-Phosphate-Guanosine,CpG〕基序作為佐劑的潛力也已得到廣泛認(rèn)可。CpG基序又稱DNA免疫激活序列，是一些以非甲基化的胞嘧啶鳥(niǎo)嘌呤二核苷酸為基序的寡脫氧核苷酸短序列，可誘導(dǎo)多種免疫細(xì)胞分泌各種細(xì)胞因子、誘導(dǎo)B細(xì)胞分泌免疫球蛋白、激發(fā)非特異性免疫應(yīng)答、誘導(dǎo)Thl免疫應(yīng)答并抑制Th2免疫應(yīng)答等，被以為是一種安全有效的佐劑[35].Blazevic等[36]發(fā)現(xiàn)，鼻內(nèi)接種Ag85B/CpG后，高免疫原性的Ag85B在CpG的輔助下能更多地進(jìn)入到肺內(nèi)和黏膜皮下組織，并能夠有效防止局部黏膜感染，該疫苗能夠兩周內(nèi)在老鼠的呼吸道內(nèi)誘導(dǎo)出CD4+Th1和CD8+T細(xì)胞。同時(shí)，通過(guò)基因工程方式方法獲得含有內(nèi)置分子佐劑的新型疫苗在結(jié)核疫苗的研發(fā)中得到初步應(yīng)用。如Pepponi等[21]采用基因工程方式方法在煙草中表示出Ag85B-Acr-抗Acr單克隆抗體重鏈〔TB-RICS〕多肽鏈，該多肽鏈能夠通過(guò)重鏈自發(fā)構(gòu)成二聚體，純化后的蛋白質(zhì)經(jīng)滴鼻免疫后在小鼠體內(nèi)起保衛(wèi)性作用。這些結(jié)核分枝桿菌抗原-重組免疫復(fù)合物能夠直接結(jié)合補(bǔ)體分子，可以以與APC細(xì)胞直接結(jié)合，進(jìn)而激發(fā)有效的免疫應(yīng)答。除此之外，免疫刺激復(fù)合物〔immune-stimulatingcomplex,ISCOM〕作為另外一種新型疫苗，是蛋白質(zhì)抗原的脂類載體復(fù)合物，通過(guò)促進(jìn)免疫細(xì)胞對(duì)抗原的攝取，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體的黏膜免疫應(yīng)答。An-dersen等[26]研究報(bào)道，小鼠接種DNA疫苗時(shí)，在佐劑CTA-1DD/ISCOM的幫助下，CD4+T細(xì)胞分泌的IFN-的水平顯著增加，提高抗結(jié)核應(yīng)答能力。2.3黏膜免疫抗原遞送系統(tǒng)黏膜遞送系統(tǒng)的主要作用是保衛(wèi)抗原，使之免受呼吸道黏膜、胃腸道黏膜或其他部位的酶降解，進(jìn)而加強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答。黏膜遞送系統(tǒng)還具有抗原緩釋作用，通過(guò)延長(zhǎng)抗原的釋放時(shí)間、避免突釋效應(yīng)、維持抗原有效濃度來(lái)加強(qiáng)機(jī)體產(chǎn)生持續(xù)長(zhǎng)效的免疫保衛(wèi)作用。當(dāng)前研究較熱的遞送系統(tǒng)有脂質(zhì)體、病毒體和病毒樣顆粒、殼聚糖及其衍生物等。脂質(zhì)體作為常用的經(jīng)鼻免疫載體遞送系統(tǒng)，能夠加強(qiáng)IgG和局部IgA的應(yīng)答。Okada等[37]報(bào)道與單獨(dú)卡介苗的免疫效果相比，Hsp65+IL-12/HVJ-脂質(zhì)體DNA疫苗能在小鼠和豚鼠體內(nèi)更迅速地誘導(dǎo)Hsp65特異性的CD8+T細(xì)胞，并加強(qiáng)IFN-的分泌。病毒體是一種含有功能性病毒膜蛋白的脂質(zhì)體，例如免疫加強(qiáng)重建流感病毒體〔IRIV〕[38].病毒體外表通過(guò)偶聯(lián)抗原，模擬自然感染的途徑，介導(dǎo)多種免疫細(xì)胞活化，加強(qiáng)免疫應(yīng)答。McShane等[39]通過(guò)小鼠試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)痘病毒載體疫苗MVA85A能成功增加卡介苗接種后的免疫應(yīng)答。同樣地，San-tosuosso等[40]報(bào)道，腺病毒載體疫苗AdAg85A也能夠加強(qiáng)既有卡介苗的免疫應(yīng)答。殼聚糖作為一種新的遞送系統(tǒng)，在經(jīng)鼻免疫中的作用也不可小覷。殼聚糖有延長(zhǎng)疫苗作用時(shí)間、維持產(chǎn)物有效濃度、減輕不良反響等優(yōu)點(diǎn)。Amidi等[41]研究報(bào)道，殼聚糖能夠通過(guò)蛋白激酶C打開(kāi)細(xì)胞間嚴(yán)密連接，提高黏膜通透性，促進(jìn)肽類分子的跨黏膜吸收。Bolhassani等[42]報(bào)道，以殼聚糖作為蛋白疫苗的遞送系統(tǒng)能夠靶向APC細(xì)胞，激活CD8+T細(xì)胞，產(chǎn)生特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞〔cytotoxiclymphocyte,CTL〕應(yīng)答。基因工程技術(shù)的進(jìn)步也帶動(dòng)了黏膜遞送系統(tǒng)的研發(fā)。通過(guò)基因工程方式方法構(gòu)建的活重組細(xì)菌和病毒載體，具有表示出目的抗原、少毒甚至無(wú)毒、能增殖和入侵黏膜外表的優(yōu)點(diǎn)。所以，將活的重組病毒或是細(xì)菌作為抗原的遞送系統(tǒng)，既能夠提高免疫應(yīng)答的持久性，可以以獲得免疫效果的多樣性。重組病毒載體當(dāng)前研究較多，Watanabe等[43]人通過(guò)視黃酸Ⅰ型受體誘導(dǎo)基因，用表示出Ag85B的重組Ⅱ型人類副流感病毒〔rhPIV2-Ag85B〕鼻內(nèi)接種老鼠，能夠誘導(dǎo)抗原特異性黏膜免疫應(yīng)答，免疫效果優(yōu)于普通的Ag85B免疫應(yīng)答。近年來(lái)，惰性細(xì)菌孢子〔inertbacterialpore〕作為一種新開(kāi)發(fā)的載體系統(tǒng)，在經(jīng)鼻免疫中的作用得到較廣泛的研究。Reljic等[3]將表示出結(jié)核特異性抗原的惰性細(xì)菌孢子，鼻內(nèi)接種小鼠，能夠誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫，并誘導(dǎo)產(chǎn)生各種功能的T細(xì)胞，能大大減少感染老鼠肺部和脾臟的結(jié)核菌落。還有研究發(fā)現(xiàn)，由各種比例的脂類分子和蛋白質(zhì)組成的脂蛋白所構(gòu)成的納米顆粒，一方面對(duì)抗原有保衛(wèi)作用，同時(shí)能夠增加黏膜疫苗的有效性。Stylianou等[44]運(yùn)用肝素結(jié)合血凝素黏附蛋白〔HBHA〕的保衛(wèi)，減少Ag85B抗原在經(jīng)過(guò)肺泡上皮經(jīng)過(guò)中被酶降解的數(shù)量，提高了抗原濃度。結(jié)果表示清楚，通過(guò)鼻內(nèi)接種表示出Ag85B抗原的肝素結(jié)合血凝素黏附蛋白〔Ag85B-HBHA〕，能夠誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生持續(xù)性的體液免疫應(yīng)答和CD4+T細(xì)胞，加強(qiáng)IFN-、IL-2、TNF-的分泌。3瞻望抗結(jié)核黏膜免疫應(yīng)答不僅成為抵御結(jié)核菌感染的第一道防線，黏膜局部所產(chǎn)生多種免疫效應(yīng)分子對(duì)于激發(fā)結(jié)核菌感染臟器甚至全身免疫應(yīng)答都具有重要的免疫調(diào)控作用，由此提出的黏膜免疫疫苗也成為結(jié)核疫苗研制的新策略。同時(shí)，黏膜疫苗接種還具有接種方便，不需要注射器，容易被群眾接受，接種成本低等優(yōu)勢(shì)。通過(guò)尋找免疫原性更強(qiáng)的抗原、適宜的黏膜疫苗接種途徑、高效的黏膜免疫佐劑和抗原遞送系統(tǒng)，是研發(fā)獲得黏膜免疫疫苗的關(guān)鍵。在結(jié)核黏膜疫苗的研發(fā)中，綜合結(jié)核抗原的挑選和其他呼吸道感染疫苗研發(fā)的最新進(jìn)展，會(huì)使結(jié)核黏膜免疫疫苗從實(shí)驗(yàn)室走向?qū)嶋H應(yīng)用成為現(xiàn)實(shí)，為結(jié)核病及其他黏膜感染性疾病的防控提供新的手段。參考文獻(xiàn)[1]BarkerLF,BrennanMJ,RosensteinPK,etal.Tubercu-losisvaccineresearch:theimpactofimmunology.CurrOpinImmunol,2018,21:331-338[2]AagaardC,DietrichJ,DohertyM,etal.TBv