提取過(guò)程及原理

關(guān)于提取過(guò)程及原理第一頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日DNA提取過(guò)程及原理鹽溶法（萃?。?/p>

1研磨破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜，使核蛋白被釋放出來(lái)。（從細(xì)胞中分離得到的DNA是與蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA，其中還含有大量RNA，即核糖核蛋白。）

2利用DNA不溶于0.14mol/L的NaCl溶液而RNA能溶于0.14mol/L的NaCl溶液這一性質(zhì),將DNA核蛋白和RNA核蛋白從樣品破碎細(xì)胞液中分開(kāi)。第二頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日3分離得到核蛋白后，還需進(jìn)一步將蛋白等雜質(zhì)除去。去除蛋白的方法有3種：①用含辛醇或異戊醇的氯仿振蕩核蛋白溶液，使其乳化，然后離心除去變性蛋白質(zhì)。用這種方法處理時(shí)，蛋白質(zhì)停留在水相和氯仿相中間，而DNA則溶于上層水相，用兩倍體積的95%乙醇溶液可將DNA鈉鹽沉淀出來(lái)。第三頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日②用十二烷基硫酸鈉(SDS)等去污劑使蛋白質(zhì)變性，從而使其與核酸分離③用苯酚處理，然后離心分層。DNA溶于上層水相，蛋白變性后則停留在酚層內(nèi)，吸出上層水相，加入兩倍體積的95%乙醇即可得到白色纖維狀DNA沉淀。第四頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日第五頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日第二部分第六頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日核酸電泳第七頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日第八頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日第九頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日第十頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日

TAE是使用最廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)更符合實(shí)際相對(duì)分子質(zhì)量（TBE中電泳時(shí)測(cè)出的相對(duì)分子質(zhì)量會(huì)大于實(shí)際分子質(zhì)量），且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%，電泳大于13kb的片段時(shí)用TAE緩沖液將取得更好的分離效果，此外，回收DNA片段時(shí)也易用TAE緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳。TAE的缺點(diǎn)是緩沖容量小，長(zhǎng)時(shí)間電泳（如過(guò)夜）不可選用，除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。第十一頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日TBE的特點(diǎn)是緩沖能力強(qiáng)，長(zhǎng)時(shí)間電泳時(shí)可選用TBE，并且當(dāng)用于電泳小于1kb的片段時(shí)分離效果更好。TBE用于瓊脂糖凝膠時(shí)易造成高電滲作用，并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價(jià)結(jié)合的四羥基硼酸鹽復(fù)合物而使DNA片段的回收率降低，所以不宜在回收電泳中使用。TPE的緩沖能力也較強(qiáng)，但由于磷酸鹽易在乙醇沉淀過(guò)程中析出，所以也不宜在回收DNA片段的電泳中使用。第十二頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日第十三頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日第十四頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日第十五頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日第十六頁(yè)，共十八