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關(guān)于提取過(guò)程及原理第一頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日DNA提取過(guò)程及原理鹽溶法(萃?。?/p>
1研磨破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,使核蛋白被釋放出來(lái)。(從細(xì)胞中分離得到的DNA是與蛋白質(zhì)結(jié)合的DNA,其中還含有大量RNA,即核糖核蛋白。)
2利用DNA不溶于0.14mol/L的NaCl溶液而RNA能溶于0.14mol/L的NaCl溶液這一性質(zhì),將DNA核蛋白和RNA核蛋白從樣品破碎細(xì)胞液中分開(kāi)。第二頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日3分離得到核蛋白后,還需進(jìn)一步將蛋白等雜質(zhì)除去。去除蛋白的方法有3種:①用含辛醇或異戊醇的氯仿振蕩核蛋白溶液,使其乳化,然后離心除去變性蛋白質(zhì)。用這種方法處理時(shí),蛋白質(zhì)停留在水相和氯仿相中間,而DNA則溶于上層水相,用兩倍體積的95%乙醇溶液可將DNA鈉鹽沉淀出來(lái)。第三頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日②用十二烷基硫酸鈉(SDS)等去污劑使蛋白質(zhì)變性,從而使其與核酸分離③用苯酚處理,然后離心分層。DNA溶于上層水相,蛋白變性后則停留在酚層內(nèi),吸出上層水相,加入兩倍體積的95%乙醇即可得到白色纖維狀DNA沉淀。第四頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日第五頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日第二部分第六頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日核酸電泳第七頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日第八頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日第九頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日第十頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日
TAE是使用最廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)更符合實(shí)際相對(duì)分子質(zhì)量(TBE中電泳時(shí)測(cè)出的相對(duì)分子質(zhì)量會(huì)大于實(shí)際分子質(zhì)量),且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率較其他兩種緩沖液快約10%,電泳大于13kb的片段時(shí)用TAE緩沖液將取得更好的分離效果,此外,回收DNA片段時(shí)也易用TAE緩沖系統(tǒng)進(jìn)行電泳。TAE的缺點(diǎn)是緩沖容量小,長(zhǎng)時(shí)間電泳(如過(guò)夜)不可選用,除非有循環(huán)裝置使兩極的緩沖液得到交換。第十一頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日TBE的特點(diǎn)是緩沖能力強(qiáng),長(zhǎng)時(shí)間電泳時(shí)可選用TBE,并且當(dāng)用于電泳小于1kb的片段時(shí)分離效果更好。TBE用于瓊脂糖凝膠時(shí)易造成高電滲作用,并且因與瓊脂糖相互作用生成非共價(jià)結(jié)合的四羥基硼酸鹽復(fù)合物而使DNA片段的回收率降低,所以不宜在回收電泳中使用。TPE的緩沖能力也較強(qiáng),但由于磷酸鹽易在乙醇沉淀過(guò)程中析出,所以也不宜在回收DNA片段的電泳中使用。第十二頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日第十三頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日第十四頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日第十五頁(yè),共十八頁(yè),2022年,8月28日第十六頁(yè),共十八
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